kursus cell culture

7/26/2019 Kursus Cell Culture

1/45

CELL CULTURECELL CULTURE

Sri Kadarsih SoejonoSri Kadarsih Soejono

Bagian Ilmu faalBagian Ilmu faalFak. Kedokteran, UGMFak. Kedokteran, UGM


2/45

Kultur sel bukan suatu teknik baruKultur sel bukan suatu teknik baru

Merupakan metode untukMerupakan metode untukmempelajari perubahan fungsimempelajari perubahan fungsi

sel/jaringan tanpa pengaruhsel/jaringan tanpa pengaruh

sistemiksistemik

Mulamula merupakan fragmenMulamula merupakan fragmen

jaringan !ang diletakkan di "a#anjaringan !ang diletakkan di "a#an

kulturkultur

$imulai dengan menanam selsel$imulai dengan menanam selsel

embrionik.embrionik.


3/45

Sel !ang dapat hidup se"ara in %itroSel !ang dapat hidup se"ara in %itro

dan masih mempun!ai sifatsifatdan masih mempun!ai sifatsifat

mirip dengan sel intakmirip dengan sel intak

&epas dari pengaruh sistemik&epas dari pengaruh sistemik

Selsel tertentu mengadakanSelsel tertentu mengadakan

proliferasi tetapi masih dalamproliferasi tetapi masih dalam

keadaan tidak terdiferensiasikeadaan tidak terdiferensiasi

'pa !ang dinamakan kultur'pa !ang dinamakan kultur

sel(sel(


4/45

Kultur sel dapat dipakai untuk berma"am penelitian,Kultur sel dapat dipakai untuk berma"am penelitian,

misaln!a antara lain sebagai berikutmisaln!a antara lain sebagai berikut


5/45

)enggunaan kultur sel memiliki)enggunaan kultur sel memiliki

beberapa kelebihan dan keuntungan,beberapa kelebihan dan keuntungan,

antara lain*antara lain* Mudah dikontrol +sikokimia lingkunganMudah dikontrol +sikokimia lingkunganp-, suhu, tekanan oksigen, dan p-, suhu, tekanan oksigen, dan 0011

dapat dikontrol sesuai dengandapat dikontrol sesuai dengan

keinginankeinginan Mudah dibuat homogen sehinggaMudah dibuat homogen sehingga

mudah dianalisismudah dianalisis

2konomis, tidak perlu memakai ban!ak2konomis, tidak perlu memakai ban!akhe#an "obahe#an "oba

Mudah diadakan perlakuanMudah diadakan perlakuan


6/45

)enggunaan kultur sel memiliki)enggunaan kultur sel memiliki

beberapa kekurangan dan kerugian,beberapa kekurangan dan kerugian,

antara lain*antara lain* Memerlukan keahlian, mempun!aiMemerlukan keahlian, mempun!ai

peneliti !ang sangat men!enangi kulturpeneliti !ang sangat men!enangi kultur

sel, selalu menjaga aseptis, tertip dansel, selalu menjaga aseptis, tertip dan

sabarsabar Gambaran histologis sudah tidakGambaran histologis sudah tidak

nampaknampak

3idak atau sukar untuk mengidenti+kasi3idak atau sukar untuk mengidenti+kasisifatsifat seperti pada in %i%o, misalkansifatsifat seperti pada in %i%o, misalkan

akibat pengaruh sistemikakibat pengaruh sistemik


7/45

Memulai kultur selMemulai kultur sel

Mulamula !ang dipakai adalah fragmenMulamula !ang dipakai adalah fragmenjaringan, tidak han!a mendapat satujaringan, tidak han!a mendapat satuma"am sel populasi sel heterogen1ma"am sel populasi sel heterogen1

)ara peneliti ingin mendapatkan kultur)ara peneliti ingin mendapatkan kultursel berpopulasi homogensel berpopulasi homogen Mudah diadakan inter%ensi,!ang mudahMudah diadakan inter%ensi,!ang mudah

dianalisisdianalisis

Sel dapat tumbuh di "a#an kulturSel dapat tumbuh di "a#an kultur )enting sekali dengan !ang dinamakan)enting sekali dengan !ang dinamakan

