7/28/2019 119263661-kolesterol

1/13

I. Judul Praktikum

Pemeriksaan kolesterol dengan metode CHOD-PAP

II. Tanggal Praktikum

Rabu, 10 desember 2008

III. Tujuan Praktikum

1. Mengukur kadar kolesterol dengan metode CHOD-PAP

2. Membandingkan kadar kolesterol probandus dengan nilai normal

3. Melakukan diagnosa dini penyakit apa saja yang disebabkan oleh peningkatan

kadar kolesterol dengan bantuan hasil praktikum yang dilakukan.

IV. Dasar Teori

Kolesterol adalah komponen membran sel dan prekursor untuk hormon

steroid dan asam empedu yang disintesa oleh sel tubuh dan diserap dengan

makanan. Kolesterol diangkut di dalam plasma melalui lipoprotein, yang disebut

kompleks antara lipid dan apolipoprotein. Ada 4 klas lipoprotein: high density

lipoprotein (HDL), low density lipoprotein (LDL), very low density lipoprotein

(VLDL), dan khilomikron. Sementara LDL berperan dalam pengangkutankolesterol ke sel di perifer, HDL bertanggungjawab terhadap pengambilan

kembali kolesterol dari sel. Empat perbedaan klas lipoprotein menunjukkan

hubungan yang nyata terhadap atherosklerosis koroner. LDL-cholesterol (LDL-C)

menyumbang pembentukan plak atherosklerotik di dalam intima arteri dan terkait

erat dengan penyakit jantung koroner (PJK) dan berhubungan dengan mortalitas.

Pada saat kolesterol total dalam rentang nilai normal, peningkatan kolesterol

LDL-C menunjukkan resiko tinggi. HDL-C mempunyai efek perlindungan

dengan menghambat pembentukan plak dan menunjukkan hubungan terbalik

dengan angka kejadian PJK. Pada kenyataannya, nilai HDL-C yang rendah

merupakan faktor resiko independen. Penetapan kadar kolesterol total individu

digunakan untuk screening kepentingan itu, sambil pengkajian resiko yang lebih

baik, maka perlu mengukur HDL-C dan LDL-C sebagai tambahan.

7/28/2019 119263661-kolesterol

2/13

Beberapa uji coba klinis terkendali dengan menggunakan diet, perubahan

gaya hidup, obat-obat yang berbeda (khususnya HMG-CoA reductase inhibitor

/statins) telah menunjukan bahwa rendahnya kadar kolesterol total dan LDL-C

mengurangi resiko PJK secara drastis.

Nilai normal kolesterol dicurigai di atas 220 mg/dl atau mmol/l dan

meningkat di atas 260 mg/dl atau 6,7 mmol/l. Asosiasi Atherosclerosis Eropa

merekomendasikan untuk menurunkan kadar kolesterol sampai dengan 180 mg/dl

untuk orang berusia sampai dengan 30 th dan 200 mg/dl di atas 30 th.

Prinsip :

Kolesterol ditentukan setelah hidrolisa enzimatic dan oksidasi. Indikator

kolorimetrik yaitu quinoneimine terbentuk dari 4-aminoantipyrine dan phenol

oleh hydrogen peroksida dengan katalis peroksidase (reaksi trinders).

CHE

Cholesterol ester + H2O cholesterol as. Lemak

(CHE : Cholesterol Esterase)

CHO

Cholesterol + O2 cholesterol as. Lemak

(CHO : Cholesterol Oksidase)

POD

2H2O2 + PAD + phenol quinoneimine + 4H2O

(POD :Peroksidase)

V. Alat dan Bahan

A. Alat

1. Spuit 3 cc

2. Torniquet

3. Plakon

4. Eppendorf

5. Sentrifugator

6. Tabung reaksi 3 mL

7. Rak tabung reaksi

7/28/2019 119263661-kolesterol

3/13

8. Mikropipet (10 l - 100 l)

9. Mikropipet (100 l - 1000 l)

10. Yellow tip

11. Blue tip12. kuvet

13. Spektrofotometer

B. Bahan

1. Sampel (serum)

2. Working reagen

VI. Cara Kerja

1. Persiapan sampel :

a. Diambil darah probandus sebanyak 3 cc dengan

spuit

b. Darah dimasukkan ke dalam tabung eppendorf dan

disentrifugasi dengan kecepatan 4000 rpm selama 10 menit, kemudian

diambil serumnya sebagai sampel.

