plagiat merupakan tindakan tidak terpujidan yeni natalia atas kebersamaan, dan kebaikan kalian...

UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA GETAH JARAK TINTIR (Jatrophamultifida Linn.) TERHADAP Staphylococcus aureus ATCC 25923,Escherichia coli ATCC 25922, dan Candida albicans ATCC 10231

Skripsi

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu SyaratMemperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh:Puspita Sari

NIM : 108114153

FAKULTAS FARMASIUNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA2014

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

i

UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA GETAH JARAK TINTIR (Jatropha

multifida Linn.) TERHADAP Staphylococcus aureus ATCC 25923,

Escherichia coli ATCC 25922, dan Candida albicans ATCC 10231

Skripsi

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh:

Puspita Sari

NIM : 108114153

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2014


ii


iii


iv

Hiduplah sedemikian rupa seolah-olah

akan mati esok. Belajarlah seolah-olah kau

hidup selamanya.

Mahatma Gandhi

Kupersembahkan karya sederhanaku ini untuk :

Tuhan Yesus Kristus penolongku yang hebat.

Bapak Partijo dan Ibu Lasmi Puji Asih,kedua orang tuaku yang hebat.

Kakak – kakakku terkasih Darmiasih, Jati Nugroho, dan Sugianto.

Semua orang yang telah mengisi hidupku, dan Almamaterku.


v

PRAKATA

Puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Baik, karena atas penyertaan dan

pertolonganNya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Uji Aktivitas

Antimikroba Getah Jarak Tintir (Jatropha multifida Linn.) Terhadap

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922, dan

Candida albicans ATCC 10231”.

Skripsi ini disusun sebagai syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.

Farm.) di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma. Penyusunan skripsi ini

dapat terselesaikan karena bantuan dan kerja sama dari banyak pihak. Oleh karena

itu, penulis ingin mengucapkan teima kasih yang mendalam kepada:

1. Bapak Ipang Djunarko, M.Sc., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi

Universitas Sanata Dharma.

2. Bapak Prof. Dr. C. J. Soegihardjo, Apt. selaku Dosen Pembimbing dan

penguji yang telah rela meluangkan waktu untuk memberikan bimbingan,

saran, dan dukungan hingga skripsi ini terselesaikan.

3. Damiana Sapta Candrasari, M.Sc. dan Dr. Erna Tri Wulandari M.Si., Apt.

selaku Dosen Penguji yang telah meluangkan waktu untuk menguji selama

ujian tertutup dan terbuka serta untuk kritik dan sarannya yang membangun.

4. Ibu C.M. Ratna Rini Nastiti, M. Pharm., Apt., selaku Ketua Program Studi

dan Dosen Pembimbing Akademik atas bantuan yang telah diberikan selama

perkuliahan dan penyusunan skripsi.

5. Ibu Maria Dwi Jumpowati, S.Si., yang telah bersedia meluangkan waktu

untuk berdiskusi mengenai mikrobiologi.


vi

6. Seluruh staf Dosen Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma karena telah

membagikan ilmu kepada penulis.

7. Bapak Mukminin, Bapak Wagiran, Mas Andri, Mas Sigit, seluruh laboran

dan karyawan Universitas Sanata Dharma.

8. Orang tuaku, dua orang luar biasa dalam hidupku, terima kasih atas cinta,

semangat, dukungan, dan kepercayaannya sehingga semua terasa lebih indah.

9. Ketiga kakakku terkasih (Darmiasih, Jati Nugroho, dan Sugianto) atas segala

dukungan, doa, dan penghiburan yang kalian berikan.

10. Sahabatku Trifonia Rosa, Ranny Oktaviani, Gilda Todingbua, Yohanes Ivan,

dan Yeni Natalia atas kebersamaan, dan kebaikan kalian selama ini.

11. Teman – teman Kos Agatha : Liana Risha yang selalu mengingatkan tentang

skripsi, Rosa Kurniasih, Rosalia Suryaningtyas, Gabriella Septiana, Maria

Karina, Gracia Jenny, Maria Magdalena, terima kasih atas dukungan dan

kebersamaannya selama ini.

12. Teman – teman FKK B 2010 atas kebersamaannya selama ini.

13. Semua pihak yang telah banyak membantu penyelesaian skripsi ini yang tidak

dapat penulis sebutkan satu persatu.

Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini masih jauh dari sempurna.

Oleh karena itu, kritik dan saran yang membangun akan sangat membantu penulis

dalam menyempurnakan skripsi ini. Penulis berharap semoga skripsi ini berguna

dikemudian hari.

