uji aktivitas antibakteri kombinasi infusa daun...

UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI KOMBINASI INFUSA DAUN SIRIH

(Piper betle Linn.) DENGAN KLORHEKSIDIN TERHADAP BAKTERI

Porphyromonas gingivalis

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh:

Raden Muhamad Hovi Nurakbar

NIM : 138114129

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2018

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

i

HALAMAN JUDUL




SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh:


NIM : 138114129

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2018


ii

Persetujuan Pembimbing




Skripsi yang diajukan oleh:


NIM : 138114129

telah disetujui oleh:

Pembimbing Utama

Dr. Yustina Sri Hartini, M.Si., Apt. tanggal....................................


iii

Pengesahan Skripsi Berjudul




Oleh :


NIM : 138114129

Dipertahankan di hadapan Panitia Penguji Skripsi

Fakultas Farmasi

Universitas Sanata Dharma

pada tanggal : ...........................

Mengetahui

Fakultas Farmasi

Universitas Sanata Dharma

Dekan

(Dr. Yustina Sri Hartini, M.Si., Apt.)

Panitia Penguji : Tanda Tangan

1. Dr. Yustina Sri Hartini, M.Si., Apt. .......................

2. Dr. Erna Tri Wulandari, M.Si., Apt. .......................

3. Damiana Sapta Candrasari, M.Sc. .......................


iv

HALAMAN PERSEMBAHAN

Saya persembahkan Skripsi ini untuk

Allah SWT sumber segala ilmu awal dari segala penciptaan

Ibu dan Bapak yang selalu menyebut nama saya dalam setiap doanya

Dan

Almamater tercinta, Universitas Sanata Dharma

The desire that guide me in all i do is the

desire to harness the forces of nature to the

service of mankind

~ Nickola Tesla ~


v

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA

Saya menyatakan dengan sesungguhnya bahwa skripsi yang saya tulis ini

tidak memuat karya atau bagian karya orang lain, kecuali yang telah disebutkan

dalam kutipan dan daftar pustaka, sebagaimana layaknya karya ilmiah.

Apabila di kemudian hari ditemukan indikasi plagiarisme dalam naskah

ini, maka saya bersedia menanggung segala sanksi sesuai peraturan perundang-

undangan yang berlaku.

Yogyakarta,

Penulis



vi

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN

PUBLIKASI KARYA ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS

Yang bertandatangan di bawah ini, saya mahasiswa Universitas Sanata Dharma :

Nama : Raden Muhamad Hovi Nurakbar

Nomor Mahasiswa : 138114129

Demi pengembangan ilmu pengetahuan, saya memberikan kepada Perpustakaan

Universitas Sanata Dharma karya ilmiah saya yang berjudul :

“ UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI KOMBINASI INFUSA DAUN SIRIH


Porphyromonas gingivalis ”

Beserta perangkat yang diperlukan (bila ada). Dengan demikian saya memberikan

kepada Perpustakaan Universitas Sanata Dharma hak untuk menyimpan,

mengalihkan dalam bentuk media lain, mengelolanya dalam bentuk pangkalan

data, mendistribusikan secara terbatas, dan mempublikasikannya di internet atau

media lain untuk kepentingan akademis tanpa perlu meminta ijin dari saya

maupun memberikan royalti kepada saya selama tetap mencantumkan nama saya

sebagai penulis.

Demikian pernyataan ini saya buat dengan sebenarnya.

Dibuat di Sleman

Pada tanggal :

Yang menyatakan



vii


viii

PRAKATA

Puji syukur dan terima kasih kepada Allah Tuhan Yang Maha Esa untuk

segala berkat serta rahmat penyertaan sehingga penulis dapat menyelesaikan

Skripsi yang berjudul “UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI KOMBINASI

INFUSA DAUN SIRIH (Piper betle Linn.) DENGAN KLORHEKSIDIN

TERHADAP BAKTERI Porphyromonas gingivalis” sebagai salah satu syarat

untuk mendapatkan gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.) di Fakultas Farmasi

Universitas Sanata Dharma. Penyelesaian skripsi ini tentunya tidak lepas dari

bantuan berbagai pihak, oleh karena itu penulis hendak mengucapkan terima kasih

kepada :

1. Ibu Dr. Yustina Sri Hartini, M.Si., Apt. selaku dosen pembimbing atas

segala arahan, masukan, kesabaran serta dukungan kepada penulis dari

awal hingga proses penyelesaian skripsi ini.

2. Ibu Dr. Erna Tri Wulandari, M.Si., Apt. selaku dosen penguji yang telah

memberikan banyak saran dan arahan kepada penulis dalam proses

penyelesaian skripsi ini.

3. Ibu Damiana Sapta Candrasari, M.Sc. selaku dosen penguji yang telah

memberikan banyak saran dan arahan kepada penulis dalam proses


4. Ibu dan Bapak, Pakde Tono, Om Handi, Bu Vivin, Mbak Efi, Mbak Fetri,

Devi untuk segala dukungan dan doa selama proses penyelesaian skripsi

ini.

5. Teman seperjuangan Casanti Wiji Rahayu untuk segala kerjasama,

bantuan dan dukungan selama proses penyelesaian skripsi ini.

6. Evo, Inyo, Ervin, Theo, Akhiles, Dika, Rahkhel, Lia, Oka, Nisa, Azmi,

Rahma, Fidel dan Chris untuk segala dukungan selama proses


7. Teman-teman FSM C 2013, FKK C 2013 serta seluruh Thirteenity untuk

semua cerita kebersamaan kita selama di Fakultas Farmasi Universitas

Sanata Dharma.


ix

Akhir kata penulis menyadari bahwa skripsi ini masih terdapat kekurangan

dan jauh dari sempurna, oleh karena itu penulis mengharapkan masukkan serta

saran yang membangun dari semua pihak. Semoga skripsi ini memberikan

manfaat bagi pembaca.

