bab i-v revisi2

8/16/2019 BAB I-V revisi2

1/109

UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK KASAR, ISOLATFLAVONOID DAN TERPENOID UMBI SARANG SEMUT

( Myrmecodia pendens ) DIBANDINGKAN DENGANKLORHEKSIDIN TERHADAP Streptococcus sanguinis

ATCC 10566

OleF!" #$! A%%! &! A""!$#$#

1'01 01'005'

USULAN PENELITIAN TESIS

U "*+ $e$e * # !l! !"* -!&!" *.#!G* ! $e$/e& le el!& M! # "e& Ke e !"!

P& &!$ Pe 2#2#+! M! # "e& P& &!$ S"*2# Il$* Ke2 +"e&! D! !&

K e "&! # F!&$!+ l #

UNIVERSITAS PADJADJARANBANDUNGT! * 015

1


2/109

UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK KASAR, ISOLATFLAVONOID DAN TERPENOID UMBI SARANG SEMUT

( Myrmecodia pendens ) DIBANDINGKAN DENGANKLORHEKSIDIN TERHADAP Streptococcus sanguinis

ATCC 10566

OleF!" #$! A%%! &! A""!$#$#

1'01 01'005'

USULAN PENELITIAN TESIS

U "*+ $e$e * # !l! !"* -!&!" *.#!G* ! $e$/e& le el!& M! # "e& Ke e !"!

P& &!$ Pe 2#2#+! M! # "e& P& &!$ S"*2# Il$* Ke2 +"e&! D! !& # #Tel! 2# e"*.*# le T#$ Pe$3#$3# /!2! "! !l

Se/e&"# "e&"e&! 2# 3!4! # #

B! 2* , ' J* # 015

2


3/109

PERN ATAAN

Dengan ini saya menyatakan bahwa:1. Karya tulis saya, usulan penelitian tesis ini, adalah asli dan belum pernah

diajukan untuk mendapatkan gelar akademik (sarjana, magister, dan/ataudoktor), baik di Uni ersitas !adjadjaran maupun di perguruan tinggi lain.

". Karya tulis ini adalah murni gagasan, rumusan, dan penelitian saya sendiri,tanpa bantuan pihak lain, ke#uali arahan $im !embimbing dan masukkan

$im !enguji.%. Dalam karya tulis ini tidak terdapat karya atau pendapat yang telah ditulis

atau dipublikasikan orang lain, ke#uali se#ara tertulis dengan jelasdi#antumkan sebagai a#uan dalam naskah dengan disebutkan nama pengarang dan di#antumkan dalam da&tar pustaka.

'. !ernyataan ini saya buat dengan sesungguhnya dan apabila di kemudianhari terdapat penyimpangan dan ketidakbenaran dalam pernyataan ini,maka saya bersedia menerima sanksi akademik berupa pen#abutan gelar yang telah diperoleh karena karya ini, serta sanksi lainnya sesuai dengannorma yang berlaku di perguruan tinggi ini.

andung, % uni "*1+ang membuat pernyataan,

-athimah ahra ttamimi 0! 1%*1"*1%**+%

3


4/109

DAFTAR ISI

DAFTAR ISI

DAFTAR TABEL

#

DAFTAR GAMBAR

#

DAFTAR SINGKATAN

##

BAB I PENDAHULUAN

1.1 2atar elakang

11." 3umusan asalah

41.% $ujuan !enelitian

51.' Kegunaan !enelitian

51.'.1 Kegunaan kademis

51.'." Kegunaan !raktis

6

i


5/109

BAB II TINJAUAN PUSTAKA, KERANGKA PEMIKIRAN, HIPOTESIS

".1 Kajian !ustaka7

".1.1 !lak 8igi

7".1.1.1 Komposisis dan Distribusi !lak 8igi

1*".1.1." !roses !embentukan !lak 8igi

11".1." Streptococcus sanguinis

1'".1.".1 Klasi&ikasiS. sanguinis

1'".1."." 9truktur dan or&ologiS. sanguinis

14".1.".% !atogenesisS. sanguinis

14".1.% Klorheksidin

16".1.%.1 ekanisme Kerja Klorheksidin

16".1.%." !enggunaan dan &ek 9amping Klorheksidin

"*

ii


6/109

".1.' Umbi 9arang 9emut

"*

".1.'.1 or&ologi Umbi 9arang 9emut

""".1.'." Kandungan 9enyawa dalam Umbi 9arang 9emut

"'".1.+ Uji 9ensiti&itas

%*".1.4 Uji Minimal Inhibitory Concentration ( ;bjek, ahan, dan lat !enelitian

'1%.1.1 >bjek !enelitian

'1%.1." ahan !enelitian

'"%.1.% lat !enelitian

'"%." etode !enelitian

'%

iii


7/109

%.".1 $ipe 3an#angan !enelitian

'%%."." De&inisi Konsep dan >perasional ?ariabel !enelitian

'%%.".".1 De&inisi Konsep ?ariabel

'%%."."." De&inisi >perasional ?ariabel

''%.".% !rosedur !enelitian

'+%.".%.1 !engujian kti&itas ntibakteri ( Kirby Bauer)

'4%.".%." !engujian Minimum Inhibitory Concentration ( ;


8/109

++'.1." =asil Uji ;<

+6'.1.".1 Uji Korelasi ntara kstrak Kasar Umbi 9arang 9emut

terhadap Kematian 9el akteri

4%

'.1."." Uji Korelasi ntara Konsentrasi ;solat -la onoid Umbi9arang 9emut terhadap Kematian 9el akteri

4'

'.1.".% Uji Korelasi ntara Konsentrasi ;solat $erpenoid Umbi9arang 9emut terhadap Kematian 9el akteri

4+

'.1.".' Uji Korelasi ntara Klorheksidin terhadap Kematian 9elakteri

44

'." !embahasan44

BAB V SIMPULAN DAN SARAN

+.1 9impulan

54+.1.1 9impulan Umum

54+.1." 9impulan Khusus

55

v


9/109

+." 9aran

55

DAFTAR PUSTAKA

89

vi


10/109

DAFTAR TABEL

$abel ".1 Klasi&ikasi 9treptokokus 3ongga ulut

1+

$abel "." !enggolongan -la onoid erdasarkan ioakti&itasnya

"4

$abel %.1 De&inisi >perasional

'+

$abel %." !anduan ;nterpretasi Diameter Bona =ambat pada Uji Kirby-Bauer

47

$abel %. % $abel odel =asil Uji 9ensiti&itas ( Kirby-Bauer ) kstrak Kasar,;solat -la onoid dan $erpenoid Umbi 9arang 9emut danKlorheksidin $erhadap !ertumbuhan S. sanguinis

+1

$abel %. ' $abel odel =asil Uji ;< kstrak Kasar, ;solat -la onoid dan$erpenoid Umbi 9arang 9emut dan Klorheksidin $erhadap!ertumbuhan S. sanguinis

+"

$abel %.+ $abel odel =asil Uji t !erbedaan e&ek antibakteri antara kstrak Kasar/;solat -la onoid/ ;solat $erpenoid Umbi 9arang danKlorheksidin $erhadap !ertumbuhan S. sanguinis

+"

$abel '.1 =asil Uji Kirby-Bauer terhadap S.sanguinis

+7

vii


11/109

$abel '." =asil Uji t antara kstrak Kasar Umbi 9arang 9emut denganKlorheksidin 4*

$abel '.% =asil Uji t antara ;solat $erpenoid Umbi 9arang 9emut denganKlorheksidin

4*

$abel '.' =asil Uji t antara kstrak Kasar dengan ;solat $erpenoid Umbi

9arang 9emut

41

$abel '.+ =asil nalisis ;< kstrak Kasar 9arang 9emut terhadapS.sanguinis

4"

$abel '.4 =asil nalisis ;< ;solat -la onoid 9arang 9emut terhadapS.sanguinis

4'

$abel '.5 =asil nalisis ;< ;solat $erpenoid 9arang 9emut terhadapS.sanguinis

4+

$abel '.6 =asil nalisis ;< Klorheksidin terhadap S.sanguinis

44

$abel '.7 =asil ;nterpretasi 0ilai ;< dari kstrak Kasar, ;solat -la onoiddan $erpenoid Umbi 9arang 9emut dan Klorheksidin

45

viii


12/109

$abel '.1* =asil Uji 0>? antara !eningkatan Konsentrasi kstrak Kasar Umbi 9arang 9emut terhadap Kematian 9el akteriS. sanguinis 46

$abel '.11 =asil Uji $ukey antara !eningkatan Konsentrasi kstrak Kasar Umbi 9arang 9emut terhadap Kematian 9el akteriS. sanguinis

46

$abel '.1" =asil Uji Korelasi !earson antara kstrak Kasar Umbi 9arang

9emut dengan !ersentase Kematian 9el akteri

47

$abel '.1% =asil Uji 0>? antara !eningkatan Konsentrasi ;solat -la onoidUmbi 9arang 9emut terhadap Kematian 9el akteriS. sanguinis

5*

$abel '.1' =asil Uji $ukey antara !eningkatan Konsentrasi ;solat -la onoidUmbi 9arang 9emut terhadap Kematian 9el akteriS. sanguinis

51

$abel '.1+ =asil Uji Korelasi !earson antara !eningkatan Konsentrasi ;solat-la onoid Umbi 9arang 9emut dengan !ersentase Kematian 9el

akteri

5"$abel '.14 =asil Uji 0>? antara !eningkatan Konsentrasi ;solat $erpenoid

Umbi 9arang 9emut terhadap Kematian 9el akteriS. sanguinis

5"

$abel '.15 =asil Uji Korelasi !earson antara !eningkatan Konsentrasi ;solat$erpenoid Umbi 9arang 9emut dengan !ersentase Kematian 9el

akteri

ix


13/109

5%

x


14/109

DAFTAR GAMBAR

8ambar ".1 $ahap !embentukan io&ilm !lak 8igi 9erta akteri angerperan

11

8ambar "." S.sanguinis sebagai salah satu bakteri pionir pembentuk plak gigi

15

8ambar ".% or&ologi Umbi 9arang 9emut

"%

8ambar ".' 9truktur Kimia 9enyawa -la onoid

"'

8ambar ".+ 9truktur Kimia 9enyawa $erpenoid

"6

8ambar ".4 $eknik !engukuran Diameter Bona =ambat

%1

8ambar ".5


15/109


16/109

DAFTAR SINGKATAN

$


17/109

BAB I

PENDAHULUAN

1:1 L!"!& Bel!+!

. !enyakit in&eksi pada rongga mulut merupakan salah satu penyakit yang

paling sering terjadi pada manusia. danya in&eksi pada rongga mulut juga

seringkali dihubungkan dengan penyakit sistemik lainnya, seperti penyakit

jantung dan diabetes melitus.1 Data Worl$ *ealth 'rgani+ation (@=>) pada

tahun "*1" menyebutkan bahwa 7*C anak usia sekolah mengalami kerusakan

pada gigi, "*C orang dewasa usia %+A'' tahun sudah kehilangan gigi dan orang

pada usia lanjut 4+A5' tahun sudah tidak memiliki gigi asli." 9elain itu, data 3iset

kesehatan dasar (3iskesdas) pada tahun "*1% oleh Kementrian Kesehatan

3epublik ;ndonesia menyatakan bahwa pre alensi nasional masalah gigi dan

mulut dijumpai sebesar "+,7C. !enyakit gigi dan mulut yang mempunyai

pre alensi #ukup tinggi di ;ndonesia adalah karies dan penyakit periodontal

(gingi itis dan periodontitis).%

Kesehatan gigi dan mulut memiliki keterkaitan yang erat dengan kesehatan

umum.Di satu sisi, kesehatan mulut dapat dihubungkan dengan beberapa penyakitkronis dan menular yang menunjukkan gejala pada mulut. Di sisi lain, penyakit

mulut dapat menyebabkan in&eksi, peradangan, yang menyebabkan dampak

serius pada kesehatan se#ara keseluruhan. Dengan demikian, menjaga kesehatan

mulut yang baik adalah penting untuk mempertahankan kesehatan umum dan

sebaliknya.