"a#an/gelas tutup kultur"a#an/gelas tutup kultur


8/45

4.4. 2ksplan, suatu irisan jaringan2ksplan, suatu irisan jaringan5 sukar untuk die%aluasi, sel bertumpuk,sukar untuk die%aluasi, sel bertumpuk,

tidak homogen, tidak dapat dihitungtidak homogen, tidak dapat dihitung

untuk analisisn!auntuk analisisn!a

5 !ang die%aluasi adalah selsel !ang!ang die%aluasi adalah selsel !angtumbuh diluar irisan jaringan, !aitutumbuh diluar irisan jaringan, !aitudengan mengukur lebar pertumbuhandengan mengukur lebar pertumbuhan

5 untuk menanamn!a ada "a#an khususuntuk menanamn!a ada "a#an khusus5 tidak perlu inkubator tidak perlu inkubator 00, "a#an, "a#an

ditutup rapat dengan tape supa!a ditutup rapat dengan tape supa!a 00tidak keluar, dipakai untuk pernapasantidak keluar, dipakai untuk pernapasan

Ma"am Kultur 6aringanMa"am Kultur 6aringan


9/45

0.0. Kultur selKultur sel

5 sel !ang terpisahpisah, sel mudah dihitung,sel !ang terpisahpisah, sel mudah dihitung,

sel dapat hidup satu lapis monola!er1sel dapat hidup satu lapis monola!er1

5 sel mudah dihitung baik sebelum dikultursel mudah dihitung baik sebelum dikultur

maupun setelah dikultur padamaupun setelah dikultur pada

pen!elesaian penelitiann!a1pen!elesaian penelitiann!a1

5 harus memakai inkubator harus memakai inkubator 00untukuntuk"ampuran udara, digunakan untuk hidup"ampuran udara, digunakan untuk hidup

5 kultur primer, setelah mendapat sel !angkultur primer, setelah mendapat sel !ang

sudah terpisahpisah langsung ditanam disudah terpisahpisah langsung ditanam di

dalam "a#an kulturdalam "a#an kultur

5 kultur sekunder atau subkultur setelahkultur sekunder atau subkultur setelah

kultur primer kon7uen dilepas dari "a#ankultur primer kon7uen dilepas dari "a#an

dan ditanam kembali dilain "a#an kulturdan ditanam kembali dilain "a#an kultur


10/45

Kultur primer maupun kultur sekunderKultur primer maupun kultur sekunder

dapat dipelihara sampai berharihari,dapat dipelihara sampai berharihari,

"ontoh* +broblas menghasilkan"ontoh* +broblas menghasilkankolagen,otot skelet berkontraksi, sel sarafkolagen,otot skelet berkontraksi, sel saraf

membuat sinapsmembuat sinaps

$ie%aluasi denganmenggunakan mikroskopelektron


11/45

8.8. $ispers sel* sebelum orang dapat$ispers sel* sebelum orang dapatmengadakan kultur sel, merekamengadakan kultur sel, mereka

han!a melumatkan jaringan danhan!a melumatkan jaringan danmenghitung seln!amenghitung seln!a

5 3idak ditanam, han!a di dalam tabung,3idak ditanam, han!a di dalam tabung,dan dimasukkan ke dalam inkubatordan dimasukkan ke dalam inkubator

00, setelah mendapat perlakuan, setelah mendapat perlakuandihitung lagi seln!adihitung lagi seln!a

5 $apat untuk menghitung atau mengukur$apat untuk menghitung atau mengukurkonsentrasi substansia !ang ada dikonsentrasi substansia !ang ada di

dalam tabung !ang dihasilkan oleh seldalam tabung !ang dihasilkan oleh sel5 3idak dapat die%aluasi se"ara3idak dapat die%aluasi se"ara

imunositokimiaimunositokimia


12/45

Sel dapat berfusi atau hibridomaSel dapat berfusi atau hibridoma

dengan sel lainn!adengan sel lainn!a


13/45

Sejarah penemuan kultur sel*Sejarah penemuan kultur sel*

499: ;ou? -arrison* menanam saraf spinal am+bi dantumbuh sel saraf disekelilingn!atumbuh sel saraf disekelilingn!a

