Menilai antimikroba Pengaruh Minyak Atsiri dari Myrtus communis pada Isolat Klinis Porphyromonas gingivalis: Sebuah Studi in vitro

Bahan dan Metode

3.1. Seleksi pasien

Tiga puluh pasien dengan periodontitis kronis canggih yang dirujuk ke departemen of Periodontology Shiraz sekolah kedokteran gigi antara Oktober 2010 dan Juni 2011 didaftarkan ke dalam penelitian. Para peserta memiliki setidaknya satu gigi dengan saku lebih dalam dari 7 mm di awal pemeriksaan. Para pasien yang memiliki riwayat periodontal pengobatan, merokok, kehamilan, minum antibiotik selama dua bulan terakhir, gangguan sistemik seperti diabetes dan penyakit menular, mengkonsumsi suplemen zat besi dikeluarkan dari penelitian tersebut. Kasus yang direkrut seharusnya setidaknya 35 tahun. Usia pasien yang dipilih berkisar antara 36 sampai 52 tahun. Dua Puluh tujuh pasien tersebut adalah laki-laki, sementara tiga mata pelajaran adalah perempuan.

Ujian lisan ekstra dilakukan dan lengkap riwayat kesehatan diperoleh .suatu keluhan utama direkam dan Pocket kedalaman (PD) dan mukogingival junction (MGJ) diukur. Gingiva diperiksa dan jenis penyakit periodontal diidentifikasi. Para pasien kemudian diperintahkan untuk kesehatan mulut menggunakan sikat gigi lembut (Trisa Ultra Super sensitif) dan unwaxed benang gigi (oral-B). Semua pasien menjalani supragingiva skala menggunakan perangkat ultrasonik Hu-Friedy dan tangan instrumen. Satu minggu setelah scaling supragingiva, pasien dipanggil untuk pengambilan sampel. Sampel yang diambil dari semua daerah yang memiliki saku lebih dari 7 mm mendalam, dengan satu pukulan dari kuret pada permukaan gigi dan penyisipan No.20 kertas kerucut di periodontal yang saku selama 15, 20 dan 30 detik. Spesimen yang ditempatkan dalam 5 tabung reaksi mL mengandung 3 mL Thioglycolate medium kultur (Merck) dan disimpan dalam lemari es pada suhu 4C. Untuk menghindari gangguan pada saat penarikan kuret atau kertas kerucut, gigi dengan mahkota atau mengisi subgingival juga dikecualikan. Tabung kemudian dimasukkan ke dalam cetakan khusus untuk menjadi dicegah dari pencampuran dan dipindahkan ke laboratorium dalam waktu kurang dari 20 menit.

3.2. media

3.2.1. Brucella Broth Medium

Dari media kultur (Merck), 41 g dilarutkan dalam air suling dan disterilkan selama 15 menit dalam autoklaf. Kemudian di bawah kondisi aseptik, 5% segaris domba darah, 5 mg / mL Hemin, 1 mg / mL vitamin K, 1 mg / mL nalidiksat asam, dan 5 mg / mL vankomisin ditambahkan ke steril menengah. 3.2.2. Brucella Darah Agar Medium

Prosedur sebelumnya sama diulang dan 1,5% agar serbuk (Merck) ditambahkan dan disterilkan dalam autoclave selama 15 menit. Setelah itu, dalam kondisi aseptik, 5% domba segaris darah, 5μg / mL Hemin, 1 uL / vitamin mg K, 1 mg / mL asam nalidiksat, dan 5 mg / mL Vancomycin ditambahkan ke dalam media steril.

3.3. Identifikasi bakteri

Sampel siap diinokulasi pada Brucella darah agar media dan diinkubasi di bawah anaerobik kondisi di 37C selama 14 hari. Selanjutnya, gelap koloni cokelat tumbuh pada media dijemput dan diselidiki oleh gram staining dan lampu neon. Bakteri dengan pigmen hitam atau coklat tua (g-) dan neon (-) diidentifikasi sebagai P. gingivalis. untuk mengkonfirmasi identifikasi, uji indol dipekerjakan pada bakteri ini dan sampel dengan hasil positif yang digunakan dalam percobaan. Setelah isolasi dan identifikasi bakteri, mereka dipindahkan ke daging dimasak media untuk proliferasi lebih tinggi dan diinkubasi pada 37 C selama 14 hari dalam anaerobik jar.