Penulis


vii


viii


ix

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL .......................................................................................... i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING................................................. ii

HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................ iii

HALAMAN PERSEMBAHAN ........................................................................ iv

PRAKATA ......................................................................................................... v

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ............................................................ vii

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA

ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS ........................................... viii

DAFTAR ISI ...................................................................................................... ix

DAFTAR TABEL .............................................................................................. xiii

DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... xiv

DAFTAR LAMPIRAN ...................................................................................... xv

INTISARI ........................................................................................................... xvii

ABSTRACT ......................................................................................................... xviii

BAB I. PENGANTAR ....................................................................................... 1

A. Latar Belakang ..................................................................................... 1

1. Perumusan masalah ......................................................................... 3

2. Keaslian penelitian .......................................................................... 3

3. Manfaat penelitian .......................................................................... 4

B. Tujuan Penelitian ................................................................................. 4

BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA ............................................................... 5


x

A. Jarak tintir (Jatropha multifida Linn.) .................................................. 5

B. Kandungan Metabolit Sekunder Batang Jarak Tintir .......................... 6

1. Saponin ............................................................................................ 7

2. Tanin ............................................................................................... 8

3. Flavonoid ......................................................................................... 8

4. Alkaloid ........................................................................................... 9

C. Getah Jarak Tintir ................................................................................ 10

D. Bakteri Gram Positif dan Gram Negatif .............................................. 11

E. Staphylococcus aureus ......................................................................... 12

F. Escherichia coli ................................................................................... 14

G. Candida albicans ................................................................................. 15

H. Antijamur ............................................................................................. 17

I. Antibakteri ........................................................................................... 18

J. Pengukuran aktivitas antimikroba ....................................................... 20

K. Landasan Teori .................................................................................... 20

L. Hipotesis .............................................................................................. 22

BAB III. METODOLOGI PENELITIAN ......................................................... 23

A. Jenis Rancangan Penelitian ............................................................... 23

B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional ................................... 23

1. Variabel penelitian ........................................................................ 22

2. Definisi operasional ...................................................................... 24

C. Bahan Penelitian ................................................................................ 25

D. Alat atau Instrumen Penelitian .......................................................... 25


xi

E. Tata Cara Penelitian .......................................................................... 26

1. Determinasi tanaman .................................................................... 26

2. Pengumpulan bahan ..................................................................... 26

3. Skrining Fitokimia Getah Jarak Tintir .......................................... 26

a. Uji pendahuluan ....................................................................... 26

b. Uji tanin .................................................................................... 27

c. Uji saponin ............................................................................... 27

d. Uji flavonoida .......................................................................... 28

e. Uji alkaloida ............................................................................. 28

f. Uji antrakinon .......................................................................... 28

4. Uji aktivitas antimikroba .............................................................. 29

a. Persiapan konsentrasi getah jarak tintir .................................... 29

b. Pembuatan kultur mikroba uji .................................................. 29

c. Pengukuran zona hambat ......................................................... 29

d. Penentuan KHM (Konsentrasi Hambat Minimum) ................. 30

F. Tata cara Analisis Hasil ..................................................................... 30

BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN .......................................................... 32

A. Determinasi tanaman ......................................................................... 32

B. Pengumpulan Getah Jarak Tintir ....................................................... 33

C. Skrining Fitokimia Getah Jarak Tintir .............................................. 33

1. Uji pendahuluan ............................................................................ 34

2. Uji tanin ........................................................................................ 34

3. Uji saponin .................................................................................... 36


xii

4. Uji flavonoid ................................................................................. 38

5. Uji alkaloida .................................................................................. 38

6. Uji antrakinon ............................................................................... 39

D. Uji Potensi Antimikroba Getah Jarak Tintir Secara Difusi Sumuran 41

1. Uji potensi antibakteri getah jarak tintir terhadap Staphylococcus

aureus ATCC 25923 ..................................................................... 45

2. Uji potensi antibakteri getah jarak tintir terhadap Escherichia

coli ATCC 25922 .......................................................................... 47

3. Uji potensi antibakteri getah jarak tintir terhadap Candida

albicans ATCC 10231 .................................................................. 50

E. Penentuan Konsentrasi Hambat Miniman (KHM) Getah Jarak

Tintir terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923, dan

Escherichia coli ATCC 25922 secara Dilusi Cair ............................. 51

1. Penentuan KHM getah jarak tintir terhadap Staphylococcus

aureus ATCC 25923 ..................................................................... 52

2. Penentuan KHM getah jarak tintir terhadap Escherichia coli

ATCC 25922 ................................................................................. 53

F. Mekanisme Antimikroba Golongan Senyawa yang Terkandung Dalam Getah Jarak Tintir .................................................................. 55

BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ........................................................... 57

A. Kesimpulan .......................................................................................... 57

B. Saran .................................................................................................... 57

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 58

LAMPIRAN ....................................................................................................... 62

BIOGRAFI PENULIS ....................................................................................... 118


xiii

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel I. Hasil uji tabung pada skrining fitokimia getah jarak tintir ........... 40

