ABSTRAK

Karena kompleksitas kerangka dan kesamaan polaritas, riset kecil dilaporkan pada isolasi sesquiterpene lakton oleh kromatografi berarus-balik berkecepatan tinggi (HSCCC). Di sini, tiga sesquiterpene lakton berhasil ditahirkan dari ekstrak etil asetat akar tanaman obat Uighur tradisional Cichorium glandulosum Boiss. et Huet. oleh HSCCC. Pemisahan ini dilakukan dalam dua langkah-langkah dengan dua sistem pelarut: n-hexane–ethyl acetate–methanol–water (1.5:5:2.75:5, v/v/v/v) dan etil acetate–methanol–water (20:1:20, v/v/v). Dari 166 mg ekstrak etil asetat, 19 mg lactucopicrin diisolasi dengan sistem pelarut pertama dan 10 mg 11, 13-dihydrolactucin dan 16 mg lactucin diperoleh dengan sistem pelarut yang kedua. Semua senyawa murni yang lebih dari 94% kemurnian yang ditentukan oleh analisis HPLC, dan struktur kimia ini dikonfirmasi oleh 1 H NMR dan NMR 13 C.

INTRODUKSICichorium glandulosum Boiss. et Huet. (Compositae, Asteraceae) dikenal baik dalam

obat rakyat Uighur sebagai cholagogic dan agen diuretik untuk meningkatkan nafsu makan, meningkatkan pencernaan, dan untuk menyembuhkan penyakit hati, dll [1]. Tanaman ini didistribusikan secara luas di Xinjiang, namun komposisi kimianya tidak dipelajari secara menyeluruh. Sebelumnya, penulis melaporkan isolasi dan pemurnian kumarin utama (esculetin) dari biji tanaman ini [2]. Di tempat lain, ditemukan sedikit informasi tentang hal ini tanaman Metabolit sekunder. Di Farmakope Cina dari Republik Rakyat Cina, "Juju" (Herba Cichorii dan Radix Cichorii) mengacu pada bagian respirasi dan akar Cichorium intybus L. dan Cichorium glandulosum Boiss. et Huet., et all [1]. Dengan demikian, kedua spesies, milik genus yang sama (Cichorium L.), mungkin memiliki komposisi kimia yang serupa dan bioactivities. Dari karya-karya yang diterbitkan, lakton sesquiterpene adalah zat yang utama. Yang paling melimpah adalah lactucin, lactucopicrin, dan 11, 13 dihydroderivatives [3,4]; Gambar 1 menunjukkan struktur kimia mereka. Banyak farmakologi studi pada lakton sesquiterpene telah dilakukan sebelumnya, seperti antikanker [5,8], antimalaria aktivitas [6], analgesik dan obat penenang kegiatan [7], dan anti-inflamasi efek [9]. Kemajuan dan prestasi fungsional herbal ekstrak telah semakin nyata di dunia. Tapi kontrol kualitas ramuan ekstrak harus diperkuat untuk memastikan keamanan dan efektivitas. Laporan ini tidak hanya untuk mengusulkan prosedur umum sukses isolasi, dan pemurnian sesquiterpene lakton oleh kromatografi berarus-balik berkecepatan tinggi (HSCCC) menurut serangkaian pilihan sistem pelarut, tetapi juga untuk menyediakan beberapa senyawa murni sebagai "penanda senyawa" untuk kontrol kualitas produk-produk herbal yang mengandung lactucin-seperti guainolides.

HSCCC adalah jenis partisi bebas dukungan semua kromatografi cair yang pertama diciptakan oleh Ito [10].Aplikasi dari HSCCC untuk pemisahan dan pemurnian berbagai jenis senyawa alami yang termasuk flavanoids, saponin dan alkaloid telah dilaporkan sebelumnya. Riset kecil dilaporkan pada isolasi sesquiterpene lakton oleh HSCCC, demikian pula, Li et al. terisolasi costunolide dan dehydrocostuslactone dari tanaman obat Cina Aucklandia lappa menggunakan cahaya petroleum–methanol–water (5:6.5:3.5, v/v/v) [11] dan Yan et al. terisolasi dua insektisida germacrone dan curdione dari minyak esensial II suku ini c. wenyujin menggunakan HSCCC dengan sistem pelarut: minyak ether–ethanol–diethyl ether–

water (5:4:0.5:1, v/v/v/v) [12]. Dalam makalah ini, tiga sesquiterpene lakton dengan kerangka serupa berhasil diisolasi dan dimurnikan dalam dua langkah dan dengan dua sistem pelarut: n-hexane–ethyl acetate–methanol–water (1.5:5:2.75:5, v/v/v/v) dan etil acetate–methanol–water (20:1:20, v/v/v). Semua senyawa murni yang lebih dari 94% kemurnian sebagaimana ditentukan oleh HPLC.

