analisis antibiotik secara simultan pada sampel biologis dengan.pptx

8/18/2019 Analisis Antibiotik Secara Simultan Pada Sampel Biologis Dengan.pptx

1/20

Analisis Antibiotik Secara SimultanPada Sampel Biologis DenganKromatograf Cair Kinerja Ultra

Tinggi Tandem Spektrometri Massa


2/20

Pendahuluan

konsumsi Antibiotikglobal diperkirakan telah mencapaiantara 100.000 sampai 200.000 ton/tahun.

Pengobatan dengan antimikroba memiliki beberapamanfaat, tetapi ketika sejumlah besar antibiotik jenistertentu yang diberikan, dapat menyebabkan efeksamping seperti; mikroorganisme resistan terhadap

obat, reaksi alergi dan efek samping lainpenggunaan antibiotik yang rasional, pemberian dosisyang tepat dan durasi pengobatan adalah faktor kunciuntuk mencegah kemungkinan resistensi. alam halini, penting untuk menentukan konsentrasi antibiotikyang masuk dalam jaringan yang berbeda, untukmengetahui efekti!tas pengobatan.isini "imia analitik sangat penting untukmeningkatkan hasil klinis, karena dapat memberikan

metode yang cocok untuk penentuan antibiotik dengan


3/20

#agi pasien kritis, dimana membutuhkan diagnosis a$al dan

hasil analisis kimia klinis yang dapat diandalkan merupakanhal yang sangat penting. %erlebih lagi, karena &at'&at sepertiobat, metabolit atau senya$a endogen dapat terakumulasidalam tubuh manusia pada tingkat yang lebih tinggi danmungkin akan beracun, maka penentuan senya$a'senya$a

dalam cairan biologis sangat penting untuk penelitian klinis

%ujuan dari penelitian ini adalah pengembangan metode baruuntuk penentuan simultan antibiotik dari golongan yangberbeda (aminoglikosida, makrolida, )'*actames, kuinolon,

penisilin, sefalosporin, carbapenems, glikopeptida danpolipeptida+, yang banyak digunakan di unit pera$atanintensif rumah sakit. elain plasma dan urin, dianalisis jugadua cairan biologis yaitu aspirasi bronkus dan cairanserebrospinal (-+. analisis dilakukan, mengingat bah$abeberapa senya$a yang dipilih dapat mencapai cairan

Pendahuluan


4/20

ahan Dan Metodologi

#ahan "imia dan eagen.Amoksisilin, leooacin, amikasin, seftriakson,

ankomisin, ampisilin, tobramycin, ta&obactam,piperasilin, cefta&idime dan line&olid diperoleh dariigma'Aldrich (3adrid, panyol+. 4mipenem,sulbaktam, sefepim, moksioksasin dan teicoplanin

dibeli dari armakope 5ropa (trasbourg, Prancis+.3oksioksasin dan asam klaulanat disediakan dariluka (teinheim, 6erman+. 3eropenem dipasok oleh*7- tantandars (#arcelona, panyol+ dan tigecyclinedari 8yeth (3adrid, panyol+. aptomycin dipasok dari9oartis (#arcelona, panyol+ dan klaritromisin dari r5stee (#arcelona, panyol+. *arutan tok standar satusenya$a murni (dengan konsentrasi antara 200 dan:00 mg/*+ dibuat dengan menimbangan bubuk secara

akurat, kemudian dilarutkan dalam 0 m* metanol' o


5/20

Peralatan

Analisis kromatogra! dilakukan dengan menggunakansistem A-=>4%? >P*- (8aters, 3ilford, 3A, >A+, danpemisahan dengan menggunakan kolom A-=>4%?>P*- #5< -1@ (>kuran partikel 100 mm 2,1 mm,1, Bm+ diperoleh dari $aters. Analisis spektrometri

massa dilakukan dengan menggunakan 8atersA-=>4%? %= spektrometer massa yang ditandemCuadrupole (8aters, 3anchester, 4nggris+. 4nstrumendioperasikan menggunakan ionisasi elektrospray

(54+. Akuisisi data dilakukan menggunakan 3ass *ynD.0 dengan program =uan*yn (8aters+. Pemisahankromatogra! dilakukan dengan fase gerak yang terdiridari metanol (eluen A+ dan larutan asam format0,01E, / (eluen #+ dengan laju alir 0,: m*/menit.


