uji efek antibakteri infusa daun karamunting …repository.helvetia.ac.id/800/25/kti putri...i...
TRANSCRIPT
UJI EFEK ANTIBAKTERI INFUSA DAUN KARAMUNTING
(Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk) TERHADAP
PERTUMBUHAN BAKTERI Staphylococcus aureus
KARYA TULIS ILMIAH
Oleh:
PUTRI MAGDALENA NAPITUPULU
1515194043
PROGRAM STUDI D3 FARMASI
FAKULTAS FARMASI DAN KESEHATAN
INSTITUT KESEHATAN HELVETIA
MEDAN
2018
UJI EFEK ANTIBAKTERI INFUSA DAUN KARAMUNTING
(Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk) TERHADAP
PERTUMBUHAN BAKTERI Staphylococcus aureus
KARYA TULIS ILMIAH
Diajukan Sebagai Syarat Untuk Menyelesaikan Pendidikan
Program Studi D3 Farmasi dan Memperoleh Gelar
Ahli Madya Farmasi
(Amd., Farm.)
Disusun Oleh:
PUTRI MAGDALENA NAPITUPULU
1515194043
PROGRAM STUDI D3 FARMASI
FAKULTAS FARMASI DAN KESEHATAN
INSTITUT KESEHATAN HELVETIA
MEDAN
2018
Telah diuji pada tanggal : 12 September 2018
PANITIA PENGUJI KARYA TULIS ILMIAH
Ketua : Suprianto, S.Si., M.Si., Apt
Anggota : 1. Drs. Jacub Tarigan, M.Kes., Apt
2. Leny, S.Farm., M.Si., Apt
HALAMAN PERNYATAAN
Dengan ini saya mengatakan bahwa :
1. KTI ini adalah asli dan belum pernah diajukan untuk mendapatkan gelar
akademik Ahli Madya Farmasi (Amd.Farm) di Fakultas Farmasi dan
Kesehatan Institut Kesehatan Helvetia Medan.
2. KTI ini adalah murni gagasan, rumusan dan penelitian saya sendiri, tanpa
bantuan pihak lain, kecuali arahan tim pembimbing dan masukkan tim
penguji.
3. Dalam KTI ini tidak terdapat karya atau pendapat yang telah ditulis atau
dipublikasikan orang lain, kecuali secara sendiri dengan jelas dicantumkan
sebagai acuan dalam naskah dengan sebutan nama pengarang dan
dicantumkan dalam bentuk pustaka.
4. Pernyataan ini saya buat dengan sesungguhnya dan apabila dikemudian
hari terdapat penyimpangan dan ketidakbenaran dalam pernyataan ini,
maka saya bersedia menerima sanksi akademik berupa pencabutan gelar
yang telah diperoleh karena karya ini, serta sanksi lainnya sesuai dengan
norma yang belaku diperguruan tinggi ini.
Medan, September 2018
Yang Membuat Pernyataan
Putri Magdalena Napitupulu
1515194043
RIWAYAT HIDUP PENULIS
A. IDENTITAS DIRI
Nama : Putri Magdalena Napitupulu
Tempat / Tanggal Lahir : Balige, 07 September 1997
Agama : Kristen Protestan
Jenis Kelamin : Perempuan
Anak Ke- : 1 (satu) dari 4 (empat) bersaudara
Alamat : Napitupulu Bagasan Kecamatan Balige
Kabupaten Toba Samosir Provinsi Sumatera
Utara
B. IDENTITAS ORANG TUA
Nama Ayah : Tonggo Napitupulu
Pekerjaan : Wiraswasta
Nama Ibu : Damaris Hutahaean
Pekerjaan : Pegawai
Alamat : Napitupulu Bagasan Kecamatan Balige
Kabupaten Toba Samosir Provinsi Sumatera
Utara
C. RIWAYAT PENDIDIKAN
1. Tahun 2003 - 2009 : SD Katolik Sanfrancesco Balige
2. Tahun 2009 - 2012 : SMP Negeri 4 Balige
3. Tahun 2012 - 2015 : SMK Swasta Arjuna Laguboti
4. Tahun 2015 - 2018 : Diploma III Farmasi Insitut Kesehatan Helvetia
Medan
i
ABSTRAK
UJI EFEK ANTIBAKTERI INFUSA DAUN KARAMUNTING
(Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk) TERHADAP PERTUMBUHAN
BAKTERI Staphylococus Aureus.
PUTRI MAGDALENA NAPITUPULU
NIM: 1515194043
Secara tradisional daun karamunting (Rhodomyrtus tomentosa (Aiton)
Hassk) digunakan sebagai obat cacing pada manusia, mengobati luka, kudis,
mengobati sakit perut dan diare, menahan pendarahan dan juga digunakan untuk
mencegah infeksi setelah melahirkan. Berdasarkan penggunaan tradisional
sebagai pencegah infeksi bekas luka pada kornea mata dan obat diare maka
diduga tumbuhan ini aktif terhadap mikroba. Hasil penelitian menunjukkan daun
karamunting mengandung senyawa golongan alkaloid, flavonoid, fenol, tannin,
saponin, dan triterpenoid. Flavonoid terutama berupa senyawa yang larut dalam
air mempunyai aktivitas antara lain sebagai antioksidan, antimikroba, antibakteri,
antijamur, antivirus, hepatoprotektif, antiinflamasi, dan antidiabetes.
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental. Bertujuan untuk
mengetahui kemampuan infusa daun karamunting menghambat pertumbuhan
bakteri Staphylococcus aureus dan mengetahui pada konsentrasi berapa infusa
daun karamunting dapat menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus
aureus.
Uji efek antibakteri dilakukan dengan menggunakan metode difusi agar,
dengan konsentrasi 50%, 40%, 30%, 20% dan 10%. Hasil menunjukkan infusa
konsentrasi 50%, belum menujukkan adanya efek antibakteri. Dilakukan
penguapan dari konsentrasi 50% diperoleh 30 ml dan 15 ml infusa, masing-
masing zona hambat yang dihasilkan 5,2 mm dan 6,3 mm. Kontrol positif yaitu
tetrasiklin memberikan zona hambat 28,5 mm. Kontrol negatif yaitu aquadest
tidak memiliki efek antibakteri.
Berdasarkan hasil disarankan menggunakan metode dan pelarut lain
dengan membandingkan kedua hasil, sehingga diperoleh metode yang lebih
efektif untuk menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus.
Kata kunci : Daun Karamunting (Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk),
Infusa, Efek Antibakteri Staphylococcus aureus.
ii
iii
KATA PENGANTAR
Puji syukur kehadirat Tuhan Yang Maha Esa, atas berkat rahmat dan
karunia-Nya yang telah memberikan kesehatan kepada penulis, sehingga dapat
menyelesaikan karya tulis ilmiah yang berjudul “Uji Efek Antibakteri Infusa
Daun Karamunting (Rhodomyrtustomentosa (Aiton) Hassk) terhadap
Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus”, yang disusun sebagai salah satu
syarat untuk menyelesaikan pendidikan program studi D3 Farmasi di Institut
Kesehatan Helvetia Medan.
Selama proses penyusunan karya tulis ilmiah ini penulis banyak
mendapatkan bantuan dan bimbingan dari berbagai pihak. Oleh karena itu pada
kesempatan kali ini penulis menyampaikan ucapan terimakasih kepada:
1. Dr. dr. Hj. Rajia Begum Suroyo, M.sc., M.Kes. selaku Pembina Institut
Kesehatan Helvetia Medan.
2. Imam Muhammad, S.E, S.Kom., M.M., M.Kes. selaku Ketua Yayasan
Institut Kesehatan Helvetia Medan.
3. Dr. Ismail Effendy, M.Si. selaku Rektor Institut Kesehatan Helvetia Medan.
4. Dr. dr. Arifah Devi Fitriani, M.Kes. Selaku Wakil Rektor Bidang Akademik
5. Teguh Suharto, SE., M.Kes., Selaku Wakil Rektor Bidang Administrasi dan
Keuangan.
6. Darwin Syamsul, S.Si., M.Si., Apt. Selaku Dekan Fakultas Farmasi dan
Kesehatan Institut Kesehatan Helvetia Medan.