Penulis


x

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ........................................................................................ i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING .............................................. ii

HALAMAN PENGESAHAN .......................................................................... iii

HALAMAN PERSEMBAHAN ...................................................................... iv

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA .......................................................... v

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI .......................... vi

PRAKATA ....................................................................................................... viii

DAFTAR ISI .................................................................................................... x

DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... xi

DAFTAR TABEL ............................................................................................ xii

DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................... xiii

ABSTRAK ....................................................................................................... xiv

ABSTRACT ....................................................................................................... xv

PENDAHULUAN ........................................................................................... 1

METODE PENELITIAN ................................................................................. 3

Jenis dan Rancangan Penelitian ................................................................ 3

Alat dan Bahan Penelitian ......................................................................... 3

Determinasi Tanaman ............................................................................... 3

Pembuatan Simplisia ................................................................................. 3

Penetapan Kadar Air ................................................................................. 4

Pembuatan Infusa Daun Sirih ................................................................... 4

Pembuatan Infusa Kombinasi ................................................................... 4

Pengujian Aktivitas Antibakteri ................................................................ 4

Analisis Statistik ....................................................................................... 6

HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................................ 7

KESIMPULAN ................................................................................................ 14

DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................... 15

LAMPIRAN .................................................................................................... 17

BIOGRAFI PENULIS ..................................................................................... 24


xi

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Cara Pengukuran Diameter Zona Hambat ....................................... 6

Gambar 2. Kontrol Media dan Kontrol Pertumbuhan ....................................... 8

Gambar 3. Hasil Pengujian Aktivitas Antibakteri Kombinasi .......................... 9

Gambar 4. Hasil Pengjian Aktivitas Antibakteri Tunggal .............................. 10


xii

DAFTAR TABEL

Tabel I. Hasil Pengukuran Diameter Zona Hambat ............................................. 9


xiii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Sertifikat Hasil Uji Isolasi dan Identifikasi Bakteri .................... 17

Lampiran 2. Surat Keterangan Determinasi Tanaman .................................... 18

Lampiran 3. Hasil Uji Kepekaan Infusa Daun Sirih terhadap P. gingivalis .... 20

Lampiran 4. Hasil Uji Statistik ........................................................................ 21


xiv

ABSTRAK

Kejadian resistensi bakteri Porphyromonas gingivalis yang diakibatkan oleh

penggunaan klorheksidin secara terus menerus mendorong dilakukannya

penemuan antimikroba yang berasal dari tanaman yang memiliki aktivitas

antibakteri seperti daun sirih dan senyawa sintesis gabungan yang dapat

meningkatkan efektifitas terapi ataupun mencegah dan menghambat resistensi.

Penelitian ini bertujuan untuk membandingkan aktivitas antibakteri kombinasi

infusa daun sirih dengan klorheksidin 0,2% dengan infusa tunggal dan

klorheksidin 0,1% tunggal terhadap bakteri Porphyromonas gingivalis. Penelitian

ini menggunakan daun sirih yang diperoleh dari daerah Sleman Yogyakarta, serta

kultur murni bakteri Porphyromonas gingivalis yang didapatkan dari Balai

Laboratorium Kesehatan Yogyakarta. Daun sirih diolah menjadi simplisia untuk

dibuat infusa dengan 2 konsentrasi yaitu 50% dan 100%. Kombinasi infusa daun

sirih dengan klorheksidin 0,2% dibuat dengan rasio 1:1.

Metode yang digunakan dalam uji aktivitas antibakteri ini adalah difusi

sumuran. Aquadest sebagai kontrol negatif, klorheksidin 0,1% sebagai kontrol

positif, dan menggunakan media Nutrien Agar (NA) darah. Sedangkan untuk

konsentrasi bakteri Porphyromonas gingivalis digunakan standar McFarland 0,5.

Hasil dari uji aktivitas terhadap Porphyromonas gingivalis menunjukkan

perbedaan yang bermakna secara statistik (P

xv

ABSTRACT

Resistance cases of Porphyromonas gingivalis caused by continual use of

chlorhexidine has encouraged the discovery of antimicrobial derived from plants

with antibacterial potential such as betel leaf and combination of synthesis

compound that can improve the effectiveness of therapy or prevent and hinder

resistance This is study aimed to compare the antibacterial activity of a

combination of betel leaf infusion with 0.2% chlorhexidine and a single infusion

wtih single 0.1% chlorhexidine againts the bacteria Porphyromonas gingivalis.

This study utilized betel leaf obtained from Sleman district in Yogyakarta, and

pure culture of Porphyromonas gingivalis bacteria from Laboratorium Kesehatan

Yogyakarta. The betel leaf was processed into simplicia to be infused with 2

consentration 50% and 100%. The combination of betel leaf infusion and 0.2%

chlorhexidine was made with a ratio of 1:1.

The method used in this antibacterial activity test is the Well diffusion.

Aquadest as negative control, 0.1% chlorhexidine as a positive control, and using

Nutrient Agar (NA) of blood as the media. As for the concentration of

Porphyromonas gingivalis bacteria used McFarland standard of 0.5.

The result of the testing showed that the activity on Porphyromonas

gingivalis antibacterial activity showed statistically significant (P

1

PENDAHULUAN

Penyakit pada rongga mulut terjadi akibat adanya akumulasi bakteri, termasuk

diantaranya adalah bakteri Streptococcus mutans penyebab karies gigi dan bakteri

Porphyromonas gingivalis penyebab penyakit periodontal (Sinaredi et al., 2014).

Porphyromonas gingivalis adalah bakteri gram negatif anaerob yang menyebabkan

periodontitis dengan mekanisme patogenesis melakukan invasi secara lokal pada jaringan

periodontal (Mysak et al., 2014). Klorheksidin merupakan kationik biguanid digunakan

sebagai antimikroba pilihan untuk mengobati plak dan gingivitis. Bahan antimikroba yang

biasa digunakan dalam obat kumur adalah klorheksidin, fluoride, dan povidone iodine

(Sinaredi et al., 2014).

