FACULTAD DE CIENCIAS FARMACUTICAS Y BIOQUMICA

BIOQUIMICA 2

PRCTICA N5

TEMA:

Determinacin de Glucosa por Mtodo Enzimtico

ALUMNO:

BENAVIDES BERMUDEZ, JESSICA DOCENTE:

Q.F Jack Caldern.2015-II

PRACTICA N 5Determinacin de glucosa por mtodo Enzimtico.I-INTRODUCCION

La glucosa es la principal fuente de energa para el metabolismo celular. Se obtiene fundamentalmente a travs de la alimentacin, y se almacena principalmente en el hgado, el cual tiene un papel primordial en el mantenimiento de los niveles de glucosa en sangre (glucemia). Para que esos niveles se mantengan y el almacenamiento en el hgado sea adecuado, se precisa la ayuda de la insulina, sustancia producida por el pncreas.

La glucosa es un azcar que es utilizado por los tejidos como forma de energa al combinarlo con el oxgeno de la respiracin. Cuando comemos el azcar en la sangre se eleva, lo que se consume desaparece de la sangre, para ello hay una hormona reguladora que es la insulina producida por el pncreas (islotes pancreticos). Esta hormona hace que la glucosa de la sangre entre en los tejidos y sea utilizada en forma de glucgeno, aminocidos, y cidos grasos. Cuando la glucosa en sangre est muy baja, en condiciones normales por el ayuno, se secreta otra hormona llamada glucagn que hace lo contrario y mantiene los niveles de glucosa en sangre. Cuando la insulina es insuficiente, la glucosa se acumula en sangre, y si esta situacin se mantiene, da lugar a una serie de complicaciones en distintos rganos. Esta es la razn principal por la que se produce aumento de glucosa en sangre, pero hay otras enfermedades y alteraciones que tambin la provocan.

El tejido ms sensible a los cambios de la glucemia es el cerebro, en concentraciones muy bajas o muy altas aparecen sntomas de confusin mental e inconsciencia.

El mantenimiento de la glucemia, o concentracin plasmtica de glucosa, en los organismos superiores es fundamental para el funcionamiento de todos los rganos, al ser la glucosa un metabolito energtico principal.

La ingestin de glucosa o sustancias que la produzcan (almidn, fructosa, galactosa, protenas, pero no grasas) va seguida, en las personas sanas, por un aumento de la glucosa en sangre. Este aumento origina la puesta en marcha del mecanismo regulador: aumento de la utilizacin de glucosa (por gluclisis, entre otras), aceleracin de la glucogenognesis y disminucin de la glucogenlisis; todo ello ocurre principalmente mediante la secrecin de insulina, una hormona pancretica de tipo polipeptdico. En el caso de que la produccin de insulina est disminuida, la glucosa no puede ser utilizada por las clulas, lo cual ocasiona niveles elevados de glucosa en sangre (hiperglucemia); as ocurre en las personas que sufren diabetes del tipo denominado "dependiente de insulina" o "tipo 1".

El diagnstico de la diabetes dependiente de insulina es sencillo y se basa en antecedentes, sntomas clnicos y comprobacin de una hiperglucemia significativa. Las determinaciones de glucemia basal permiten el diagnstico de la diabetes, pero constituyen valores puntuales y aislados en el tiempo que no reflejan los niveles medios de glucemia ni la duracin de la misma. Por lo tanto, es necesario disponer de pruebas que indiquen el grado del control metablico de la enfermedad a corto y medio plazo. Estas pruebas estn basadas en el fenmeno de unin de la glucosa a diversas protenas. Esta glucosilacin tiene lugar por una reaccin no enzimtica y afecta tanto a protenas de vida media corta (albmina, hemoglobina, etc.) como de vida media larga (colgeno, mielina, etc.). La intensidad de la glucosilacin depende de varios factores, siendo los ms importantes los niveles medios de glucemia, la duracin de la hiperglucemia, la vida media de las protenas y la concentracin de stas. Como consecuencia, la medida de la glucosilacin proteica constituye un buen marcador bioqumico del grado de compensacin del enfermo diabtico.

