1. Accuraacy dan presisia. Perbedaan accuracy dan precision:Ketepatan (Accuracy) parameter yang menunjukkan kedekatan hasil pengukuran dengan nilai sebenarnya. Kecermatan (precision)adalah parameter yang menunjukkan keseragaman hasil pengukuran .b. Perbedaan standart dan blank? Jelaskan fungsinya:-Larutan standart untuk mengecek ketepatan suatu metode.-Larutan blank untuk mengecek kemurnian reagen.c. Sebutkan macam eror dan penyebabnya!Random, unpredictable contohnya : pakai PCR, tetapi lampu nya mati. Careless, pure human eror, tidak mempelajari protokol, menggunakan alat yang rusakd. Bagaimana cara membersihkan glassware?-Kotoran berupa lemak menggunakan alkohol, khloroform, benzena, dll.-Peralatan yang sangat kotor menggunakan konsenstrat nitrit dan asam sulfur, dibilas dengan air mengalir (aquades), -Normal glassware dikeringkan di oven-Volumetric glassware dikeringkan dengan udara hangat

2. Asam dan Basaa. apa yang dimaksud dengan buffer dan apa fungsinya? Buffer adalah campuran antara asam/ basa lemah dengan garamnya, berfungsi untuk mempertahankan pH pada suatu larutan secara konstan.b. bagaimana cara menentukan derajat asam-basa dari ketiga buffer (buffer karbonat bikarbonat, buffer fosfat, buffer protein) dalam sistem hayati? Buffer karbonat bikarbonat: derajat pH ditentukan oleh perbandingan sodium bikarbonat (NaHCO3) dgn asam karbonat (H2CO3). Normal NaHCO3:H2CO3= 20:1. buffer phosphat: peran dlm mmperthankan asam basa cairan dalam tubula ginjal. Derajat pH ditentukan oleh naik atau turunnya ekskresi ion hidrogen.c. bagaimana cara mengkaliberasi pH meter? Kemukakan alasannya kenapa harus dikaliberasi! Kaliberasi dilakukan paling sedikit dengan 2 larutan buffer yang mencakup kisaran pH larutan yang akan diukur, saat mengkaliberasi perlu diperhatikan pula temperatur larutan standar yang diukur karena suhu berpengaruh terhadap nilai pH. Dikaliberasi karena agar data hasil pengukuran calid, akurat mendekati kebenaran

3. sentrifugasia. apa dasar pemisahan partikel dalam sentrifugasi? Pemisahan berdasarkan ukuran, bentuk, densitas, viskositas medium dan kecepatan rotor.b. Apa yang dimaksud dengan stay steady dalam prinsip sentrifugasi?kondisi dimana partikel akan tetap tinggal (tidak terpisah) pada saat tidak ada perbedaan densitas (kondisi isopiknik).c. jelaskan jenis pemisahan sentrifugal! Sentrifugal diferensial : berdasarkan oada ukuran partikel, digunakan untukmenghasilakn pelet dan preparasi organela subseluler dan makromolekul, homogenat sel dapat disentrifugasi bertahap dengan meningkatkan kecepatan sentrifugasi (g) dan waktu sentrifugasi sehingga dihasilkan pelet yang mengandung organela yang telah dipurifikasi. Sentrifugasi gradien densitas: dilakukan untuk purifikasi organela subseluler dan makromolekul, dilakukan dengan membuat lapisan gradient media (misal sukrosa) dari yang paling berat di bagian paling bawah, ada dua macam ; rate zonal (size) separation dan isopycnic separation

4. Spektroskopia. jelaskan prinsip dasar spektroskopi dan spektrofotometri! Adalah pengukuran intensitas dan panjang gelombang radiasi yang terserap atau terpantulkan oleh suatu bahan, spektroskopi (absobsi) dan fluorometri (emisi/pantulan)b. apa perbedaan jenis speektroskopi UV dan spektroskopi Vis? Panjang gelombang UV: 200 -400 nm. Panjang gelombang visible 400 800 nm.c. bagaimana cara membaca hasil spektroskopi?

