BAB I. PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Di dalam bidang ilmu mikrobiologi ada suatu hal mendasar yang juga perlu

diperhatikan yaitu analisia kuantitatif terhadap suatu bahan. Suatu analisis ini

sangat penting untuk mengetahui jumlah mikroorganisme yang ada pada suatu

sampel tertentu (Fardiaz, 1992). Enumerasi adalah metode perhitungan jumlah

mikroba yang terkandung pada suatu sampel. Terdapat berbagai macam metode

enumerasi antara lain: metode pengenceran, metode perhitungan langsung dalam

ruang hitung (hemasitometer), membrane filter, metode berat kering dan volume

sel, metode MPN (Most Probable Number) dan lain sebagainya (Kawuri

dkk,2007).

Isolasi adalah suatu proses pemindahan suatu mikroba yang diinginkan atau

yang diteliti dari media asal agar terpisah dari mikroba lainnya (kontaminan)

(Purwaningsih 2004). Pada proses isolasi ada dua metode yang sering digunakan

yaitu penanaman pada lempeng agar dan metode pengenceran (Jewetz.et

al.,1996).Metode pengenceran dilakukan dengan menggunkan seri pengenceran

dari sampel yang ditanam pada suatu media. Media dengan sampel diinkubasi dan

koloni yang tumbuh dapat dihitung dengan asumsi bahwa satu koloni yang tumbuh

berasal dari satu sel. Pengenceran biasanya dinyatakan dalam pangkat negatife

(Kawuri dkk, 2007). Cawan yang nantinya dipilih untuk perhitungan koloni adalah

yang mengandung antara 30-300 koloni (Kawuri dkk,2007).

1.2 Tujuan

1.Untuk mengetahui metode – metode yang digunakan dalam menghitung jumlah

mikroba.

2.Untuk mengetahui pengaruh dari faktor-faktor pengenceran terhadap jumlah

mikroba yang terdapat pada sampel

3.Untuk mengetahui jumlah sel bakteri yang terkandung dalm tiap-tiap sampel.

1

BAB II. MATERI DAN METODE

Praktikum enumerasi mikroba dilakukan dengan menggunkan metode

pengenceran. Sampel yang digunakan yaitu jenis sampel padat antara lain hati ayam,

kulit ayam, daging ayam, usus ayam, ampela ayam, dan jantung ayam. Masing-

masing sampel ditimbang sebanyak 10 gram kemudian dimasukkan ke dalam botol

yang berisi 90 ml air steril (pengenceran 10 kali/10-1). Sampel kemudian dikocok

sampai homogen. Kemudian diambil sebanyak 1 ml dari botol dengan pipet ukur, dan

dipindahkan kedalam 9 ml air steril pada tabung reaksi (pengenceran 100 kali/10 -2).

Tabung yang berisi sampel kemudian dikocok pad vortex. Dipipet lagi 1 ml sampel

pada tabung pertama tadi dan dipindahkan ke tabung kedua yang juga berisi 9 ml air

steril (pengenceran 1000 kali/10-3). Perlakuan tersebut terus diulang hingga

didapatkan faktor pengenceran hingga 1000.000/ 10-6. Sampel yang telah diencerkan

10.000 kali (10-4), 100.000 kali (10-5), dan 1000.000 kali (10-6) masing-masing

dimasukkan ke dalam cawan petri, baru kemudian diisi media NA cair, proses

dilakukan di dekat api bunsen untuk meminimalisir kontaminan. Media kemudian

diinkubasi pada suhu 37oC selama 24 jam,dan dihitung jumlah koloni yang ada pada

media.

Isolasi mikroba dilakukan dengan mengambil salah satu koloni dari salah satu

cawan petri dengan menggunkan kawat yang sebelumnya telah dibakar guna

mensterilkan kawat. Kemudian dilakukan Streak for single colony pada media NA

yang telah membeku.

2

BAB III. HASIL DAN PEMBAHASAN

3.1 HASIL Terlampir

3.2 PEMBAHASAN

Pada praktikum enumerasi dan isolasi digunakan metode pengenceran karena

metode ini mudah dan cepat pengerjaannya serta tidak memerlukan banyak alat, serta

mempermudah pengamatan koloni suatu bakteri. Jumlah mikroba dapat dihitung

dengan mengalikan jumlah koloni yang tumbuh dengan faktor pengenceran (Kawuri

dkk,2007). Penghitungan jumlah koloni dilakukan pada cawan yang mengandung

koloni dengan rentang 30-300 (Kawuri dkk,2007).