1


18/109

"

!enyakit periodontal merupakan in&eksi lokal yang melibatkan jaringan

pendukung gigi yaitu struktur yang membentuk periodonsium (antara lain:gingi a, ligamen periodontal, sementum akar, dan tulang al eolar).' !eriodontitis

adalah kondisi peradangan kronis jaringan periodontal yang melibatkaninteraksi

antara produk bakteri dan populasi sel dan mediator in&lamasi. !enyakit

periodontal diinisiasi oleh terbentuknya bio&ilm mikroba pada permukaan gigi

yang disebut plak gigi.+

akteri dalam rongga mulut berkembang biak dalam bentuk bio&ilm

multispesies yang melekat pada gigi membentuk lapisan plak gigi. Karies gigi

dan periodontitis adalah dua kondisi in&lamasi utama pada rongga mulut yang

disebabkan oleh pertumbuhan plak gigi. !eran bakteri dalam inisiasi dan

prolongasi in&lamasi rongga mulut sangat kompleks dan melibatkan interaksi

polimikrobial dalam plak gigi.4

Streptococcus sanguinis merupakan bakteri gram positi& yang memegang

peranan penting sebagai bakteri pionir(generasi pertama) dalam kolonisasi bakteri

pada rongga mulut manusia.4,5 S. sanguinis berperan sebagai tambatan untuk

perlekatan mikroorganisme oral lain yang akan berkolonisasi di permukaan gigi,

membentuk plak gigi dan berkontribusi terhadap perkembangan karies dan penyakit periodontal.5 Di dalam rongga mulut, organisme ini dapat menghasilkan

suatu lapisan baru diatas permukaan gigi dan sinyal yang menarik organisme

lainnya sehingga dapat terjadi koAagregasi antara bakteri tersbut di dalam bio&ilm.6

9elain berperan dalam pembentukan plak gigi,S. sanguinis dilaporkan terkait

erat dengan penyakit in&ekti& endokarditis. =al ini disebabkanS.sanguinis pada


19/109

%

bio&ilm plak dapat memasuki aliran darah apabila terjadi trauma pada rongga

mulut.7 ika terjadi in&eksi padahost , bakteri ini dapat masuk ke aliran darah yangterbungkus dalam bio&ilm plak gigi.9ampel plak gigi manusia telah terbukti dapat

menyebabkan endokarditis pada model hewan. Dengan demikian, proses

pembentukan bio&ilm plak dapat menjadi salah satu jalan masuk bakteri ke dalam

aliran darah dan menyebabkan endokarditis.6

!enggunaan obat kumur yang bersi&at bakteriostatik merupakan salah satu

tindakan untuk mengontrol pembentukan plak gigi yang akan berkembang

menjadi karies atau karang gigi.1* enis obat kumur yang sering digunakan di

dalam masyarakat diantaranya adalah klorheksidin glukonat.Klorheksidin

merupakan antibakteri yang e&ekti& terhadap sebagian besar mikroorganisme, baik

gram negati& maupun positi&, &akultati& anaerob maupun aerob. ekanisme kerja

klorheksidin glukonat adalah merusak permeabilitas membran sel bakteri

sehingga terjadi kebo#oran pada membran sel. pabila konsentrasi klorheksidin

ditambahkan maka klorheksidin dapat menyebabkan koagulasi pada dinding sel

bakteri yang dapat mengakibatkan kematian sel bakteri.11 !enggunaan

klorheksidin glukonat dalam jangka waktu lama, yaitu lebih dari " minggu,

memiliki e&ek samping terhadap rongga mulut yaitu dapat menyebabkan rasaterbakar pada mulosa mulut, mengganggu indera perasa, pewarnaan pada gigi,

erosi mukosa mulut, dan kekeringan pada rongga mulut.1"

$anaman merupakan sumber potensial untuk ditemukannya obat baru, hal ini

dikemukakan oleh @=>. Ditinjau dari segi keamanan, produk obat berbahan

dasar dari tanaman dapat dikatakan lebih aman jika dibandingkan dengan obat


20/109

'

sintetik dan dapat menjadi alternati& pengobatan. =al ini karena obat bahan alam

memiliki akti itas antibakteri, biokompatibel, serta memiliki e&ek antiin&lamasidan antioksidan.9alah satu tanaman obat yang belum teridenti&ikasi adalah umbi

sarang semut ( Myrmeco$ia pen$ens ) yang memiliki potensi sebagai sumber agen

terapeutik baru. Umbi sarang semut merupakan sejenis tumbuhan epi&it yang

banyak tumbuh di daerah !apua.1%

Umbi sarang semut diketahui mengandung senyawa &la onoid, terpenoid,

tannin yang memiliki e&ek antioksidan dan antibakteri yang baik.1'A14 kstrak

kasar tumbuhan sarang semut memiliki e&ek antibakteri baik terhadap bakteri

gram positi& maupun negati&, diantaranya bakteriS. aureus , K. pneumonia, $an

S. $ysentriae. 7, !ada penelitian ini ekstrak kasar umbi sarang semut didapat

melalui prosedur sokletasi dengan pelarut metanol. !elarut metanol dapat

melarutkan baik senyawa polar maupun nonpolar, sehingga diharapkan semakin

banyak senyawa akti& yang terlarut dan dapat menghambat pertumbuhan bakteri

S. sanguinis.

9ekarang ini, sekitar 6*C obat antibakteri, kardio askular, imunosupresi& dan

antikanker berasal dari tanaman penjualan obatAobat ini melebihi U9 E 4+ miliar

pada tahun "**%.17

$elah diakui pula bahwa lebih dari 6*C substansi yangterdapat di dalam obat berasal dari produk alam maupun dikembangkan dari

senyawa akti& suatu tanaman. !endekatan langsung dalam penemuan obat baru

dari tanaman herbal adalah dengan mengisolasi senyawa akti& dari tumbuh

tersebut."*


21/109

+

Dari penelitian yang dilakukan sebelumnya diketahui bahwa &raksi etil asetat

dan &raksi nAheksan dari umbi sarang semut memiliki akti&itas antibakteri terhadapS. sanguinis dan /nteroccoccus 0aecalis. Kandungan senyawa yang dominan yang

pada &raksi etil asetat dan nAheksan adalah senyawa &la onoid dan terpenoid.1+,"1

>leh karena itu, pada penelitian ini akan dilakukan isolasi senyawa &la onoid dan

terpenoid umbi sarang semut untuk diuji akti&itasnya sebagai antibakteri terhadap

S. sanguinis.

-la onoid memiliki banyak man&aat bagi kesehatan manusia, yaitu akti&itas

antioksidan, khelasi logam dan antiproli&erati&, anti kanker, antibakteri, antiA

in&lamasi, anti alergi, dan anti irus.1' -la onoid termasuk dalam gologan poli&enol

yang merupakan senyawa dengan akti itas antibakteri yang baik. senyawa

&la onoid memiliki e&ek antibakteri terhadapS. aureus, S. epi$ermi$is, /. coli, dan

S. typhimurium ."" ;solat &la onoid umbi sarang semut terbukti memiliki akti&itas

antibakteri terhadapS. mutans, salah satu bakteri yang ikut berkolonisasi dengan

S. sanguinis dalam menyebabkan terbentuknya plak gigi.

9enyawa lain yang banyak terdapat pada umbi sarang semut adalah senyawa

terpenoid. ;solat terpenoid umbi sarang semut dapat menghambat akti&itas bakteri

/. coli , merupakan bakteri yang paling banyak ditemukan pada in&eksi saluranakar gigi.1+ kti itas antibakteri ekstrak alami yang ditemukan dalam banyak

penelitian disebabkan adanya salah satu kelas senyawa terpenoid, yaitu

diterpenoid."% &ek antimikroba yang dimiliki oleh beberapa senyawa terpenoid

(mentol, thymol, dan linalyl asetat) melalui mekanisme mengganggu &raksi lipid


22/109

4

membran plasma mikroorganisme, sehingga terjadi perubahan permeabilitas

membran dan kebo#oran organel intraseluler bakteri."' enurut @=>, pengobatan herbal menyediakan perawatan kesehatan primer

untuk sekitar %,+A' milyar orang di seluruh dunia. 9ekitar 6+C dari obat

tradisional tersebut melibatkan penggunaan ekstrak tanaman, yang dapat disebut

Fpengobatan herbal modern.F"* Dalam pengembangan obat herbal, setelah

dilakukan isolasi dan identi&ikasi senyawa akti& yang terdapat di dalam ekstrak

maka selanjutnya akan dilakukan proses sintesis kimia dari senyawa tersebut."+

9e#ara umum, tingkat kesuksesan jalur sintetik dalam menghasilkan obat baru

adalah 1 1*.***. 9edangkan tingkat kesuksesan pen#arian terapi baru dari

tanaman herbal yang digunakan dalam sistem pengobatan tradisional dapat

men#apai 1:' atau lebih."* Diharapkan ekstrak kasar, isolat &la onoid dan

terpenoid umbi sarang semut memiliki e&ek antibakteri dalam menghambat

pertumbuhanS. sanguinis sehingga dapat dikembangkan dan digunakan sebagai

obat alternati& pengganti klorheksidin.

erdasarkan latar belakang di atas, tema sentral penelitian ini adalah:

Streptococcus sanguinis merupakan bakteri pionir dalam proses pembentukan

plak gigi dalam ronga mulut. akteri ini juga menyediakan tempat perlekatanuntuk bakteriAbakteri lainnya sehingga dapat menempel pada permukaan gigi dan

membentuk plak gigi yang kompleks.9elain ituS. sanguinis juga terkait erat

dengan penyakit in&ekti& endokarditis. Karies gigi dan periodontitis adalah dua

kondisi in&lamasi utama pada rongga mulut yang disebabkan oleh pertumbuhan

plak gigi. Klorheksidin glukonat adalah salah satu jenis obat kumur yang banyak


23/109

5

digunakan untuk men#egah terbentuknya plak gigi (antiplak). Klorheksidin

glukonat e&ekti& sebagai antibakteri tetapi memiliki e&ek samping jika digunakandalam jangka panjang. eberapa e&ek samping klorheksidin glukonat adalah dapat

menyebabkan rasa terbakar pada mukosa mulut, mengganggu indera perasa,

pewarnaan pada gigi, dan erosi pada mukosa ronga mulut. >leh karena itu,

dibutuhkan alternati& pengobatan baru dengan e&ek samping yang minimal. 9alah

satu tumbuhan alam yang berman&aaat sebagai tanaman obat adalah umbi sarang

semut. Umbi sarang semut diketahui mengandung senyawa &la onoid, tannin, dan

terpenoid. -la onoid dan terpenoid memiliki si&at antibakteri yang baik dan

terbukti memiliki e&ek antibakteri terhadap beberapa jenis bakteri gram negati&

dan positi&. !enelitian ini bertujuan untuk menguji akti&itas antibakteri ekstrak

kasar, isolat &la onoid dan terpenoid yang terdapat dalam umbi sarang semut

terhadap bakteriS. sanguinis dibandingkan dengan klorheksidin dan pengaruh

peningkatan konsentrasinya terhadap kematian sel bakteriS. sanguinis.

1: R*$* ! M! !l!

erdasarkan latar belakang penelitian, maka permasalahan yang akan dikaji

antara lain:1. pakah terdapat perbedaan e&ek antibakteri ekstrak kasar umbi sarang semut

dengan klorheksidin dalam menghambat pertumbuhanS. sanguinis G". pakah terdapat perbedaan e&ek antibakteri isolat &la onoid umbi sarang

semut dengan klorheksidin dalam menghambat pertumbuhanS. sanguinis G%. pakah terdapat perbedaan e&ek antibakteri isolat terpenoid umbi sarang

semut dengan klorheksidin dalam menghambat pertumbuhanS. sanguinis G


24/109

6

'. pakah terdapat perbedaan e&ek antibakteri antara isolat &la onoid dengan

ekstrak kasar umbi sarang semut dalam menghambat pertumbuhanS.

sanguinis G+. pakah terdapat perbedaan e&ek antibakteri antara isolat terpenoid dengan

ekstrak kasar umbi sarang semut dalam menghambat pertumbuhanS.

sanguinis G4. pakah terdapat hubungan antara peningkatan konsentrasi ekstrak kasar

umbi sarang semut dengan kematian selS. sanguinis G5. pakah terdapat hubungan antara peningkatan konsentrasi isolat &la onoid

semut, dengan kematian selS. sanguinis G6. pakah terdapat hubungan antara peningkatan konsentrasi isolat terpenoid

umbi sarang semut, dengan kematian selS. sanguinis G

1:' T*.*! Pe el#"#!

