Bahan dan Metode

1. Bakteri Strain , Plasmid , dan Kondisi Pertumbuhan

Semua E. Coli ditumbuhkan dalam medium LB (10gl-1tryptone, ekstrak 5gl-1yeast,

dan 10gl-1NaCl) dilengkapi atau tidak dengan sumber karbon tambahan pada 37° C

dengan gemetar. Media yang dilengkapi dengan kloramfenikol antibiotik (50 mg l-1)

yang diperlukan.

2. Ekstraksi dan Kuantifikasi Lycopen

Rekombinan sel E. Coli yang dipanen dengan sentrifugasi pada 12.000 rpm selama 5

menit. Sel dicuci dengan air dan kemudian diekstrak di 1 mL aseton pada 55° C selama

15 menit dengan vortexing berselang. Campuran itu kemudian disentrifugasi pada 12.000

rpm selama 10 menit, dan supernatan aseton adalah dipindahkan ke tabung baru.

Absorbansi ekstrak yang dihasilkan diukur pada 475 nm dan dikonversi ke konsentrasi

lycopene (mg / l) menggunakan kurva standar diperoleh dengan menggunakan lycopene

komersial (Sigma).

3. Deteksi Lycopene Yield

Sebuah koloni tunggal dari rekombinan E. Coli diinokulasi ke dalam tabung reaksi

20ml mengandung 5 ml medium pertumbuhan dan tumbuh semalam di 37° C maka

budaya starter secara terpisah diencerkan ke LB , LB dilengkapi dengan 6 g 1-1 glukosa,

dan LB dilengkapi dengan 6 g 1-1 fruktosa ke OD 600 0,025. Kloramfenikol ( 50 g / ml )

ditambahkan ke dalam media di atas. Setiap lain 4 jam, absorbansi ekstrak yang

dihasilkan diukur pada 475 nm dan lycopene. Konsentrasi ( mg / l ) dihitung

menggunakan lycopene komersial sebagai standar ( Sigma ) . Setiap sampel diukur dalam

rangkap tiga.

Hasil

Optimalisasi Saring Host untuk Lycopene Produksi

Untuk memilih strain yang optima,l strain rekombinan untuk produksi lycopene,E. coli K - 12 , DH5a , JM109 , dan BL21 ( DE3 ) diubah dengan pACLYCipi

plasmid masing-masing, dan kemudian dibiakkan dalam 250 ml bingung labu di media LByang populer dengan ahli bakteri karena memungkinkan pertumbuhan yang cepat dan pertumbuhan yang baik. hasil bagi banyak spesies.

E. coli K – 12 ( pACLYCipi ) yang digunakan ditunjukkan dengan massa sel dan lycopene konten tertinggi di antara strain . Konsentrasi akhir dari lycopene yang dihasilkan oleh strain yang digunakan meliputi Agar K - 12 ( pACLYCipi ) > DH5a ( pACLYCipi ) > JM109 (pACLYCipi) > BL2 ( pACLYCipi ). Dengan demikian , E. coli K - 12 galur terpilih sebagai tuan rumah optimal untuk lycopene produksi.