Penelitian Kulik et al. 2014 menunjukkan bahwa telah dilakukan pengujian secara

in vitro untuk menganalisis perkembangan resistensi bakteri pada penggunaan obat kumur

yang mengandung klorheksidin dibandingkan dengan obat kumur yang mengandung amine

fluoride / stannous flouride, dengan hasil bahwa penggunaan jangka panjang obat kumur

yang mengandung klorheksidin memiliki potensi adanya perkembangan resistensi bakteri.

Sedangkan penggunaan jangka panjang obat kumur amine fluoride / stannous flouride

yang mempunyai tingkat efisiensi terapi sebanding dengan klorheksidin tidak

menyebabkan perkembangan resistensi bakteri.

Saat ini dalam era pengobatan modern penggunaan obat-obatan herbal lebih

banyak digunakan sebagai pengobatan alternatif dan dianggap sebagai pengobatan yang

primitif. Era pengobatan modern lebih mengutamakan penggunaan senyawa sintesis

tunggal yang dapat bekerja cepat dan langsung pada target penyakit, dan jika di kemudian

hari terjadi tidak efektifnya terapi ataupun terjadi resistensi maka dapat diberikan senyawa

sintesis gabungan yang dapat meningkatkan efektifitas terapi ataupun mencegah dan

menghambat resistensi. Dilain pihak tanaman herbal memiliki strategi bertahan terhadap

resistensi lebih awal dibandingkan pengobatan modern pada perkembangan era

pengobatan. Strategi ini mengandalkan banyaknya senyawa kimia alami atau yang disebut

senyawa fitokimia yang berefek sinergis sehingga meningkatkan efektifitas terapi dan atau

bertahan dari adanya resistensi (Carmona dan Pereira, 2013).

Tanaman sirih sudah lama dikenal sebagai tanaman obat dan banyak tumbuh di

Indonesia dengan keyakinan bahwa daun sirih dapat menguatkan gigi, menyembuhkan

luka-luka kecil di mulut, menghilangkan bau mulut, menghentikan pendarahan gusi, dan


2

sebagai obat kumur (Ardiyanti, 2011). Sebagian besar efek antibakteri daun sirih adalah

karena daun sirih mengandung 4.2% minyak atsiri yang komponen utamanya terdiri dari

bethel fenol dan turunannya yang berkhasiat sebagai antibakteri. Fenol dan senyawa

turunannya ini dapat mendenaturasi protein sel bakteri (Inayatullah, 2014). Hasil uji

farmakologi menunjukkan bahwa infusa daun sirih dapat menghambat pertumbuhan

bakteri penyebab pneumonia. Air rebusan daun sirih dapat digunakan untuk mengobati

batuk maupun berfungsi sebagai bakteriosid terutama terhadap Haemophylus influenza,

Staphylococcus aureus, dan Streptococcus haemoliticus. Pada uji antibakteri dengan

metode dilusi air rebusan daun sirih dapat menghambat pertumbuhan Staphylococcus

aureus pada konsentrasi 60% (Hermawan et al., 2007).

Penelitian Sendy et al. 2014 menunjukkan bahwa ekstrak daun sirih merah dengan

konsentrasi 100% mempunyai zona hambat dengan rata-rata 10,7638 mm terhadap bakteri

Porphyromonas gingivalis, yang dimana zona hambat tersebut mendekati zona hambat dari

kontrol positif berupa obat kumur klorheksidin 0,2% dengan rata-rata zona hambatnya

12,2088 mm. Terdapat penurunan aktivitas antibakteri pada kombinasi infusa daun sirih

dan daun sirih merah dibandingkan dengan masing-masing bentuk tunggalnya terhadap

bakteri S. aureus, S. epidermidis, dan E. Coli. Hal ini menunjukkan bahwa terdapat efek

antagonis ketika dikombinasikan sehingga direkomendasikan untuk digunakan secara

terpisah (Hartini et al., 2018).

Mekanisme efek sinergis di antara senyawa yang dikombinasikan berkaitan

dengan dua faktor, yaitu kelarutan dari sekelompok zat dengan berbagai polaritas, dan

banyaknya target yang dapat ditambatkan, diantaranya enzim, reseptor, ion channels,

protein transport, antibodi dan lain sebagainya (Carmona dan Pereira, 2013).

Antagonis kimia terjadi ketika berbagai senyawa berinteraksi sehingga justru

menghasilkan produk yang inaktif. Efek yang juga dapat terjadi adalah antagonis reseptor,

yakni ketika suatu senyawa aktif yang bersifat antagonis menduduki suatu situs aktif

reseptor yang seharusnya diduduki senyawa aktif agonis, ini disebut juga antagonis

kompetitif. Adapun antagonis non-kompetitif, yakni suatu senyawa menduduki sisi

alosterik dari suatu reseptor sehingga senyawa agonis kehilangan afinitasnya pada situs

aktif reseptor (Tripathi, 2013).


3

METODE PENELITIAN

Jenis dan Rancangan Penelitian

Penelitian dengan judul “Uji Aktivitas Antibakteri Kombinasi Infusa Daun Sirih

(Piper betle Linn) dengan Klorheksidin Terhadap Bakteri Pophyromonas gingivalis”

termasuk penelitian eksperimental murni dengan rancangan post only control group

design.

Alat dan bahan Penelitian

Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah oven (MEMMERT), tampah,

toples, timbangan analitik, blender, bejana infusa (panci enamel), termometer, hot plate,

pengaduk kaca, kain flannel, gelas beker, gelas ukur, sendok, tabung reaksi, cawan petri,

lidi kapas steril, inkubator, bunsen, korek api, vortex, pipet volume, glasfirn, mikropipet,

pelubang sumuran diameter 0,6 cm, mistar, densicheck (VITEX) dan Moisture Balance

(KERN).