7. Rina Hanum, SST., M.Kes. Selaku Wakil Dekan Bidang Akademik.
8. Vivi Eulis Diana, S.Si., M.EM., Apt Selaku Wakil Dekan Bidang
Kemahasiswaan
9. Hafizhatul Abadi, S.Farm., M.Kes., Apt. Selaku Ketua Program Studi D3
Farmasi Institut Kesehatan Helvetia Medan.
10. Yulis Kartika, S.Farm., M.Si., Apt. Selaku Sekretaris Program Studi D3
Farmasi.
iv
11. Suprianto, S.Si., M.Si., Apt. Selaku Dosen Pembimbing yang senantiasa
memberikan waktu dan mengarahkan penulis dalam menyusun karya tulis
ilmiah ini.
12. Drs. Jacub Tarigan, M.Kes., Apt. selaku dosen penguji II yang telah
memberikan saran dan banyak meluangkan waktu untuk memberikan kritik
dan saran yang membangun dalam penyempurnaan karya tulis ilmiah ini.
13. Leny, S.Farm., M.Si., Apt. selaku dosen penguji III yang telah memberikan
saran dan banyak meluangkan waktu untuk memberikan kritik dan saran yang
membangun dalam penyempurnaan karya tulis ilmiah ini.
13. Seluruh Dosen dan Staf Institut Kesehatan Helvetia Medan yang telah
memberikan ilmu dan pengetahuan kepada penulis selama pendidikan.
14. Teristimewa kepada kedua orangtua tercinta ayah dan ibu dan keluarga besar
yang tidak pernah berhenti memberikan dukungan serta doa dan materi
kepada penulis.
15. Rekan-rekan mahasiswa D3 Farmasi semester VI dan rekan-rekan lainnya,
yang telah membantu dan mendukung penulis sampai karya tulis ilmiah ini
selesai.
Penulis menyadari bahwa karya tulisi lmiah penelitian ini masih jauh dari
kesempurnaan, sehingga penulis mengharapkan kritik dan saran yang
membangun. Akhir kata penulis mengharapkan semoga tulisan ini bermanfaat
bagi kita semua.
Medan, September 2018
Penulis
Putri Magdalena Napitupulu
v
DAFTAR ISI
Halaman
LEMBAR PENGESAHAN
LEMBAR PANITIA PENGUJI
LEMBAR PERNYATAAN
RIWAYAT HIDUP PENULIS
ABSTRAK ...................................................................................................... i
ABSTRACT ................................................................................................... ii
KATA PENGANTAR ....................................................................................... iii
DAFTAR ISI ................................................................................................... v
DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... vii
DAFTAR TABEL ....................................................................................... viii
DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................... ix
BAB I PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang ............................................................................. 1
1.2 Rumusan Masalah ........................................................................ 3
1.3 Tujuan Penelitian ......................................................................... 3
1.4 Manfaat Penelitian ....................................................................... 4
1.5 Hipotesis ...................................................................................... 4
1.6 Kerangka Konsep ......................................................................... 5
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Uraian Tumbuhan ......................................................................... 6
2.1.1 Habitat Tumbuhan Karamunting ......................................... 6
2.1.2 Sistematika Tumbuhan Karamunting .................................. 6
2.1.3 Nama Daerah ....................................................................... 7
2.1.4 Morfologi Tumbuhan Karamunting .................................... 7
2.1.5 Kandungan dan Manfaat Tumbuhan Karamunting ............. 8
2.1.6 Senyawa yang Terisolasi dari Tumbuhan Karamunting ...... 9
2.2 Ekstraksi ........................................................................................ 10
2.2.1 Metode Ekstraksi............................................................... 10
2.3 Bakteri ........................................................................................... 13
2.3.1 Bakteri Staphylococcus aureus ............................................ 13
2.3.2 Patogenitas ........................................................................... 15
2.3.3 Media Pertumbuhan Bakteri ................................................ 16
2.3.3.1 Macam-macam Media ............................................. 16
2.4 Antibiotik ...................................................................................... 20
2.5 Tetrasiklin ..................................................................................... 21
2.5.1 Stuktur Umum Tetrasiklin ................................................ 21
2.5.2 Mekanisme Kerja Tetrasiklin ............................................ 21
BAB III METODE PENELITIAN
3.1 Jenis Penelitian ............................................................................... 22
3.2 Tempat dan Waktu Penelitian ........................................................ 22
vi
3.2.1 Tempat Penelitian.................................................................. 22
3.2.2 Waktu Penelitian ................................................................... 22
3.3 Objek Penelitian ............................................................................. 22
3.4 Alat dan Bahan ............................................................................... 22
3.4.1. Alat ..................................................................................... 22
3.4.2. Bahan.................................................................................. 23
3.5 ProsedurKerja ................................................................................ 23
3.5.1 Penyiapan Bahan ............................................................... 23
3.5.2 Pembuatan Infusa Daun Karamunting Induk .................... 23
3.5.3 Prosedur dan Pembuatan Media Manitol Salt Agar (MSA) 25
3.5.4 Prosedur dan Pembuatan Media Nutrient Agar (NA) ....... 25
3.5.5 Prosedur dan Pembuatan Media Hilton Agar (MHA)....... 25
3.5.6 Prosedur dan Pembuatan Larutan NaCl 0,9% ................... 27
3.5.7 Pembuatan Suspensi Standar Mc. Farland ........................ 27
3.5.8 Pembiakan Bakteri ............................................................ 27
3.5.9 Pembuatan Inokulum Bakteri ............................................ 28
3.5.10 Prosedur Pengujian Efek Antibakteri ................................ 29
BAB IV METODE PENELITIAN
4.1 Hasil Penelitian .............................................................................. 30
4.2 Hasil Pengujian Infusa Daun Karamunting.................................... 30
4.3 Pembahasan .................................................................................... 32
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan .................................................................................... 33
5.2 Saran ............................................................................................... 33
DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................... 34
vii
DAFTAR GAMBAR
Nomor Judul Halaman
Gambar 2.1 Tumbuhan Karamunting ........................................................... 7
Gambar 2.2 Bakteri Staphylococcus aureus ................................................. 14
Gambar 2.3 Rumus Struktur Tetrasiklin ........................................................ 21
viii
DAFTAR TABEL
Nomor Judul Halaman
Tabel 4.1 Hasil Pengamatan ......................................................................... 32
Tabel 4.2 Daya Hambat Pertumbuhan Bakteri ............................................. 33
ix
DAFTAR LAMPIRAN
Nomor Judul Halaman
Lampiran 1 Tumbuhan Karamunting ............................................................. 37
Lampiran 2 Alat dan Bahan ........................................................................... 39
Lampiran 3 Pengembangbiakan dan Pewarnaan Bakteri ............................... 41
Lampiran 4 Uji Daya Hambat Infusa Karamunting ....................................... 42
Lampiran 5 Uji Daya Hambat Infusa Karamunting Dengan Penguapan ....... 43
Lampiran 6 Lembar Pengajuan Judul Tugas Akhir ....................................... 44
Lampiran 7 Lembar Bimbingan Tugas Akhir ................................................ 45
Lampiran 8 Lembar Permohonan Izin Penelitian .......................................... 46
Lampiran 9 Surat Balasan Izin Penelitian ...................................................... 47
Lampiran 10 Berita Acara Perbaikan Seminar Hasil KTI ............................... 48
1
BAB I
PENDAHULUAN
1.1. Latar Belakang
Kesehatan merupakan satu hal yang sangat penting dalam kehidupan
manusia, namun untuk menjaganya perlu dilakukan tindakan pencegahan
(preventif) dan pengobatan (kuratif).Tindakan pencegahan dan pengobatan ini
dilakukan untuk menghindari resiko terjadinya infeksi.Penyakit infeksi
disebabkan oleh bakteri seperti bakteriStaphylococcus aureus danEscherichia coli
(1).
Banyak sekali tanaman yang dapat dimanfaatkan sebagai obat tradisional,
diantaranya daun karamunting (Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk). Salah
satu tumbuhan obat yang memiliki potensi efek antibakteri adalah daun
karamunting (Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk).Tumbuhan ini tersebar di
Asia Selatan hingga Tenggara.
Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk. termasuk ke dalam famili
Myrtaceae. Secara tradisional daun tumbuhan ini digunakan sebagai obat cacing
pada manusia, mengobati luka, kudis, mengurangi sakit kepala, mengobati sakit
perut dan diare, menahan pendarahan dan juga digunakan untuk mencegah infeksi
setelah melahirkan. Buahnya digunakan sebagai antibisa dan diare, serta dibuat
selai yang di India disebut dengan thaonti. Kayunya mengandung zat warna
digunakan untuk menghitamkan gigi. Sedangkan sari akar karamunting digunakan
untuk mengobati sakit jantung, mengurangi rasa sakit setelah melahirkan, obat
diare dan untuk perawatan bekas luka pada kornea mata. Berdasarkan penggunaan
2
tradisional sebagai pencegah infeksi bekas luka pada kornea mata dan obat diare
maka diduga tumbuhan ini aktif terhadap mikroba (2).
Di Sumatera Barat tumbuhan ini secara tradisional telah digunakan
sebagai obat cacing pada manusia, obat luka, kudis, sakit kepala, sakit perut dan
diare, menahan pendarahan dan mencegah infeksi setelah melahirkan (3). Hasil
penelitian menunjukkan daun karamunting mengandung senyawa golongan
alkaloid, flavonoid, fenol, tannin, saponin, dan triterpenoid (4). Flavonoid
terutama berupa senyawa yang larut dalam air mempunyai aktivitas antara lain
sebagai antioksidan, antimikroba, antibakteri, antijamur, antivirus, hepatrotektif,
antiinflamasi, dan antidiabetes (5).
Bakteri merupakan mikroorganisme bersel tunggal yang mempunyai
bentuk dan susunan sel sederhana, umumnya bersifat pathogen yaitu dapat
menghasilkan toksin berupa enterotoksin yang dapat mencemari makanan dan
apabila dikonsumsi manusia akan menimbulkan penyakit. Salah satu bakteri
tersebut adalah Staphylococcus aureus.Bakteri Staphylococcus aureus merupakan
bakteri gram positif, bersifat hidup secara aerob fakultatif, tidak mempunyai flagel
dan spora (6).
Penelitian sebelumnya (Saising, J., and all; Limsuwan, S., and all; 2011)
menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun karamunting (Rhodomyrtus tomentosa
(Aiton) Hassk) dapat mengurangi jumlah Staphylococcus dan memiliki aktivitas
yang kuat melawan bakteri Streptococcus pyogenes (7,8). Penelitian selanjutnya
(F.Y.Yun., S.L, dkk; 2013) diperoleh informasi bahwa ekstrak etil asetat daun
3
karamunting ini mengandung senyawa golongan flavonoid, yaitu combretol yang
diketahui berfungsi sebagai antibakteri (9).
Penelitian sebelumnya (Fahmi, R., dkk; 2012) juga telah berhasil diisolasi
suatu derivat asil floroglusinol, rhodomyrtone dari fraksi aktif mempunyai
aktivitas antibakteri.Senyawa ini memperlihatkan aktivitas nyata terhadap
Staphylococcus aureusdan Staphylococcus epidermis, yang mendukung
penggunaan daun tumbuhan ini secara tradisional untuk mencegah infeksi (3).
Berdasarkan latar belakang diatas, penulis tertarik ingin melakukan
penelitian uji efek antibakteri infusa daun karamunting (Rhodomyrtus tomentosa
(Aiton) Hassk) terhadap bakteri Staphylococus aureus.
1.2.Perumusan Masalah
1. Apakah infusa daun karamunting (Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk)
dapat menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus ?
2. Apakah semakin tinggi konsentrasi semakin mempunyai daya hambat
yang besar terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus ?
1.3. Tujuan Penelitian
1. Untuk mengetahui kemampuan infusa daun karamunting (Rhodomyrtus
tomentosa (Aiton) Hassk) menghambat pertumbuhan bakteri
Staphylococcus aureus.
2. Untuk mengetahui pada konsentrasi berapa infusa daun karamunting
(Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk) dapat menghambat pertumbuhan
bakteri Staphylococcus aureus.
4
1.4 Manfaat Penelitian
1. Untuk memberi informasi kepada masyarakat tentang khasiat infusa daun
karamunting (Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk).
2. Dapat dijadikan rujukan referensi bagi peneliti selanjutnya dalam
melakukan penelitian tentang penggunaan daun karamunting
(Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk) sebagai obat tradisional.
1.5. Hipotesis
1. Infusa daun karamunting (Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk) dapat
menghambat bakteri Staphylococcus aureus.
2. Semakin tinggi konsentrasi semakin mempunyai daya hambat yang besar
terhadap Staphylococcus aureus.
5
1.6. Kerangka Konsep
Berdasarkan hal-hal yang dipaparkan diatas, maka kerangka konsep
penelitian yang dilakukan sebagai berikut :
Variabel Bebas Variabel Terikat Parameter
Daya Hambat infusa
daun karamunting
(Rhodomyrtus tomentosa
(Aiton) Hassk) terhadap
pertumbuhan
Staphylococcus aureus
Diameter zona
hambat
pertumbuhan
Staphylococcus
aureus
Konsentrasi
0%
Konsentrasi
20%
Konsentrasi
10%
Konsentrasi
30%
Konsentrasi
50%
Konsentrasi
40%
6
6
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1. Uraian Tumbuhan
Uraian tumbuhan meliputi habitat tumbuhan, sistematika tumbuhan,
morfologi tumbuhan, nama daerah, kandungan dan manfaat tumbuhan .
2.1.1. Habitat Tumbuhan Karamunting
Karamunting berasal dari India, Cina bagian timur sampai selatan,
Hongkong, Taiwan, Filipina, Malasya bagian selatan dan Sulawesi
(10).Tumbuhan karamunting (Rhodomyrtus tomentosa (Aiton ) Hassk) adalah
tumbuhan liar pada tempat yang mendapat sinar matahari yang cukup, seperti di
lereng gunung, lapangan yang tidak terlalu gersang (11).
2.1.2. Sistematika Tumbuhan Karamunting
Sistematika tumbuhan karamunting sebagai berikut :
Nama daerah : Karamunting
Kingdom : Plantae
Division :Magnolophyta
Kelas : Magnoliopsida
Ordo : Myrtales
Genus : Rhodomyrtus
Famili : Myrtacea
Spesies : Rhodomyrtus tomentosa( Aiton) Hassk (11).
7
2.1.3. Nama Daerah
Nama-nama daerah Indonesia untuk tumbuhan ini antara lain :
Karamunting (Bahasa Banjar dan bahasa-bahasa di Kalimantan secara umumnya,
termasuk Sabah dan Sarawak), Karamunting (Bahasa Minangkabau), Harimonting
(Bahasa Batak), Harendong Sabrang (Bahasa Sunda) (11).
2.1.4. Morfologi Tumbuhan Karamunting
Karamunting adalah termasuk famili Myrtacea (suku jambu-jambuan).
Karamunting merupakan tumbuhan berkayu dengan tinggi mencapai 4 m. Letak
daun bersilang berhadapan daun tulang, daun berjumlah tiga dari pangkal
meruncing, tepi rata, permukaan bagian atas mengkilap, sedangkan permukaan
bagian bawah kasar karena memiliki rambut-rambut halus, panjang 5-7 cm dan
lebar 2-3 cm. Bunga berwarna merah muda keunguan, bertipe majemuk. Buah
muda berwarna hijau menjelang matang warna yang semula hijau menjadi merah
sampai ungu dengan rasa yang manis (10).
Gambar 2.1. Tumbuhan Karamunting
8
2.1.5. Kandungan dan Manfaat Tumbuhan Karamunting
Karamunting mempunyai potensi sebagai tumbuhan obat dengan
kandungan senyawa flavonoida, saponin, tanin, steroid/triterpenoid yang terdapat
dibagian akar, batang, daun, bunga, dan buah yang berfungsi untuk mencegah dan
menyembuhkan berbagai macam penyakit. Zat aktif yang dikandung dari
tumbuhan karamunting berperan sebagai penyembuh luka yaitu: Flavonoid
berfungsi sebagai antibakteri dan antioksidan jika diberikan pada kulit dapat
menghambat pendarahan. Steroid berfungsi sebagai antiinflamasi.Saponin
memiliki kemampuan sebagai pembersih dan antiseptik yang membunuh atau
mencegah pertumbuhan mikroorganisme.Tanin berfungsi sebagai astrigen yang
dapat menyebabkan penutupan pori-pori kulit, memperkeras kulit, menghentikan
eksudat dan pendarahan yang ringan.Karamunting ini juga berfungsi sebagai
pereda demam (antiperetik), penghilang nyeri (analgesik), peluru kencing
(diuretik), menghilangkan pembengkakan, melancarkan aliran darah dan
penghenti pendarahan (hemostatis) (12).