1. engukur perbedaan e&ek antibakteri dari ekstrak kasar umbi sarang semut

dengan klorheksidin dalam menghambat pertumbuhanS. sanguinis". engukur perbedaan e&ek antibakteri isolat &la onoid umbi sarang semut

dengan klorheksidin dalam menghambat pertumbuhanS. sanguinis%. engukur perbedaan e&ek antibakteri dari isolat terpenoid umbi sarang

semut dengan klorheksidin dalam menghambat pertumbuhanS. sanguinis'. engukur perbedaan e&ek antibakteri dari isolat &la onoid dengan ekstrak

kasar umbi sarang semut terhadap pertumbuhan bakteriS. sanguinis+. engukur perbedaan e&ek antibakteri dari isolat terpenoid dengan ekstrak

kasar umbi sarang semut terhadap pertumbuhan bakteriS. sanguinis4. engukur besar hubungan antara peningkatan konsentrasi ekstrak kasar

umbi sarang semut terhadap kematian selS. sanguinis5. engukur besar hubungan antara peningkatan konsentrasi isolat &la onoid

umbi sarang semut terhadap kematian selS. sanguinis


25/109

7

6. engukur besar hubungan antara peningkatan konsentrasi isolat terpenoid

umbi sarang semut terhadap kematian selS. sanguinis

1:; Ke * !! Pe el#"#!

1:;:1 Ke * !! A+!2e$#

!enelitian ini diharapkan dapat mengembangkan pengetahuan di bidang

&ito&armaka, melalui data ilmiah yang dapat memberikan in&ormasi baru mengenai

e&ek antibakteri dari umbi sarang semut terhadapS. sanguinis .

1:;: Ke * !! P&!+"#

Kegunaan praktis dari penelitian ini yaitu, apabila ekstrak kasar maupun

isolat umbi sarang semut memiliki akti itas antibakteri terhadapS. sanguinis

maka penelitian ini diharapkan dapat dijadikan titik awal penelitian lanjutan pada

kultur jaringan atau jaringan rongga mulut se#arain &i&o. 9elain itu, dapat

dilakukan uji lanjutan untuk mengetahui stuktur kimia dari isolat &la onoid dan

terpenoid yang mengarah pada pembuatan obat sintesis yang berasal dari

pengembangan senyawa bahan alam. Diharapkan ekstrak kasar, isolat &la onoid

dan terpenoid umbi sarang semut dapat digunakan sebagai sumber bahan obat

antibakteri baru, sehingga dapat digunakan sebagai obat alternati& (obat kumur)

dalam mengontrol terbentuknya plak gigi dan memperlambat proses maturasi plak

gigi.


26/109

BAB II

TINJAUAN PUSTAKA, KERANGKA PEMIKIRAN, HIPOTESIS

:1 K!.#! P* "!+!

:1:1 Pl!+ G# #

3ongga mulut merupakan sistem biologis yang memiliki beberapa komponen,

termasuk di dalamnya adalah protein kelejar sali a, jaringan lunak dan keras,

dan berbagai spesies mikroorganisme yang membentuk ekologiniche yang

beragam. akteri dalam rongga mulut memiliki kemampuan untuk bertahan

terhadap adanya gangguan dari luar seperti gaya yang diakibatkan oleh proses

pengunyahan dan penelanan yang berulang, aliran sali a dan &riksi yang

disebabkan oleh gerakan lidah maupun kegiatan pembersihan rongga mulut (oral

hygiene ). akteri rongga mulut beradhesi ke jaringan keras maupun lunak atau

bakteri lainnya supaya dapat menahan gayaAgaya yang terdapat dalam rongga

mulut sehingga dapat membentuk suatu koloni. dhesi, kolonisasi, dan

pertumbuhan bakteri pada permukaan gigi dapat menghasilkan bio&ilm multiA

spesies yang disebut plak gigi. !lak gigi merupakan awal mula terjadinya penyakit

pada rongga mulut seperti karies gigi, gingi itis, periodontitis, dan periA

implantitis. !lak tidak hanya menempel pada gigi natural saja tetapi juga padarestorasi gigi maupun implan gigi.4

!lak gigi terbentuk pada permukaan lunak dan keras jaringan mulut, yang

terdiri dari bakteri hidup dan mati, produk ekstraseluler bakteri serta senyawa

11


27/109

1"

host terutama yang berasal dari air liur."4 !erkembangannya bergantung pada

adhesi bakteri pada komponen sali a yang teradsorpsi di permukaan gigi. !rosesini didominasi oleh streptokokus oral,S. sanguinis merupakan salah satunya.

Streptococcus sanguinis merupakan koloni utama dalam rongga mulut manusia

yang terbukti berperan penting dalam proses awal pembentukan plak gigi."5

:1:1:1 K $/ # # 2! D# "* # Pl!+ G# #

>rganisme dalam bio&ilm plak dikelilingi oleh matriks organik, yang terdiri

dari sekitar %*C dari total olume bio&ilm. atriks berasal dari produkAproduk

darihost dan unsur bio&ilm. atriks ini bertindak sebagai #adangan makanan dan

sebagai perekat antar satu organisme dengan organisme lainya dan jaringan

sekitarnya. Komposisi mikroba plak gigi dapat ber ariasi antara indi idu

beberapa orang mengalami proses pembentukan plak yang #epat sedangkan yang

lainnya lambat."4,"6

io&ilm plak ditemukan pada permukaan gigi dan restorasi gigi terutama

dalam keadaan kebersihan mulut yang kurang baik. !lak gigi umumnya

ditemukan di daerah anatomi yang tidak terjangkau pertahananhost , misalnya

#elah oklusal, interproHimal atau sekitar #elah gingi a. Distribusi plak gigidikategorikan berdasarkan daerah asalnya ( site o0 origin ), yaitu plak supragingi a,

subgingi a, dan plak yang berhubungan dengan restorasi gigi."4,"6 !lak

supragingi a dibagi lagi berdasarkan anatomi gigi yaitu plak yang berada pada

&isur/#elah gigi, aproksimal gigi, dan permukaan halus gigi (misalnya: permukaan


28/109

1%

bukal dan palatal rongga mulut). 9elain menempel pada permukaan gigi, plak juga

dapat terdeposit pada restorasi gigi."4

:1:1: P& e Pe$3e "*+! Pl!+ G# #

dhesi mikroba ke permukaan rongga mulut merupakan prasyarat untuk

terjadinya kolonisasi, dan hal ini merupakan langkah awal dalam proses terjadinya

in&eksi berikutnya atau in asi jaringan. !embentukan bio&ilm plak merupakan

proses yang kompleks yang terdiri dari beberapa tahapan yang berbeda (8ambar

".1).4,"4

8ambar ".1 $ahap pembentukan bio&ilm plak gigi serta bakteri yang berperanDikutip dari: Dhir "7


29/109

1'

$ahap pertama dalam pembentukan plak gigi adalah proses terbentuknya

pellicle . Pellicle merupakan lapisan tipis dari protein sali a yang terdeposit pada permukaan gigi segera setelah gigi dibersihkan. 2apisan ini akan mengendap pada

permukaan gigi dalam beberapa menit setelah terekspos pada lingkungan rongga

mulut, pada tahap ini pellicle tidak mengandung organisme dan menutupi

sebagian besar mahkota gigi. akteri rongga mulut awalnya menempel pada

pellicle dan tidak langsung pada enamel (yaitu hidroksiapatit)."4 9etelah terbentuk

pellicle , maka akan terjadi proses transpor bakteri. akteri akan mendekati

permukaan gigi melalui pergerakan alami aliran sali a yang disebutbro1nian

motion atau kemotaksis.4,"4

!roses selanjutnya setelah bakteri menempel pada pellicle terjadi interaksi

&isikokimia antara permukaan sel mikroba dan gigi yang memiki lapisan pellicle .

8aya ?an der @aals dan electrostatic repulsion menghasilkan &ase adhesi

re ersibel. !ada tahap ini ikatan antara bakteri dengan permukaan pellicle masih

bersi&at re ersibel. pabila telah terjadi suatu reaksi stereokimia antara adhesin

pada permukaan sel mikroba dan reseptor pada pellicle , maka akan terbentuk

ikatan yang ire ersibel. -ase ire ersibel merupakan &ase terjadinya ikatan polimer

yang menghubungkan organisme dan permukaan yang membantu perlekatanorganisme, sehingga organisme dapat berkembang biak pada permukaan

tersebut.4,"4 !roses penambahan jumlah bakteri plak dapat ber ariasi (dari menit

ke jam), baik antara spesies bakteri yang berbeda dan antara anggota spesies yang

sama, tergantung pada kondisi lingkungan."4,"6


30/109

1+

akteri baru akan berikatan dengan bakteri generasi pionir yang telah

berikatan terlebih dahulu dengan permukaan rongga mulut sehingga terjadi suatukoAagregasi antara bakteri. akteri yang baru mungkin berasal dari genus yang

sama atau berbeda dengan bakteri generasi pertama.4 !roses koAagregasi terus

berlanjut dan akan menghasilkan pertumbuhan kon&luen resultan dan

pembentukan bio&ilm sehingga menjadi lapisan yang semakin kompleks."4

io&ilm dide&inisikan sebagai kompleks komunitas &ungsional dari satu atau

lebih spesies mikroba yang terikat dalam sebuah matriks eksopolisakarida dan

melekat satu sama lain atau pada suatu permukaan (#ontoh: permukaan inert

seperti enamel gigi, gigi tiruan akrilik atau kateter plastik atau permukaan

jaringan hidup seperti katup jantung). 9truktur bio&ilm tersusun dari agregat

mikrorganisme yang diatur dalam kolom atau struktur berbentuk jamur diselingi

dengan saluran yang membawa metabolit dan nutrisi."4,"6

!lak dewasa yang terbentuk selama beberapa hari akan ber&ungsi sebagai

sebuah bio&ilm koloni mikroba dengan interaksi metabolisme antara mikroba

terjadi di dalamnya. ;ni termasuk interaksi katabolisme kompleks glikoprotein

yang berasal darihost . 9inyal antara sel yang terjadi dapat menyebabkan ekspresi

gen terkoordinasi dalam komunitas mikroba. 9elAsel bakteri dapat berkomunikasisatu sama lain melalui trans&er gen hori ontal. ;nteraksi antar bakteri ini seringkali

terjadi dalam bio&ilm sehingga mengakibatkan peningkatan resistensi bakteri

terhadap agen antimikroba. Komposisi mikroba dari plak gigi dewasa tergantung

pada bakteri pionir, proses koAagregasi dan pertumbuhannya. akteri pionir

menyediakan substrat sebagai tempat berikatan bakteri baru yang akan datang.


31/109


32/109

15

streptokokus nonAhemolitik).Streptococcus sanguinis termasuk dalam kelompok

Streptococci &iri$ans .7,"4

9treptokokus oral biasanya menunjukkan JAhemolisis pada agar darah, tapi

terdapat beberapa strain menunjukkan gambaran nonAhemolitik dan MAhemolitik.

9treptokokus oral dapat dibagi menjadi empat jenis kelompok utama ($abel ".1)."4

$abel ".1 Klasi&ikasi 9treptokokus 3ongga ulut8rup 9pesies

Mutans S. mutans, serotipe #, e, & S. sobrinus, serotipe gS. cricetus, serotipeaS. rattus

Sali&arius S. sali&ariusS. &estibularis

nginosus S. constellatusS. interme$iusS. anginosus

Mitis S. sanguinisS. gor$oniiS. parasanguinisS. oralis

Dikutip dari: 9amaranayake"4

:1: :' P!" e e # Pl!+ G# #

io&ilm plak yang terakumulasi pada permukaan gigi terdiri lebih dari %*

genus yang mewakili lebih dari +** spesies. 9ekitar 6*C koloni bakteri yang

berperan dalam pembentukan tahap awal plak gigi merupakan golongan

streptokokus.%% eskipun memiliki struktur yang kompleks, pembentukan plak

memiliki proses yang sangat teratur. Kolonisasi awal oleh sekelompok bakteri

gram positi&, terutama streptokokus, diikuti oleh perlekatan bakteri anaerob gram


33/109

16

negati&."4 Streptococcus sanguinis merupakan salah satu spesies yang paling

banyak ditemukan pada bio&ilm oral.7

io&ilm memiliki substansi seperti lipopolisakarida, antigen dan &aktor

irulensi lainnya yang berasal dari bakteri yang berhabitat didalamnya. 9ubstansi

tersebut memiliki akses ke jaringan gingi a dan dapat memulai respon in&lamasi

dan kekebalan tubuh, yang menyebabkan akti asi sel pertahananhost . 9ebagai

hasil dari akti asi sel, mediatorAmediator in&lamasi seperti sitokin, kemokin,

metabolit asam arakidonat dan en im proteolitik se#ara kolekti& berkontribusi

dalam kerusakan jaringan dan resorpsi tulang yang mengarah pada penyakit

periodontal.+

S. sanguinis berinteraksi dengan berbagai reseptorhost dan mikroba mulut

lain di sekitarnya untuk mem&asilitasi kolonisasi bakteri di dalam rongga mulut.