2. Sampel (serum) sebanyak 10 l dicampur dengan working reagen

sebanyak 1000 l

3. Campuran di inkubasi selama 15 menit dalam suhu ruangan (20-25 0C),

kemudian diukur dengan spektrofotometer dengan panjang gelombang 546

nm.

VII. Hasil dan Pembahasan

A. Hasil

Probandus : Leti Indah Oktaviani

Umur : 19 tahun

Jenis kelamin : Perempuan

7/28/2019 119263661-kolesterol

4/13

diinkubasi 20 menit(suhu 20-25

0

C)

diukur absorbansinya

dengan spektrofotometer=546 nm

Berdasarkan hasil pengukuran dengan spektrofotometer didapatkan

kadar kolesterol total probandus adalah 209 mg/dl.

B. Pembahasan

Berdasarkan hasil praktikum, kadar kolesterol total dari probandus

yaitu 209 mg/dl. Hal ini menunjukan kadar kolesterol probandus normal

karena dalam rentan 180 - 220 mg/dl.

Terdapat dua sumber kolesterol tubuh yaitu makanan dan

pembentukan kolesterol oleh banyak organ terutama hati. Karena tubuh dapat

membentuk kolesterol, tidak ada korelasi antar kolesterol langsung antara

kolesterol yang dimakan dengan kadar kolesterol dalam darah. Walaupun

penurunan asupan lemak hewani dapat menurunkan kadar klesterol dalam

darah di tingkat sedang. Kolesterol adalah suatu lipid yang tidak terlalu larut

1000 lworking reagen

10 lserum

working reagen + serum

7/28/2019 119263661-kolesterol

5/13

dalam darah. Sebagian besar kolesterol terikat protein-protein plasma tertentu

dalam bentuk lipoprotein.

Metabolisme lipid dapat dibagi atas tiga jalur utama yaitu jalur

metabolisme eksogen, jalur endogen, dan jalurreverse cholesterol transport.

Jalur metabolisme eksogen adalah lipid yang diserap dari usus halus, jalur

metabolisme endogen adalah sintesa lipid di hati, dan jalurreverse cholesterol

transportadalah berkaitan dengan fungsi HDL yang menarik kolesterol yang

mengendap di jaringan khususnya di makrofag untuk di bawa kembali ke hati

atau jaringan steroidogenik lainnya.

1. Jalur metabolism eksogen

Makanan berlemak yang kita makan terdiri atas trigliserid dan

kolesterol. Selain lemak yang berasal dari makanan, dalam usus juga

terdapat kolesterol dari hati yang diekskresi bersama empedu ke usus

halus. Baik lemak di usus halus yang berasal dari makanan maupun yang

berasal dari hati disebut lemak eksogen. Trigliserid dan kolesterol dalam

usus halus akan diserap ke dalam enterosit mukosa usus halus. Trigliserid

akan diserap sebagai asam lemak bebas sedang kolesterol sebagai

kolesterol. Di dalam usus halus asam lemak bebas akan dirubah lagi

7/28/2019 119263661-kolesterol

6/13

menjadi trigliserid, sedang kolesterol akan mengalami esterifikasi menjadi

kolesterol ester dan keduanya bersama dengan fosfolipid dan

apolipoprotein akan membentuk lipoprotrein yang dikenal dengan

kilomikron.

Kilomikron ini akan masuk ke saluran limfe dan akhirnya melalui

duktus torasikus akan masuk ke dalam aliran darah. Trigliserid dalam

kilomikron akan mengalami hidrolisis oleh enzim lipoprotein lipase yang

berasal dari endotel menjadi asam lemak bebas (free fatty acid (FFA) =

non-esterified fatty acid (NEFA)). Asam lemak bebas dapat disimpan

sebagai trigliserid kembali di jaringan lemak (adiposa), tetapi bila banyak

sebagian akan diambil oleh hati menjadi bahan untuk pembentukkan

trilgiserid hati. Kilomikron yang sudah kehilangan sebagian besar

trilgiserid akan menjadi kilomikron remnant yang mengandung kolesterol

ester dan akan dibawa ke hati.