5. penghancuran sel dan homogenisasia. sebut dan jelaskan metode penghancuran sel! b. jelaskan prinsip dialysis ! Dialisis: proses yang memisahkan molekul berdasarkan ukuran melalui penggunaan membran semipermeabel.Dialisis umumnya digunakan untuk menghilangkan garam dari protein.Pemisahan zat terlarut melalui membran semipermeabel. Membran semipermeabel yang mengandung pori-pori kurang dari dimensi makromolekul.Pori-pori di membran dialisis dengan ukuran tertentu.Pori-pori di membran memungkinkan pelarut, garam dan metabolit kecil untuk berdifusi melintasi tapi memblok molekul yang lebih besar.Protein tinggal, air, garam, fragment protein dan molekul lainnya yg lebih kecil dari ukuran pori dapt melewatinya.Cellophane (selulosa asetat) bahan dialisis yang paling umum digunakan.Biasanya digunakan untuk mengubah pelarut dimana protein terlarut masukBisa juga digunakan untuk berkonsentrasi solusi protein dengan penempatan di dessicant. Selain polimer (PEG) yang tidak bisa pergi melalui membran tetapi menyerap air melalui membran.c. Apa yang dimaksud dengan homogenasi?

Ultrasonikasi

Biasa untuk pemecahan organisme sel tunggal seperti sel-sel bakteri atau yeastGetaran ultrasonic membentuk gelembung kavitasi (muncul akibat variasi tekanan ekstrem yang dihasilkan oleh gelombang suara) kadang disertai kenaikan temperatur / panas sehingga sampel perlu didinginkan berkali kalibahaya : berpotensi merusak organ pendengaran sehingga disarankan dikerjakan dlm ruang kedap

2. Freeze thawing / beku-cair

efektif untuk organisme tanpa dinding sel seperti : sel bakteri dan sel mamalia membekukan suspensi sel dalam dry ice/ethanol atau freezer dan kemudian diikuti dengan thawing/ mencairkannya pada suhu kamar/ 37C.

sel membengkak saat kristal es terbentuk selama proses pembekuan dan kemudian mengalami kontraksi selama pencairan sehingga dan akhirnya lisis dilakukan berulang agar sel lisis secara efisienefektif melepaskan protein rekombinan yang terletak di sitoplasma bakteri.

3. Bead mill homogenization 4.Grinding under liquid nitrogen5.Blender6.cylindrical rotating bladePotter homogenizer

Efek gesek / shearing effect merupakan teknik yang sering digunakan untuk pemecahan sel

Shearing effect

3. Bead mill homogenization

Potter homogenizer td. Tabung gelas dengan pestle (alu) yang sesuai dengan besar lubang tabung tsbt.

Potter homogenizer

homogenisasi jaringan secara kasar dapat dilakukan dengan blender (pisau yg diputar dgn kecepatan tinggi). Biasa digunakan pada sampel yang berupa potongan2/cacahan jaringan. Menyebabkan kerusakan yg cukup tinggi pd sel. Digunakan sebagai proses homogenisasi awal sebelum dilakukan homogenisasi lebih lanjut untuk jaringan yg lebih kecil digunakan cylindrical rotating blade yang dpt diatur untuk memperoleh kerusakan selular dengan kondisi yang lebih spesifik.ketika pisau-pisau tersebut diatur sedemikian rupa dapat menghasilkan efek ultrasonik.

Mortar and Pestle

Manual grinding is the most common method used to disrupt plant cells. Tissue is frozen in liquid nitrogen and then crushed using a mortar and pestle. Because of the tensile strength of the cellulose and other polysaccharides comprising the cell wall, this method is the fastest and most efficient way to access plant proteins and DNA.

menggunakan campuran yang mengandungdetergen (SDS, CTAB, Dll)NaClBuffer (Misal Tris, Phosphat, dll)SukrosaEDTA

Penggunaan campuran bahan ini dilakukanberdasar pada pengalaman.

Enzim yang sering digunakan :lisosimporteinase-KAkromopeptidasePronase E

setelah proses pemecahan sel maka akan diperoleh suspensi yang berisi semua isi sel, yang disebut HOMOGENATE atau EKSTRAK