2.1.6. Senyawa yang Terisolasi dari Tumbuhan Karamunting
Struktur umum flavonoid
Senyawa yang sudah terisolasi dari tumbuhan karamunting antara lain adalah
phlorogusinol, flavonoid, terpenoid, glikosida, dan tannin (13).
9
Beberapa struktur kimia dari senyawa flavonoid yang terisolasi (13).
1) Combretol 2) Cyanidin-3-Galaktoside
3) delphinidin-3-Galaktoside 4) pelargonidin-3,5-bigglucoside
5) cyanidin-3-0-glucoside 6) peonidin-3-0-glicoside
7) malvidin-3-0-glicoside 8) petonidin-3-0-glicoside
10
9) delphinidin-3-0-glicoside 10) pelargonidin-3-glicoside
11) quersetin
2.2. Ekstraksi
Ekstrak adalah sediaan kering, kental atau cair dibuat dengan menyari
simplisia nabati atau hewani menurut cara yang cocok, diluar pengarung cahaya
matahari langsung.ekstrak kering harus mudah digerus menjadi serbuk. Sebagai
cairan penyari digunakan air, eter atau campuran etanol dan air (14).
Ekstraksi adalah suatu proses penyarian zat aktif dari bagian tanaman obat
yang bertujuan untuk menarik komponen kimia yang terdapat dalam bagian
tanaman obat tersebut (15).
2.2.1. Metode Ekstraksi
1. Cara dingin
a. Maserasi
Maserasi merupakan penyarian secara sederhana karena dilakukan
dengan cara merendam serbuk simplisia dalam cairan penyari. Cairan
11
penyari akan menembus dinding sel dan masuk kedalam rongga sel yang
mengandung zat aktif. Zat aktif akan larut dan karena adanya perbedaan
konsentrasi antara larutan dan zat aktif didalam sel dan diluar sel maka
larutan yang terpekat didesak keluar. Peristiwa ini berulang-ulang kali
terjadi keseimbangan konsentrasi antara larutan diluar sel dan didalam sel.
Maserasi merupakan proses perendaman sampel dengan pelarut
organik yang digunakan pada temperatur ruangan. Proses ini sangat
menguntungkan dalam isolasi bahan alam karena dengan perendaman
sampel tumbuhan akan terjadi pemecahan dinding dan membran sel akibat
perbedaan tekanan antara didalam dan diluar sel sehingga metabolit
sekunder yang ada dalam sitoplasma akan terlarut dalam pelarut organik
dan ekstraksi senyawa akan sempurna karena dapat diatur lama
perendaman yang dilakukan. Pemilihan pelarut untuk proses maserasi
akan memberikan efektifitas yang tinggi dengan memperhatikan kelarutan
senyawa bahan alam pelarut tersebut. Secara umum pelarut methanol
merupakan pelarut yang paling banyak digunakan dalam proses maserasi.
b. Perkolasi
Perkolasi adalah ekstrak dengan pelarut yang selalu baru sampai
sempurna (exhaustive extraction) yang umumnya dilakukan pada
temperatur ruangan. Proses terdiri dari tahapan pengembangan bahan,
tahap maserasi antara, tahap perkolasi sebenarnya
(penetapan/penampungan ekstrak) yang jumlahnya 1-5 bahan.
12
Perkolasi merupakan proses melewatkan pelarut organik pada sampel
sehingga pelarut akan membawa senyawa organik bersama-sama pelarut.
Tetapi efektifitas dari proses ini akan lebih besar untuk senyawa organik
yang sangat mudah larut dalam pelarut yang digunakan.
2. Cara panas
a. Refluks
Refluks adalah ekstraksi dengan pelarut pada temperatur titik
didihnya, selama waktu tetentu dan jumlah pelarut terbatas yang relatif
konstan dengan adanya pendingin balik. Umunya dilakukan pengulangan
proses pada residu pertama sampai 3-5 kali sehingga dapat termasuk
proses ekstraksi sempurna.
b. Soxhlet
Soxhlet adalah ekstraksi menggunakan pelarut yang selalu baru yang
umunya dilakukan dengan alat khusus sehinnga terjadi ekstraksi kontinyu
dengan pelarut relatif konstan dengan adanya pendingin balik
c. Digesti
Digesti adalah maserasi kinetik (dengan pengadukan kontinu) pada
yang lebih tinggi dari temperatur ruangan (kamar), yaitu secara umum
dilakukan pada temperatur 40-500C.
d. Infusa
Infusa adalah ekstraksi dengan pelarut air pada temperatur penangas
air (bejana) infusa tercelup dalam penangas air mendidih, temperatur
terukur 96-980C selama waktu tertentu 15-20 menit.
13
e. Dekok
Dekok adalah infusa pada waktu yang lebih lama ≥ 300C dan
temperatur sampai titik didih air (16).
2.3. Bakteri
Bakteri adalah kelompok organisme yang tidak memiliki membran inti sel.
Organisme ini termasuk kedalam domain prokariota dan berukuran sangat kecil
(mikroskopik), serta memiliki peran besar dalam kehidupan di bumi. Beberapa
kelompok bakteri dikenal sebagai gen penyebab infeksi dan penyakit, sedangkan
kelompok lainnya dapat memberikan manfaat di bidang pangan, pengobatan, dan
industri. Struktur sel bakteri relatif sederhana tanpa nucleus, kerangka sel, dan
organel-organel lain seperti mitokondria dan kloroplas.Hal inilah yang menjadi
dasar perbedaan antara sel prokariot dan sel eukariot yang lebih kompleks. Bakteri
dapat ditemukan di hampir semua tanah, air, udara, dalam simbiosis dengan
organisme lain maupun sebagai agen parasit (pathogen), bahkan dalam tubuh
manusia (17).
2.3.1. Bakteri Staphylococcus aureus
Staphylococcus aureus merupakan bakteri gram positif berbentuk bulat
berdiameter 0,7-1,2 um, tersusun dalam kelompok-kelompok yang tidak teratur
seperti buah anggur, fakultatif anaerob, tidak membentuk spora, dan tidak
bergerak. Bakteri ini tumbuh pada suhu optimum 370C, tetapi membentuk pigmen
paling baik pada suhu kamar (20-250C).Koloni perbenihan padat berwarna abu-
abu sampai kuning keemasan, berbentuk bundar, halus, menonjol, dan berkilau
(18).
14
Staphylococcus aureus menimbulkan infeksi bernanah dan abses.
Infeksinya akan lebih berat bila menyerang anak-anak, usia lanjut dan orang yang
daya tahan tubuhnya menurun, seperti penderita diabetes mellitus, luka bakar dan
AIDS. Staphylococcus aureus dapat menyebabkan penyakit seperti infeksi pada
folikel rambut dan kelenjar keringat, bisul, infeksi luka, meningitis.Sedangkan di
Rumah Sakit sering menimbulkan infeksi nasokomial infeksi pada bayi, pasien
luka bakar, pasien bedah atau sebagian besar disebabkan kontaminasi oleh
personil Rumah Sakit (medis dan paramedis) (19).
Gambar 2.2 Bakteri Staphylococcus aureus
Klasifikasi Staphylococcus aureus adalah sebagai berikut :
Domain : Bacteria
Kerajaan : Eubacteria
Filum : Firmicutes
Kelas : Bacilli
Ordo : Bacillales
15
Famili : Staphylococcaceae
Genus : Staphylococcus
Spesies : S. aureus
Nama binomial :Staphylococcus aureus (20).
2.3.2. Patogenisitas
Staphylococcus aureus adalah patogen utama pada manusia.Hampir semua
orang pernah mengalami infeksi S. aureus selama hidupnya, dengan derajat
keparahan yang beragam, dari keracunan makanan atau infeksi kulit ringan hingga
infeksi berat yang mengancam jiwa.Sebagian bakteri Staphylococcus merupakan
flora normal pada kulit, saluran pernafasan, dan saluran pencernaan makanan pada
manusia.Bakteri ini juga ditemukan di udara dan lingkungan sekitar.S. aureus
yang patogen bersifat invasif, menyebabkan hemolisis, membentuk koagulase,
dan mampu meragikan manitol (20).