9upaya dapat terjadi koneksi dengan reseptor inang dan bakteri lain dibutuhkan

beberapa ma#am protein adhesin. Kolonisasi streptokokus rongga mulut pada

permukaan gigi tergantung pada adhesi bakteri dengan komponen sali a yang

teradsorpsi pada permukaan gigi.%'

9tudi terhadap genS.sanguinis menunjukkan hipotesis baru untuk patogenesis

dan irulensiS. sanguinis , dan berbeda dari komplemen gen streptokokus patogen dan nonpatogen lainnya. 9e#ara khusus,S. sanguinis memiliki protein

permukaan yang sangat banyak, yang menyebabkan bakteri ini dapat berikatan

dengan permukaan gigi dan menjadi koloni utama pada rongga mulut dan agen

penyebab endokarditis.7


34/109

17

8ambar "." S.sanguinis sebagai salah satu bakteri pionir pembentuk plak gigi.!ermukaan gigi ditutupi oleh pellicle yang terdiri dari lipid dan protein, termasuk glikoprotein aglutinin dari sali a. Pellicle inidikenali oleh bakteri pionir (S. oralis, S. mitis, S. gor$onii $an S.

sanguinis ) yang mengekspresikan reseptor untuk glikoproteinaglutinin sali a. akteri lain kemudian mulai berkolonisasi se#araspasial dan temporal menggunakan reseptor dan adhesins untuk akhirnya membentuk plak gigi dewasa.Dikutip dari: akalet%+

!rotein permukaan bakteri gramApositi& akan di#erna oleh en im sortase

(9rt ), sehingga dapat terjangkar pada dinding sel. n im 9rt dariS. sanguinis

yang menghubungkan satu atau lebih protein permukaan juga memiliki peran


35/109

"*

sebagai anti opsonisasi, yaitu mekanisme pertahanan terhadap sistem kekebalan

tubuh manusia. !rotein permukaan yang dijangkar oleh en im 9rt berperandalam kolonisasi dan kelangsungan hidupS. sanguinis. 5,7

:1:' Kl & e+ #2#Klorheksidin dikembangkan oleh ;mperial


36/109


37/109

""

:1:': Pe * !! 2! Eleh karena itu,

klorheksidin hanya dapat digunakan untuk terapi jangka pendek."4,%4,%5

:1:; U$3# S!&! Se$*"


38/109

"%

A B

8ambar ".% or&ologi Umbi 9arang 9emut. . Umbi sarang semut yang tumbuhepi&it pada tumbuhan lain . 3onggaArongga yang terdapat di dalamumbi sarang semutDikutip dari: www.in&ormasiherbal.#om'"

;ndonesia merupakan negara yang memiliki lebih dari 15.*** pulau dan

dilewati garis khatulistiwa. nam puluh persen dari lahannya ditutupi oleh 1"*.%hektar hutan raksasa, menjadikannya salah satu negara terkaya dalam

keanekaragaman hayati di dunia. ;ndonesia memiliki %*.*** spesies tanaman,

bagaimanapun, hanya 7'* yang telah diidenti&ikasi. 9alah satu tanaman obat yang

belum teridenti&ikasi adalah tumbuhan umbi sarang semut yang memiliki potensi

sebagai sumber agen terapi baru.14

$umbuhan sarang semut banyak digunakan di !apua arat sebagai

pengobatan herbal dengan man&aat terapeutik yang sangat luas. asyarakat

setempat mengkategorikan tanaman ini menjadi sarang semut merah dan putih,

dimana penentuan taksonomi selanjutnya terbagi menjadi M. pen$ens (sarang

semut merah) dan M. tuberosa (sarang semut putih).'% erikut ini adalah

taksonomi untuk umbi sarang semut:

http://www.informasiherbal.com/http://www.informasiherbal.com/


39/109

"'

Di isi :!racheophyta

Kelas : Magnoliopsi$a

Sub2elas : #amii$ae

>rdo : %ubiales

-amili : %ubiacea

8enus : yrme#odia

9pesies : Myrmeco$ia pen$ens Merr. " Perry.

$anaman sarang semut tergolong &amili 3ubia#eae dengan + genus, namun

hanya " yang memiliki hubungan dengan semut, yaitu Myrmeco$ia ('+ spesies)

dan *ypnophytum ("4 spesies). Dari spesies tersebut, hanya *ypnophytum

0ormicarum, Myrmeco$ia pen$ens dan Myrmeco$ia tuberosa yang dianggap

memiliki nilai terapeutik.14

eberapa penelitian telah membuktikan khasiat sarang semut untuk

pengobatan kanker, terungkap setelah sarang semut herbal dapat digunakan

sebagai alternati& obat kemoterapi kanker payudara dengan e&ek samping yang

minimal. !engobatan dengan sarang semut obat tradisional tidak membutuhkan

banyak biaya dan memiliki e&ek samping yang minimal dibandingkan dengan

kemoterapi.''

$anaman ini berpotensi untuk dikembangkan sebagai obatAobatanherbal modern karena dapat tumbuh dengan baik sebagai tanaman epi&it, oleh

karena itu eksploitasi tidak akan membahayakan lingkungan.'%

Khasiat M. pen$ens ditunjukkan oleh kandungan at akti& diantaranya

poli&enol, &la onoid, tanin, dan glikosida. M. pen$ens telah digunakan untuk

mengobati berbagai penyakit se#ara tradisional dan aman tanpa e&ek samping oleh


40/109

"+

beberapa suku di @amena untuk waktu yang lama. 9elain sebagai anti kanker, M.

pen$ens dapat mengobati berbagai penyakit sistemik seperti leukemia, penyakit jantung, $


41/109

"4

dilakukan oleh para peneliti sebelumnya yang mempelajari golongan senyawa ini

dalam kaitannya dengan sistem pertahanan diri tumbuhan sarang semut.9ayangnya, senyawa metabolit sekunder yang berhasil ditemukan pada tumbuhan

sarang semut masih sangat terbatas.1',''

9enyawa golongan terpenoid yang ditemukan pada M. Pen$ans terbukti

memiliki akti itas antibakteri terhadap bakteri /. 0aecalis .1+ !enelitian lainnya

juga telah menemukan lima senyawa golongan &la onoid dari M. pen$ans yaitu:

kaem&erol, luteolin, rutin, Quer#etin dan apigenin. eskipun kelima senyawa

&la onoid ini belum berhasil diisolasi dari M. pen$ans , namun hal ini #ukup

membuktikan bahwa terdapat senyawa &la onoid pada M. pen$ans .1'

Fl! #2

-la onoid tersebar dalam selAsel &otosintesis dan biasanya ditemukan dalam

buah, sayuran, ka#angAka#angan, bijiAbijian, batang, bunga, teh, anggur, propolis

dan madu. 9enyawa yang tergolong kelas &la onoid sering menjadi penelitian

antiAin&eksi. anyak kelompok telah diisolasi dan diidenti&ikasi struktur &la onoid

yang memiliki akti&itas antijamur, anti irus dan antibakteri.""


42/109

"5

8ambar ".' 9truktur Kimia9enyawa -la onoidDikutip dari: shutosh'5

!reparat &itokimia yang banyak mengandung &la onoid pada umumnya

dilaporkan memiliki akti itas antibakteri. 9enyawa tunggal &la onoid yang telah

diketahui memiliki akti itas antibakteri diantaranya adalah &la on glikosida,

&la on, iso&la on, &la anol, &la onol, glikosida, dan #hal#on. Dalam &ungsinya

sebagai antibakteri, &la onoid menghambat sintesis asam nukleat bakteri,

menghambat D0 girase, menghambat sintesis en im $!ase, dan menghambat

sintesis 30 . 9elain itu, &la onoid juga dapat menghambat &ungsi membran

sitoplasma bakteri. !enelitian terdahulu melaporkan kemampuan &la onoid

bekerja sebagai antimikroba terhadapS. aureus, S. epi$ermi$is, /. coli, S.

typhimurium. "",'6

$abel "." !enggolongan -la onoid erdasarkan ioakti&itasnya


43/109

"6

ioakti itas enis &la onoidntioksidan Quersetin, epikatekin, rutin, &la anA%Aol, &la onA%Aol

=epatoprotekti& Quersetin, apigenin, katekin, naringenin, rutin,enoruton, silimarin dan antosianin sianidinA%A>AMA

glukosida

ntibakteri 3obinetin, mirisetin, Quersetin, epigalokatekin, katekin,galanganin, apigenin, naringenin, sophora&la anone 8,&la on, &la onol glikosida, iso&la on, dan &la anon

ntiin&lamasi Quersetin, apigenin, luteolin, hesperidin

ntikanker Quersetin &la onol, mirisetin, robinetin, Quersetin,&la anol epigalokatekin galat, iso&la on genistein,daid ein, bio#hanin , hesperidin, asam &la onA6Aasetat

nti irus luteolin, kaemperol, bai#alin, Quersetin, apigenin,naringenin, katekin, morin, rutin, galangin dan &la anA%Aol

Dikutip dari Kumar R !andey'7

-la onoid termasuk dalam gologan poli&enol yang merupakan senyawa

dengan akti itas antibakteri yang baik. eberapa #ontoh senyawa &la onoid

adalah Quer#etin, sophora&la one 8, epigallo#ate#hin gallate, dan li#o#hal#ones

dan =

berperan penting dalam pelepasan ion =S yang menyerang gugus &os&at sehingga

molekul &os&olipid akan terurai menjadi gliserol, asam karboksilat, dan asam


44/109

"7

&os&at. !ada perusakan membran sel, ion =S dari senyawa &enol dan turunannya

akan menyerang gugus polar (gugus &os&at) sehingga molekul &os&olipid akanterurai menjadi gliserol, asam karboksilat, dan asam &os&at. =al ini mengakibatkan

&os&olipid tidak mampu mempertahankan bentuk membran sel, akibatnya

membran sel akan bo#or dan bakteri akan mengalami hambatan pertumbuhan atau

bahkan kematian.-la onoid juga memiliki bioakti itas sebagai antioksidan, antithrombogenik,

anti irus, dan dapat menurunkan kadar kolesterol dalam darah, antiangiogenesis,dan menghambat proli&erasi sel. 9i&at antioksidan yang dimiliki oleh senyawa

&la onoid berasal dari reaksi redoks yang dimilikinya. 3eaksi ini berperan penting

untuk menyerap dan menetralisasi radikal bebas, menangkap oksigen, atau

menyebabkan dekomposisi peroksida.""

Te&/e #2

$erpenoid merupakan salah satu kelas metabolit sekunder dari tumbuhan yang

paling banyak jumlahnya dan beragam strukturnya. plikasi penggunaan senyawa

terpenoid sangat luas, diantaranya dapat digunakan sebagai penyedap makanan,

obatAobatan, par&um, insektisida, dan agen antimikroba.+1 9e#ara umum, terpenoid

dapat dikelompokkan berdasarkan strukturnya. leh karena itu, senyawa ini

seringkali disebut sebagai isoprenoid.'5

Unit isoprena adalah molekul dengan lima karbon. Unit isoprena tunggal

merupakan kelas paling dasar dari terpenoid yaitu hemiterpenes (


45/109

%*

tersebut tergolong monoterpenoid (


46/109


47/109


48/109

%%

bakteri terhadap at antibakteri.9elanjutnya dikatakan bahwa semakin lebar

diameter ona hambat yang terbentuk maka bakteri tersebut semakin sensiti&."4

9alah satu langkah yang paling penting dalam proses pengujian di&usi agar

adalah mempersiapkan inokulum. !roses ini melibatkan pemilihan koloni yang

tepat untuk pengujian, inkubasi dalambroth , dan standardisasi suspensi. da dua

metode untuk persiapan inokulum, yaitu suspensi koloni langsung dan log

pertumbuhanlog phase . =anya metode suspensi koloni langsung yang dapat

memberikan hasil akurat untuk beberapa organisme.%6

etode di&usi agar merupakan salah satu metode yang digunakan dalam uji

sensiti&itas bakteri dengan #ara mengamati daya hambat pertumbuhan bakteri

oleh bahan antibakteri yang diketahui dari daerah di sekitar kertas #akram ( paper

$is2 ) yang tidak ditumbuhi oleh bakteri. Bona hambat pertumbuhan inilah yang

menunjukkan sensiti&itas bakteri terhadap bahan antibakteri. 9ensiti&itas bakteri

terhadap suatu bahan dapat dikategorikan menjadi sensiti&, intermediet, atau

resisten, tergantung standar ona hambat minimal suatu bahan terhadap bakteri

yang telah ditentukan."4

A B8ambar ".4 $eknik !engukuran Diameter Bona =ambat. .