Bahan penelitian yang digunakan adalah daun sirih yang diperoleh dari Kebun

Obat Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta, serta bakteri uji Phorphyromonas gingivalis

yang didapatkan dari Laboratorium Kesehatan Yogyakarta (Lampiran 1), akuades, alkohol

70%, Nutrient Agar (NA) merk oxoid yang ditambahkan 10% darah steril kambing,

klorheksidin gluconate 0,2% dan 0,1%. Perangakat lunak statistik R i386 Versi 3.3.1.

Determinasi Tanaman

Determinasi tanaman dilakukan oleh Bapak Yohanes Dwiatmaka, M.Si. selaku

dosen Botani Farmasi di Laboratorium Botani Farmasi, Fakultas Farmasi Univeritas Sanata

Dharma dengan mencocokan ciri-ciri yang terdapat dalam tanaman sirih berdasarkan

kunci-kunci yang terdapat dalam “Flora Steenis”.

Pembuatan Simplisia

Bahan uji dikumpulkan, selanjutnya daun sirih disortasi basah yang telah

dikumpulkan. Sortasi basah dilakukan untuk memisahkan daun sirih dari pengotor dan

benda-benda asing seperti tanah atau debu. Setelah itu, daun sirih dicuci dengan air

mengalir. Proses pencucian dilakukan untuk menghilangkan kotoran yang tidak dapat

hilang saat proses sortasi basah. Selanjutnya, daun sirih ditata di tampah untuk dikeringkan

dengan dijemur sementara sampai air di permukaan daun sirih kering. Lalu dilanjutkan

proses pengeringan menggunakan oven dengan suhu 40-50oc selama 4 hari hingga daun

sirih kering sepenuhnya ditandai dengan daun mudah patah ketika diremas. Pengeringan


4

daun dimaksudkan untuk mengurangi kadar air dimana air sebagai media tumbuh

kontaminan diantaranya jamur. Kemudian daun sirih kering disortasi kering dengan cara

memisahkan simplisia yang sudah kering tersebut dengan bahan-bahan asing. Setelah itu

daun sirih yang sudah kering diblender sampai dihasilkan serbuk kasar. Proses blender

membuat luas permukaan kontak simplisia dengan pelarut air dalam infusa semakin luas

sehingga mempermudah keluarnya minyak atsiri dari jaringan daun sirih. Serbuk kasar

yang dihasilkan tersebut tidak diayak melainkan langsung digunakan.

Penetapan Kadar Air

Penentuan kadar air dilakukan dengan menggunakan alat Moisture Balance. Alat

tersebut digunakan karena lebih sederhana. Namun kelemahannya dapat mudah

menguapkan minyak atsiri karena alat ini menggunakan suhu yang tinggi, yaitu mencapai

120oC. Simplisia yang digunakan sebesar 4 gram.

Pembuatan Infusa Daun Sirih

Pembuatan infusa yang mengacu pada literatur BPOM (2011). Simplisia daun

sirih ditimbang sebanyak 50 gram untuk konsentrasi 100%, kemudian dimasukkan ke

dalam panci enamel dan ditambahkan akuades 50 mL dan untuk penjenuhan ditambahkan

akuades sebanyak 100 mL (2 kali bobot) (Prasetyo, 2016). Untuk konsentrasi 50%

ditimbang 25 gram, kemudian dimasukkan ke dalam panci enamel dan ditambahkan

akuades 50 mL dan untuk penjenuhan ditambahkan akuades sebanyak 100 mL.

Selanjutnya dipanaskan diatas penangas air selama 15 menit terhitung dari suhu sudah

mencapai 90oC sambil sesekali diaduk. Disekai selagi panas melalui kain flannel,

ditambahkan akuades secukupnya melalui ampas hingga diperoleh infusa yang

dikehendaki yaitu 50 mL (BPOM, 2011).

Pembuatan Kombinasi

Setelah diperoleh infusa daun sirih dengan konsentrasi 100% dan 50% masing-

masing sebanyak 50 mL, dibuat kombinasi infusa daun sirih dan klorheksidin 0,2%

dicampur dengan rasio 1:1. Rasio tersebut didapatkan dengan mengambil masing-masing 5

mL infusa daun sirih dan klorheksidin 0,2% kemudian dimasukan ke dalam labu ukur 10

mL, kemudian digojog hingga homogen. Kemudian hasil yang didapatkan adalah 10 mL

kombinasi infusa daun sirih dan klorheksidin 0,2% dengan perbandingan 1:1 (v/v).

Pengujian Aktivitas Antibakteri

Pengujian aktivitas antibakbteri terhadap bakteri Porphyromonas gingivalis

diawali dengan dilakukannya subkultur bakteri dengan cara menginokulasikan 1 ose


5

biakan murni bakteri Porphyromonas gingivalis ke dalam NaCl fisiologis 0,9% di vortex

dan dicek kekeruhannya menggunakan densicheck hingga diperoleh angka 0,5 yang sesuai

dengan standar Mc Farland 0,5.

Media yang digunakan dalam penelitian ini adalah NA darah. Pembuatan media

dengan menimbang 7 gram bubuk NA sesuai kebutuhan kemudian dimasukkan ke dalam

erlenmeyer dan ditambahkan akuades 250 mL. Setelah itu dididihkan dan diaduk dengan

menggunakan stirer. Setelah mendidih, media disterilisasi menggunakan autoklaf dengan

suhu 121oC selama 15 menit. Setelah steril media tersebut ditambahkan darah kambing

steril sebesar 10%, dan kemudian dibagi ke dalam cawan petri dan didiamkan hingga

memadat. Penambahan darah steril pada media NA untuk menambah/ memperkaya nutrisi

yang terdapat pada NA.