Infeksi oleh S. aureus ditandai dengan kerusakan jaringan yang disertai
abses.Beberapa penyakit infeksi yang disebabkan oleh S. aureus adalah bisul,
jerawat, impetigo, dan infeksi luka.Infeksi yang lebih berat diantaranya
pneumonia, mastitis, plebitis, meningitis, infeksi saluran kemih, osteomielitis, dan
endokarditis.S. aureus juga merupakan penyebab utama infeksi nosokomial,
keracunan makanan, dan sindroma syok toksik .
Sindroma syok toksik (SST) pada infeksi S. aureus timbul secara tiba-tiba
dengan gejala demam tinggi, muntah, diare, mialgia, ruam, dan hipotensi, dengan
gagal jantung dan ginjal pada kasus yang berat. SST sering terjadi dalam lima hari
permulaan haid pada wanita muda yang menggunakan tampon, atau pada anak-
16
anak dan pria dengan luka yang terinfeksi stafilokokus. S. aureus dapat diisolasi
dari vagina, tampon, luka atau infeksi lokal lainnya, tetapi praktis tidak ditemukan
dalam aliran darah (20).
2.3.3. Media Pertumbuhan Bakteri
Media pertumbuhan mikroorganisme adalah suatu bahan yang terdiri atas
campuran nutrisi (nutrient) yang digunakan oleh suatu mikroorganisme untuk
tumbuh dan berkembangbiak pada media tersebut.Mikroorganisme memanfaatkan
nutrisi pada media berupa molekul-molekul kecil yang dirakit untuk menyusun
komponen selnya.Media adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran zat-zat
hara (nutrient) yang berguna untuk membiakkan mikroba.Dengan
mempergunakan bermacam-macam media dapat dilakukan isolasi, perbanyakan,
pengujian sifat-sifat fisiologis dan perhitungan jumlah mikroba (21).
2.3.3.1. Macam-macam media
Media untuk kultur bakteri dalam mikrobiologi ada banyak jenisnya dan
dapat menjadi tiga kelompok besar berdasarkan bentuk, komposisi/susunannya
(21).
a. Berdasarkan Bentuknya
Bentuk media ada tiga macam yang dapat dibedakan dari ada atau
tidaknya bahan tambahan berupa bahan pemadat seperti agar-agar atau
gelatin. Bentuk media tersebut yaitu:
1) Media Padat
Media padat merupakan media yang mengandung banyak agar atau zat
pemadat kurang lebih 15% agar sehingga media menjadi padat.
17
2) Media semi padat
Media semi padat atau semi cair merupakan media yang mengandung agar
kurang dari yang seharusnya kurang lebih 0,3%- 0,4% sehingga media
menjadi kenyal, tidak padat dan tidak begitu cair.
3) Media cair
Media cair merupakan media yang tidak ditambahi bahan pemadat,
umumnya digunakan untuk pertumbuhan mikroalga.
b. Berdasarkan komposisi/susunannya
Berdasarkan komposisinya media dibagi atas :
1. Media alami/non sintesis merupakan media yang disusun dari bahan-
bahan alami dimana komposisinya tidak dapat diketahui secara pasti
dan biasanya langsung diekstrak dari bahan dasarnya seperti: kentang,
tepung, daging, telur, dan ikan sayur. Contohnya: Tomato juice agar.
2. Media semi sintesis merupakan media yang disusun dari bahan-bahan
alami dan bahan-bahan sistesis. Contohnya kaldu nutrisi disusun dari:
Pepton 10,0 g, ekstrak daging 10,0 g, NaCl 5,0 g, dan aquadest 1000
ml.
3. Media sintesis, yaitu media yang disusun dari senyawa kimia yang
jenis dan takarannya diketahui secara pasti. Contohnya : Mac Conkey
Agar.
c. Berdasarkan bentuk
Berdasarkan bentuk, media perbenihan dapat dikelompokkan menjadi :
18
1) Media alami, yaitu media yang disusun oleh bahan-bahan alami
seperti kentang, tepung, daging, telur, ikan, umbi-umbian lainnya dan
sebagainya.
2) Media sintetik yaitu media yang disusun oleh senyawa kimia.
3) Media semi sintetik yaitu media yang tersusun oleh campuran bahan-
bahan alam dan bahan-bahan sitesis.
d. Jenis-jenis media berdasarkan fungsinya
1. Media basal (media dasar) adalah media yang digunakan sebagai
bahan dasar untuk membuat media lain yang lebih kompleks. Media
ini dapat mendukung pertumbuhan hampir semua jenis mikrobia,
contohnya adalah nutrient broth, dan kaldu pepton.
2. Media diferensial adalah media yang bila ditumbuhi oleh mikroba
yang berbeda, mikroba tersebut akan tumbuh dengan ciri khusus
sehingga dapat dibedakan. Contohnya: Media Triple Sugar Iron Agar
(TSIA), Media Sulfit Indol Motility (SIM), dan sebagainya.
3. Media selektif adalah media yang memungkinkan suatu jenis mikroba
tumbuh dengan pesat. Contohnya Media Salmonella Shigella Agar
(SSA), Thiosulphate Citrate Bile Salt (TCBS), dan sebagainya.
4. Media diperkaya (enrichment) adalah media yang dirancang untuk
mendukung pertumbuhan mikroorganisme. Media tersebut memiliki
konstituen nutrisi yang mendorong pertumbuhan mikroba tersebut.
5. Media pengkayaan adalah media yang mengandung bahan-bahan
tertentu yang di satu pihak dapat menghambat pertumbuhan bakteri
19
tertentu, tetapi dilain pihak sebaliknya dapat menunjang pertumbuhan
bakteri tertentu. Misalnya media Muller-Kauffman mengandung
natrium tetrationat yang menunjang pertumbuhan salmonella tetapi
menghambat pertumbuhan Escherichia.
6. Media uji (identifikasi) adalah media yang digunakan untuk
identifikasi mikroba, misalnya medium litmus milk umumnya
ditambah dengan substansi tertentu yang bisa menjadi indicator.
7. Media umum, media yang ditambahkan bahan-bahan yang bertujuan
menstimulasi pertumbuhan mikroba secara umum. Contoh Nutrien
Agar (NA) untuk menstimulasi pertumbuhan bakteri, Potato Dextose
Agar (PDA) untuk menstimulir pertumbuhan fungi.
8. Media khusus (spesifik), merupakan medium untuk menentukan tipe
pertumbuhan mikroba dan kemampuannya untuk mengadakan
perubahan-perubahan kimia tertentu misalnya, medium tetes tebu
untuk Saccharomyces cerevisiae dan media manitol salt agar (MSA)
untuk Staphylococcus aureus warna berubah dari merah menjadi
kuning.
9. Medium penguji (Assay medium), yaitu medium dengan susunan
tertentu yang digunakan untuk pengujian senyawa-senyawa tertentu
dengan bantuan bakteri misalnya medium untuk menguji vitamin-
vitamin, antibiotika dan lain-lain.
10. Medium perhitungan jumlah mikroba yaitu medium spesifik
digunakan untuk menghitung jumlah mikroba dalam suatu bahan,
20
misalnya medium untuk menghitung jumlah bakteri Escherichia coli
air sumur (21).
11. Medium uji kepekaan dan sensibilitas antibakteri yaitu media muller
Hilton agar (MHA) (22).
2.4. Antibiotik
Antibiotik dapat diklasifikasikan berdasarkan spektrum atau kisaran kerja,
mekanisme aksi, stain penghasil, cara biosintesis maupun berdasarkan struktur
biokimianya. Berdasarkan spektrum atau kisaran kerjanya antibiotik dapat
dibedakan menjadi antibiotik berspektrum sempit (narrow spectrum) dan
antibiotik berspektrum luas (broad spectrum) (17).