49/109

%'

eberapa ona mungkin sulit untuk diukur, #ontohnya ketika terdapat

gambaran ona hambat ganda dan ditemukannya koloni bakteri di dalam onahambat. Untuk mengukur diameter ona hambat pada gambaran ona hambat

ganda maka diambil ona yang paling dalam. pabila ditemukan koloni di dalaam

ona hambat dapat disebabkan adanya kultur #ampuran atau subpopulasi yang

resisten pada bakteri uji. Kemudian apabila ditemukan gambaran ona hambat

dengan batas luar yang kurang jelas (seperti bulu) maka diambil titik yang

menunjukkan demarkasi yang jelas antara adanya pertumbuhan dan tidak ada

pertumbuhan.%6

:1:6 U.# Minimum Inhibitory Concentration (MIC)

Minimum inhibitory concentration dide&inisikan sebagai konsentrasi terendah

agen antimikroba yang dapat menghambat pertumbuhan mikroorganisme. etode

dilusi digunakan untuk menentukan ;< dari agen antimikroba dan merupakan

metode re&erensi untuk pengujian kerentanan antimikroba. Dalam tes dilusi,

mikroorganisme diuji untuk melihat kemampuan mereka untuk menghasilkan

pertumbuhan yang terlihat melalui perubahan warnabroth yang terdapat pada

1ells plat mikrotitrasi. Broth yang terdapat pada1ells tersebut mengandung agen

antimikroba yang sudah mengalami dilusi serial.%*


50/109

%+

8ambar ".5


51/109

%4

konsentrasi yang berbedaAbeda, dimana kolom 1 memiliki konsentrasi yang paling

besar kemudian dilakukan serial dilusi hingga kolom keA7 ( kolom keA7 memilikikonsentrasi yang paling ke#il). 9embilan1ells pada baris dan kolom 11

merupakan kontrol positi&.+4

: Ke&! +! /e$#+#&!

Streptococcus sanguinisis merupakan bakteri gram positi& yang berperan

sebagai bakteri pionir dalam kolonisasi bakteri pada gigi dan merupakan salah

satu spesies yang paling melimpah pada bio&ilm rongga mulut yang disebut plak

gigi. 9ekitar 6*C koloni bakteri yang berperan dalam pembentukan tahap awal

plak gigi merupakan golongan streptokokus."4,"6,%%

S. sanguinis berinteraksi dengan berbagai reseptorhost dan mikroba mulut

lain di sekitarnya untuk mem&asilitasi kolonisasi rongga mulut. 9upaya dapat

terjadi koneksi dengan dengan reseptor inang dan dibutuhkan beberapa ma#am

adhesin dan protein permukaan. eberapa protein permukaan yang berpotensi

dalam proses adhesi dalam rongga mulut atau irulensi penyakit in asi&

diidenti&ikasi dalam genomS. sanguinis . 2ipoprotein (2!) dan proteincell-1all

anchore$ (


52/109

%5

memiiki en im 9rt yang menghubungkan satu atau lebih protein permukaan

sebagai anti opsonisasi.5,7

io&ilm terbentuk dari komunitas mikroorganisme yang terorganisir menutupi

permukaan biotik atau abiotik. ;nisiasi pembentukan bio&ilm dalam rongga mulut

disebabkan oleh adhesi mikroorganisme utama (streptokokus) pada permukaan

yang dilapisi glikoprotein sali a.6 9ubstansi yang dilepaskan dari bio&ilm ini

seperti lipopolisakarida, antigen dan &aktor irulensi lainnya memiliki akses ke

jaringan gingi a dan memulai respon in&lamasi dan kekebalan tubuh, yang

menyebabkan akti asi sel pertahananhost . 9ebagai hasil dari akti asi sel,

mediator in&lamasi, termasuk sitokin, kemokin, metabolit asam arakidonat dan

en im proteolitik se#ara kolekti& berkontribusi terhadap kerusakan jaringan dan

resorpsi tulang yang mengarah pada penyakit periodontal.+

$indakan untuk mengontrol pembentukan plak gigi diperlukan untuk

men#egah terjadinya karies atau karang gigi. 9elain mempertahankan kebersihan

rongga mulut dengan menggosok gigi dan pemeriksaan rutin ke dokter gigi,

dibutuhkan perawatan penunjang seperti penggunaan obat kumur yang memiliki

si&at antimikroba."6,%"

gen antimikroba diklasi&ikasikan berdasarkan mekanisme kerja merekaterhadap sel bakteri. genAagen ini dapat mengganggu sintesis dinding sel,

menghambat sintesis protein, mengganggu sintesis asam nukleat atau

menghambat jalur metabolisme bakteri. ekanisme kerja agen antimikroba

terhadap bakteri gram positi& dan gram negati& yang sangat mirip. Klorheksidin


53/109

%6

sebagai salah satu agen yang memiliki e&ek antimikroba juga memiliki mekanisme

kerja yang khusus."4,"6,%6

&ekti&itas klorheksidin terjadi karena adanya interaksi interaksi muatan

positi& molekul klorheksidin dan gugus &os&at yang bermuatan negati& pada

dinding sel mikroba sehingga mengubah keseimbangan osmotik sel bakteri.'*

9elanjutnya dinding sel bakteri akan mengalami peningkatan permeabilitas, hal

ini memungkinkan molekul klorheksidin untuk berpenetrasi ke dalam sel bakteri.

klorheksidin bersi&at basa dan stabil sebagai garam. 9ediaan klorheksidin yang

paling umum adalah klorheksidin glukonat yang memiliki si&at larut dalam air, p=

&isiologis, dan mudah berdissosiasi dan melepaskan komponen klorheksidin

bermuatan positi&. !ada konsentrasi rendah (*,"C) bersi&at bakteriostatik dan

dapat menyebabkan ionAion khususnya kalium dan &os&or bo#or keluar dari sel.

!ada konsentrasi yang lebih tinggi ("C), klorheksidin bersi&at bakterisida yang

menyebabkan presipitasi sitoplasma terjadi dan pada akhirnya menyebabkan

kematian sel bakteri."6,%5,'*,'1

Klorheksidin merupakan molekul kationik yang memiliki akti itas

antimikroba yang #ukup luas serta substanti&ity yang baik.'* @alaupun

menunjukkan e&ekti&itas klinis yang baik, e&ek samping yang dihasilkanmembatasi penggunaan klorheksidin hanya pada indikasi khusus dan terapi jangka

pendek."4 &ek samping klorheksidin diantaranya dapat menyebabkan perubahan

warna pada gigi dan lidah, rasa yang kurang enak,loss o0 taste , erosi mukosa

rongga mulut, dan mengandung alkohol dalam sediannya."4,"6,%"


54/109


55/109

'*

S"*2# $e e !# e


56/109

'1

S. sanguinis

dhesin dan protein

permukaan lain

!ili

9rt

K2>3= K9;D;

;solat -la onoid

;solat $erpenoid

!lak 8igi

!enyakit !eriodontal danKaries gigi

etabolisme bakteri T

Kerusakan embran 9elakteri

9intesis D0 /30 bakteriT

!embentukan Diinding 9elakteri T

G

G

Keterangan 8ambar:

: &ek isolat &la onoid: &ek isolat terpenoid: &ek K2>3= K9;D;0: -aktor ?irulensi: ;nduksi

8ambar ".7 agan Kerangka !emikiran

kstrak Kasar Umbi 9arang


57/109

'"

erdasarkan uraian pada kerangka pemikiran tersebut, maka dapat diambil

premisApremis sebagai berikut:!remis 1: Streptococcus sanguinis adalah spesies yang paling banyak jumlahnya

dalam bio&ilm plak gigi, berperan sebagai bakteri pionir dalam

kolonisasi bakteri pada gigi dan penyebab terbentuknya bio&ilm plak

gigi."4,"6,%%

!remis ": -aktor irulensiS. sanguinis adalah protein permukaan seperti adhesin

dan pili yang berperan dalam perlekatan dengan permukaan gigi atau

bakteri rongga mulut lain dan en im 9rt sebagai mekanisme

pertahanan terhadap sistem kekebalan tubuh manusia.5,7,"5,%'

!remis %: ekanisme kerja antibiotik melalui beberapa #ara yaitu, menghambat

pembentukan dinding sel mengganggu membran sitoplasma

menghambat sintesis D0 menghambat metabolisme sel bakteri."4,"6,%6

!remis ': Klorheksidin merupakan molekul kationik yang memiliki akti itas

antimikroba dengan mekanisme interaksi muatan positi& molekul

klorheksidin dan gugus &os&at yang bermuatan negati& pada dinding sel

mikroba sehingga mengubah keseimbangan osmotik sel bakteri

selanjutnya dinding sel bakteri akan mengalami peningkatan

permeabilitas dan kebo#oran sel bakteri."6,%5,'*,'1

!remis +: kstrak kasar umbi sarang semut memiliki kandungan senyawaA

senyawa kimia dari golongan &la onoid, tanin, dan terpenoid, dan

sebagian besar ekstrak yang memiliki kandungan &la onoid maupun

terpenoid didalamnya memiliki akti&itas antibakteri.1'A14,""A"',+5


58/109

'%

!remis 4: kstrak kasar suatu tanaman obat dihasilkan dari interaksi yang terjadi

diantara senyawaAsenyawa yang terdapat didalamnya sehingga e&ek antibakteri yang dimiliki ekstrak seringkali lebih besar dibandingkan

isolat senyawa akti& dari ekstrak tersebut.+6

!remis 5: -la onoid memiliki akti&itas antibakteri dengan menghambat sintesis

asam nukleat bakteri, menghambat D0 girase, menghambat akti itas

en im $!ase, menghambat sintesis 30 , dan serta mengganggu

&luiditas membaran sitoplasma sel bakteri."",+*

!remis 6: 9enyawa terpenoid bekerja pada membran &os&olipid bilayer bakteri,

yang disebabkan oleh mekanisme biokimia yang dikatalisis oleh

&os&olipid bilayer dari sel bakteri. !roses ini meliputi penghambatan

transportasi elektron, translokasi protein, &os&orilasi dan reaksi

en+yme-$epen$ent ."',+7

:' H#/ "e #

enga#u pada premisApremis di atas dapat dideduksi hipotesis sebagai

berikut:

1. &ek antibakteri ekstrak kasar umbi sarang semut setara dengan

klorheksidin dalam menghambat pertumbuhanS. sanguinis (1A4)

". &ek antibakteri isolat &la onoid lebih ke#il dari klorheksidin dalammenghambat pertumbuhanS. sanguinis (1, ", %, ', 5)

%. &ek antibakteri isolat terpenoid lebih ke#il dari umbi sarang semut dengan

klorheksidin dalam menghambat pertumbuhanS. sanguinis (1, ", %, ', 6)'. &ek antibakteri ekstrak kasar lebih besar dari isolat &la onoid umbi sarang

semut dalam menghambat pertumbuhanS. sanguinis (1, ", %, +, 4, 5)+. &ek antibakteri ekstrak kasar lebih besar dari isolat terpenoid umbi sarang

semut dalam menghambat pertumbuhanS. sanguinis (1, ", %, +, 4, 6)


59/109

''

4. $erdapat hubungan antara peningkatan konsentrasi ekstrak kasar umbi

sarang semut terhadap kematian selS. sanguinis (1, ", %, +, 4)5. $erdapat hubungan antara peningkatan konsentrasi isolat &la onoid umbi

sarang semut terhadap kematian selS. sanguinis (1, ", %, +, 5)6. $erdapat hubungan antara peningkatan konsentrasi isolat terpenoid umbi

sarang semut terhadap kematian selS. sanguinis (1, ", %, +, 6)


60/109

BAB III

BAHAN7OBJEK DAN METODE PENELITIAN

!enelitian ini bertujuan untuk menguji akti itas antibakteri dari senyawa

murni (isolat) umbi sarang semut ( Myrmecope$ia pen$ens Merr " Perry)

terhadapStreptococcus sanguinis. !enelitian ini akan menguji ekstrak kasar, isolat

&la onoid dan terpenoid umbi sarang semut sebagai bahan alam yang memiliki

potensi sebagai agen antibakteri baru. Uji akti itas antibakteri ekstrak kasar dan

isolat umbi sarang semut terhadapStreptococcus sanguinis akan diuji melalui dua

tahap. $ahap pertama adalah uji di&usi agar menurut Kirby Bauer dan tahap

kedua adalah Uji ;< dengan teknik mikro dilusi menggunakan alat /#IS

%ea$er.