Pengujian daya hambat pertumbuhan bakteri dilakukan dengan menggunakan

metode difusi sumuran. Pada penelitian ini digunakan 8 cawan petri. Cawan petri pertama

digunakan sebagai kontrol media. Cawan petri kedua digunakan sebagai kontrol

pertumbuhan. Petri yang lain digunakan untuk perlakuan. Dari 6 petri yang tersisa yang

sudah berisi media NA darah, kemudian ditumbuhkan bakteri yang sudah dikulturkan

dengan menginokulasi bakteri menggunakan metode Swab pada permukaan media yang

padat. Metode Swab dilakukan dengan mengoreskan 3 arah dari suspensi bahan yang

mengandung mikroba pada permukaan medium agar pada cawan petri yang dilakukan

secara aseptis.

Keenam cawan petri yang telah diberi kultur bakteri Porphyromonas gingivalis,

lalu diberikan perlakuan dengan menggunakan metode difusi sumuran. Keenam cawan

tersebut diberi lubang sampai ke dasar cawan petri dengan menggunakan pelubang

sumuran yang berdiameter 0,6 cm dengan jarak tertentu yang tidak saling berdekatan.

Masing-masing lubang diberi 50 µL klorheksidin 0,1% (sebagai kontrol positif), 50 µL

infusa daun sirih, 50 µL kombinasi infusa dan akuades sebagai kontrol negatif. Setelah

selesai diberikan perlakuan, keenam cawan petri tersebut diinkubasikan selama 2x24 jam

di dalam inkubator khusus Anaerob dengan kondisi pertumbuhan CO2 5% dan suhu 37oC.

Setiap cawan petri yang sudah diberi lubang berisi kontrol positif (klorheksidin

0.1%), kontrol negatif (akuades), perlakuan (infusa tunggal daun sirih 100% dan 50%,

kombinasi infusa 100% dan 50%). Kontrol media hanya berisi media NA darah yang telah

disterilisasi kemudian dibiarkan memadat dan tidak diberikan perlakuan, sedangkan


6

kontrol pertumbuhan berisi media NA darah yang telah memadat yang ditumbuhan bakteri

Porphyromonas gingivalis dengan Swab 3 arah.

Pengumpulan data dilakukan dengan mengukur zona hambat yang terbentuk

disekitar lubang. Pengukuran dilakukan setelah inkubasi 2x24 jam dengan menggunakan

mistar pada satuan cm. Penentuan ukuran zona hambat dihitung dengan menggunakan

acuan pada literatur dengan rumus : (a+b)/2 yang dapat dilihat pada gambar berikut :

Gambar 1. Cara Pengukuran Diameter Zona Hambat (Sendy et al, 2014).

Keterangan gambar : a = diameter yang panjang, b = diameter yang pendek

Analisis Statistik

Pengambilan data dilakukan dengan mencatat diameter zona hambat yang

terbentuk. Selanjutnya data dihitung dengan uji statistik. Untuk mengetahui data

terdistribusi normal dilakukan uji Pearson chi-square. Untuk mengetahui data terdistribusi

secara homogen dilakukan uji Levene. Kemudian dilanjutkan dengan uji one-way

ANOVA. Setelah didapat hasil uji one-way ANOVA dilakukan uji Post Hoc untuk

mengetahui data mana yang diketahui berbeda bermakna maupun yang tidak.


7

HASIL DAN PEMBAHASAN

Determinasi Tanaman

Hasil determinasi menunjukkan bahwa tanaman yang digunakan adalah jenis

tanaman sirih (Piper betle Linn.). (Lampiran 2).

Pembuatan Simplisia

Simplisia yang digunakan merupakan hasil panen daun sirih yang dipilih berusia

seragam dilihat dari warna daunnya dengan ukuran yang homogen. Daun dipisahkan dari

kotoran dan bahan asing lainnya dengan cara sortasi basah, pencucian dengan air mengalir

dimaksudkan untuk menghilangkan kotoran yang melekat pada daun sirih. Daun sirih

dikeringkan dengan mesin oven agar daun mengering hingga mudah patah. Sortasi kering

dilakukan untuk kembali memisahkan simplisia yang kurang baik. Simplisia selanjutnya

diblender hingga menjadi serbuk kasar tanpa proses pengayakan. Bobot simplisia yang

digunakan 75,38 gram.

Penetapan Kadar Air

Pada penelitian ini dilakukan penetapan kadar air pada simplisia serbuk daun

sirih. Menurut Farmakope Indoneisa (1995), kadar air yang dapat diterima untuk simplisia

kualitas baik ialah

8

memastikan bahwa bakteri Porphyromonas gingivalis dapat tumbuh dengan baik pada

media NA darah. Hal ini ditunjukan pada Gambar 2 yaitu kontrol media yang tidak

terdapat adanya kontaminasi sehingga proses pembuatan media aseptis dan tidak

terkontaminasi bakteri lain, sedangkan kontrol pertumbuhan menunjukkan bakteri dapat

tumbuh baik pada media NA darah.

A

B

Gambar 2. Kontrol media dan kontrol pertumbuhan

Keterangan : A = Kontrol media NA darah, B = Kontrol pertumbuhan bakteri Porphyromonas gingivalis

Uji aktivitas antibakteri kombinasi infusa daun sirih merah dengan klorheksidin

dilakukan untuk mengetahui perbedaan aktivitas antibakteri terhadap bakteri

Porphyromonas gingivalis dengan menggunakan metode difusi sumuran. Di dalam

penelitian ini, dapat dikatakan memiliki aktivitas antibakteri jika terdapat zona jernih

disekitar lubang. Hasil uji aktivitas antibakteri ditunjukkan pada Tabel I serta Gambar 3

dan Gambar 4.