Antibiotik spektrum sempit, agen-agen kemoterapeutik yang hanya bekerja
dalam satu grup mikroorganisme yang terbatas disebut memiliki spektrum
sempit.Misalnya : isoniazid hanya aktif melawan mikrobakteria. Antibiotik
spektrum luas, obat-obat seperti tetracycline dan chloramphenicole,
mempengaruhi beragam jenis spesies mikroba dan disebut sebagai antibiotika
spektrum luas dapat mengubah sifat flora bakteri normal secara drastis dan
mencetuskan super infeksi organisme, seperti Candida albicans, pertumbuhannya
secara normal diperiksa dengan keberadaan mikroorganisme lain (18).
2.5. Tetrasiklin
Tetrasiklin, klortetrasiklin dan oksitetrasiklin merupakan nama-nama
umum untuk tiga antibiotik yang memiliki sifat biologis dan kimiawi yang
serupa.Sebagai kelompok, ketiganya biasanya dinamakan tetrasiklin.Antibiotik ini
21
dihasilkan oleh bakteri dari genus Streptomyces.Salah satu antibiotik berspektrum
luas, dan spektrum antimikrobialnya serupa.Antibiotik ini digunakan untuk
mengobati infeksi yang disebabkan oleh banyak bakteri gram negatif dan
beberapa gram positif (19).
2.5.1. Struktur Umum Tetrasiklin
Tetrasiklin merupakan antibiotik yang bersifat bakteriostatik dan bekerja
dengan jalan menghambat sintesis protein kuman.
Rumus Molekul : C22H24N2O8
BM : 444,435
Gambar 2.3 Rumus Struktur Tetrasiklin
2.5.2. Mekanisme Kerja Tetrasiklin
Tetrasiklin bekerja dengan cara menghalangi terikatnya RNA (RNA
transfer aminoasil) pada situs spesifik di ribosom, selama pemanjangan rantai
peptida. Akibatnya sistesis protein mengalami penghambatan (19).
22
BAB III
METODE PENELITIAN
3.1. Jenis Penelitian
Jenis penelitian yang dilakukan merupakan penelitian
eksperimental.Penelitian pada dasarnya, suatu usaha penyelidikan yang hati-hati
dan secara teratur terhadap suatu objek tertentu untuk memperoleh suatu
kebenaran.
3.2. Tempat dan Waktu Penelitian
3.2.1. Tempat Penelitian
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi Fakultas
Kedokteran Universitas Sumatera Utara.
3.2.2. Waktu Penelitian
Penelitian ini dilakukan mulai Juni 2018- Agustus 2018
3.3. Objek Penelitian
Objek penelitian ini adalah daun karamunting (Rhodomyrtus tomentosa
(Aiton) Hassk) yang masih segar yang diambil langsung dari pohonnya di Balige
Kabupaten Toba Samosir.
3.4. Alat dan Bahan
3.4.1. Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah beaker glass, kawat ose,
erlenmeyer, autoklaf, batang pengaduk, cawan petri, inkubator, kain flannel,
23
kapas, kertas perkamen, labu tentukur, lampu spiritus, mikroskop, oven, penangas
air, rak tabung reaksi, tabung reaksi, kertas label, tisu, asbes, kertas cakram dan
timbangan.
3.4.2. Bahan
Bahan yang digunakan adalah daun karamunting (Rhodomyrtus tomentosa
(Aiton) Hassk), aquadest, Manitol Salt Agar (MSA), Media Muller Hinton Agar
(MHA), Nutrient Agar (NA), larutan NaCl 0,9%; larutan Lugol; larutan Kristal
Violet; alkohol 95%; larutan Fuschin; Suspensi Mc. Farland dan bakteri
Staphylococcus aureus.
3.5. Prosedur Kerja
3.5.1. Penyiapan Bahan
Bahan berupa daun karamunting (Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk)
dalam keadaan segar dikumpulkan, dan dibersihkan dengan air mengalir. Daun
yang bagus diseleksi lalu dikeringkan dengan diangin-anginkan pada suhu
ruangan dan terhindar dari sinar matahari langsung kemudian daun yang sudah
kering disimpan dalam wadah plastik.
3.5.2. Pembuatan Infusa Daun Karamunting (Rhodomyrtus tomentosa
(Aiton) Hassk)Induk
Untuk pembuatan rebusan daun karamunting (Rhodomyrtus tomentosa
(Aiton) Hassk) dipakai konsentrasi 50% adalah 50 gram daun karamunting yang
kering, kemudian dimasukkan kedalam panci dan diberi aquadest sebanyak 100
ml, dipanaskan diatas penangas air sampai suhu 90˚C selama 15 menit sambil
sesekali diaduk, kemudian diserkai dengan menggunakan kain flannel,
24
ditambahkan air panas secukupnya melalui ampas hingga diperoleh volume
rebusan 100 ml (M5).
Setelah dilakukan pembuatan infusa daun karamunting induk (M5) maka
dibuat pengenceran daun karamunting (Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk)
dengan konsentrasi 0%, 10%(M1), 20%(M2), 30%(M3), dan 40%(M4) dan
diuapkan sampai 30ml (M6) dan 15 ml (M7).
a) Konsentrasi 40%
Untuk membuat 5 ml infusa daun karamunting 40% dibuat dengan cara
pengenceran dari infusa daun karamunting induk 50% yaitu :
V1 .C1 = V2 .C2
V1 .50% = 5 . 40%
V1 = 4 ml
Maka dipipet 4 ml infusa daun karamunting 50%, ditambahkan aquadest
sampai 5ml.
b) Konsentrasi 30%
Untuk membuat 5 ml infusa daun karamunting 30%, diambil sebanyak 3
ml.
Maka dipipet 3 ml infusa daun karamunting 50%, ditambahkan aquadest
sampai 5 ml.
c) Konsentrasi 20%
Untuk membuat 5 ml infusa daun karamunting 20%, diambil 2 ml.
Maka dipipet 2 ml infusa daun karamunting 50%, ditambahkan aquadest
sampai 5 ml.
25
d) Konsentrasi 10%
Untuk membuat 5 ml infusa daun karamunting 10%, diambil 1 ml.
Maka dipipet 1 ml infusa daun karamunting 50%, ditambahkan aquadest
sampai 5 ml.
3.5.3. Prosedur dan Pembuatan Media Manitol Salt Agar (MSA)
Jumlah media Manitol Salt Agar (MSA) yang harus dilarutkan dalam 1
liter aquadest pada etiket adalah 111 g/L. Banyaknya MSA yang diperlukan 50 ml
adalah :
111 g
1000 mlx 50 ml = 5,55 g
Pembuatan :
1. Ditimbang MSA sebanyak 5.55 g
2. Dimasukkan kedalam erlenmeyer, dilarutkan aquadest sebanyak 50 ml
3. Dipanaskan sampai mendidih
4. Diangkat dan ditutup erlenmeyer dengan kapas, dilapisi dengan kertas
perkamen, kemudian diikat dengan benang
5. Disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121˚C selama 15 menit
6. Setelah steril, diangkat dari autoklaf dengan perlahan-lahan dan hati-hati
7. Didinginkan, lalu dibuka kertas perkamen yang diikatkan pada erlenmeyer
kemudian dituang kedalam cawan petri secara aseptis.
3.5.4. Prosedur dan Pembuatan Media Nutrient Agar (NA)
Jumlah media yang harus dilarutkan dalam 1 liter aquadest pada etiket
adalah 20 g/L. Banyaknya Nutrient Agar (NA) yang dibutuhkan untuk 20 ml
adalah :
26
20 g
1000 mlx 20 ml = 0,4 g
Pembuatan :
1. Ditimbang Nutrient Agar sebanyak 0,4 g
2. Dimasukkan kedalam erlenmeyer, dilarutkan dengan aquadest sebanyak 20
ml
3. Dipanaskan sampai mendidih
4. Diangkat, lalu dibagi dalam beberapa tabung (sesuai kebutuhan), ditutup
dengan kapas, dilapisi dengan kertas perkamen kemudian diikat dengan
benang
5. Disterilkan dalam autoklaf pada 121˚C selama 15 menit. Setelah steril,
diangkat dari autoklaf dengan perlahan-lahan dan hati-hati
6. Didinginkan, dibuka kertas perkamen yang diikatkan pada tabung kemudian
dimiringkan tabung yang berisi Nutrien Agar untuk memperoleh agar miring
7. Dibiiarkan sampai membeku, setelah itu lakukan penanaman bakteri dengan
menggoreskan bakteri secara zig-zag pada media.
