Pada praktikum kimia klinik ini dilakukan pemeriksaan total protein dengan metode biuret menggunakan Spektrofotometer. Dalam pereaksi biuret terkandung 3 macam reagen yaitu reagen yang pertama adalah CuSO4 dalam aquadest dimana reagen ini berfungsi sebagai penyedia ion Cu2+ yang nantinya akan membentuk kompleks dengan protein. Reagen yang kedua adalah K-Na-Tartrat yang berfungsi untuk mencegah terjadinya reduksi pada Cu2+ sehingga tidak mengendap. Reagen yang ketiga adalah NaOH dimana fungsinya adalah membuat suasana basa. Suasana basa akan membantu pembentukan Cu(OH)2yang nantinya akan menjadi Cu2+ dan 2OH-.Untuk penetuan protein total pada sampel dilakukan preparasi blanko,standar dan sampel. Preparasi dilakukan dengan cara mencampurkan monoreagen dengan blanko, standar,dan sampel pada tabung yang berbeda-beda dengan perbandingan 5:1 dimana 500 mikroliter reagen 1 ditambahkan 10 mikroliter baik blanko, standar, maupun sampel pada tabung serologi yang berbeda selanjutnya diinkubasi selama 5 menit pada suhu 370C (untuk monoreagen terdiri dari campuran 20 ml reagen 1 dan 5 ml reagen2)Adapun prinsip dari metode ini adalah pengukuran serapan cahaya kompleks berwarna ungu dari protein yang bereaksi dengan pereaksi biuret dimana, yang membentuk kompleks adalah protein dengan ion Cu2+ yang terdapat dalam pereaksi biuret dalam suasana basa. Semakin tinggi intensitas cahaya yang diserap oleh alat maka semakin tinggi pula kandungan protein yang terdapat di dalam serum tersebut. Reaksi yang terjadi pada penetapan kadar protein dengan metode Biuret adalah :CuSO4.5H2O + 2NaOH Cu(OH)2+Na2SO4+5H2OCu(OH)2 Cu2+ + 2OH-

Setelah inkubasi 5 menit, diasumsikan bahwa protein telah bereaksi dengan reagen biuret sehingga dapat diamati perubahan warna larutan dari biru muda (warna reagen) menjadi ungu tua setelah ditambahkan sampel. Kompleks warna ini kemudian diukur serapan cahayanya pada spektrofotometer dengan panjang gelombang 546 nm. Adapun langkah langkah pengukuran dengan spektropotometer yaitu sbb :1. Dipastikan alat sudah dihidupkan dan dipanaskan 2. Dilakukan wash dengan cara memasukkan aspirate water (aquadest) pada pipa kapiler lalu tekan wash kemudian didiamkan beberapa detik, kembali tekan wash dan aspirate water di tarik 3. Pilih run test dengan menekan angka 14. Pilih # page2 dengan menekan angka 25. Pilih TPRO untuk pengukutran Total protein 6. Apabiladiminta aspiratewater pada alat masukkan aquadest pada pipa kapiler kemudian tekan tombol dekan pipa kapiler kemudian ikuti instruksi selanjutnya 7. Cara pengukuran absorbansi yaitu:a. Masukkan blanko kemudian tekan tombol dekat pipa kapiler kemudian catat absorbansi , tekan Yes untuk menyimpan datab. Masukkan standar kemudian tekan tombol dekat pipa kapiler kemudian catat absorbansi , tekan Yes untuk menyimpan datac. Masukkan sampel kemudian tekan tombol dekat pipa kapiler kemudian catat absorbansi dan konsentrasi8. Tekan reset untuk kembali kemenu awalk 9. Masukkan aspirate water (aquadest) keudian tekan tombol wash 10. Ditunggu beberapa detik keudian tekan washSetelah dilakukan pengukuran terhadap blanko, standar dan sampel didapatkan absorbansi larutan blanko adalah ------ , larutan standar adalah ---- dan absorbansi larutan sampel adalah -----.serta konsentrasi sampel adalah -------------