9

Tabel I. Hasil pengukuran diameter zona hambat

No Bahan Uji Rerata ± SD

1 Kontrol Positif 2,36 ± 0,05 cm

2 Kontrol Negatif 0,6 ± 0 cm

3 Infusa daun sirih 100% 1,02 ± 0,07 cm

4 Infusa daun sirih 50% 0,6 ± 0 cm

5 Kombinasi Infusa 100% + Klorhexidin 0,2% 2,1 ± 0 cm

6 Kombinasi Infusa 50% + Klorhexidin 0,2% 2,18 ± 0,01 cm

*Keterangan : Diameter yang diukur termasuk lubang sumuran yaitu 0,6 cm

Gambar 3. Hasil Pengujian Aktivitas Antibakteri Kombinasi

Keterangan gambar : 1 = kontrol positif (klorheksidin 0,1%), 2 = kontrol negatif (Akuades), 3 = kombinasi

infusa 50% + klorheksidin 0,2%, 4 = kombinasi infusa 100% + klorheksidin 0,2%


10

Gambar 4. Hasil Pengujian Aktivitas Antibakteri Tunggal

Keterangan gambar : 1 = infusa daun sirih 50%, 2 = infusa daun sirih 100%

Berdasrkan gambar 3, terlihat bahwa kombinasi infusa daun sirih 50% dan 100%

dengan klorheksidin memiliki diameter zona hambat yang lebih kecil dari kontrol positif.

Pada kontrol negatif yang berisi aquades tidak menunjukkan adanya zona hambat, hal ini

berarti aquades tidak memiliki aktivitas antibakteri sebagai pelarut bahan uji. Pada infusa

daun sirih konsentrasi 50% tidak menunjukan diameter zona hambat sedangkan pada

konsentrasi 100% menujukkan zona hambat sebesar 1,02 cm.

Penelitian Inayatullah (2014) membuktikan bahwa ekstrak daun sirih memiliki

efek terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus, pada penelitian tersebut

menggunakan metode difusi paper disk dengan variabel bebas ekstrak sirih terbagi dalam

konsentrasi 106, 5x106, dan 107 ppm. Hasil pengamatan pada penelitian Inayatullah

menunjukkan pada konsentrasi ekstrak daun sirih 106 ppm didapatkan rata-rata zona

hambat sebesar 21,3 mm. Pada konsentrasi 5x106 ppm didapatkan rata-rata zona hambat

sebesar 25,3 mm. Dan pada konsentrasi 107 didapatkan rata-rata zona hambat sebesar 27,3

mm. Penelitian ini menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi ekstrak daun sirih

maka semakin kuat dalam menghambat pertumbuhan bakteri. Pan et al. (2009) menyatakan

bahwa daya hambat terhadap bakteri terdiri dari kuat (> 6mm), sedang (3-6mm), dan

lemah (

11

mutans. Daya hambat tertinggi infus daun sirih terhadap S. mutans terdapat pada perlakuan

0,45 gr/ml dengan rata-rata pertumbuhan 0,008 x 102 koloni/ml, sedangkan daya hambat

terendah terdapat pada perlakuan 0,05 gr/ml dengan rata-rata pertumbuhan 25,60 x 102

koloni/ml. Hal ini mendukung bahwa dalam konsentrasi tertentu daya hambat bakteri daun

sirih meningkat seiring meningkatnya konsentrasi infusa daun sirih.

Sudah banyak penelitian mengenai kombinasi bahan alam dengan obat sintetis

yang memberikan efek sinergis. Seperti penelitian yang dilakukan oleh Prabhakar (2013)

untuk terapi penyakit diabetes melitus dilakukan terapi kombinasi obat komersial dengan

fitokimia untuk mengurangi efek samping yang diakibatkan penggunaan obat antidiabetes.

Penelitian yang dilakukan oleh Ofokansi et al (2012), menyebutkan bahwa kombinasi

ekstrak atau fraksi metanol dengan obat standar ciprofloxacin, menghaslikan efek sinergis

dalam banyak rasio kombinasi terhadap organisme uji dan memiliki banyak implikasi

terapetik dalam pengobatan infeksi yang disebabkan oleh Staphylococcus aureus.

Kombinasi campuran senyawa dapat diklarifikasikan berdasarkan efek kombinasi,

menjadi sinergisme, antagonis dan aditif. Antagonis adalah ketika kombinasi campuran

senyawa menghasilkan efek yang lebih rendah dari senyawa individu atau tunggalnya

(Bulusu, 2016). Antagonis kimia terjadi ketika berbagai senyawa berinteraksi sehingga

justru menghasilkan produk yang inaktif. Efek yang juga dapat terjadi adalah antagonis

reseptor, yakni ketika suatu senyawa aktif yang bersifat antagonis menduduki suatu situs

aktif reseptor yang seharusnya diduduki senyawa aktif agonis, ini disebut juga antagonis

kompetitif. Adapun antagonis non-kompetitif, yakni suatu senyawa menduduki sisi

alosterik dari suatu reseptor sehingga senyawa agonis kehilangan afinitasnya pada situs

aktif reseptor (Tripathi, 2013). Terdapat penurunan aktivitas antibakteri pada kombinasi

infusa daun sirih dan daun sirih merah dibandingkan dengan masing-masing bentuk

tunggalnya terhadap bakteri S. aureus, S. epidermidis, dan E. Coli. Hal ini menunjukkan

bahwa terdapat efek antagonis ketika dikombinasikan sehingga direkomendasikan untuk

digunakan secara terpisah (Hartini et al., 2018). Terdapat juga penelitian mengenai

kombinasi yang menghasilkan efek antagonis. Penelitian yang dilakukan oleh Semeniuc et

al (2016) menyebutkan bahwa kombinasi Esensial Oil Thyme dengan Esensial oil

peterseli, lovage, dan kemangi menunjukkan pengurangan aktivitas antibakteri dari

Esensial oil Thyme. Oleh karena itu, disarankan untuk digunakan secara tunggal sebagai

antibakteri. Esensial oil Thyme menghasilkan presentase potensi antibakteri tertinggi dari

sema bahan yang diuji.