4=4> ;ous* membuat tumor dengan induksi ektrak4=4> ;ous* membuat tumor dengan induksi ektraktumor a!am , timbul %irus ;@' ;ous "ar"inomatumor a!am , timbul %irus ;@' ;ous "ar"inoma%irus1%irus1

4=48 arrel* dalam keadaan aseptik sel dapat4=48 arrel* dalam keadaan aseptik sel dapathidup dengan baikhidup dengan baik

4=A9 2arle dtt.* menanam sel tunggal !ang dapat4=A9 2arle dtt.* menanam sel tunggal !ang dapathidup berkelompokhidup berkelompok

4=:0 Ge! dkk.* menanam sel kanker ser%iks4=:0 Ge! dkk.* menanam sel kanker ser%iks

manusia, didiamkan, sekarang terkenal denganmanusia, didiamkan, sekarang terkenal dengannama sel turunan "ell line1 -e&a "ell linenama sel turunan "ell line1 -e&a "ell line

4=:A &e%iMontal"ini dkk* dengan rangsangan @GF4=:A &e%iMontal"ini dkk* dengan rangsangan @GFkultur saraf tumbuh dengan baikkultur saraf tumbuh dengan baik

4=:: 2agle* menemukan nutrisi !ang diperlukan4=:: 2agle* menemukan nutrisi !ang diperlukan

oleh kultur sel. @utrisi di"ampur dengan protein danoleh kultur sel. @utrisi di"ampur dengan protein dandibuat dalam bentuk serbukdibuat dalam bentuk serbuk


14/45

4=: )u"k dkk.* memisahkan selsel mutan -e&a4=: )u"k dkk.* memisahkan selsel mutan -e&adengan memberi makanan tertentudengan memberi makanan tertentu

4=:9 3emin C ;ubin* mengukur se"ara k#antitatif kultur4=:9 3emin C ;ubin* mengukur se"ara k#antitatif kulturembrio a!am terinfeksi dengan ;ousus sar"oma %irus,embrio a!am terinfeksi dengan ;ousus sar"oma %irus,

diteruskan dengan %irus !ang lainditeruskan dengan %irus !ang lain 4=4 -a!7i"k C Moorhead* kultur +broblas manusia4=4 -a!7i"k C Moorhead* kultur +broblas manusia

setelah membelah dalam jumlah tertentu akan matisetelah membelah dalam jumlah tertentu akan mati 4=A &ittle+eld* mengenalkan media -'3 untuk media4=A &ittle+eld* mengenalkan media -'3 untuk media

kultur hibrid sel somatik. Kato mengadakan fusi sel padakultur hibrid sel somatik. Kato mengadakan fusi sel pada

tanamantanaman 4=: -am* mengenalkan serum free media untuk kultur4=: -am* mengenalkan serum free media untuk kultursel mamaliasel mamalia

4=9 'ugusti3o""o C Sato* neuroblastoma tikus4=9 'ugusti3o""o C Sato* neuroblastoma tikusditanam dengan kultur sel saraf, memberikan elektrikditanam dengan kultur sel saraf, memberikan elektrikeksitabel1eksitabel1

4=?: Kohler C Milstein* !ang pertama membuat4=?: Kohler C Milstein* !ang pertama membuatmonoklonelantibodimonoklonelantibodi