2. Jalur metabolism endogen

Trigliserida dan kolesterol yang disintesis di hati dan disekresi ke

dalam sirkulasi sebagai VLDL. Apolipoprotein yang terkandung dalamVLDL adalah apolipoprotein B100. Dalam sirkulasi, trigliserid di VLDL

akan mengalami hidrolisis oleh enzim lipoprotein lipase (LPL), dan VLDL

berubah menjadi IDL yang juga akan mengalami hidrolisis dan berubah

menjadi LDL. Sebagian dari VLDL dan IDL akan mengangkut kolesterol

ester kembali ke hati. LDL adalah lipoprotein yang paling banyak

7/28/2019 119263661-kolesterol

7/13

mengandung kolesterol. Sebagian dari kolesterol di LDL akan dibawa ke

hati dan jaringan steroidogenik lainnya seperti kelenjar adrenal, testis, dan

ovarium yang mempunyai reseptor untuk LDL.

Tetapi sebagian dari LDL akan mengalami oksidasi dan ditangkap

oleh reseptor scavengerA (SR-A) di makrofag dan akan menjadi sel busa

(foam cell). Makin banyak kadar LDL-kolesterol dalam plasma makin

banyak yang akan mengalami oksidasi dan ditangkap oleh sel makrofag.

Jumlah kolesterol yang akan teroksidasi tidak banyak tergantung dari

kadar kolesterol yang terkandung di LDL. Beberapa hal yang

mempengaruhi tingkat oksidasi seperti:

a. Meningkatnya jumlah LDL kecil padat (small dense LDL) seperti

pada diabetes melitus

b. Kadar HDL-kolesterol, makin tinggi kadar HDL-kolesterol akan

bersifat protektif terhadap oksidasi LDL.

3. Jalur reverse cholesterol transport

HDL dilepaskan sebagai partikel kecil miskin kolesterol yang

mengandung apolipoprotein (apo) A, C dan E; dan disebut HDL nascent.

HDL nascent berasal dari usus halus dan hati, mempunyai bentuk gepeng

dan mengandung apolipoprotein A1. HDL nascent akan mendekati

makrofag untuk mengambil kolesterol yang tersimpan di makrofag.

7/28/2019 119263661-kolesterol

8/13

Setelah mengambil kolesterol dari makrofag, HDL nascent berubah

menjadi HDL dewasa yang berbentuk bulat. Agar dapat diambil oleh HDL

nascent, kolesterol (kolesterol bebas) di bagian dalam dari makrofag harus

dibawa ke permukaan membran sel makrofag oleh suatu transporter yang

disebut adenosine triphosphate-binding cassette transporter-1 atau

disingkat ABC-1.

Setelah mengambil kolesterol bebas dari sel makrofag, kolesterol

bebas akan diesterifikasi menjadi kolesterol ester oleh enzim lecithin

cholesterol acyltransferase (LCAT). Selanjutnya sebagian kolesterol ester

yang dibawa oleh HDL akan mengambil dua jalur. Jalur pertama ialah ke

hati dan ditangkap oleh scavenger receptor class B type 1 dikenal dengan

SR-B1. Jalur kedua adalah kolesterol dalam HDL akan dipertukarkan

dengan trigliserid dari VLDL dan IDL dengan bantuan cholesterol ester

transfer protein (CETP). Dengan demikian fungsi HDL sebagai penyerap

kolesterol dari makrofag mempunyai dua jalur yaitu langsung ke hati dan

jalur tidak langsung melalui VLDL dan IDL untuk membawa kolesterol

kembali ke hati.

Kolesterol HDL sering pula disebut sebagai kolesterol baik yang

membawa kolesterol dari sel ke hati. Trigliserida di dalam tubuh dibawa di

aliran darah oleh lipoprotein VLDL (Very Low Density Lipoprotein). Kadar

HDL yang rendah secara konsisten dihubungakan dengan peningkatan risiko

penyakit jantung koroner dan stroke. Kadar HDL yang rendah memacu

munculnya proses atherogenik (pembentukan plak di dinding pembuluh darah

arteri).