Tabel II. Diameter zona hambat getah jarak tintir terhadap bakteri

Staphylococcus aureus ATCC 25923 ........................................... 46

Tabel III. Diameter zona hambat getah jarak tintir terhadap Escherichia

coli ATCC 25922 .......................................................................... 48

Tabel IV. Diameter zona hambat getah jarak tintir terhadap bakteri

Candida albicans ATCC 10231 ................................................... 50

Tabel V. Kekeruhan media pada dilusi cair bakteri Staphylococcus

aureus ATCC 25923 ATCC 25923 .............................................. 52

Tabel VI. Kekeruhan media pada dilusi cair bakteri Escherichia coli

ATCC 25922 ................................................................................. 54


xiv

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 1. Tanaman jarak tintir ...................................................................... 6

Gambar 2. Dinding sel bakteri Gram Positif dan Gram Negatif .................... 11

Gambar 3. Bakteri Staphylococcus aureus ..................................................... 13

Gambar 4. Bakteri Escherichia coli ................................................................ 14

Gambar 5. Jamur Candida albicans ............................................................... 16

Gambar 6. Tanaman jarak tintir ...................................................................... 32

Gambar 7. Ikatan antara tanin dengan protein ................................................ 35

Gambar 8. Reaksi terpenoid dengan pereaksi Liebermann-Burchard ............ 37

Gambar 9. Mekanisme reaksi antara flavonoid dengan magnesium .............. 38

Gambar 10. Mekanisme reaksi alkaloid dengan pereaksi Mayar ..................... 36

Gambar 11. Mekanisme reaksi alkaloid dengan pereaksi Dragendorff ........... 36

Gambar 12. BD PhoenixSpecTM

Nephelometer ............................................... 43


xv

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

Lampiran 1. Surat Determinasi Tanaman Jarak Tintir (Jatropha multifida

Linn.) ........................................................................................... 63

Lampiran 2. Sertifikat Hasil Uji Staphylococcus aureus ATCC 25923 .......... 64

Lampiran 3. Sertifikat Hasil Uji Escherichia coli ATCC 25922 .................... 65

Lampiran 4. Sertifikat Hasil Uji Candida albicans ATCC 10231 .................. 66

Lampiran 5. Data diameter zona hambat (mm) getah jarak tintir terhadap

Escherichia coli ATCC 25922..................................................... 67

Lampiran 6. Hasil uji statistik diameter zona hambat (mm) getah jarak tintir

terhadap Escherichia coli ............................................................ 67

Lampiran 7. Hasil uji Mann-Whitney kelompok konsentrasi pada bakteri

Escherichia coli ATCC 25922 .................................................... 80


Staphylococcus aureus ATCC 25923 ......................................... 80

Lampiran 9 Hasil uji statistik diameter zona hambat getah jarak tintir

terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923 .......................... 81

Lampiran 10. Hasil uji Mann-Whitney kelompok konsentrasi pada bakteri



Candida albicans ATCC 10231 ................................................. 94

Lampiran 12. Hasil uji statistik diameter zona hambat (mm) getah jarak tintir

terhadap Candida albicans ATCC 10231 ................................... 94

Lampiran 13. Hasil uji Mann-Whitney kelompok konsentrasi pada Candida

albicans ATCC 10231 ................................................................ 107

Lampiran 14. Data pengukuran kekeruhan media pada dilusi cair bakteri


Lampiran 15. Data pengukuran kekeruhan media pada dilusi cair bakteri 109


xvi

Escherichia coli ATCC 25922 ....................................................

Lampiran 16. Foto Tanaman Jarak Tintir (Jatropha multifida Linn.) dan

Getah Jarak Tintir ........................................................................ 110

Lampiran 17. Foto Hasil Skrining Fitokimia Getah Jarak Tintir (Jatropha

multifida Linn.) ........................................................................... 111

Lampiran 18. Foto seri konsentrasi getah jarak tintir, kontrol positif, dan

kontrol negatif ............................................................................. 113

Lampiran 19. Foto hasil uji aktivitas antibakteri getah jarak tintir terhadap

Staphylococcus aureus secara difusi sumuran ............................ 114

Lampiran 20. Foto hasil uji aktivitas antibakteri getah jarak tintir terhadap

Escherichia coli secara difusi sumuran ...................................... 115

Lampiran 21. Foto hasil uji aktivitas antifungi getah jarak tintir terhadap

Candida albicans secara difusi sumuran .................................... 116

Lampiran 22. Foto pengujian aktivitas antibakteri getah jarak jarak tintir

secara dilusi cair terhadap Staphylococcus aureus dan

Escherichia coli untuk mendapatkan KHM (Konsentrasi

Hambat Minimal) ....................................................................... 117


xvii

INTISARI

Getah jarak tintir (Jatropha multifida Linn.) digunakan masyarakat

sebagai penyembuh luka. Hasil penelitian yang dilakukan di Filipina oleh

Ongtengco (1992) dan di Nigeria oleh Adelosa (2007) menyatakan bahwa getah

jarak tintir memiliki aktivitas antimikroba terhadap Candida albicans, Proteus

spp., Staphylococcus aureus, Citrobacter spp., Morganella morgani, Klebsiella,

Serratia, Aeromonas, Acitobacter, Pseudomonas aeruginosa, dan Eschericia coli.

Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans merupakan

mikroba yang sering menimbulkan penyakit pada manusia. Penelitian ini

bertujuan untuk mengetahui aktivitas antimikroba dari getah jarak tintir yang

tumbuh di Indonesia terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan

Candida albicans serta mengetahui senyawa golongan apa saja yang terkandung

didalamnya.

Uji aktivitas antimikroba ini dilakukan dengan metode difusi sumuran

untuk mengetahui diameter zona hambat getah jarak tintir. Selanjutnya untuk

menentukan KHM (Konsentrasi Hambat Minimal) digunakan metode dilusi cair

dan dibaca kekeruhannya menggunakan Nephelometer. Data diameter zona

hambat diolah menggunakan uji Shapiro-Wilk untuk mengetahui normalitas data

dan diuji menggunakan Kruskal-Wallis dan dilanjutkan dengan analisis Mann-

Whitney. KHM ditentukan berdasarkan konsentrasi terendah yang menunjukkan

adanya penurunan kekeruhan media pada dilusi cair. Uji tabung digunakan untuk

menentukan senyawa golongan apa saja yang terkandung dalam getah jarak tintir.

Penentuan hasil positif dengan pengamatan perubahan warna dan adanya

pengendapan.

Hasil penelitian diketahui bahwa getah jarak tintir memiliki aktivitas

antibakteri terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli dengan nilai

KHM berturut – turut, yaitu 4% dan 7%, serta memiliki aktivitas antijamur

terhadap Candida albicans dengan zona hambat iradikal. Senyawa yang diduga

terkandung dalam getah jarak tintir, yaitu saponin triterpen, tanin, alkaloid, dan

flavonoid.

Kata kunci : getah jarak tintir, Jatropha multifida Linn., Staphylococcus aureus,

Escherichia coli, Candida albicans


xviii

ABSTRACT

Latex of jarak tintir (Jatropha multifida Linn.) has been used as a wound

healer. The result of research that has been done by Ongtengco (1992) in

Philippines and Adelosa (2007) in Negeria is that jarak tintir‟s latex have

antimicrobiac activity against Candida albicans, Proteus spp., Staphylococcus

aureus, Citrobacter spp., Morganella morgani, Klebsiella, Serratia, Aeromonas,

Acitobacter, Pseudomonas aeruginosa, and Eschericia coli. Staphylococcus

aureus, Escherichia coli, and Candida albicans are microbe that often cause

disease to human. This study aims to determine the antimicrobial activity of jarak

tintir;‟s latex against Staphylococcus aureus, Escherichia coli, and Candida

albicans, and as well to knowing what compounds contain in it.

This antimicrobial activity test was carried out by the method of well

diffusion to determine the inhibition zone diameter of jarak tintir‟s latex.

Furthermore, to determine the MIC (Minimum Inhibitory Concentration) used

broth dilution method and the turbidity was read by Nephelometer. Data of

inhibition zone diameter were processed using Shapiro-Wilk to determine the

normality of the data and tested using Kruskal-Wallis followed by Mann-Whitney.

MIC os determined based on the lowest concentration that show decreases in

turbidity on broth media. Phytochemical screening is used to determine what

compounds were contained in jarak tintir‟s latext. Determination of positive

results with observations of color change and precipitation.

The result show thet jarak tintir‟s latex have antimicrobial activity

against Staphylococcus aureus and Escherichia coli with MIC values 4% and

7%, and have antifungal activity against Candida albicans with iradikal zone

inhibition. Compouns that contoined int the jarak tintir‟s latex are saponins

(triterpene), tannins, alkaloids, and flavonoids.

Keyword : latex of jarak tintir, Jatropha multifida Linn., Staphylococcus aureus,

Escherichia coli, Candida albicans


1

BAB I

PENGANTAR

A. Latar Belakang

Dewasa ini, penyakit akibat infeksi bakteri maupun jamur telah banyak

terjadi. Bakteri maupun jamur merugikan yang seringkali ditemukan tersebut

antara lain Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans.

Berbagai penelitian terkait senyawa antimikroba tersebut terus dilakukan karena

sering terjadi resistensi terhadap senyawa yang telah digunakan sebelumnya.