4=? Sato dkk* pertama publikasi berseri tentang sel4=? Sato dkk* pertama publikasi berseri tentang selturunan !ang berbeda memerlukan "ampuran hormonturunan !ang berbeda memerlukan "ampuran hormondan gro#th fa"tor !ang berbeda untuk tumbuh di dalamdan gro#th fa"tor !ang berbeda untuk tumbuh di dalam

serum free mediumserum free medium


15/45

Mengapa perlu mengadakan kultur sel,Mengapa perlu mengadakan kultur sel,

para peneliti terpaksa memakai kulturpara peneliti terpaksa memakai kultur

sel sebagai sub!ek penelitiann!a*sel sebagai sub!ek penelitiann!a*

mudah dikendalikan pada suhu,mudah dikendalikan pada suhu,

tekanan osmotik dan p-tekanan osmotik dan p- mudah dibuat homogenmudah dibuat homogen

mudah diadakan karakterisasimudah diadakan karakterisasi

selsel !ang dalam organn!a hidupselsel !ang dalam organn!a hidupse"ara siklikse"ara siklik


16/45

ara menanam kultur sel primer*ara menanam kultur sel primer*

Kerjalah dengan aseptik dan telitiKerjalah dengan aseptik dan teliti

$ipikirkan sel apa !ang akan dikultur$ipikirkan sel apa !ang akan dikultur

Sel dipisahpisahkan dari jaringanSel dipisahpisahkan dari jaringan5 enDimatik* tripsin, kolagenaseenDimatik* tripsin, kolagenase

5 Mekanik* gojoggojog dan %orteksMekanik* gojoggojog dan %orteks

bergantianbergantian

disaring dengan saringan !ang tidakdisaring dengan saringan !ang tidak

perlu terlalu ke"il.perlu terlalu ke"il.


17/45

$ihitung seln!a sebelum$ihitung seln!a sebelumditanam, sel ada diditanam, sel ada didalam media tanpa Datdalam media tanpa Dat

penumbuh. $enganpenumbuh. $enganmemakai hemositometermemakai hemositometer

Kalau hemositometern!aKalau hemositometern!amempun!ai 0 bilik, untukmempun!ai 0 bilik, untukratarata dapatratarata dapatmenghitung ulang di bilikmenghitung ulang di biliksatun!a. 6ika han!a satusatun!a. 6ika han!a satubilik, "u"i dulu dan hitungbilik, "u"i dulu dan hitunglagi dengan suspensilagi dengan suspensibarubaru


18/45

Kalkulasi ratarata dari kedua bilik danKalkulasi ratarata dari kedua bilik dan

dihitung konsentrasi dengan rumus berikutdihitung konsentrasi dengan rumus berikut

E n / E n /

E konsentrasi sel sel/m&1 E konsentrasi sel sel/m&1

n E jumlah sel !ang dihitungn E jumlah sel !ang dihitung

E %olume m&1 E %olume m&1

Kedalaman E >,4 mm, luas E 4mmKedalaman E >,4 mm, luas E 4mm22

olume E >,4 mmolume E >,4 mm33atau E 4>atau E 4> -4-4

E n < 4> E n < 4>AA

Ban!ak sel !ang ditanam harus "ukup kirakiraBan!ak sel !ang ditanam harus "ukup kirakira4>4>55/m&/m&

Untuk membedakan sel mati dan hidupUntuk membedakan sel mati dan hidup

memakai tripan biru, sel mati ber#arna biru danmemakai tripan biru, sel mati ber#arna biru dankalu sel hidup jernih mengkilatkalu sel hidup jernih mengkilat


19/45

Siapkan "a#an kultur dan taburkan selSiapkan "a#an kultur dan taburkan sel

ke dalam "a#an dan ditambah denganke dalam "a#an dan ditambah dengan

media penumbuh M2M, FBS 4>,media penumbuh M2M, FBS 4>,

antibiotik 0, fungiDone >,:1antibiotik 0, fungiDone >,:1

M2M saja tahan disimpan dalam AM2M saja tahan disimpan dalam Aoo

selama 4 5 0 bulan, media penumbuhselama 4 5 0 bulan, media penumbuhhan!a dapat selama 4 minggu.han!a dapat selama 4 minggu.