II-FUNDAMENTO TEORICO Glucosa

Es un glcido o carbohidrato, ms precisamente un monosacrido, la estructura ms sencilla dentro de los azcares simples, presente en forma libre en las frutas y la miel. Entre los carbohidratos de absorcin rpida,la glucosa es la que se absorbe ms rpidamente.

La glucosa es una fuente importante de energa para la mayora de las clulas del cuerpo, incluidas las del cerebro. Los carbohidratos que se encuentran en las frutas, los cereales, el pan, la pasta y el arroz se transforman rpidamente en glucosa en el cuerpo, lo que eleva el nivel de dicho azcar en la sangre.

Las hormonas producidas en el cuerpo llamadas insulina y glucagn ayudan a controlar los niveles de azcar en la sangre.

Caractersticas

La glucosa, libre o combinada, es el compuesto orgnico ms abundante de la naturaleza. Es la fuente primaria de sntesis de energa de las clulas, mediante su oxidacin catablica, y es el componente principal de polmeros de importancia estructural como la celulosa y de polmeros de almacenamiento energtico como el almidn y el glucgeno.

A partir de su estructura lineal, la D-glucosa sufre una ciclacin hacia su forma hemiacetlica para dar sus formas furano y pirano (D-glucofuranosa y F-glucopiranosa) que a su vez presentan anmeros alfa y beta. Estos anmeros no presentan diferencias de composicin estructural, pero si diferentes caractersticas fsicas y qumicas.

La glucosa es uno de los tres monosacridos dietticos, junto con fructosa y galactosa, que se absorben directamente al torrente sanguneo durante la digestin. Las clulas lo utilizan como fuente primaria de energa y es un intermediario metablico. La glucosa es uno de los principales productos de la fotosntesis y combustible para la respiracin celular.

Todas las frutas naturales tienen cierta cantidad de glucosa (a menudo con fructosa), que puede extraerse y concentrarse para preparar un azcar alternativo. Sin embargo, a escala industrial tanto el jarabe de glucosa (disolucin de glucosa) como la dextrosa (glucosa en polvo) se obtienen a partir de la hidrlisis enzimtica de almidn de cereales (generalmente trigo o maz). Biosntesis

Los organismos fotoauttrofos, como las plantas, sintetizan la glucosa en la fotosntesis a partir de compuestos inorgnicos como agua y dixido de carbono, segn la reaccin:

Los seres hetertrofos, como los animales, son incapaces de realizar este proceso y toman la glucosa de otros seres vivos o la sintetizan a partir de otros compuestos orgnicos. Puede obtenerse glucosa a partir de otros azcares, como fructosa o galactosa. Otra posibilidad es la sntesis de glucosa a partir de molculas no glucdicas, proceso conocido como gluconeognesis. Hay diversas molculas precursoras, como el lactato, el oxalacetato y el glicerol.

Tambin existen ciertas bacterias anaerobias que utilizan la glucosa para generar dixido de carbono y metano segn esta reaccin:

Forma en que se realiza el examen:

Se necesita una muestra de sangre. Esto se realizar antes del procedimiento de la glucosa a travs de la venopuncin o flebotoma. Preparacin para el examen:

Despus de nohaber comida nada (en ayunas) durante 7-8 horas. No ingerir ningn tipo de frmacos durante 72 horas.