EKSPERIMEN

A. PersiapanHSCCC instrumen yang digunakan dalam studi ini adalah kumparan

multiplayer 10A2 Model GS dari 110m×1.6mm ID dengan kapasitas total 230 ml (dirancang dan dibangun di Beijing Institut Teknologi aplikasi baru, Beijing, Cina). Nilai-nilai β kisaran persediaan kolom ini dari 0,5 0.8. Revolusi kecepatan peralatan bisa diatur dengan kecepatan controller di kisaran antara 0 dan 1000 rpm. Kecepatan optimum 800 RPM adalah digunakan dalam kajian ini.

Pelarut dipompa ke kolom dengan Model NS-1007 konstan-flowpump (Beijing Institute of NewTechnology Aplikasi, Beijing, Cina). Pemantauan terus menerus tembusan dicapai dengan Model 8823A-UV monitor (Beijing Institut Teknologi aplikasi baru) di 254 nm. Sampel injeksi manual katup diubah dengan 2,5 ml loop untuk HSCCC persediaan (Tianjin NewScience teknologi tinggi, Tianjin, China) digunakan untuk memperkenalkan sampel ke dalam kolom, masing-masing. Perekam portabel (Masaoka Model 3057, Cina pabrik, Chongqing, Sichuan instrumen) adalah digunakan untuk menarik chromatograms.

Peralatan kromatografi cair berperforma tinggi (Dionex, Sunnyvale, CA, USA) digunakan adalah sistem Dionex termasuk pompa P680, ASI-100 otomatis injektor sampel, TCC-100 kolom pengontrol suhu kompartemen, Detektor UVD170U. Analisis ini dilakukan dengan Luna fase dibalik C18 kolom (250mm×4.6 mm, id, 5 m; Phenomenex, Torrance, CA, Amerika Serikat). Evaluasi dan kuantifikasi dibuat pada Chromeleon Workstation.

B. Reagen dan BahanSemua pelarut organik yang digunakan untuk HSCCC adalah analitis Grade

dan dibeli dari pabrik kimia Tianjing (Tianjing, Cina). Metanol digunakan untuk HPLC adalah grade HPLC dan dibeli dari Fisher ilmiah (Fair Lawn, NJ, Amerika Serikat). Akar Cichorium glandulosum Boiss. et Huet. dikumpulkan dari Jimsar County, Xinjiang Uighur otonomi Pemerintahan, Republik Rakyat Cina pada September 2004 dan yang diidentifikasi oleh Prof. L.Y. Zhang Institut XinjiangEkologi dan geografi, Akademi Ilmiah Tiongkok.

C. Persiapan sampel mentah

Sekitar 0,5 kg bubuk akar Cichorium glandulosum Boiss. et Huet. yang percolated dengan metanol (5000 ml) pada suhu kamar di kolom. Ekstrak dikombinasikan dan menguap kekeringan pengurangan tekanan, yang menghasilkan 37 g ekstrak minyak mentah. Ekstrak minyak mentah dilarutkan di 200 ml air dan kemudian diekstraksi dengan eter minyak bumi (200 ml, 3 kali), etil asetat (200 ml, 3 kali) untuk menghasilkan 4.174 g (sampel 1) dan 4.627 g (sampel 2), masing-masing.

Contoh 2 (166 mg) digunakan untuk pemisahan HSCCC lactucopicrin (puncak I), dan fraksi sebelum waktu retensi puncak saya yang semua dikumpulkan dan menguap pengurangan tekanan untuk mendapatkan sampel 3 (95 mg) untuk ofHSCCCseparation langkah kedua 11, 13-dihydrolactucin (puncak II) dan lactucin (puncak III).

D. Pemilihan 2 fase pelarut

Sistem pelarut 2 fase dipilih menurut Koefisien partisi (K) komponen target sampel 2 dan 3. Nilai K yang ditentukan oleh analisis HPLC sebagai berikut: cocok jumlah sampel ditambahkan ke campuran volume yang sama dan tahap atas tahap yang lebih rendah dari sistem pelarut Two-phase. Solusi kemudian dicampur secara menyeluruh. Setelah equilibration didirikan, tahap atas dan tahap yang lebih rendah, masing-masing, yang dianalisis oleh HPLC. Area puncak dari fase atas tercatat sebagai AU dan bahwa bawah fase ini tercatat sebagai AL. Nilai K yang dihitung Menurut persamaan berikut: K = AU/AL.