12

Namun, belum dapat dipastikan senyawa apakah yang menyebabkan terjadinya

interaksi antagonis pada kombinasi infusa daun sirih dan klorheksidin 0,2% yang

menyebabkan penrunan aktivitas pada klorheksidin 0,2%. Khasiat antimikroba pada

tanaman bergantung pada struktur kimia komponen aktif dan konsentrasinya. Ada berbagai

komponen kimia pada tanaman sebagai antimikroba antara lain senyawa fenolik seperti

terpen, alkohol alifatik, aldehid, keton, dan isoflavon. Sedangkan yang ditemukan di daun

adalah senyawa saponin dan flavonoid (Hayek et al, 2013). Menurut Purwata dkk (2008),

daun sirih mengandung senyawa antibakteri yang larut dalam fraksi pelaurt kloroform

yaitu kavikol, eugenol dan fenol asetat. Bahan-bahan ini bersifat antibakteri. Fenol dan

derivatnya, seperti kavikol dan eugenol merupakan senyawa toksik yang menyebabkan

protein sel pada bakteri mengalami denaturasi sehingga protein tidak dapat melakukan

fungsinya. Fenol dan derivatnya dapat merusak dinding sel bakteri. Ketidakstabilan pada

dinding sel dan membran sitoplasma bakteri menyebabkan fungsi permeabiltas selektif,

fungsi pengangkutan aktif dan pengendalian susunan protein dari sel bakteri menjadi

terganggu. Adanya gangguan pada sitoplasma berakibat pada lolosnya makro molekul dan

ion dari sel sehingga sel bakteri menjadi kehilangan bentuknya dan akhirnya mengalami

lisis.

Perhitungan Statistika Hasil Pengujian Aktivitas Antibakteri terhadap


Perhitungan statistik terhadap diameter zona hambat dilakukan menggunakan

perangkat lunak R statistic software V. 3.3.1. Data yang diujikan statistik adalah data

diameter zona hambat kombinasi infusa daun sirih dan klorheksidin dengan klorheksidin

tunggal. Dilakukan uji Normalitas menggunakan Pearson chi-square test dengan hasil p-

value > 0.05 = 0.3173, 0.3173, dan 0.08326, didapatkan semua data terdistribusi normal.

Dilanjutkan dengan pengujian Homogenitas menggunakan Levene test dengan hasil p-

value > 0.05 = 0.05529, dan data dinyatakan homogen. Karena data terdistribusi normal

dan homogen, maka selanjutnya dilakukan uji ANOVA, didapatkan nilai P < 0.05 yaitu

0.000368, menunjukan data berbeda bermakna secara statistik. Dari perhitungan statistika

tersebut menunjukan bahwa kombinasi infusa daun sirih dan klorheksidin memiliki

aktivitas antibakteri yang berbeda bermakna secara statistik (p = 0.000368) dengan

klorheksidin tunggal, sehingga dilanjutkan dengan pengujian post-hoc menggunakan

TukeyHSD didapatkan data adanya perbedaan antara kelompok kombinasi infusa daun sirih

50% dan klorheksidin dengan klorheksidin tunggal, dan antara kelompok kombinasi infusa


13

daun sirih 100% dan klorheksidin dengan klorheksidin tunggal. Dari hasil penelitian ini

didapatkan Rerata ± SD dari dimeter zona hambat kombinasi infusa 100% dan 50%

dengan klorheksidin yaitu secara berturut-turut 2,1 ± 0 cm dan 2,18 ± 0,01 cm.


14

KESIMPULAN DAN SARAN

Kesimpulan

Dari hasil penelitian ini didapatkan Rerata ± SD dari dimeter zona hambat

kombinasi infusa 100% dan 50% dengan klorheksidin yaitu secara berturut-turut 2,1 ± 0

cm dan 2,18 ± 0,01 cm. Aktivitas antibakteri kombinasi infusa daun sirih dan klorheksidin

berbeda dengan klorheksidin tunggal terhadap bakteri Phorpyromonas gingivalis dilihat

dari uji ANOVA nilai P < 0.05 yaitu 0.000368. Kombinasi infusa dan klorheksidin diduga

memiliki sifat antagonis, yaitu aktivitas yang dihasilkan lebih rendah dibandingkan

dengan klorheksidin tunggal.

Saran

Metode checkerboard dan melihat nilai Fractional Inhibitory Concentration (FIC)

dapat menjadi salah satu metode dalam menentukan efek yang terjadi dalam kombinasi.

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui senyawa apakah yang

kemungkinan menyebabkan interaksi antagonis, yang menyebabkan penurunan aktivitas

antibakteri pada klorheksidin. Dengan diketahuinya senyawa apa yang dapat menyebabkan

interaksi antagonis sehingga dalam perkembanganya dapat digunakan senyawa lain yang

tidak menimbulkan interaksi antagonis dalam melakukan kombinasi dengan klorheksidin.


15

DAFTAR PUSTAKA

Ardiyanti, G.M., 2011. Efektivitas Ekstrak Daun Sirih Sebagai Obat Kumur Terhadap

Penurunan Plak Indeks, Skripsi, Fakultas Ilmu Keolahragaan Universitas

Negeri Semarang.

Badan Pengawas Obat dan Makanan RI, 2011, Acuan Sediaan Herbal, Badan Pengawas

Obat dan Makanan RI, 1 (5), 3.

Bulusu, K.C., Guha, R., Mason, D.J., Lewis, R.P.I., Muratov, E., Motamedi, Y.K., Cokol,

M, and Bender, A., 2016, An Overview of State of The Art in Predictive

Modelling of Compund Combination Activity and The Value and Significance

of Systems Informatics in Identifying Combinations for Therapeutic Purposes,

vol. 21 (2), Elsevier Ltd., USA, 226.

Carmona, F., dan Pereira, A.M.S., 2013. Herbal Medicines: Old and New Concepts, Truths

and Misunderstandings, Brazilian Journal Of Pharmacognosy, 23 (2), 379-385.