3.5.5. Prosedur dan Pembuatan Media Hilton Agar (MHA)
Jumlah media yang harus dilarutkan dalam 1 liter aquadest pada etiket
adalah 34 g/L. Banyaknya MHA yang diperlukan untuk 100 ml adalah :
34 g
1000 mlx 100 ml = 3,4 g
Pembuatan :
1. Ditimbang MHA sebanyak 3,4 gram
2. Dimasukkan kedalam erlemeyer, dilarutkan dengan aquadest 100 ml
3. Dipanaskan sampai mendidih
27
4. Diangkat dan ditutup erlenmeyer dengan kapas, dilapisi dengan kertas
perkamen kemudian diikat dengan benang
5. Disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121˚C selama 15 menit.
3.5.6. Prosedur dan Pembuatan Larutan NaCl 0.9%
Pembuatan :
NaCl ditimbang sebanyak 0,9 g lalu dilarutkan dengan aquadest hingga
100 ml dalam labu tentukur, kemudian disterilkan dalam autoklaf pada suhu
121˚C selama 15 menit.
3.5.7. Pembuatan Suspensi Standar Mc. Farland
Pembuatan :
Dicampurkan larutan Asam Sulfat dan larutan Barium Klorida kedalam
tabung reaksi dan dikocok homogen (Standar Mc. Farland). Apabila kekeruhan
suspensi bakteri uji sama dengan kekeruhan suspensi standar Mc. Farland, maka
konsentrasi suspensi bakteri adalah 108 koloni/ml.
3.5.8. Pembiakan Bakteri
Langkah-langkah pembiakan bakteri antara lain :
1. Diambil satu ose dari suspensi bakteri Staphylococcus aureus
2. Kemudian ditanam ke media MSA dengan cara digoreskan
3. Diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37˚C selama 18-24 jam
4. Diamati pertumbuhan koloni pada media
5. Setelah mendapat hasil, dilakukan pengecatan gram dengan cara :
a) Diambil biakan bakteri yang telah berumur 18-24 jam, diletakkan pada
kaca objek yang telah diberikan aquadest terlebih dahulu, lalu difiksasi
28
b) Ditambahkan kristal violet, didiamkan 1-2 menit, kemudian dibilas
dengan aquadest dan ditambahkan larutan lugol, dibiarkan selama 1
menit.
c) Setelah 1 menit lugol dibilas dengan alkohol 95%, didiamkan selama
5-15 detik, dibilas dengan aquadest
d) Ditambahkan larutan Fuchsin didiamkan kira-kira 20 detik, dibilas
dengan aquadest lalu dikeringkan, diamati hasilnya dibawah
mikroskop dengan perbesaran 10 x 40 dan 10 x 100.
3.5.9. Pembuatan Inokulum Bakteri
Pembuatan :
Stok kultur bakteri Staphylococcus aureus yang tumbuh pada Nutrient
Agar diambil dengan jarum ose steril, lalu disuspensikan dalam tabung yang berisi
10 ml larutan NaCl 0,9% sampai didapatkan kekeruhan suspensi bakteri sama
dengan kekeruhan standart Mc. Farland, ini berarti konsentrasi bakteri adalah 108
koloni/ml.
Setelah mendapat hasil dilakukan pengenceran dengan rumus :
V1 . C1 = V2 . C2
0,1 . 108 = 10 . C2
C2 = 106 koloni/ml
Berdasarkan perhitungan diatas dipipet 0,1 ml biakan bakteri (108
koloni/ml), dimasukkan dalam tabung reaksi dan tambahkan NaCl 0,9% sebanyak
10 ml dan dikocok homogen, maka diperoleh suspensi bakteri dengan konsentrasi
106 koloni/ml.
29
3.5.10. Prosedur Pengujian Efek Antibakteri
Langkah-langkah pengujian efek antibakteri antara lain:
1. Disterilkan semua alat dan bahan yang digunakan
2. Dibuat persediaan inokulum
3. Dipipet 0,1 ml suspensi bakteri dengan konsentrasi 106 koloni/ml ke dalam
100 ml media MHA dengan suhu 45˚C-50˚C lalu dikocok hingga homogen,
kemudian dituang segera sebanyak 15 ml kedalam cawan petri steril, lalu
dibiarkan memadat
4. Dibuat 7 kelompok, 5 kelompok untuk infusa daun karamunting, 1
kelompok untuk aquadest sebagai kontrol negatif, dan 1 kelompok untuk
tetrasiklin sebagai kontrol positif
5. Ditetesi kedalam 0,1 ml infusa daun karamunting yang telah dibuat dengan
M1, M2, M3, M4, M5, M6 dan M7
6. Diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37˚C
7. Dibaca hasilnya dengan mengukur zona hambatan berupa daerah yang
tampak jernih yang tidak ditumbuhi oleh bakteri Staphylococcus aureus
8. Diukur dalam satuan mm
Percobaan dilakukan triplo yaitu dilakukan sebanyak 3 kali untuk masing-
masing infusa daun karamunting.
30
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Hasil Penelitian
Telah dilakukan penelitian tentang infusa daun karamunting (Rhodomyrtus
tomentosa (Aiton) Hassk) dengan pengujian efek antibakteri terhadap
pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureusyang menyebabkan bau badan.
Pelarut yang digunakan dalam penelitian ini dalam pembuatan infusa daun
karamunting (Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk) digunakan air. Penelitian
ini dilakukan dengan cara mengumpulkan sampel kemudian dikeringkan untuk
mengurangi kadar air. Setelah itu, simplisia ditimbang sebanyak 50 gram
kemudian diinfusa dengan menggunakan pelarut air sebanyak 100 ml (M5) diatas
penangas air sampai suhu 90˚C selama 15 menit.Hasil yang didapatkan kemudian
dicukupkan hingga diperoleh infusa 100 ml.
4.2 Hasil Pengujian Infusa Daun Karamunting (Rhodomyrtus tomentosa
(Aiton) Hassk)
Infusa daun karamunting (Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk) diujikan
efek antibakteri terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureusdengan
menggunakan metode difusi agar yaitu kertas cakram.
Dari infusa daun karamunting (Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk)
induk yang telah dibuat dengan konsentrasi 50% (M5), maka dibuat pengenceran
hingga diperoleh konsentrasi 40% (M4), 30% (M3), 20% (M2), dan 10% (M1).
Konsentrasi 50% (M5) = 50 gram serbuk simplisia daun karamunting
(Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk) didalam 100 ml air.
31
Dari M5 dipipet 4 ml kemudian ditambahkan air sampai 5 ml (M4).
Dari M5 dipipet 3 ml kemudian ditambahkan air sampai 5 ml (M3).
Dari M5 dipipet 2 ml kemudian ditambahkan air sampai 5 ml (M2).
Dari M5 dipipet 1 ml kemudian ditambahkan air sampai 5 ml (M1) dan dari M5
diuapkan sampai 30 ml (M6) dan sampai 15 ml (M7).
Kemudian dari masing-masing konsentrasi yang diuji didapatkan hasil
yang terlihat pada tabel berikut ini :
Tabel 4.1 Hasil Pengamatan
No Konsentrasi
Infusa Daun
Karamunting
Diameter
Zona Hambat
(mm)
Rata-rata Zona
Hambatan
(mm)
Ulangan I Ulangan II Ulangan III
1 M1 0 0 0 0
2 M2 0 0 0 0
3 M3 0 0 0 0
4 M4 0 0 0 0
5 M5 0 0 0 0
6 M6 5,0 5,5 5,1 5,2
7 M7 6,5 6,0 6,4 6,3
8 M8 29 28 28,5 28,5
9 M9 0 0 0 0
Keterangan :
M1 = Konsentrasi infusa daun karamunting 10%
M2 = Konsentrasi infusa daun karamunting 20%
M3 = Konsentrasi infusa daun karamunting 30%
M4 = Konsentrasi infusa daun karamunting 40%
M5 = Konsentrasi infusa daun karamunting 50%
M6 = Konsentrasi infusa daun karamunting 50% diuapkan hingga 30
ml.
32
M7 = Konsentrasi infusa daun karamunting 50% diuapkan hingga 15
ml.