Menurut Priyanto (2010) resistensi antimikroba merupakan keadaan dimana

mikroba tidak lagi dapat dihambat pertumbuhannya maupun dibunuh dengan

antimikroba yang biasa digunakan.

Indonesia memiliki banyak tanaman yang dapat dimanfaatkan sebagai

antimikroba. Penelitian terhadap tanaman-tanaman tersebut telah banyak

dilakukan. Jatropha multifida (jarak tintir) atau lebih dikenal sebagai pohon

yodium telah banyak diteliti aktivitas antimikrobanya. Hasil penelitian terdahulu

menyatakan bahwa jarak tintir memiliki aktivitas antimikroba yang diduga

berasal dari kandungan senyawa saponin, alkaloid, flavonoid, dan tanin pada

batangnya.

Ekstrak metanol dari campuran daun, batang, biji, dan kulit jarak tintir

mampu menghambat pertumbuhan Candida albicans, Staphylococcus aureus,

dan Escherichia coli (Sari, 2011), sedangkan ekstrak metanol dari kulit batang

memiliki aktivitas antimikroba terhadap Candida albicans, Staphylococcus

aureus, Gardnerella vaginalis, Neisseria gonorrhoeae, Proteus mirabilis, dan


2

Pseudomonas aeruginosa dengan nilai Konsentrasi Hambat Minimal (KHM)

berturut-turut, yaitu 0,005%, 0,00125%, 0,0000625%, 0,01%, 0,000156%,

0,00125% (Aiyelaagbe, 2008).

Getah jarak tintir sendiri telah dikenal sebagai penyembuh luka.

Pengujian aktivitas antimikroba dari getah jarak tintir terhadap Staphylococcus

aureus, Pseudomonas aeruginosa, dan Escherichia coli telah dilakukan di

Filipina oleh Ongtengco (1992). Nilai KHM getah jarak tintir pada pengujian

tersebut terhadap Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, dan

Escherichia coli berturut – turut, yaitu 0,098%, 0,78%, dan 1,56%. Berdasarkan

penelitian Adelosa (2007), getah Jarak tintir sendiri yang diujikan sebagai

pengobatan lesi/luka pada mulut anak di Nigeria akibat infeksi Candida albicans

memiliki efek pengeringan luka lebih cepat dari obat Nystatin.

Faktor edafik atau faktor tanah tempat tumbuh yang berbeda dapat

mempengaruhi kandungan senyawa suatu tanaman meskipun spesiesnya sama.

Hal ini terbukti dari hasil penelitian Widyastuti (2003) yang menyatakan bahwa

jenis tanah mempengaruhi kadar minyak atsiri pada tanaman ketumbar

(Coriandrum sativum L.). Oleh karena itu, peneliti tertarik menguji aktivitas

antimikroba getah jarak tintir terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli,

dan Candida albicans meskipun penelitian terhadap bakteri dan jamur yang

sama pernah dilakukan sebelumnya di Filipina dan Nigeria. Selain itu, peneliti

tertarik untuk mengetahui apakah getah jarak tintir juga memiliki kandungan

senyawa golongan saponin, alkaloid, flavonoid, dan tanin seperti yang

terkandung pada batang jarak tintir.


3

1. Perumusan masalah

a. Berapakah diameter zona hambat dan KHM getah jarak tintir terhadap


Candida albicans ATCC 10231?

b. Senyawa golongan apa sajakah yang terkandung dalam getah jarak tintir?

2. Keaslian penelitian

Sejauh pengetahuan penulis, uji aktivitas antimikroba getah jarak

tintir terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida

albicans berbeda dari penelitian yang dilakukan oleh Delia C. Ongtengco di

Manila, Filipina pada tahun 1992 yang berjudul „The In Vitro Antibacterial

Activity of Jatropha multifida Linn. Latex Against Common Bacterial

Wound Isolates‟. Perbedaan penelitian ini terdapat pada metode pengujian,

mikroba uji yang digunakan dan tempat pengambilan bahan tanaman.

Penelitian yang dilakukan Ongtengco menggunakan metode pengujian

Kirby-Bauer Agar-Disk Diffusion, sedangkan pada penelitian aktivitas

antimikroba yang peneliti lakukan menggunakan metode difusi sumuran.

Mikroba uji pada penelitian Ongtengco, yaitu bakteri yang didapat dari

isolat luka, sedangkan penelitian ini menggunakan strain bakteri yang

didapat dari Balai Laboratorium Kesehatan Yogyakarta. Getah jarak tintir

yang digunakan oleh Ongtengco berasal dari Filipina, sedangkan pada

penelitian ini berasal dari Yogyakarta, Indonesia.