Perhitungan jumlah koloni dilakukan pada pengenceran 10.000 kali (10-4),

100.000 kali (10-5), dan 1000.000 kali (10-6). Sedangkan pada pengenceran 10-1

sampai 10-3 sampel dianggap masih cukup padat sehingga sukar diperoleh biakan

yang murni. Perhitungan jumlah koloni yang valid secara statistik adalah pada cawan

yang mengandung 30-300 koloni (Madigan,1997). Namun pada sampel kulit ayam

dan daging ayam diperoleh angka yang lebih dari 300 koloni, yaitu pada pengenceran

10.000 kali. Hal ini mungkin disebabkan karena kulit dan daging ayam lebih sering

kontak dengan lingkungan, sehingga banyak terdapat mikroba. Dari hasil data

pengamatan ditemukan pula jumlah koloni yang jumlahnya kurang dari 30 yaitu pada

hati, ampela dan jantung. Hal ini mungkin disebabkan karena sampel yang dibawa

tidak segar lagi dan bakterinya sudah banyak yang mati sebelum diuji. Akibat dari

jumlah koloni yang kurang dari 30 dan tidak masuk dalam rentan antara 30-300,

maka penghitungan jumlah koloni sulit untuk ditentukan. Maka dari itu digunakan

rumus dibawah ini untuk sampel yang jumlah koloninya kurang dari 30.

Σ x= x (10 4 )+x (10 5 )+x(10 6 )

3

3

Sehingga didapatkan jumlah total sel pada masing-masing sampel adalah : pada

hati ayam terdapat 2 x 106 CFU/ml, pada kulit ayam 130 x 106 CFU/ml, pada daging

ayam 127 x 105 CFU/ml, pada usus ayam 46 x 105 CFU/ml, pada ampela ayam 2 x

106 CFU/ml dan pada jantung ayam 1 x 106 CFU/ml. Dari data yang diperoleh juga

dapat diketahui bahwa umumnya semakin tinggi pengenceran maka jumlah koloni

mikroba semakin berkurang, sehingga jumlah koloni pada pengenceran 10.000 kali

lebih banyak dari pengenceran 100.000 kali dan koloni paling sedikit terdapat pada

pengenceran 1000.000 kali. Hal ini disebabkan karena sampel yang dipindahkan pada

tabung dengan pengenceran lebih tinggi, jumlah mikrobanya semakin sedikit. Namun

pada sampel usus ayam dan ampela terdapat penyimpangan karena jumlah mikroba

pada pengenceran 100.000 kali lebih banyak dari pada pengenceran 10.000 kali. Hal

ini mungkin disebabkan karena kurangnya pengocokan sehingga mikroba tidak

merata pada larutan, atau mungkin dikarenakan mikroba pada saat dipindahkan ke

media, ada beberapa yang mati karena terkena media cair NA yang masih panas.

Setelah dilakukan proses penghitungan koloni, dilakukan isolasi mikroba pada

masing-masing sampel. Koloni yang paling menarik dan bagus bentuknya diambil

dan dilakukan streak for single colony pada media tegak.

4

BAB IV. KESIMPULAN

1. Metode enumerasi yang dapat digunakan untuk menghitung jumlah mikroba

pada sampel diantaranya metode pengenceran, metode perhitungan langsung dalam

ruang hitung (hemasitometer), metode membrane filter, metode berat kering dan

volume sel, dan metode MPN. Pada metode pengenceran satu koloni yang tumbuh

diasumsikan berasal dari satu sel, dan jumlah mikroba dihitung dengan mengalikan

faktor pengenceran dengan jumlah koloni yang tumbuh pada sampel.

2. Pengenceran berpengaruh terhadap jumlah mikroba yang terdapat pada

sampel, semakin tinggi faktor pengencerannya jumlah bakteri yang tumbuh pada

media semakin sedikit dan begitu sebaliknya.

3. Jumlah total bakteri yang terdapat pada masing-masing sampel yaitu pada hati

ayam terdapat 2 x 106 CFU/ml, pada kulit ayam 130 x 106 CFU/ml, pada daging

ayam 127 x 105 CFU/ml, pada usus ayam 46 x 105 CFU/ml, pada ampela ayam 2 x

106 CFU/ml dan pada jantung ayam 1 x 106 CFU/ml. Dapat dilihat bahwa jumlah

bakteri paling banyak terdapat pada kulit dan daging ayam.

5