M8 = Kontrol Positif Tetrasiklin
M9 = Kontrol Negatif aquadest
4.3 Pembahasan
Tabel 4.2 Standar Daya Hambat (Zona Jernih) Pertumbuhan Bakteri (Davis
dan Stout, 1971)
Diameter Zona Jernih Hambatan Pertumbuhan Bakteri
>20 mm Sangat Kuat
10-20 mm Kuat
5-10 mm Sedang
<5 mm Lemah
Konsentrasi infusa daun karamunting (Rhodomyrtus tomentosa (Aiton)
Hassk) dengan penguapan hasil 30 ml dan 15 ml memberikan daya hambat
dengan kategori sedang yaitu 5,2 mm dan 6,3 mm.
33
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian uji efek antibakteri infusa daun karamunting
(Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk) terhadap pertumbuhan bakteri
Staphylococcus aureus yang telah dilakukan dengan konsentrasi tertinggi 50%
(M5) belum dapat memberikan daya hambat sebagai antibakteri tetapi pada M6
dan M7 sudah menunjukkan efek antibakteri dalam kategori sedang.
5.2 Saran
Saran dari penelitian ini agar dilakukan penelitian lebih lanjut dengan
menggunakan metode lain dan pelarut lain dengan membandingkan kedua hasil,
sehingga diperoleh metode yang lebih efektif untuk menghambat pertumbuhan
bakteri Staphylococcus aureus.
34
DAFTAR PUSTAKA
1. Arianti, N.K., Darmayasa I.B.G., Sudiga K.S. Daya Hambat Ekstrak Kulit
Daun Lidah Buaya (Aloe barbadensis Miller) terhadap Pertumbuhan
Bakteri Staphylococcus aureus. ATCC 25923 dan Escherichia coli ATCC
25922. Jurnal Biologi: XVI (1) : 1-4; 2012
2. Dachriyanus, Lucida, H., Fahmi, R. Isolasi Senyawa Antibakteri dan
Rhodomyrtus tomentosa.
http://repo.unand.ac.id/1886/1/Isolasi-Senyawa-Antibakteri-dan-
Rhodomyrtus-Tomentosa-2009-art.doc Diakses tanggal 15 Maret 2018
3. Fahmi, R., Rullah, K., Rahmat, R.D., Lucida, H., Manjang, Y., Lajis, N.H
dan Dachriyanus. Pengembangan Potensi Rhodomyrtone Sebagai Bahan
Aktif Sediaan Topikal. Jurnal Farmasi Indonesia; 6(1): 7-12; 2012
4. Sutomo, Arnida, Rizky, M.I., Triyasmo, L., Nugroho, A., Mintowati, E.,
Salamiah. Skrining Fitokimia dan Uji Kualitatif Antioksidan Tumbuhan
Asal Daerah Rantau Kabupaten Tapin Kalimantan Selatan. Jurnal
Pharmascience; 3(1): 66-74; 2016
5. Tapas, A.R., Sakarkar, D.M., Kakde, R.B. Flavonoids as Nutraceutical
Tropical. Jurnal of Pharmaceutical Research; 7(3): 1089-1099; 2008
6. Rezi, J., Andarwati, R., Fauzi, Z.I. Uji Efek Antibakteri Rebusan Daun
Sirsak (Annona muricata L.) terhadap Pertumbuhan Bakteri
Staphylococcus aureus. Jurnal Ilmiah Pannmed; 8(3) ; 263-264; 2014
7. Saising, J., Ongsakul, M., Voravuthikunchai, S.P., Rhodomyrtus
tomentosa Aiton. Ekstrak and Rhodomyrtone a Potential Strategy For the
Treatment Bioflim-Forming Staphylococci. Jurnal of Medical
Microbiology; 60: 1793-180; 2011
8. Limsuwan, S., Hesseling-Meinders, A., Voravuthikunchai, S.P., Dijl,
J.M.V., Kayser, O. Potential and Anti-infective Effect of Rhodomyrtone
35
From Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk, on Streptococcus Pyogenes
as Revealed by Proteomics Phytomidicine; 18:934-940; 2011
9. F.Y.Yun., S.L. Aisyah .,R.Mulyani: Potensi Metabolit Sekunder Fraksinasi
Ekstrak n-Heksan Daun Karamunting Rhodomyrtus tomentosa (Aiton
Hassk) Asal Belitung Sebagai Antioksidan. Aristotetles; 10(2): 30-40;
2013.
10. Hermanto, C., Indriani, N.L.P., Hadiati, S. Keragaman dan Kekayaan
Buah Tropika Nusantara Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian
Kementerian Pertanian; 2013
11. Nasution, I. Pembuatan Ekstrak Buah Karamunting (Rhodomyrtus
tomentosa (Aiton) Hassk) Dalam Formula Pewarna Rambut (Skripsi)
Medan: Universitas Sumatera Utara; 2014
12. Nafsiah, L., Sudrajat., Sudrastuti. Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk)
terhadap Proses Penyembuhan Luka Pada Kulit Mencit ( Musmusculus L).
Prosiding Seminar Sains dan Teknologi FMIPA Unmul; 1(1): 1-11; 2015
13. Hamid, H.A., Mutazah, S.S.Z.R., Yusoff, M.M Rhodomyrtus tomentosa: A
Phytochemical and Pharmacological Review. Asian Journal Of
Pharmaceutical and Clinical Research; 10(1); 2017
14. Ditjen POM. Farmakope Indonesia Edisi Ketiga. Jakarta: Departemen
Kesehatan RI; 1979
15. Marjoni, R. Dasar-Dasar Fitokima. Jakata: Penerbit Buku Kesehatan; 2016
16. Syaiful, S.D. Formulasi dan Uji Stabilitas Fisik Gel Ekstrak Daun
Kemangi (Ocimum santum L) Sebagai Sediaan Handsanitizer (Skripsi).
Makasar: Universitas Islam Negeri Allaudin; 2016.
17. Pelczar, M.J., dan Chan, E.C.S Dasar- Dasar Mikrobiologi. Jakarta :
Universitas; 2013 Hal 46
18. Cahyono, W. Aktivitas Antibakteri Kombinasi Ekstrak Etanol Daun Sirih
Merah dan Kloramfenikol terhadap Bakteri Salmonella thypi, Shigella
dysenteriae dan Staphylococcus aureus Beserta Bioautografinya. Skripsi.
Fakultas Farmasi Universitas Muhammad Surakarta; 2013
36
19. Entjang, I. Mikrobiologi dan Parasitologi. Bandung. Citra Aditya Bakti;
2003. Hal 118
20. http://digilib.unila.ac.id/9739/11/12.%20Bab%2011.pdf Diakses tanggal 2
April 2018.
21. Putri, M.H., Sukini dan Yodong. Bahan Ajar Keperawatan Gigi
Mikrobiologi. Pusat Pendidikan Sumber Daya Manusia Kesehatan Badan
Pengembangan dan Pemberdayaan Sumber Daya Manusia Kesehatan;
2017. Hal 33-39
22. Suryanto, D., Irmayanti dan Sofyan Lubis. Karakterisasi dan Uji Kepekaan
Antibiotik beberapa Isolat Staphylococcus aureus dari Sumatera Utara;
40(2); 2010
37
Lampiran 1. Tumbuhan Karamunting (Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk)
a) Karamunting (Rhodomyrtus tomentosa (Aiton) Hassk)
b) Daun Segar
38
c) Penimbangan bahan
d) Simplisia Kering
39
Lampiran 2. Alat dan Bahan
a) Autoklaf
b) Inkubator
40
c) Biosafety
d) Infusa konsentrasi 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, Kontrol positif dan control
negatif.
41
Lampiran 3. Pengembangbiakan dan Pewarnaan Bakteri
a) Pewarnaan bakteri terlihat dibawah mikroskop
b) Pengembangbiakan bakteri
42
Lampiran 4. Uji Daya Hambat Infusa Daun Karamunting
a) Pengulangan 1
b) Pengulangan 2
c) Pengulangan 3
43
Lampiran 5. Uji Daya Hambat Infusa Daun Karamunting dengan penguapan
a) Pengulangan 1
b) Pengulangan 2
44
Lampiran 6. Lembar Pengajuan Judul Tugas Akhir
45
Lampiran 7. Lembar Bimbingan Tugas Akhir
46
Lampiran 8. Permohonan Izin Penelitian
47
Lampiran 9. Surat Balasan Izin Penelitian
48
Lampiran 10 Berita Acara Perbaikan Seminar Hasil KTI