Penelitian ini juga berbeda dari pengujian „Daya Hambat Getah

Jarak Cina (Jatropha multifida L.) terhadap Staphylococcus aureus Secara


4

In Vitro‟ yang dilakukan oleh Darmawi (2013). Perbedaan tersebut terletak

pada metode yang digunakan, yaitu Kirby-Bauer Agar-Disc Diffusion

sedangan pada penelitian ini menggunakan metode difusi sumuran.

3. Manfaat penelitian

a. Manfaat teoritis : penelitian ini dapat menambah informasi tentang

aktivitas antimikroba dari getah jarak tintir yang tumbuh di Yogyakarta,

Indonesia terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia

coli ATCC 25922, dan Candida albicans ATCC 10231.

b. Manfaat praktis : penelitian ini dapat digunakan sebagai acuan dalam

penggunaan getah jarak tintir sebagai antimikroba terhadap

Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans.

B. Tujuan

1. Tujuan umum

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antimikroba getah jarak

tintir terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC

25922, dan Candida albicans ATCC 10231.

2. Tujuan khusus

a. Mengetahui diameter zona hambat dan KHM getah jarak tintir terhadap

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922,

dan Candida albicans ATCC 10231.

b. Mengetahui senyawa golongan apa sajakah yang terkandung dalam

getah jarak tintir.


5

BAB II

PENELAAHAN PUSTAKA

A. Jarak tintir (Jatropha multifida Linn.)

Klasifikasi jarak tintir, yaitu :

Kerajaan : Plantae

Subkerajaan : Tracheobionta

Super Divisi : Spermatophyta

Divisi : Magnoliophyta

Kelas : Magnoliopsida

Sub Kelas : Rosidae

Bangsa : Euphorbiales

Suku : Euphorbiaceae

Marga : Jatropha

Jenis : Jatropha multifida Linn. (Anonim, 2012).

Jarak tintir biasanya memiliki tinggi 3-7 kaki, terkadang bisa mencapai

20 kaki. Daunnya berwarna hijau tua, menempel berselang seling pada batang,

toreh berbagi sehingga terbentuk 9-11 lobus. Bunganya kecil berwarna merah,

dengan kelopak sejumlah 5 berwarna merah 2-3 cm, benang sari 8 berwarna

kuning. Buah berwarna kuning saat tua, berbelah tiga, dan tidak membuka

sendiri jika sudah tua. Biji yang dihasilkan berwarna putih dan berminyak

(Begg, 1994).


6

Gambar 1. Tanaman jarak tintir

Jarak tintir disebut juga jarak cina, pohon yodium, jarak gurita dan

balacai batai. Tumbuhan ini memiliki senyawa kimia berupa α-amirin,

kampesterol, 7α-diol, stigmaterol, β-sitosterol, dan HCN. Jarak tintir telah

digunakan sebagai pengobatan untuk luka berdarah, penurun panas, dan anti-

inflamasi (Hariana, 2004).

Hasil penelitian melaporkan bahwa ekstrak metanol dari kulit batang

jarak tintir memiliki aktivitas antimikroba terhadap mikroba penyebab penyakit

kelamin seperti Candida albicans, Staphylococcus aureus, Gardnerella

vaginalis, Neisseria gonorrhoeae, Proteus mirabilis, dan Pseudomonas

aeruginosa dengan nilai Konsentrasi Hambat Minimal (KHM) berturut-turut,

yaitu 0,005%, 0,00125%, 0,0000625%, 0,01%, 0,000156%, 0,00125%

(Aiyelaagbe, 2008).

B. Kandungan Metabolit Sekunder Batang Jarak Tintir

Batang jarak tintir mengandung saponin, tanin, flavonoid, dan alkaloid

(Hariana, 2004). Golongan senyawa tersebut telah diketahui memiliki aktivitas


7

antimikroba sehingga diharapkan getah jarak tintir juga mengandung saponin,

tanin, flavonoid, dan alkaloid.

1. Saponin

Saponin adalah glikosida dengan berat molekul besar yang terikat

dengan aglikon triterpen atau steroid. Kebanyakan saponin bersifat sabun,

bersifat hemolitik, memiliki rasa pahit dan toksik terhadap ikan (piscicidal).

Berdasarkan jenis sapogeninnya (aglikon) saponin dibagi menjadi tiga kelas,

yaitu triterpen, steroid, dan steroid alkaloid. Semua saponin mengikat satu

atau lebih gula pada aglikonnya (Hostetmann, 2005). Mekanisme saponin

sebagai antibakteri adalah dengan menurunkan tegangan permukaan sehingga

mengakibatkan naiknya permeabilitas atau kebocoran sel dan mengakibatkan

keluarnya senyawa intraseluler (Robinson (cit., Nuria, 2009)).