3.4. Persiapan Minyak Atsiri

Pertama, 300 g Myrtus communis bubuk (bentuk serbuk tanaman meningkatkan hasil efektif) tenggelam dalam suling air selama 4 jam, yang kemudian direbus dalam Clevenger (menghasilkan 0,69%). Esensinya diperoleh maka untuk lebih Pemurnian kelembaban tambahan telah dihapus oleh natrium bubuk sulfat dan disimpan di 4C sampai digunakan. The "pemurnian "Dalam metode ini berarti penghapusan kelebihan air.

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah ramah ditawarkan oleh pusat Obat Herbal dan Kimia Riset center oleh profesor Javidnia.

3.5. Broth Metode mikrodilusi

Dalam penelitian ini, metode dilusi mikro digunakan dalam Untuk menentukan Konsentrasi Hambat Minimum (MIC) dari Myrtus communis esensi dari P. gingivalis. Dalam metode ini, sel-96 baik piring mikro berbudaya dengan datar bawah sumur berbentuk U yang digunakan. Pertama, di bawah steril kondisi dan di bawah kap laminar, 100 uL dari Brucella media kaldu ditambahkan ke setiap baris sumur pertama, ke-3 dan sampai kolom ke-12. Setelah menambahkan 128 uL dari Myrtus communis penting untuk baris kedua dari sumur, volume mereka meningkat menjadi 200 mL menggunakan Brucella yang media kaldu sehingga pengenceran esensi mencapai 64 mL / mL. Kemudian, 100 uL diambil dari sumur kedua dan ditambahkan untuk yang ketiga. Kecenderungan ini terus berlangsung sampai tanggal 11 baik dan akhirnya, 100 uL 11 sumur dibuang. Serial pengenceran dibuat dari senyawa diselidiki dalam 2-11 kolom sumur. Kemudian 0,5 suspensi Mcfarland (1 ˟ 108 CFU / mL) bakteri yang diuji diencerkan 1:10 untuk menghasilkan 107 CFU / mL. Total 5 uL ini Suspensi diinokulasikan ke dalam untuk 2 nd-12 kolom th sumur, dengan cara ini konsentrasi ujian akhir bakteri di setiap sumur adalah sekitar 5 ˟ 105 CFU / mL (atau 5 ˟ 104 CFU / baik). Untuk mengontrol sterilitas kondisi; itu baik dari kolom pertama yang berisi 100 uL dari medium kultur tanpa suspensi mikroba yang dianggap sebagai kontrol negatif. Di sisi lain, baik dari kolom 12 yang termasuk mikroba yang suspensi dan tidak memiliki Myrtus communis esensi yang dianggap sebagai kontrol positif. Kemudian, plat ditempatkan di bawah kondisi anaerob di 37C. Kekeruhan sumur pelat mikro yang berisi bakteri yang dibaca oleh mata telanjang setelah 72 jam. Konsentrasi Myrtus communis esensi dalam sumur pertama di masing-masing kolom yang tidak memiliki kekeruhan dianggap sebagai MIC. dalam rangka untuk melakukan eksperimen tersebut, bakteri memiliki berada di fase logaritmik. Dengan demikian, bakteri segar budaya yang disimpan dalam media daging dimasak di 37C selama 4 hari di bawah anaerob dimanfaatkan. Semua percobaan diulang selama 3 kali dalam rangka mengurangi tingkat kesalahan yang mungkin sejauh. Juga, dalam kasus tidak adanya pencocokan antara baris, percobaan diulang lagi (12).

4. Hasil

Subyek penelitian ini meliputi 27 laki-laki dan 3 pasien wanita dengan periodontitis kronis canggih. Usia rata-rata pasien berusia 47,6 ± 2,0 tahun. Pengambilan sampel dilakukan dan P. gingivalis diisolasi dari sampel melalui berbagai percobaan, termasuk gram pewarnaan, uji Indol, dan uji fluorescent. Didalam Penelitian, 0,12-64 uL / mL Myrtus communis esensi digunakan 30 P. gingivalis isolat dan MIC50 dan konsentrasi MIC90 dari Myrtus communis esensi terhadap isolat yang sama dengan 1 dan 8 uL / mL.