6/20

Pengambilan sampelampel urin, serum, - dan aspirasi bronkialdikumpulkan dari pasien yang dira$at di unit

pera$atan intensif (4->+ rumah sakit diAlmeria (panyol+. Pasien'pasien ini dipilihsecara acak dari mereka yang dira$at

menggunakan beberapa antibiotik yangtermasuk dalam jenis dari metode yangdikembangkan. ampel dikumpulkan dalam$adah yang steril dan langsung dibekukan

pada suhu '20o

- dengan tujuan menghindariterjadinya degradasi antibiotik yang mungkinterjadi selama transportasi. ampel dianalisisdalam $aktu 2D jam setelah pengambilan dan

sebelum analisis, sampel dicairkan pada suhu


7/20

1. >rineF 0, m* sampel urin diencerkan dengan 1 m* fase

gerak (1F2, /+. sebelum dianalisis menggunakan>


8/20


9/20

Antibiotic 54 %8 (min+ -one oltage(N+

=uanti!cationtransitiona

-on!rmation transitiona

%obramycin L 0.G1O0.G :0 DG@. :2D.D (1+ DG@. 1D.2 (20+

Amikacin L 0.GDO0.G@ @G. 1G:.2 (:0+ @G. 2GD.D (2+

Nancomycin L 0.0O0.: :0 2.G 1DD.2 (1+ 2.G 100.1 (20+4mipenem L [email protected] :0 :00.: 1D2.0 (2+ :00.: 12G.2 (20+

-efepime L 0.M:O1.02 2 [email protected] :MG.: (1+ [email protected] :2D.: (1+

Amoicillin L 0.MDO1.2: 20 :GG.2 :DM.D (10+ :GG.2 11D.1 (20+

%igecycline L 0.MGO1.1: 20 @G.G GM.@ (20+ @G.G 1:.G (22+

%a&obactam L 0.MMO1.2: : :01.D [email protected] (12+ :01.D M2.1 (2+

-laulanic acid ' 1.0O1.: 20 [email protected] 1:G.2 (+ [email protected] [email protected] (10+

3eropenem L 1.0MO1.2M 0 D0G.D :1.D (20+ D0G.D 2G.: (20+

-efta&idime L 1.1O1.0 :0 D.: DG@. (10+ D.: 1G.2 (2+ulbactam ' 1.2GO1.:2 2 2:2.1 1D0.2 (12+ 2:2.1 1@@.: (10+

*eooacin L 1.O1.@@ 20 :G2.: :[email protected] (20+ :G2.: 221.: (:+

-eftriaone L 1.MO1.2 :0 . :MG.D (10+ . 1G.2 (2+

Ampicillin L 1.G0O1.@M :0 :0.2 10G.1 (1+ :0.2 11D.1 (:0+

3oioacin L 2.1@O2.:M D D02. :@D.G (20+ D02. :GD.G (2+

*ine&olid L 2.GO2.G D0 ::@.2 2MG. (20+ ::@.2 2:.D (20+

%eicoplanin L 2.O2.G@ :0 MD1.2 :1G. (1+ MD1.2 20D.2 (20+

Piperacillin L 2.2O2.MM 0 D0.D :M@. (20+ D0.D [email protected] (2+-larithromycin L :.:1O:.D@ D0 DM.1 [email protected] (:0+ DM.1 M0. (20+

aptomycin L :.GDO:.@2 : @11.2 1M.2 (D0+ @11.2 :D1.G (2+

Retention time windows (%8s+ dan parameters 3/3 untuk beberapa antibi

%abel 1 menunjukkan nilai'nilai optimal dari transisi 3/3, tegangan kerucutdan energi tabrakan untuk senya$a yang dipilih. #eberapa senya$a tidakmenunjukkan transisi yang spesi!k, contohnya seperti tigecycline,

amoksisilin dan moksioksasin, meskipun demikinan ion produk yangterdeteksi paling sensitif sesuai dengan hilangnya amonia J3L< ' 9


10/20

Pemisahan kromatogra!