E. Persiapan 2 fase larutan pelarut dan larutan sampelsistem pelarut 2 fase yang digunakan terdiri dari nhexane–etil acetate–

methanol–water (1.5:5:2.75:5, v/v/v/v) dan etil acetate–methanol–water (20:1:20, v/v/v). Pelarut campuran benar-benar dipisahkan di corong pisah di suhu kamar dan dua fase dipisahkan segera sebelum digunakan. Fasa stasioner adalah atas fasa organik dan fasa gerak adalah tahap yang lebih rendah. larutan sampel dibuat dengan melarutkan 166 mg sampel 2 di 2 ml atas fase pertama sistem pelarut. Untuk tahap kedua 95 mg sampel 3 diuapkan 1,5 ml tahap atas kedua sistem pelarut.

F. Prosedur pemisahan HSCCCPemisahan HSCCC dilakukan sebagai berikut: fase atas (stasioner tahap)

dipilih pelarut sistem dipompa ke dalam kolom pemisahan pada awalnya. Setelah kolom adalah benar-benar dipenuhi dengan tahap atas, peralatan HSCCC dijalankan pada kecepatan 800 PGK. Pada saat yang sama, tahap yang lebih rendah Ini dipompa ke kolom di flowrate min−1 2,0 ml. Setelah hydrodynamic mencapai kesetimbangan (sekitar 50 menit kemudian), larutan sampel disuntikkan ke dalam kolom pemisahan melalui katup injeksi. Tembusan dari ujung ekor pemisahan kolom terus-menerus dipantau di 254 nm. Setelah 60 menit sampel injeksi, data yang dikumpulkan segera. Pecahan sebelum waktu retensi puncak saya Semua dikumpulkan dan diuapkan, pengurangan tekanan untuk mendapatkan sampel 3 (95 mg) untuk langkah kedua pemisahan HSCCC. Pecahan lainnya dikumpulkan secara manual menurut Diperoleh chromatogram dan kemudian menguap pengurangan tekanan. Residu yang larut dalam metanol untuk analisis kemurnian berikutnya oleh HPLC.

F.1. Pemisahan lactucopicrin oleh HSCCCSistem pelarut yang terdiri dari n-hexane–ethyl acetate–Methanol–Air

(1.5:5:2.75:5, v/v/v/v) digunakan untuk lactucopicrin Pemisahan HSCCC. 19 mg lactucopicrin Diperoleh dari 166 mg sampel 2 dengan kemurnian 94,8% seperti yang ditentukan oleh HPLC.

F.2. Pemisahan 11β, 13-dihydrolactucin dan lactucin oleh HSCCC

Sistem pelarut two-phase terdiri dari etil acetate–Methanol–Air pada volume rasio 20: 1: 20 digunakan untuk 11, 13-dihydrolactucin dan lactucin pemisahan HSCCC. Dari 95 mg sampel 3, 10 mg 11, 13-dihydrolactucin dan 16 mg dari lactucin diperoleh kemurnian 95.3 dan 99.6%, masing-masing sebagaimana ditentukan oleh HPLC.

G. Analisis HPLC dan identifikasi dari puncak HSCCC

Sampel (sampel 2 dan 3) dan puncak dari HSCCC yang dianalisis oleh HPLC. Analisis ini dilakukan dengan kolom C18 (250mm×4.6 mm, id, 5 m) di kolom suhu 35 ◦C. Fasa gerak adalah gradien metanol dan air sebagai berikut: 40% metanol (6 menit), 40% metanol (6–6.5 min), 50% metanol (6.5–20 menit), 50–95% metanol (20–23 menit), 95% metanol (23–30 min) kemudian kembali ke awal (40% metanol) dalam 2 menit dan terus kesetimbangan for10 menit. Laju aliran adalah min−1 1,0 ml dan tembusan dipantau di 258 nm oleh UV detektor. Identifikasi puncak HSCCC dilakukan oleh NMR 1 H dan NMR 13 C. Puncak I diidentifikasi sebagai lactucopicrin [5]. Puncak II diidentifikasi sebagai 11, 13-dihydrolactucin [15] dan peak III adalah diidentifikasi sebagai lactucin [14].