5. Diskusi

The hadir dalam studi vitro menunjukkan bahwa 1 uL / mL dari Myrtus communis esensi memiliki potensi penghambatan terhadap P. gingivalis sebagai yang paling periodontopathogenic spesies. Periodontitis kronis dikenal sebagai penyakit infeksi yang dipicu dan dikelola oleh plak mikroba, tetapi kerusakan jaringan lebih lanjut dapat mengakibatkan dari mekanisme pertahanan host-(1). Tujuan dari kebanyakan perawatan medis atau gigi adalah untuk menghapus faktor penyakit memulai. Di antara gigi mikroorganisme plak, P. gingivalis dominan yang gram negatif anaerob patogen periodontal (13). Itu Pengobatan umum untuk eliminasi bakteri atau pengurangan adalah debridement mekanis dari permukaan akar, tetapi tidak efektif untuk patogen yang telah menembus jaringan (14). Teknik Oleh karena itu, ajuvan seperti pemanfaatan antibiotik dianggap (15). Penggunaan antibiotik sistemik memiliki potensi samping yang tidak diinginkan efek seperti gangguan pencernaan, reaksi alergi, resistensi obat dan kurangnya kerjasama dari pasien (16). Topikal antibiotik digunakan memiliki efek samping yang lebih sedikit daripada antibiotik sistemik. Manfaat yang paling penting satunya adalah efek yang menguntungkan mereka dengan minimum dosis pemberian. Namun kerugian dari topikal antibiotik memakan waktu, biaya tinggi dan teknik sensitivitas (17). Cara lain adalah dengan menggunakan agen yang berbeda dalam bentuk obat kumur. Chlorhexidine adalah yang paling obat kumur yang berguna, tetapi karena gigi dan lidah pewarnaan dan rasa tidak enak, itu tidak dapat diterima untuk pasien (18). Listerine obat kumur adalah lain, yang meskipun tidak memiliki efek samping klorheksidin, memiliki tingkat alkohol yang menghasilkan mulut kekeringan dan komplikasi berikutnya (19). kebanyakan pasien lebih memilih tanaman alami daripada obat sintetis. Myrtus communis adalah salah satunya. Cabang udara tanaman yang digunakan dalam penelitian ini. Salah satu persiapan dari Myrtus communis telah terbukti memiliki penghambatan efek pada gram positif aerobik mikro-organisme seperti

staphylococcus aureus, E. coli, dan pseudomonas aeruginosa (20). Topikal obat herbal ini dapat digunakan dalam pengobatan herpes simpleks dan peradangan hidung. Membilas jamu ini efektif dalam pengobatan ulkus aftosa (10). Dalam penelitian ini, kami menggunakan klinis strain P. gingivalis diisolasi dari pasien bukan strain standar. Karena strain referensi yang terisolasi lama (beberapa tahun) dan sering budaya dan mutasi berikutnya mungkin diberikan mereka berbeda dari strain yang ada dalam masyarakat manusia dewasa ini. Dengan demikian, mereka mungkin tidak sesuai untuk menyelidiki perlawanan mereka terhadap farmasi senyawa.

Kami mengevaluasi efek antimikroba Myrtus communis terhadap spesies yang paling periodontal-patogen; yaitu P. gingivalis yang merupakan bakteri gram negatif. Itu rentang konsentrasi Myrtus communis terhadap P. gingivalis adalah antara 0,12 dan 64 uL / mL dan MIC50 on terisolasi P. gingivalis adalah 1 uL / mL. Hasil ini kesepakatan dengan penelitian yang dilakukan oleh Suleiman et al. yang menggunakan obat ini sebagai irrigant saluran akar (20). Temuan studi menunjukkan bahwa ekstrak alkohol dari Myrtus communis menunjukkan efek antimikroba pada berbeda pengenceran, tetapi efek antibakteri terbaik adalah melihat pada pengenceran 35%. Kekuatan penelitian ini adalah pemanfaatan ekstrak air suling dari daun lebih dari ekstrak alkohol, yang merupakan efek murni tanaman. Kami tidak menentukan komposisi esensi dalam penelitian ini. Minyak esensial ini murah dan mudah disiapkan tanpa efek yang tidak diinginkan. Tambahan Pula, memiliki bau yang baik yang akan berpengaruh positif nya penerimaan antara pasien. Penelitian ini adalah satu-satunya yang menyelidiki efek Myrtus communis esensi dari P. gingivalis bakteri anaerob. esensi ini mudah disiapkan, murah, dengan bau halus dengan tidak ada efek samping. Penelitian lebih lanjut disarankan pada efek klinis esensi ini, sebagai obat kumur, pasta gigi, atau irrigant subgingival; sendiri atau dalam kombinasi dengan pengobatan scaling dan root planning.