Pemisahan kromatograf dilakukan dengan %ase gerak"ang terdiri dari metanol &eluen A' dan larutan asam%ormat (()* +,+ &eluen B' dengan laju alir (- m.,menit/

7ambar. 1 menunjukkan kromatogram puncak dari blanko/sampel

spiked 1 mg/* dari antibiotik yang dipilih dalam serum.


11/20

0ptimasi prosedur ekstraksiIptimalisasi metode ekstraksi antibiotik dari aspirasi bronkialdilukukan dengan cara menambahkan D m* larutan %% (1E $/+ke dalam 1 g sampel spiked (2 mg/kg+ untuk mencairkan sampel.disentrifugasi dengan kecepatan 000 rpm (D1:G H g+ selama menit dan ekstrak bersih diperoleh. etelah itu, 00 B* darisupernatan yang diperoleh diencerkan dengan 00 B* fase gerak(1F1 /+ dan disuntikkan ke dalam sistem >ntuk itu, dipakai lima tingkat

konsentrasi yaitu 0, sampai mg/*, untuk dianalisis. Analisisdilakukan menggunakan pelarut campuran metanolFair (1F1 /+dan juga ekstrak sampel blank (matrik+. Pada 7ambar. 2menunjukkan rasio kemiringan matriks/pelarut untuk masing'masing senya$a, dan penindasan sinyal yang di toleransikan atau

efek peningkatan dianggap jika rasio kemiringan berkisar 0,@'1,2,secara tidak langsung menyatakan bah$a efek dianggap kuat jika


12/20

7ambar. 2. asio kemiringan antara kecocokan matriks dankalibrasi pelarut antibiotik target. 4nteral rasio kemiringanberkisar antara 0,@ dan 1,2 untuk efek matriks yg ditoleransi. F (a+urine, (b+ serum, (c+ - dan (d+ aspirasi bronkial. "ode senya$aFtobramycin (1+, (2+ amikasin, (:+ ankomisin; (D+ imipenem, (+sefepim; (G+ amoksisilin; (+ tigecycline; (@+ ta&obactam; (M+ asamklaulanat; (10+ meropenem; (11+ cefta&idime; (12+ sulbaktam;(1:+ leooacin, (1D+ ceftriaone; (1+ ampisilin; (1G+

moksioksasin; (1+ line&olid; (1@+ teicoplanin; (1M+ piperacillin;


13/20

2alidasi

Karakteristik hasil optimalisi metode dapat dibuktikandengan cara +alidasi prosedur "aitu dengan mempelajari

tingkat selekti+itas linieritas batas deteksi &.0Ds' dankuantifkasi &.03s' trueness pengulangan dan presisiinterda" dari sampel urine kosong serum CS! danaspirasi bronkial/


14/20


15/20


16/20


17/20

Penerapan metode

3etode yang dikembangkan diaplikasikan untuk penentuanantibiotik pada sampel biologis (urin, serum, - dan aspirasi

bronkus+ dari 10 pasien pada unit pera$atan intensif rumah sakitdi AlmerQa (panyol+, yang sedang dira$at/terapi denganbeberapa antibiotik termasuk dalam penelitian ini.


18/20

Kesimpulan• Penelitian ini menghasilkan suatu metode yang sederhana,

sensitif dan throughput tinggi untuk ekstraksi simultan danpenentuan antibiotik dari kelas yang berbeda'beda dalam urin,

serum, - dan sampel aspirasi bronkial.• 3etode ekstraksi didasarkan pada langkah pengenceran

tunggal untuk sampel urine dan sampel -, berdasarkanpresipitasi protein untuk serum dan pencairan sederhana untukaspirasi bronkial. elain itu, penggunaan >


19/20

1+ . ernRnde&'%orres, 3.I. -onsentino, 3.A.#. *Spe&, 3.-. 3ochSn, imulta'neous determinationof 11 antibiotics and their main metabolites from fourdiTerent groups by reersed'phase high'performance liCuid chromatography'diode array'uorescence (


20/20

analisis antibiotik secara simultan pada sampel biologis dengan.pptx

Documents