Hermawan, A., 2007. Pengaruh Ekstrak Daun Sirih (Piper betle L.) Terhadap Pertumbuhan

Staphylococus aureus dan Escherichia coli Dengan Metode Difusi Disk,

Skripsi, Fakultas Ilmu Kedokteran Hewan Universitas Airlangga Surabaya.

Inayatullah, S., 2014. Efek Ekstrak Daun Sirih Hijau (Piper betle L.) Terhadap

Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus, Skripsi, Fakultas Kesehatan dan

Ilmu Kedokteran Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah.

Kulik, E.M., Waltimo, T., Weiger, R., Schweizer, I., Lenkeit, K., Jenny, E.F, 2014.

Development of Resitance of Mutans Streptococci and Porphyromonas

gingivalis to Chlorhexidine Digluconat and Amine Flouride/Stannous Flouride

– Containing Moutrinses, In Vitro, Clin Oral Invest, 1-6.

Mysak, J., Podzimek, S., Sommerova, P., Lyuya, Y., Bartova, J., Janatova, T., 2014.

Porphyromonas gingivalis: Major Periodontopathic Pathogen Overview,

Journal of Immunologi Research, 1-8.

Novianti, D., 2013, Efektivitas Infus Daun Sirih Sebagai Antibakteri Streptococcus mutans

Penyebab Karies Gigi, Sainmatika Vol. 10 No. 1 hal. 7-10.

Ofokansi, K.C., Attama, A.A., Uzor, P.F., and Ovri, M.O., 2012, Antibacterial Activities

of Combined Leaf Extract of Phyllantus muellerianusand and Ciprofloxacin

against Urogenintall Isolates of Sthaphylococcus aureus, Clinical

Pharmacology & Biopharmaceutics, Vol 1 (4).


16

Pan X, Chen F, Wu T, Tang H, Zhao Z. 2009. The Acid, bile tolerance and antimicrobial

property of Lactobaccillus acidophillus. NIT. J Food Control. 20: 598-602.

Prasetyo, A., Denashurya, T.G., Putri, W.S., and Ilmiawan M.I., 2016, Perbandingan Efek

Hipoglikemik Infusa Daun Kembang Bulan (Tithonia diversifolia (Hamsley) A.

Gray) dan Metfromin pada Tikus yang Diinduksi Aloksan, vol. 43 (2),

Continuing Professional Development, 92.

Prabhakar, P.K., et al., 2014, Combination therapy : A New Strategy to Manage Diabetes

and its Complications, Phytomedicine, vol 21, 123-130.

Purwata, O.K., W.S. Rita, dan R. Yoga. 2009. Isolasi dan Uji Antiradikal Bebas Minyak

Atsiri Pada Daun Sirih (Piper betle Linn) Secara Spektroskopi Ultra Violet-

Tampak. Jurnal Kimia Vol. 3 No.1. Universitas Udayana. Bukit Jimbaran.

Salamah, N., dan Widyasari, E., 2015, Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol Daun

Kelengkeng (Euphoria longan (L) Steud.) dengan Metode Penangkapan

Radikal 2,2’-Difenil-1-Pikrilhidrazil, Pharmaciana, Vol 5 no 1, 25-34.

Semeniuc, C.A., Pop, C.R., and Rotar, A.M., 2016, Antibacterial activity and interactions

of plant essential oil combinations againts Gram-positive and Gram-negative

bacteria, Journal of Food and Drug Analysis, 403-408.

Sendy, V.A.A., Pujiastuti, P., dan Ermawati, T., 2014, Daya Antibakteri Ekstrak Daun

Sirih Merah (Pipper crocatum) Terhadap Porphyromonas gingivalis, Artikel

Ilmiah Hasil Penelitian Mahasiswa.

Sinaredi, B.R., Pradopo., S., Wibowo, T.B., 2014. Daya Antibakteri Obat Kumur

Chlorhexidine, Povidone Iodine, Flouride Suplementasi Zinc terhadap,

Streptococcus mutans dan Porphyromonas gingivalis, Dental Journal, 47 (4),

211-214.

Tripathi, K.D., 2013, Essential of Medical Pharmacology, Jaypee Brothers Medical

Publisher : London, 57-65.


17

LAMPIRAN


18

Lampiran 1. Sertifikat Hasil Uji Isolasi dan Identifikasi Bakteri


19

Lampiran 2. Surat Keterangan Determinasi Tanaman


20


21

Lampiran 3. Hasil Uji Kepekaan Infusa Daun Sirih terhadap Phorphyromonas

gingivalis


22

Lampiran 4. Hasil Uji Statistik


23


24

BIOGRAFI PENULIS

Penulis skripsi bernama Raden Muhamad Hovi Nurakbar, lahir di

Bandung pada tanggal 26 Agustus 1994. Penulis yang akrab

dipanggil Hovi merupakan anak dari pasangan Raden Djanuar

Nugraha dan Utiek Suprapti. Penulis menempuh pendidikannya di

SD Kanisius Pijenan, SMP N 2 Bantul, SMF Indonesia Yogyakarta,

dan pada tahun 2013 melanjutkan pendidikan di Progam Studi

Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Selama

perkuliahan, penulis aktif dalam mengikuti kegiatan seminar,

kepanitiaan dan organisasi seperti seminar nasional “Herbal

Medicine as Alternative and Complementary Treatment for

Patient”, anggota UKF Herbal Garden Team, pernah terlibat dalam

kepanitiaan sebagai anggota penyuluhan “Penyakit Degeneratif dan Pelatihan Pemanfaatan

TOGA di kelompok lansia Wirawredha”. Pernah terlibat sebagai anggota PKM

Pengabdian Kepada Masyarakat “MEGATRON SARAPAN JAMU BISA KEKAR

(Lemari Toga Elektronik Sarana Pelestarian Jamu bagi Siswa Tunanetra di MTs Yaketunis

Yogyakarta)”.


uji aktivitas antibakteri kombinasi infusa daun...

Documents