':1 O3.e+, B! ! , 2! Al!" Pe el#"#!':1:1 O3.e+ Pe el#"#!

>bjek penelitian adalah bakteriStreptococcus sanguinis $


61/109

'4

':1: B! ! Pe el#"#!!enelitian ini terbagi menjadi beberapa tahapan, bahanAbahan habis pakai

yang digunakan untuk kegiatan penelitian antara lain:1. akteri: bakteri yang akan diuji adalah S. sanguinis $


62/109

'5

': Me" 2e Pe el#"#!': :1 T#/e R! =! ! Pe el#"#!

!enelitian ini merupakan eksperimen laboratorium yang bertujuan untuk

menguji akti itas antibakteri isolat &la onoid dan terpenoid dari umbi sarang

semut terhadapS. sanguinis . !engujian antibakteri melalui uji Kirby-Bauer dan

Uji ;


63/109

'6

umbi sarang semut

"**** ppm

ekstraksi dan sokhletasi dengan etil asetat

kemudian dilakukan kromatogra&i pada

&raksi etil asetat, kemudian diisolasi

sehingga diperoleh isolat senyawa tunggal.

!ada uji ;< dilakukan pengen#eran

sehingga didapatkan konsentrasi "+**,

1"+*, 4"+, %1",+, 1+4,%, 56,1%, %7,*4,

17,+%, 7,55, ',66, ",'', dan 1,"" ppm;solat terpenoid

umbi sarang semut

"**** ppm

9enyawa tunggal yang diperoleh dari hasil

ekstraksi dan sokhletasi dengan etil asetat

kemudian dilakukan kromatogra&i pada

&raksi nAheksana, kemudian diisolasi

sehingga diperoleh isolat senyawa tunggal.

!ada uji ;< dilakukan pengen#eran

sehingga didapatkan konsentrasi "+**,

1"+*, 4"+, %1",+, 1+4,%, 56,1%, %7,*4,

17,+%, 7,55, ',66, ",'', dan 1,"" ppm

ppm ;nter al

Klorheksidin "***

ppm

>bat kumur inosep golongan biguanida,

memiliki si&at antiseptik dan antibakteriuntuk mengontrol plak gigi. !ada uji ;<

dilakukan pengen#eran sehingga didapatkan

konsentrasi "+*, 1"+, 4",+, %1,"+, 1+,4%,

5,61, %,71, 1,7+, *,76, *,'7, *,", dan *,1"

ppm

ppm ;nter al

!ersentase

kematian selS.

sanguinis $rdinal


64/109

'7

;< etode penentuan konsentrasi senyawa

akti& umbi sarang semut yang paling rendah

yang dapat mengahambat pertumbuhan

bakteri S. sanguis 0ilai ;<

dikelompokkan kedalam kelompok sensiti&,

sensiti& sedang, dan resisten.

ppm >rdinal

': :' P& e2*& Pe el#"#!

$ahapan penelitian diawali dengan prosedur isolasi senyawa &la onoid dai

umbi sarang semut, sedangkan ekstrak kasar dan isolat terpenoid sudah tersedia.

9elanjutnya sampel diuji sensiti&itasnya sebagai antibakteri terhadapS. Sanguinis

!CC 1*+44 dengan metode Kirby-Bauer . Kemudian dilanjutkan dengan Uji

;< menggunakan metode mikro dilusi dengan alat /#IS %ea$er untuk

mengetahui nilai ;< dari sampel dan pengaruhnya terhadap kematian sel

bakteri.

': :':1 I l! # I l!" Fl #2 U$3# S!&! Se$*"

!roses ini terdiri dari tiga tahap, yaitu: ekstraksi tumbuhan M. pen$ens ,

&raksinasi, dan pemisahan dan pemurnian isolat dari &raksi target.

1) kstraksi sampel

9ampel berupa umbi sarang semut, dipotongApotong kemudian diekstraksi

dengan teknik sokletasi menggunakan pelarut metanol ( e>=) yang

dipanaskan selama 'H% jam. kstrak metanol yang dihasilkan, diuapkan dengan

menggunakan alatrotary e&aporator dengan tekanan dari akum pada suhu I

'* < sehingga diperoleh ekstrak metanol.


65/109

+*

") -raksinasikstrak yang didapat kemudian dipartisi dengan pelarutn-heksna dan etil asetat

dengan teknik gradien. -raksi kemudian dianalisis kandungan &la onoidnya

dengan metode analisis kualitati&, menggunakan kromatogra&i lapis tipis yang

dipandu dengan lampu ultra iolet "+' dan %4+ nm serta pereaksi penampak

noda alumunium (;;;) klorida 1*C dalam etanol.%) !emisahan dan pemurnian isolat dari &raksi target

-raksi yang mengandung senyawa akti& diuapkan pelarutnya hingga didapatkan

ekstrak &raksi yang pekat, kemudian &raksi ini dimurnikan dengan metode

kromatogra&i kolom menggunakan &asa diam silika gel4*(5*V"%* mesh) dengan

&asa gerak pelarut bergradien 1*C ( / ) yaitun-heksana, etil asetat dan

metanol. !roses pemisahan ini dilakukan terus menerus berulang sampai

mendapatkan isolat murni yang ditandai dengan adanya noda tunggal pada

analisis kromatogra&i lapis tipis. 9etiap proses pemisahan diikuti dengan

analisis kromatogra&i lapis tipis yang dipandu dengan lampu ultra iolet "+' dan

%4+ nm serta pereaksi penampak noda alumunium (;;;) klorida 1*C dalam

etanol.

': :': Pe *.#! D#!$e"e& H!$3!" ( Kirby-Bauer)!engujian akti itas antibakteri dengan menggunakan uji Kirby-Bauer

dilakukan melalui dua tahap, yaitu:4*1) !ersiapan biakan bakteri uji

akteri yang digunakan dalam penelitian ini berupa bakteriS. sanguinis

$


66/109

+1

peremajaan bakteri. akteri diremajakan dengan menumbuhkan bakteri pada

media #air Muller *inton Broth selama "'A'6 jam dengan ke#epatan pengo#okan 1+* rpm pada suhu %5o


67/109

+"

) Microplate steril yang terdiri dari 1" kolom dan 6 baris1ells dipersiapkan8) empersiapkan sampel dengan konsentrasi yang telah ditentukan5) Untuk setiap sampel yaitu ekstrak kasar, isolat &la onoid, isolat terpenoid dari

umbi sarang semut, dan klorheksidin glukonat masingAmasing menggunakan

satumicroplate dengan dilakukan se#ara duplo.

1 " % ' + 4 5 6 7 1* 11 1"

<D

-8=

Keterangan: W edia 9W sampel W akteri !W !elarut

8ambar %.1 2ay >ut ;<

4) kstrak kasar menggunakan pelarut metanol, isolat &la onoid dengan pelarut

metanol:air dan terpenoid menggunakan pelarut D 9>. !adamicroplate

pertama yaitu pada1ell baris keA1 dan " diisi dengan media dan sampel

(kontrol negati&). !ada baris keA% dan ' diisi dengan media dan bakteri

(kontrol positi&). 9elanjutnya pada1ell baris keA+ dan 4 diisi dengan media,

sampel, pelarut dan bakteri. 9edangkan pada1ell baris keA5 dan 6 diisi media

dan pelarut (kontrol pelarut).3) Untuk klorheksidin glukonat menggunakan pelarut air. !adamicroplate

pertama yaitu pada1ell baris keA1 dan " diisi dengan media dan sampel

(kontrol negati&). !ada baris keA% dan ' diisi media, sampel, pelarut dan

bakteri. 9elanjutnya pada1ell baris keA+ dan 4 diisi dengan media, pelarut,

2ay >ut ;<9ampel dengan pelarut tertentu ("H pengulangan)

M+S

M+P

M+S+B

M+P+B


68/109

+%

dan bakteri (kontrol positi&). 9edangkan pada1ell baris keA5 dan 6 diisi media

dan pelarut (kontrol pelarut).) 9ampel (ekstrak kasar, isolat &la onoid, isolat terpenoid umbi sarang semut

dan klorheksidin glukonat) diambil dengan menggunakan mikropipet 1**L2

kemudian diteteskan ke dalam1ell pada baris ke "A5 paling kiri pada masingA

masingmicroplate.

7) 9ebanyak +*Ll media uller =inton roth ditambahkan dengan +*Ll sampel

pada konsentrasi 1*** ppm dan klorheksidin "*** ppm pada1ell.

) en#ampur media dengan sampel pada1ell di baris "A5 dengan menghisap

naik turun sebanyak 4A6 kali menggunakan mikropipet.9) elakukan pengen#eran sebanyak 1" kali. !engen#eran 1**L2 dari kolom 1

dan menambahkan ke kolom ", sehingga didapatkan pengen#eran kolom " dua

kali lipat kolom 1. 9elanjutnya memindahkan 1** L2 dari kolom " ke kolom

%, dilanjutkan hingga ke kolom 1".6) empersiapkanS. sanguinis yang telah sesuai standar Mc arlan$ *,+.

) Dengan mikropipet diatur pada + L2, masukkan bakteri ke dalam1ell baris +A

5 di semua kolom.8) enutup microplate dan memasukkan ke dalam tabung jar dengan kadar "

+C dan diinkubasi dengan suhu %5o < selama '6 jam.5) 9etelah '6 jam, dilakukan pemindaianmicroplate dengan /#IS %ea$er. 0ilai

;< diukur dengan menghitung persentase penghambatan bakteri denganrumus sebagai berikut:

C !enghambatan akteri W

W edia 9W sampel W akteri !W !elarut >DW'ptical (ensity;< diambil sebagai konsentrasi terendah dari larutan sampel yang dapat

menghambat pertumbuhan bakteri ditandai dengan tidak adanya perubahan

warna menjadi keruh pada larutan di dalam1ell .


69/109

+'

Kriteria ;nterpretasi nilai ;< untuk bakteri streptokokus terdapat pada

proto#ol 1** $abel "=A1 dan "=A".

T!3el ': P! 2*! I "e&/&e"! # N#l!# MIC

A "#3# "#+ S"! 2!&

Breakpoint (//$)

Se #"#< Se #"#< Se2! Re # "e

$etra#y#line X " %A5 Y6

8ambar %." lur !enelitian

': :; A !l# # D!"!=asil uji Kirby-Bauer yang dilakukan se#ara dupo akan ditampilkan se#ara

deskripti& berupa rataArata diameter ona hambat pertumbuhan sel bakteri. Untuk

mengetahui perbedaan e&ek antibakteri ekstrak kasar dan isolat

Uji Kirby Bauer

Uji ;< ( etode ikrodilusi)

;solat-la onoid

;solat$erpenoid

Data

nalisis Data

Diba#a dengan /#IS %ea$er Diameter Bona=ambat

kstrak Kasar

Kromatogra&i Kolom ($eknik 8radien)

kstraksi ( etode 9okletasi)

Umbi 9arang 9emut

;solasi denganKromatogra&i Kolom

Klorheksidin

-raksi mengandung9enyawa -la onoid

kstrak Kasar Umbi 9arang 9emut

!ersentase Kematian selS. sanguinis " 0ilai ;


70/109

++

&la onoid/terpenoid terhadap pertumbuhanS. sanguinis dibandingkan dengan

klorheksidin dilakukan analisis data se#ara statistik menggunakan uji t.Data uji ;< yang digunakan bersi&at kuantitati& dan didapatkan melalui #ara

pengukuran/perhitungan dengan menggunakan alat /#IS %ea$er. Untuk

mengetahui pengaruh/hubungan antara pemberian konsentrasi isolat

&la onoid/terpenoid terhadap persentase kematian selS. sanguinis digunakan Uji

0>? . Kemudian untuk mengukur kekuatan dan arah hubungannya digunakan

analisis korelasi Pearson apabila data berdistribusi normal dan %ho Spearman

apabila distribusi data tidak normal. Uji normalitas data dengan uji2olmogro&-

smirno&. nalisis data penelitian diproses dengan menggunakan program 9!99

ersi "*,*.

': :5 >!+"* 2! Te$/!" Pe el#"#!!enelitian dilakukan di laboratorium kimia organik dan mikrobiologi urusan

Kimia Uni ersitas !adjadjaran. @aktu !enelitian dari bulan gustusA>ktober

"*1+.