Saponin triterpen memiliki aktivitas antifungi yang kuat tetapi

aktivitas antibakterinya rendah. Aktivitas antibakteri dari saponin jenis ini

lemah terhadap Gram positif dan tidak memiliki efek pada Gram negatif.

Mekanisme aksi saponin terhadap fungi, yaitu dengan membentuk kompleks

dengan sterol pada membran plasma yang akan merusak membran sel dan

akan berujung pada kematian sel (Hostetmann, 2005). Saponin steroid sering

digunakan sebagai starting material dalam sintesis cortisone, steroid diuretik,

vitamin D, dan cardiac glycosides. Contoh saponin jenis ini yang sudah

terkenal, yaitu digitoksin (Evans, 2009).


8

2. Tanin

Tanin adalah senyawa fenolik dengan berat molekul 500-3000 Da

dan memiliki kemampuan mengendapkan protein dari suatu larutan. Tanin

larut dalam air, alkohol, gliserol, dan aseton (Evans, 2009). Tanin

dikategorikan dalam tiga grup yaitu tanin terkondensasi, tanin terhidrolisis,

dan tanin kompleks. Tanin terkondensasi disebut juga proanthocyanidin dan

merupakan flavonoid polimerik atau oligomerik yang terdiri dari unit flavan-

3-ol (catechin). Tanin kompleks adalah tanin yang unit catechinnya terikat

pada unit gallotannin ataupun ellagitannin (Vermerris, 2008).

Menurut Robinson (cit., Nuria, 2009) Sebagai antimikroba, tanin

dapat menghambat enzim reverse transkriptase dan DNA topoisomerase

sehingga sel bakteri tidak dapat terbentuk. Gilman (cit., Sari, 2011)

menyebutkan bahwa tanin dan flavonoid merupakan senyawa fenol yang

bekerja sebagai antibakteri dengan menyebabkan kerusakan pada dinding sel.

Ion H+ dari senyawa fenol akan menyerang gugus polar (gugus fosfat)

sehingga molekul fosfolipid akan terurai menjadi gliserol, asam karboksilat,

dan asam fosfat. Hal ini mengakibatkan fosfolipid tidak mampu

mempertahankan bentuk membran sel mengakibatkan membran sel bocor dan

bakteri terhambat pertumbuhannya dan bahkah kematian.

3. Flavonoid

Flavonoid adalah zat aktif yang terdapat pada tanaman dan memiliki

struktur kimia C6-C3-C6 dengan tiap bagian C6 merupakan rantai alifatik

(Rompas, 2012). Flavonoid merupakan golongan terbesar dari senyawa


9

polifenol. Flavonoid dapat dikelompokkan berdasarkan keragaman pada

rantai C3 menjadi flavonol, flavon, isoflavon, flavanon, flavanonol, katekin,

leukoantosianidin, antosianin, khalkon, dan auron. Mekanisme kerja

flavonoid sebagai antibakteri adalah dengan membentuk senyawa kompleks

dengan protein ekstraseluler sehingga merusak membran sel bakteri yang

diikuti dengan keluarnya senyawa intraseluler. (Robinson, 1995).

4. Alkaloid

Alkaloid merupakan senyawa organik yang terdapat dalam tanaman,

bersifat basa, dan struktur kimianya memiliki sistem lingkar heterosiklik

dengan nitrogen sebagai hetero atomnya. Alkaloid tersusun atas karbon,

hidrogen, nitrogen, dan oksigen, tetapi tidak semua alkaloid mengandung

keempat unsur tersebut. Ada pula alkaloid lain yang mengandung unsur selain

yang telah disebutkan (Sumardjo, 2009).

Beberapa cara untuk mengidentifikasi alkaloid yaitu dengan

mikroskopik kristal, kelarutan dalam berbagai jenih pelarut, spektrum

absorbsi, sifat farmakologinya, maupun dengan reaksi warna. Beberapa

pereaksi yang sering digunakan untuk mengendapkan alkaloid, yaitu pereaksi

Mayer (merkuri kalium iodida), pereaksi Marme (kadmium kalium iodida),

pereaksi Hager (asam pikrat pekat), pereaksi Wagner (larutan I2 dalam kalium

iodida), pereaksi Dragendorff (bismut kalium iodida), pereaksi Sonnenschein

(asam fosfomolibdat), dan pereaksi Scheiber (asam fosfotungstrat)

(Sumardjo, 2009).


10

Alkaloid bekerja sebagai antibakteri dengan cara menghambat sintesis protein

bakteri, mengakibatkan terdenaturasinya protein dan asam nukleat sehingga

sel bakteri rusak dan berujung pada kematian sel (Oktaviani, 2013).