Lo que se siente durante el examen:

Cuando se inserta la aguja para extraer la sangre, algunas personas sienten un dolor moderado, mientras que otras slo sienten un pinchazo o sensacin de picadura. Posteriormente, puede haber algo de sensacin pulstil. Razones por las que se realiza el examen:

El mdico puede solicitar este examen si uno tiene signos de diabetes. Sin embargo, otros exmenes (prueba de tolerancia a la glucosa y examen de glucemia en ayunas) son mejores para diagnosticar la diabetes. El examen de glucemia tambin se utiliza para monitorear a pacientes que padezcan diabetes. Tambin se puede hacer si usted presenta:

Un cambio en el comportamiento

Episodios de desmayo

Convulsiones por primera vez

Por qu se hace esta prueba? Por lo general, la prueba de glucosa en la sangre se hace para detectar la diabetes mellitus. Recomendaciones para el anlisis de glucosa?La forma ms fcil de detectar la diabetes es medir la cantidad de azcar en la sangre (glucosa) antes de que el paciente coma o beba algo por la maana. En la mayora de los casos, el paciente deber ayunar durante la noche anterior, no comer ni beber nada ms que agua despus de la cena y por la maana antes de la extraccin de sangre.

MTODO ENZIMATICO Significara Clnica. La patologa ms comn relacionada con el metabolismo de los hidratos de carbono es la diabetes mellitus. El diagnstico precoz y el control de los pacientes diabticos, tienen por objeto evitar la cetoacidosis y las complicaciones de los sntomas resultantes de la hiperglicemia, mediante el tratamiento adecuado. Dado que existen mltiples factores causales de hiper o hipoglicemia, debe considerarse en cada caso la condicin fisiolgica y/o patologa en cada paciente en cuestin. Fundamento Del mtodo.

La glucosa oxidasa (GOD) oxida a la glucosa en cido glucnico y forma el perxido hidrgeno. En presencia de peroxidasa (POD) el peroxido hidrgeno reacciona con el fenol y 4-aminofenazona y produce un complejo coloreado, cuya intensidad de color es directamente proporcional a la concentracin de glucosa en la muestra.

Glucosa +O2 + H2O GOD cido glucnico + H2O2 2 H2O2 + 4-AF + fenol POD Quinoneimina coloreada + 4 H2O

Abreviaturas:

GOD = Glucosa oxidasa

POD = Peroxidasa 4-AF = 4-aminofenazona. Composicin del Reactivo Ingredientes activos Concentracin Glucosa oxidasa > 15000 U/L Peroxidasa > 1000 U/L 4-Aminoanlipirina 0.3 mM

Fenol 0.5Mm Buffer Fosfato

Estabilizadores no reactivos y relleno

Azida de sodio 0.02%

Ph (7.3+0.15)

-III-OBJETIVOS Capacitar al alumno para que conozca, maneje y determine el valor de la glucosaen sangre, utilizando el anlisis objetivo para la deduccin de un resultado real. Destacar la importancia de la glucosa en el metabolismo humano y su relacin condiversas patologas.IV-MATERIALES Y REACTIVOS Tubos de ensayo

Beacker

Gradilla

micropipetas de 2.0 mL. Micropipeta de 20L. Puntas para micropipeta. Reactivo de Glucosa Enzimtica.EQUIPOS:

- Centrifuga.

- EspectrofotmetroV-PARTE EXPERIMENTAL1- Obtener la muestra clnica.

La muestra debe recolectarse en ayuno excepto por el agua, durante ocho horas cuando menos antes de la prueba. La muestra debe recolectarse en tubo colector de tapn rojo para suero el cual no contiene anticoagulante, o de color lila el cual contiene EDTA anticoagulante para obtener plasma.

Nota:

- Los anticoagulantes de uso corriente como la EDTA, oxalato, heparina o fluoruro no

afectan los resultados.

- La hemlisis hasta 0,3 g/dL de hemoglobina no interfiere.

- La muestra es inaceptable si:

a) Si el suero se obtiene turbio.

b) Si la identificacin es inadecuada.

c) Si el tubo de recoleccin no es el adecuado.

d) Cuando se haya excedido el tiempo mximo de anlisis permisible.2- La muestra se centrifugo a 3000 rpm durante 10min y temperatura ambiente para separar el suero y plasma. La glucosa en suero o plasma es estable al menos 3 das a 2- 8C.