': :6 A /e+ E"#+

!enelitian ini menggunakanStreptococcus sanguinis $


71/109

+4


72/109

BAB IVHASIL DAN PEMBAHASAN

!enelitian ini bertujuan untuk menguji akti itas antibakteri yang terdapat pada

ekstrak kasar, isolat &la onoid dan terpenoid yang terdapat pada umbi sarang

semut. !roses pengujian akti itas antibakteri dibagi kedalam dua tahap, tahap

pertama melalui pengujian Kirby-Bauer untuk mengetahui apakah sensiti&itas e&ek

antibakteri dari sampel. Kemudian dilanjutkkan pada pengujian ;< dengan

teknik mikrodilusi. Microplate pada uji ;< akan diba#a oleh 2;9 %ea$er

kemudian akan didapatkan persentase kematian sel bakteri. Dari hasil perhitungan

tersebut akan dianalisis pengaruh pemberian sampel terhadap kematian sel bakteri

S. sanguinis.

;:1 H! #l Pe el#"#!;:1:1 H! #l U.# K#&3-?B!*e&7 D#!$e"e& H!$3!"

8ambar '.1 Uji KirbyA auer pada kstrak, ;solat -la onoid dan $erpenoid Umbi9arang 9emut (duplo)

+5


73/109

+6

8ambar '." Uji KirbyA auer !ada !elarut etanol, etanol dan ir, dan D 9>(duplo)

8ambar '.% Uji KirbyA auer pada Klorheksidin

8ambar '.1, '.", dan '.% memperlihatkan ona hambat yang dihasilkan oleh

masingAmasing kelompok sampel dan kelompok kontroll pelarut. Klorheksidin

menghasilkan diameter hambat yang paling besar, sedangkan isolat terpenoid

menghasilkan ona hambat yang sangat ke#il. ;solat &la onoid dan kelompok

#ontrol pelarut (metanol, metanol R air, dan D 9>) tidak memperlihatkan

terbentuknya ona hambat pertumbuhan bakteri.


74/109

+7

T!3el ;:1 H! #l U.# Kirby-Bauer "e& !2!/ S.sanguinis

Klorheksidin, ekstrak kasar, dan isolat terpenoid menghasilkan ona hambat

terhadap pertumbuhan 9. sanguinis, oleh karena itu ketiganya tergolong memiliki

akti&itas antibakteri. kstrak kasar menghasilkan ona hambat lebih besar dari

isolat terpenoid tetapi lebih ke#il dari klorheksidin. 9edangkan,isolat &la onoid

sama seperti kontrol pelarut metanol, metanol Rair, dan D 9> tidak

menghasilkan ona hambat, tidak memiliki akti itas antibakteri terhadap bakteriS. sanguinis $


75/109

4*

T!3el ;: H! #l U.# " ! "!&! E+ "&!+ K! !& U$3# S!&! Se$*" 2e !Kl & e+ #2#

Kel $/ + R!"!?&!"!

" #"* 2< " "!3el N#l!# /

kstrak Kasar 1",1A+,%6+ 1,%1" 1",5*4 *,*5+

Klorheksidin 1+,*

erdasarkan tabel diatas, diketahui bahwa nilai p Z *,*+ yaitu *,*5+. 9elain

itu, t hitung bernilai A+,%6+ atau Vt tabel [ A+,%6+ [ t tabel. >leh karena itu, dapat

disimpulkan bahwa e&ek antibakteri ekstrak kasar umbi sarang semut setara

dengan klorheksidin dalam menghambat pertumbuhanS. sanguinis.

;:1:1: U.# Be2! ! "!&! I l!" Te&/e #2 U$3# S!&! Se$*" 2e !

Kl & e+ #2#

T!3el ;:' H! #l U.# " ! "!&! I l!" Te&/e #2 U$3# S!&! Se$*" 2e !Kl & e+ #2#

Kel $/ + R!"!?&!"! " #"* 2< " "!3el N#l!# /

;solat $erpenoid 7,"1A"','64 1.456 1",5*4 *,**'

Klorheksidin 1+,*

erdasarkan tabel diatas, diketahui bahwa nilai p [ *,*+ yaitu *,*'+.

Kemudian t hitung bernilai A"','64 dimana t hitung [ A t tabel. >leh karena itu,

dapat disimpulkan bahwa e&ek antibakteri isolat terpenoid umbi sarang semut

lebih ke#il dibandingkan dengan klorheksidin dalam menghambat pertumbuhanS.

sanguinis.


76/109

41

;:1:1:' U.# Be2! ! "!&! E+ "&!+ K! !& 2e ! I l!" Te&/e #2 U$3# S!&!Se$*"

T!3el ;:; H! #l U.# " ! "!&! E+ "&!+ K! !& 2e ! I l!" Te&/e #2 U$3#S!&! Se$*"

Kel $/ + R!"!?&!"! " #"* 2< " "!3el N#l!# /

kstrak Kasar 1",1+,+56 " ',%*" *,*%1

;solat $erpenoid 1+,*

erdasarkan tabel diatas, diketahui bahwa nilai p [ *,*+ yaitu *,*%1.

Kemudian t hitung bernilai +,+56 dimana t hitung Z t tabel. >leh karena itu, dapat

disimpulkan bahwa e&ek antibakteri ekstrak kasar umbi sarang semut lebih besar

dibandingkan dengan isolat terpenoid dalam menghambat pertumbuhanS.

sanguinis.

;:1: H! #l U.# MICUji ;< pada penelitian ini menggunakan 741ell microplate. asingAmasing

sampel akan diuji pada satumicroplate. 9etiapmicroplate terdiri dari ' kelompok

yaitu kelompok mediaSsampel (baris ), kelompok mediaSpelarut (baris


77/109

4"

8ambar '.' Microplate Uji ;< kstrak Kasar Umbi 9arang 9emut

T!3el ;:5 H! #l A !l# # MIC E+ "&!+ K! !& S!&! Se$*" "e& !2!/ S.sanguinis

>ellK e "&! # (//$)

:500 1: 50 6 5 '1 ,5 156,' 89,1' ' :06 1 :5' :88 ;:99 :;; 1:

Me2#! S!$/el1,%*+ 1,*"" *,+7" *,%51 *,"'7 *,1+% *,1*6 *,*6% *.*47 *.*+7 *.*+5 *.*+%

1,1'6 1,*4" *,4*4 *,%46 *,"'1 *,1'7 *,1*' *,*6% *.*5 *.*41 *.*++ *.*++

Me2#! Pel!&*"*,*67 *,*4' *,*+6 *,*++ *,*+' *,*++ *,*+5 *,*+' *.*++ *.*+% *.*+' *.*+%*,*46 *,*4% *,*+5 *,*++ *,*+% *,*+% *,*++ *,*+% *.*+' *.*+% *.*++ *.*+'

Me2#! S!$/el B!+"e

1,*+% *,756 *,+77 *,%4" *,"'% *,1+" *,11* *,*6+ *.*5+ *.*47 *.*5 *.*5+1,*7" *,7*1 *,+65 *,%++ *,"%5 *,1'+ *,1*+ *,*64 *.*55 *.*51 *.*51 *.*5%

Me2#! Pel!&*" B!+"e

*,*45 *,*45 *,*+5 *,*+5 *,*4+ *,*44 *,*45 *,*45 *.*47 *.*51 *.*5" *.*5'*,*47 *,*4+ *,*+6 *,*+6 *,*4% *,*44 *,*44 *,*46 *.*5 *.*5' *.*5+ *.*47

Ke$!"#! Sel A A A A 1'5,"5% 117,7%* 6+,'++ 6",%*6 +4.474 '6.'1% "%.667 A1".%61

8ambar '.' menunjukkan sampel pada kolom keA1 sampai keA' pada baris

dan - memiliki warna yang pekat dan keruh. =al ini mempengaruhi perhitungannilai persentase kematian sel bakteri. Karena penilaian isual padamicroplate

sulit dilakukan, maka nilai ;< ditentukan melalui perhitungan nilai >D pada

tabel '.+. !erhitungan nilai >D akan menghasilkan nilai persentase kematian

bakteri dari setiap kelompok konsentrasi. 0ilai ;< merupakan nilai positi&

pertama yang didapatkan dari konsentrasi yang paling ke#il. Dari perhitungan


78/109

4%

pada tabel didapatkan nilai ;< kstrak kasar umbi sarang semut adalah ",''

ppm.

8ambar '.+ Microplate Uji ;< ;solat -la onoid Umbi 9arang 9emut

Uji ;< pada isolat &la onoid tetap dilakukan meskipun hasil pengujian

Kirby-Bauer menunjukkan hasil tidak akti& . !engujian ini bertujuan untuk

menganalisis kekuatan hubungan antara peningkatan konsentrasi isolat &la onoidterhadap persentase kematian sel bakteriS. sanguinis.

T!3el ;:6 H! #l A !l# # MIC I l!" Fl! #2 S!&! Se$*" "e& !2!/ S.sanguinis

>ell

K e "&! # (//$)

:5 1: 5 6 5 '1 ,50 156,'0 89,1' ' ,06 1 ,5' ,88 ;,99 ,;; 1,

Me2#! S!$/el

*,*71 *,*7+ *,*64 *,*51 *,*4' *,*4* *,*++ *,*+" *,*+ *,*+ *,*'7 *,*'7

*,*71 *,*7+ *,*6% *,*45 *,*+7 *,*++ *,*+% *,*+1 *,*'6 *,*'5 *,*'6 *,*'7

Me2#! Pel!&*"

*,*'' *,*'+ *,*'4 *,*'6 *,*+* *,*+" *,*'7 *,*'6 *,*+ *,*'7 *,*'6 *,*+1

*,*'% *,*'' *,*'+ *,*'4 *,*'4 *,*'6 *,*'6 *,*'6 *,*+ *,*'7 *,*'7 *,*'7

Me2#! S!$/el B!+"e

*,116 *,1*1 *,*6+ *,*55 *,*5* *,*46 *,*4+ *,*4' *,*44 *,*4" *,*41 *,*41

*,116 *,*75 *,*6" *,*5+ *,*4' *,*4+ *,*4% *,*44 *,*41 *,*4 *,*4 *,*4"

Me2#! Pel!&*" B!+"e

*,*'5 *,*+' *,*+' *,*4% *,*+7 *,*4" *,*5* *,*4% *,*4' *,*4" *,*+7 *,*41

*,*'4 *,*+% *,*++ *,*41 *,*+6 *,*4" *,*45 *,*4' *,*4" *,*4% *,*4 *,*41

Kematian selC ? ++,++4 111,"+ +%,%% '+,6% "',"64 '7,65+1',1 5 A11.%1* 5,'16 A7,*71 A1',145


79/109

4'

8ambar '.+ menunjukkan sampel pada kolom keA1 pada baris dan -memiliki warna yang pekat. =al ini mempengaruhi perhitungan nilai persentase

kematian sel bakteri. !erhitungan nilai >D akan dimulai dari kolom keA". Dari

perhitungan pada $abel '.4 didapatkan nilai ;< isolat &la onoid umbi sarang

semut terdapat pada kolom pengen#eran keA6 yaitu 17,+% ppm.

8ambar '.4 Microplate Uji ;< ;solat $erpenoid Umbi 9arang 9emutT!3el ;:8 H! #l A !l# # MIC I l!" Te&/e #2 S!&! Se$*" "e& !2!/

S.sanguinis

>ellK e "&! # (//$)

500 1 50 6 5 '1 ,5 156,' 89,1' ' ,06 1 ,5' ,88 ;,99 ,;; 1,

Me2#!

S!$/el

*,+*4 *,'*6 *,"5' *,171 *,1%7 *.*7+ *.*51 *.*4 *.*+' *.*+ *.*+1 *.*'7

*,+'6 *,' *,"'4 *,"6 *,1%" *.*66 *.*45 *.*++ *.*+1 *.*'6 *.*'4 *.*'7Me2#! Pel!&*"

*,*+7 *,*+ *,*'6 *,*'7 *,*+ *.*+1 *.*'7 *.*'6 *.*'6 *.*'5 *.*'5 *.*'6

*,*+' *,*'6 *,*'4 *,*'5 *,*'5 *.*'5 *.*'4 *.*'5 *.*'6 *.*'5 *.*'5 *.*'6Me2#!

S!$/el B!+"e

*,4"% *,''7 *,%%5 *,16% *,1%" *.*74 *.*5+ *.*46 *.*4+ *.*4% *.*41 *.*4%

*,4% *,'' *,"65 *,15' *,1%1 *.*64 *.*56 *.*4% *.*4% *.*4' *.*4 *.*4"Me2#!