Sebaliknya, Kolesterol LDL disebut sebagai kolesterol jahat yang

membawa kolesterol dari hati ke dalam sel. Jumlah kolesterol LDL yang

tinggi akan menyebabkan penimbunan kolesterol di dalam sel. Hal ini akan

memacu munculnya proses atherosklerosis (pengerasan dinding pembuluh

darah arteri). Proses atherosklerosis akan menimbulkan komplikasi pada

organ target (jantung, otak, dan ginjal). Proses tersebut pada otak akan

meningkatkan risiko terkena stroke.

7/28/2019 119263661-kolesterol

9/13

Tidak seperti sebagian besar lipid lainnya, kolesterol tidak digunakan

sebagai bahan dasar metabolik. Kolesterol berfungsi sebagai komponen

penting membran plasma. Walaupun sebagian besar sel-sel tersebut mampu

mensintesis kolesterol sendiri, namun tidak dapat memebentuk dalam jumlah

yang cukup. Sel-sel tersebut butuh aupan dari makanan atau sel-sel yang

mengkhususkan diri membentuk kolesterol seperti sel-sel hati.

Kolesterol dapat ditemukan dalam bentuk bebas atau gabungan dengan

asam lemak rantai panjang sebagai ester kolesterol. Unsure ini disintesis di

berbagai jaringan dari asetil-KoA dan akhirnya dikeluarkan dari tubuh di

dalam empedu sebagai garam kolesterol atau empedu.kolesterol juga

merupakan prekursor senyawa steroid lain di dalam tubuh seperti

kortikosteroid, hormone sek, asam empedu dan vitamin D. Senyawa ini secara

khas adalah produk dari hewan. Oleh karena itu banyak terdapat pada

makanan yang bersumber dari hewan, seperti kuning telur, hati, daging, dan

otak.

Pemeliharaan penyaluran kolesterol darah ke sel melibatkan interaksi

kolesterol dari makanan dan kolesterol ayng sisintesis oleh hati. Apabila

jumlah kolesterol darah meningkat, sintesis kolesterol oleh hati dihentikan

karena kolesterol dalam darah secara langsung menghambat enzim di hati

yang penting untuk sintesis kolesterol. Jadi semakin banyak kolesterol yng di

makan, semakin sedikit kolesterol yang dibentuk oleh hati. Sebaliknya,

apabila asupan makanan melalui kolesterol berkurang, efek inhibisi pada

enzim hati tersebut tidak ada. Dengan cara ini kadar kolesterol darah dapatdi

pertahankan dalam keadaan konstan.

Kolesterol dalam tubuh dapat meningkat akibat berbagai proses

ditingkat jaringan, antar lain :

1. Ambilan lipoprotein yang mengandung kolesterol oleh reseptor

kolesterol

2. Ambilan kolesterol dari lipoprotein yang kaya akan kolesterol ke

membran sel

7/28/2019 119263661-kolesterol

10/13

3. Sintesis kolesterol itu sendiri

4. Hidrolisis ester kolestreril oleh enzim ester kolesteril hidrolase

Sedangkan penurunan kadar kolesterol terjadi akibat :

1. Aliran keluar kolesterol dari membran sel ke lipoprotein yang

potensial kolesterolnya rendah

2. esterifikasi kolesterol oleh enzim ACAT (asil-KoA:kolesterol

asiltransferase)

3. penggunaan kolesterol untuk sintesis senyawa steroid lainnya,

seperti hormon atau asam empedu di hati.

C. Aplikasi Klinis

1. Aterosklerosis

Aterosklerosis merupakan penyempitan dan pengerasan dinding

pembuluh darah arteri koroner. Penyempitan ini disebabkan oleh

penumpukan zat-zat lemak (lipid dan kolesterol) di bawah lapisan

terdalam (endotelium) dinding pembuluh darah arteri koroner, yang

disebut ateroma. Tumpukan zat-zat lemak ini akan mengalami oksidasi

yang lama kelamaan akan membentuk plak yang dapat menyebabkan

pengerasan arteri.Aterosklerosis adalah proses pembentukan kerak padadinding pembuluh darah (ateroma) sehingga pembuluh darah mengeras

dan lumen atau saluran pembuluh darah menjadi sempit.