20/45

jika sel hidup, media jernih dan #arnajika sel hidup, media jernih dan #arna

media agak menguningmedia agak menguning

jika sel mati, media makin jambu danjika sel mati, media makin jambu danagak keruhagak keruh

dengan melihat diba#ah mikroskopdengan melihat diba#ah mikroskop

in%ersi, kelihatan sel melekat di dasarin%ersi, kelihatan sel melekat di dasar

"a#an"a#an jika sel mengapung di media setelah 0Ajika sel mengapung di media setelah 0A

jam, berarti sel matijam, berarti sel mati

2%aluasi kultur sel*2%aluasi kultur sel*


21/45

3ergantung pada desain penelitiann!a3ergantung pada desain penelitiann!a

sel sekresi, tetap mensekresikan sekret /sel sekresi, tetap mensekresikan sekret /

hormon masuk ke dalam mediahormon masuk ke dalam media

penelitian dihentikan pada #aktun!a,penelitian dihentikan pada #aktun!a,

seperti pada desainseperti pada desain media dikumpulkan tiap "a#an dalam satumedia dikumpulkan tiap "a#an dalam satu

tabung dan dikumpulkan sesuai dengantabung dan dikumpulkan sesuai dengan

kelompokn!akelompokn!a

setelah media terkumpul semuan!a,setelah media terkumpul semuan!a,

dikerjakan penghitungan konsentrasidikerjakan penghitungan konsentrasi

substansian!asubstansian!a


22/45

2%aluasi juga dapat dengan2%aluasi juga dapat dengan

5 menentukan kemampuan indeksmenentukan kemampuan indeksproliferasi, dengan menghitung inti selproliferasi, dengan menghitung inti sel!ang masih di dalam sel dibanding!ang masih di dalam sel dibandingdengan !ang ada diluar seldengan !ang ada diluar sel

5 Menghitung jumlah inti, denganMenghitung jumlah inti, denganmembubuhkan timidin terlabel kemembubuhkan timidin terlabel kedalam "a#an kultur, setelah kulturdalam "a#an kultur, setelah kulturdi"u"i dengan bufer hangat.di"u"i dengan bufer hangat.

5 $idiamkan 0A jam dan kemudian sel$idiamkan 0A jam dan kemudian seldilepas dengan "angkul kultur dandilepas dengan "angkul kultur dandihitungdihitung "ounter"ounter


23/45

)enanaman selsel tertentu perlu)enanaman selsel tertentu perlu

memakai matriks sel untukmemakai matriks sel untuk

pegangan sel, misaln!a antara lain*pegangan sel, misaln!a antara lain* Mioblas,Mioblas,

hepatosit,hepatosit,

endotelendotel

Matriks sel merupakan larutanMatriks sel merupakan larutan

bubuk kolagen !ang dilapiskan dibubuk kolagen !ang dilapiskan diatas "a#an dan tunggu keringatas "a#an dan tunggu kering

buatlah 0A jam sebelum menanam1buatlah 0A jam sebelum menanam1


24/45

Kultur sel primer !ang sangat mudahKultur sel primer !ang sangat mudah

tumbuh adalah +broblas, dalam 8> menittumbuh adalah +broblas, dalam 8> menit

sudah menempel pada "a#an kultursudah menempel pada "a#an kultur

Kalau menanam kultur denganKalau menanam kultur dengan

berma"am sel terutama ada +broblas,berma"am sel terutama ada +broblas,setelah ditabur masukkan ke dalamsetelah ditabur masukkan ke dalam

inkubator dan tunggu 8> menit supa!ainkubator dan tunggu 8> menit supa!a

semua +broblas menempel. Keluarkansemua +broblas menempel. Keluarkan

dari inkubator dan ambil media tanpadari inkubator dan ambil media tanpamengganggu dasar "a#an, +broblas adamengganggu dasar "a#an, +broblas ada

didasar "a#an, sel !ang diinginkan adadidasar "a#an, sel !ang diinginkan ada

di dalam media.di dalam media.