Pel!&*" B!+"e

*,*+6 *,*+ *,*'7 *,*++ *,*+5 *.*+5 *.*+4 *.*+6 *.*+6 *.*+7 *.*41 *.*4

*,*+4 *,*+ *,*'7 *,*++ *,*+5 *.*4 *.*+6 *.*+7 *.*4 *.*+7 *.*4 *.*41

Ke$!"#!Sel

A A A A 1++ 77.%+7 "+.+7+ "4.445 A+.*** A"*.6%% 1*.''* A6.%%%


80/109

4+

8ambar '.4 menunjukkan sampel pada kolom keA1 sampai keA' pada baris

dan - berwarna keruh. ;solat terpenoid bersi&at hidro&obik sehingga saatdilarutkan bersama dengan media air akan mengalami rekristalisasi. =al ini

mempengaruhi perhitungan snilai >D pada kolom keA1 sampai keA'. !enilaian

persentase kematian sel akan dimulai dari kolom keA+. Karena penilaian isual

pada microplate sulit dilakukan, maka nilai ;< ditentukan melalui perhitungan

nilai >D pada tabel '.5. Dari perhitungan didapatkan nilai ;< isolat terpenoid

umbi sarang semut berada pada kolom pengen#eran keA6 yaitu 17,+% ppm

8ambar '.5 Microplate Uji ;< Klorheksidin

T!3el ;:9 H! #l A !l# # MIC Kl & e+ #2# "e& !2!/ S.sanguinis

>ell

K e "&! # (//$)

50 1 5 6 ,5 '1, 5 15,6' 8,91' ', 06 1, 5' 0, 88 0,;99 0, ;; 0,1

Me2#! S!$/el

*,*'5 *,*+7 *,*4" *,*4' *,*4 *,*+7 *,*+' *,*+1 *,*+% *,*'7 *,*'7 *,*'7

*,*+ *,*+4 *,*+7 *,*+7 *,*+5 *,*+' *,*+" *,*+ *,*+ *,*'5 *,*'6 *,*+

Me2#! Pel!&*"

*,*'5 *,*'6 *,*'5 *,*'7 *,*+ *,*'' *,*'7 *,*'' *,*'4 *,*'+ *,*'5 *,*'7

*,*'+ *,*'+ *,*'5 *,*'5 *,*'4 *,*'6 *,*'5 *,*'5 *,*'4 *,*'5 *,*'5 *,*+Me2#!

S!$/el B!+"e

*,*++ *,*4 *,*4' *,*4% *,*+6 *,*+' *,*+% *,*'7 *,*5' *,*44 *,*45 *,*4'

*,*++ *,*+7 *,*4% *,*4" *,*+4 *,*+% *,*+1 *,*'7 *,*5% *,*4' *,*4% *,*45Me2#!

Pel!&*"

B!+"e

*,*+7 *,*4" *,*4" *,*4" *,*41 *,*+7 *,*4 *,*4 *,*41 *,*4 *,*41 *,*4%

*,*+7 *,*4% *,*41 *,*4% *,*4" *,*4% *,*4% *,*4' *,*4" *,*4% *,*4% *,*4'


81/109

44

Ke$!"#!Sel

'6,61 66,*7+ 57,*'6 7','51 11","14 1"* 1*5,45* 10 ,1 1 A'1,65+ A7,57" A11,141 A1',"64

0ilai ;< klorheksidin dapat ditentukan melalui pengamatan isual

microplate pada gambar '.5 apabila diamati1ell pada kolom keA6 baris -

memiliki warna yang lebih bening dibandingkan kolom keA7 baris -. =al ini

mengindikasikan adanya penghambatan pertumbuhan bakteri, yang ditandai

dengan menurunnya kekeruhan pada1ell tersebut. 9elain itu, dari perhitungan

persentase kematian sel pada tabel '.6 didapatkan nilai positi& pertama pada

kolom keA6. Kesimpulannya, nilai ;< klorheksidin adalah 1,7+% ppm yang

terdapat pada kolom keA6.

;:1: :1 I "e&/&e"! # N#l!# MIC 2! E+ "&!+ K! !&, I l!" Fl! #2 2!Te&/e #2 U$3# S!&! Se$*" 2! Kl & e+ #2#

T!3el ;: H! #l I "e&/&e"! # N#l!# MIC 2! E+ "&!+ K! !&, I l!" Fl! #22! Te&/e #2 U$3# S!&! Se$*" 2! Kl & e+ #2#

Kel $/ + N#l!# MIC (//$) I "e&/&e"! #kstrak Kasar ",'' 9ensiti&

;solat -la onoid 17,+% 3esisten;solat $erpenoid 17,+% 3esistenKlorheksidin 1,7+% 9ensiti&

0ilai ;< yang dimiliki oleh masingAmasing sampel dikategorikan menurut

standar


82/109

45

Untuk mengetahui hubungan dan besarnya pengaruh antara peningkatan

konsentrasi ekstrak kasar, isolat &la onoid, dan terpenoid terhadap kematian sel bakteri maka perlu dilakukan uji 0>? dan uji korelasi pearson. Uji statistik

dilakukan pada konsentrasi ",'', ',66, 7,55, dan 17,+%. Konsentrasi tersebut

dipilih karena didalamnya sudah men#akup nilai ;< dari ekstrak kasar, isolat

&la onoid dan terpenoid umbu sarang semut.;:1: : U.# ANOVA 2! K &el! # A "!&! Pe # +!"! K e "&! # E+ "&!+

K! !& U$3# S!&! Se$*" "e& !2!/ Ke$!"#! Sel B!+"e

T!3el ;:10 H! #l U.# ANOVA ! "!&! Pe # +!"! K e "&! # E+ "&!+ K! !& U$3# S!&! Se$*" "e& !2!/ Ke$!"#! Sel B!+"e S.sanguinis

V!!3elK e "&! # (//$)

N#l!# /,;; ;,99 ,88 1 ,5'

!ersentaseKematian 9el

"%.667 '6.'1% +4.474 6".%*6 .**1

$abel '.1* menunjukkan hasil uji 0>? antara pemberian konsentrasi

ekstrak kasar sebesar ",'', ',66, 7,55, dan 17,+% terhadap persentase kematian sel

bakteriS. sanguinis . =asil pengujian pada derajat keper#ayaan 7+C menunjukkan

terdapat paling tidak satu perbedaan yang bermakna antara ' kelompok

konsentrasi, dilihat dari nilai p [ *,*+. >leh karena itu untuk mengetahui

perbedaan antara masingAmasing perlakuan diperlukan pengujian lanjutan. Uji

yang akan digunakan adalah uji $ukey

T!3el ;:11 H! #l U.# T*+e- ! "!&! Pe # +!"! K e "&! # E+ "&!+ K! !&U$3# S!&! Se$*" "e& !2!/ Ke$!"#! Sel B!+"e S. sanguinis


83/109

46

Dependent ?ariable:!ersentase Kematian 9el

(I) K e "&! #E+ "&!+ K! !&

(J) K e "&! #E+ "&!+ K! !& Me! D#


84/109

47

K e "&! #E+ "&!+

K! !& SS

Ke$!"#!

Sel B!+"eKonsentrasi kstrakKasar

!earson


85/109

5*

yang bermakna antara ' kelompok konsentrasi isolat terpenoid. Untuk

mengetahui perbedaan antara masingAmasing kelompok konsentrasi diperlukan pengujian lanjutan. Uji yang akan digunakan adalah uji $ukey.

T!3el ;:1; H! #l U.# T*+e- ! "!&! Pe # +!"! K e "&! # I l!"Fl! #2 U$3# S!&! Se$*" "e& !2!/ Ke$!"#! Sel B!+"e

S. sanguinis

(I) K e "&! #I l!" Fl! #2

(J) K e "&! #I l!" Fl! #2

Me! D#


86/109

51

T!3el ;:15 H! #l U.# K &el! # Pe!& ! "!&! Pe # +!"! K e "&! # I l!"Fl! #2 U$3# S!&! Se$*" 2e ! Pe& e "! e Ke$!"#! SelB!+"e

K e "&! #I l!"

Fl! #2 Ke$!"#!Sel B!+"e

Konsentrasi ;solat-la onoid

!earson


87/109

5"

=asil uji 0>? pada tabel diatas memberikan nilai p Z *,*+ pada derajat

keper#ayaan 7+C. =al ini menunjukkan bahwa tidak terdapat perbedaan rataArata persentase kematian sel bakteri yang bermakna antara isolat terpenoid pada

konsentrasi ",'', ',66, 7,55 dan 17,+% ppm. Kesimpulannya, tidak terdapat

pengaruh yang signi&ikan antara peningkatan konsentrasi isolat terpenoid umbi

sarang semut terhadap kematian sel bakteriS. sanguinis.

T!3el ;:18 H! #l U.# K &el! # Pe!& ! "!&! Pe # +!"! K e "&! # I l!"Te&/e #2 U$3# S!&! Se$*" 2e ! Pe& e "! e Ke$!"#! SelB!+"e

K e "&! #I l!"

Te&/e #2

Ke$!"#! SelB!+"e

Konsentrasi ;solat$erpenoid

!earson


88/109


89/109

5'

". =asil Uji t menunjukkan bahwa diameter hambat yang dihasilkan oleh

isolat terpenoid memiliki perbedaan bermakna dengan klorheksidin ($abel'.%).

%. 0ilai ;< isolat terpenoid adalah 17,+% (kategori resisten) sedangkan

klorheksidin memiliki nilai 1,7+% ppm (kategori sensiti&).A& *$e "! # -! "#2!+ $e * .! $idak adaS#$/*l! hipotesis % teruji dan diterima

H#/ "e # ;&ek antibakteri ekstrak kasar lebih besar dari isolat &la onoid umbi sarang semut

dalam menghambat pertumbuhanS. sanguinis A& *$e "! # Pe * .!

1. ;solat &la onoid tidak menghasilkan ona hambat pada uji Kirby-Bauer

($abel '.1). 9ehingga, isolat &la onoid dianggap tidak memiliki e&ek

antibakteri". 0ilai ;< isolat &la onoid adalah 17,+% (kategori resisten) sedangkan

ekstrak kasar umbi sarang semut memiliki nilai ",'' ppm (sensiti&).A& *$e "! # -! "#2!+ $e * .! $idak adaS#$/*l! hipotesis ' teruji dan diterima

H#/ "e # 5&ek antibakteri ekstrak kasar lebih besar dari isolat terpenoid umbi sarang semut

dalam menghambat pertumbuhanS. sanguinis.A& *$e "! # Pe * .!

1. Diameter hambat yang dimiliki oleh isolat terpenoid sebesar 7,"1 ppm

lebih ke#il dibandingkan ekstrak kasar 1",1 mm.2. =asil Uji t menunjukkan bahwa diameter hambat yang dihasilkan oleh

isolat terpenoid memiliki perbedaan bermakna dengan ekstrak kasar umbi

sarang semut ($abel '.').%. 0ilai ;< isolat terpenoid adalah 17,+% (kategori resisten) sedangkan

ekstrak kasar memiliki nilai ",'' ppm (kategori sensiti&).A& *$e "! # -! "#2!+ $e * .! $idak adaS#$/*l! hipotesis + teruji dan diterima


90/109

5+

H#/ "e # 6$erdapat hubungan antara peningkatan konsentrasi ekstrak kasar umbi sarang

semut dengan kematian sel bakteriS. sanguinis.A& *$e "! # Pe * .!

1: =asil uji 0>? menunjukkan terdapat perbedaan bermakna peningkatan

konsentrasi ekstrak kasar umbi sarang semut terhadap persentase kematian

sel bakteri. =asil uji $ukey menunjukkan perbedaan bermakna rataArata

persentase kematian selS. sanguinis antara kelompok konsentrasi ",''

ppm dengan ',66, 7,55, dan 17,+% ppm.: =asil uji korelasi pearson antara peningkatan konsentrasi ekstrak kasar

umbi sarang semut terhadap persentase kematian selS. sanguinis

memberikan nilai koe&isien korelasi mendekati 1, yaitu terdapat hubungan

yang kuat dan positi&.A& *$e "! # -! "#2!+ $e * .! $idak adaS#$/*l! hipotesis 4 teruji dan diterima

H#/ "e # 8$erdapat hubungan antara peningkatan konsentrasi isolat &la onoid umbi sarang

semut dengan kematian sel bakteriS. sanguinis.A& *$e "! # Pe * .! $idak adaA& *$e "!

bab i-v revisi2

Documents