Aterosklerosis diawali dengan kelainan lemak darah yaitu kadar

kolesterol total, trigliserida atau kolesterol LDL tinggi , terlebih lagi bila

di sertai dengan kolesterol HDL rendah. Kadar lemak yang berlebihan

terutama kolesterol LDL akan tertimbun kemudian menyusup kedalam

lapisan dinding pembuluh darah. Kolesterol LDL akan lebih mudah

menyusup dalam lapisan dinding pembuluh darah bila berukuran kecil

atau di sebut LDL kecil padat yang di tandai dengan kadar Apo B dan

trigliserida yang tinggi. Di dalam dinding pembuluh darah, LDL akan

dioksidasi menjadi LDL teroksidasi menjadi yang dapat merangsang

terbentuknya kerak aterosklerosis atau ateroma. Proses oksidasi ini secara

normal akan dihambat oleh sistem antioksidan tubuh, tetapi bila sistem

7/28/2019 119263661-kolesterol

11/13

antioksidan tidak memadai maka proses akan berlanjut sehingga terbentuk

ateroma.

2. Penyakit Jantung Koroner

LDL kolesterol atau lipoprotein berkepadatan rendah adalah

kolesterol jahat karena LDL melekat pada dinding arteri. Jika timbunan

LDL semakin banyak bisa menyebabkan terjadinya penutupan arteri.

Penyakit jantung koroner adalah suatu kondisi dimana otot jantung

mengalami kerusakan karena kurangnya suplai darah. Penyakit jantung

koroner merupakan penyakit yang banyak diderita masyarakat. Penyakit

ini menyerang pembuluh darah yang mengalirkan darah ke jantung. Arteri

coronaria pada penderita PJK mengalami penyempitan sehingga suplai

darah ke otot jantung itu sendiri akan menurun. Timbunan lemak,

kolesterol dan jaringan ikat pada dinding pembuluh darah secara perlahan-

lahan pada akhirnya akan mengakibatkan menyempitnya pembuluh darah.

Pada waktu pembuluh darah menyempit, jantung harus bekerja lebih keras

dan ini menyebabkan nyeri dada. Kalau pembuluh darah tersumbat sama

sekali, pemasokan darah ke jantung akan terhenti. Inilah yang disebut

serangan jantung. Faktor resiko terjadinya penyakit jantung koroner ini

adalah kolesterol, kebiasaan merokok dan hipertensi.

7/28/2019 119263661-kolesterol

12/13

VIII. Kesimpulan

1. Pemeriksaan kadar kolesterol dengan metode CHOD-PAP digunakan

campuran serum dengan working reagen.

2. Berdasarkan hasil praktikum, kadar kolesterol total dari probandus yaitu

209 mg/dl. Hal ini menunjukan kadar kolesterol probandus normal karena

dalam rentan 180 - 220 mg/dl.

3. LDL yang mengangkut kolesterol dan trigliserid merupakan lipoprotein

jahat karena menempel pada pembuluh darah yang dpat mnyebabkan

penyumbatan dan penyempitan pembuluh darah. Hal ini bisa menimbulkan

aterosklerosis dan aenyakit jantung koroner.

7/28/2019 119263661-kolesterol

13/13

DAFTAR PUSTAKA

Guyton, Arthur C. dan John E. Hall. 1990. Metabolisme lipid. Dalam: Buku Ajar

FisiologiKedokteran. Edisi 9. Jakarta: EGC. 625-629.

Koolman, Jan dan Heinrich R. 2000.Biosintesis Kolesterol. Dalam: AtlasBerwarna dan

Teks Biokimia.Jakarta : Hippokrates. 168.

Murrey, Robert K, at all. 2003. Sintesis, Pengangkutan, dan Ekskresi kolesterol. Dalam :

Biokimia Harper edisi 25. Jakarta : EGC. 271-80.

Samudro, Pugud. 2008. Dislipidemi. Dalam : Materi Kuliah Blok Endokrin dan

Metabolisme. Purwokerto : RSMS.

Sherwood, Lauralee. 2001. Kontrol Endokrin atas Metabolisme Bahan Bakar. Dalam:

Fisiologi Manusia (Dari Sel ke Sistem) Edisi 2. Jakarta : EGC. 661-7.