25/45

6ika menanam sel !ang ter"ampur6ika menanam sel !ang ter"ampur

dengan eritrosit, pisahkan eritrositdengan eritrosit, pisahkan eritrosit

dari selsel !ang diinginkan dengandari selsel !ang diinginkan dengan

menambahkan 2$3'. $itunggumenambahkan 2$3'. $itunggusebentar baru sel terpisah darisebentar baru sel terpisah dari

eritrositeritrosit


26/45

Subkultur, kalau kultur sudahSubkultur, kalau kultur sudah

kon7uen penuh di "a#an kultur1, selkon7uen penuh di "a#an kultur1, sel

dilepas dari "a#an dengandilepas dari "a#an dengan

memberikan >,0: tripsin sambilmemberikan >,0: tripsin sambil"a#an digo!ang dan di ba#ah"a#an digo!ang dan di ba#ah

mikroskop, sehingga kalau sudahmikroskop, sehingga kalau sudah

lepas kelihatan sel ikut go!ang.lepas kelihatan sel ikut go!ang.


27/45

)enting dalam publikasi, dalam gra+k)enting dalam publikasi, dalam gra+k

hasil perlu dituliskanhasil perlu dituliskan

5 'bsis'bsis * nomor kelompok* nomor kelompok

5 rdinat * ) ng/8rdinat * ) ng/888sel/mg protein/0Asel/mg protein/0A

jamjam


28/45

Kultur otot skelet setelahdi"at dengan Giemsa

Kultur otot skelet sebelumdi"at dengan Giemsa


29/45

Kultur sel &uteal, 4 hari

setelah dikultur

Kultur sel &uteal, : hari

setelah dikultur


30/45

Gas steriliDerGas steriliDer

'uto"la%e'uto"la%e


31/45

Sor%all super "entrifugeSor%all super "entrifuge


32/45

StirrerStirrer

orte


33/45

Spe"trophotometeSpe"trophotomete

rr


34/45

Biologi"al Safet!Biologi"al Safet!

abinetabinet


35/45

00In"ubatorIn"ubator


36/45

Stereo Mi"ros"opeStereo Mi"ros"ope


37/45

In%erted Mi"ros"opeIn%erted Mi"ros"ope


38/45

In%erted Mi"ros"ope #ithIn%erted Mi"ros"ope #ithMi"romanipulatorMi"romanipulator


39/45

&'B. H;K&'B. H;K

Membuat kultur mioblasMembuat kultur mioblas

sel !ang ditanam didapat darisel !ang ditanam didapat dari

selsel otot skelet embrio a!amotot skelet embrio a!am

umurumur antara 4> 5 40 hari.antara 4> 5 40 hari.

$ipisahpisah se"ara$ipisahpisah se"aramekanik,mekanik, digojok dan di%orte


40/45


41/45


42/45


43/45

);2)';'SI

Setelah semua jaringan !ang didapatSetelah semua jaringan !ang didapatdimasukkan ke dalam tabung !angdimasukkan ke dalam tabung !angberisikan media penumbuh, sel akanberisikan media penumbuh, sel akan

didapat dengan dipisah se"aradidapat dengan dipisah se"aramekanik 8< gojok dan 8 < %orte


44/45

Sel ditanam dalam "a#an kultur !angSel ditanam dalam "a#an kultur !angtidak diberi kolagen dan dimasukkantidak diberi kolagen dan dimasukkan

ke dalam inkubator ke dalam inkubator 00:, 8?:, 8?oo

selama 8> menitselama 8> menit

Fibroblas akan menempel pada "a#an,Fibroblas akan menempel pada "a#an,

sedangkan mioblas masih mengapungsedangkan mioblas masih mengapungdalam mediadalam media


45/45

Media diambil, mioblas akan terikut danMedia diambil, mioblas akan terikut dan

jangan mengusik dasar "a#an.jangan mengusik dasar "a#an.

Mioblas ditanam dalam "a#an !ang sudahMioblas ditanam dalam "a#an !ang sudahdiolesi dengan kolagen, untuk pegangandiolesi dengan kolagen, untuk pegangan

mioblas tumbuhmioblas tumbuh

Masukkan "a#an berisi mioblas ke dalamMasukkan "a#an berisi mioblas ke dalaminkubator inkubator 00:, 8?:, 8?oo, dan ditunggu, dan ditunggusampai tumbuhsampai tumbuh

kursus cell culture

Documents