3-Se dej por unos minutos el reactivo a temperatura ambiente.4- Rotular, limpiar y secar con papel tis los tres tubos.

5- Preparar las soluciones segn el siguiente cuadro:BLANCOESTANDARMUESTRA PROBLEMA

Reactivo 2000ul 2000ul 2000ul

Incubar los tubos por 5 minutos y luego agregar

Estndar - 20ul -

Muestra problema - - 20ul

6- Se mezclo e incubo todos los tubos a 37C por 5 minutos.

7- Leer cada tubo, en absorbancia de 505 nm llevando el equipo a cero con el blanco de reactivo.

OBSERVACIONES: VALORES NORMALES GLUCOSA: 60-120mg / dl

RESULTADOS: Absorbancia de la muestra.. 0.050

Absorbancia del estndar 0.040[Glu]= ABS MP * [ Estndar] Abs Estndar

[Glu]= 0.050 * 100 = 125mg/dl 0.040

Como se puede observar el paciente tiene 125mg /dl de glucosa, una cifra superior al valor normal de glucosa (120mg /dl). SIGNIFICADO DE LOS RESULTADOS ANORMALESSI LE HICIERON UN EXAMEN DE GLUCEMIA EN AYUNAS: Unnivelde 100a 125 mg/dL significa que usted tiene una alteracin de la glucosa en ayunas, un tipo de prediabetes. Esto incrementa elriesgo para la diabetes tipo 2.

Un nivel de 126 mg/dL o mayor casi siempre significa que usted tiene diabetes.

Los niveles aleatorios de glucosa en la sangre superiores a los normalespueden ser un signo de diabetes. En alguien que tenga diabetes, puede significar que la enfermedad no est bien controlada. El mdico probablemente ordenar una glucemia en ayunas o un examen de tolerancia a la glucosa, dependiendo del resultado del examen aleatorio.

OTROS PROBLEMAS MDICOS TAMBIN PUEDEN PROVOCAR NIVELES DE GLUCOSA EN LA SANGRE SUPERIORES A LO NORMAL, COMO:

Hipertiroidismo Cncer pancretico Pancreatitis

Tumores raros, entre ellos feocromocitoma, acromegalia, sndrome de Cushing o glucagonoma

LOS NIVELES DE GLUCOSA EN LA SANGRE INFERIORES A LO NORMAL (HIPOGLUCEMIA) PUEDEN DEBERSE A:

Hipopituitarismo (un trastorno de la hipfisis)

Hipotiroidismo Insulinoma (muy poco comn)

Muy poco alimento

Demasiada insulina u otros medicamentos para la diabetes

CONCLUSIONES. La prueba est por arriba de los niveles normales (70-120 mg/dl) mostrando en el donante una hiperglucemia (125 mg/dl), aunque en situaciones de estrs intenso los niveles de glucosa en la sangre pueden aumentar temporalmente .Ya que el donante fue en ayunas, no ingiri medicamentos ni alcohol antes de la prueba. Con esta prueba, se puede observar la facilidad con la que se puede diagnosticar un problema en la regulacin de la glicemia y lo importante que resulta en la clnica en especial para pacientes con Diabetes Mellitus para llevar uncontrolya que es una enfermedad incurable solo es controlable a travs de sus niveles de glucosa sangunea. El diagnostico temprano de esta enfermedad es de suma importancia para evitarproblemascrnicos y efectos secundarios.

BIBLIOGRAFIA http://es.slideshare.net/ROYMAYCOL/guia-de-practica-de-bioquimica-i?related=3 http://es.slideshare.net/PauloGranda10/determinacin-de-glucosa-en-sangre?related=2 http://es.slideshare.net/OswaldoAngeles/manual-bioqumica-clnica-unam?related=2