C. Getah Jarak Tintir

Getah jarak tintir didapat dengan mematahkan maupun menyayat

tangkai daun dan melukai kulit batang. Getah jarak tintir berwarna kuning

sampai kuning kemerahan. Getah jarak tintir dikenal dapat membantu

penyembuhan luka sayat dan beberapa penelitian telah dilakukan untuk

membuktikannya secara ilmiah (Juniarti, 2012).

Getah jarak tintir mengandung tioglikosida yang menghasilkan minyak

bersifat iritan dan memiliki efek abortifacient Oleh karena itu, penggunaannya

secara oral harus dihindari (Begg, 1994). Labaditin merupakan senyawa yang

diisolasi dari getah jarak tintir dan memiliki efek antibakteri terhadap bakteri

Gram positif tetapi tidak pada bakteri Gram negatif (Barbosa, 2010). Getah

Jarak tintir sendiri telah diujikan sebagai pengobatan lesi/luka pada mulut anak

di Nigeria akibat infeksi Candida albicans dan efeknya lebih cepat dari obat

Nystatin (Adesola, 2007).

Pengujian aktivitas antimikroba dari getah jarak tintir terhadap bakteri

yang diisolasi dari luka telah dilakukan di Filipina tahun 1992 oleh Ongtengco.

Hasilnya, getah jarak tintir memiliki daya hambat sedang terhadap Proteus spp.,

Staphylococcus aureus, dan Citrobacter spp. dan memiliki daya hambat lemah

terhadap Morganella morgani, Klebsiella, Serratia, Aeromonas, Acitobacter,

Pseudomonas aeruginosa, dan Escherichia coli. Kriteria yang digunakan untuk


11

menentukan kekuatan daya hambat pada penelitian Ongtengco ini, yaitu daya

hambat kuat jika diameter zona hambat ≥ 18 mm, sedang jika 12-16 mm, dan

lemah jika 7-11 mm dengan diameter paper disk 6,35.

D. Bakteri Gram Positif dan Gram Negatif

Berdasarkan pewarnaan Gram, bakteri dibedakan menjadi dua

golongan, tergantung dari reaksi dinding sel terhadap tinta safranin atau kristal

violet, menjadi Gram positif dan Gram negatif. Bakteri yang tetap berwarna

ungu dengan pewarnaan oleh kristal violet disebut bakteri Gram positif,

sedangkan bakteri yang warna ungunya hilang jika dibilas dengan alkohol, dan

berwarna merah muda setelah penambahan safranin disebut bakteri Gram

negatif. Jamur dan ragi tidak dapat diwarnai dengan pewarnaan gram dan

biasanya diidentifikasi dengan pewarnaan pada jaringan yang terinfeksi (James,

2006).

Gambar 2. Dinding sel bakteri Gram positif dan Gram negatif (Generasibiologi, 2012)


12

Bakteri Gram positif sebagian besar dinding selnya mengandung

peptidoglikan yang menjerat warna violet. Bakteri Gram negatif memiliki lebih

sedikit peptidoglikan yang terletak antara membran plasma dan suatu membran

bagian luar. Zat warna violet yang digunakan dalam pewarnaan Gram dapat

terbilas dari bakteri Gram negatif (Campbell, 2003). Contoh bakteri Gram

positif, yaitu Staphylococcus aureus dan Clostridium perfringens, sedangkan

contoh bakteri Gram negatif, yaitu Escherichia coli, dan Psuedomonas

aeruginosa (James, 2006).

E. Staphylococcus aureus

Staphylococcus aureus merupakan bakteri Gram positif dan diantara

spesies Staphylococcus lain merupakan patogen utama bagi manusia.

Staphylococcus aureus merupakan bentuk koagulase-positif dan hal ini yang

membedakannya dengan spesies lain. Staphylococcus mudah menjadi resisten

terhadap antibiotik sehingga menimbulkan masalah dalam pengobatannya.

Bakteri Staphylococcus aureus dapat menyebabkan penyakit kulit (jerawat,

pioderma, dan impetigo), pneunomia, meningitis, empidema, endokarditis, dan

sepsis Staphylococcus aureus tumbuh paling cepat pada suhu 350 C dan

membentuk pigmen pada suhu 20-250 C. Koloni yang dihasilkan berwarna abu –

abu sampai kuning emas tua. Koloni Staphylococcus aureus berbentuk bundar,

halus, menonjol dan berkilau (Jawetz, 1996).


13

Gambar 3. Bakteri Staphylococcus aureus (Extension, 2010)

Kemampuan patogenik strain Staphylococcus aureus merupakan

gabungan dari faktor-faktor ekstraseluler, toksin – toksin yang dihasilkan, dan

sifat invasif dari bakteri itu sendiri. Staphylococcus aureus menghasilkan

koagulase yaitu suatu protein mirip enzim yang dapat menggumpalkan plasma

yang telah diberi oksalat atau sitrat dengan bantuan suatu faktor yang terdapat

dalam banyak serum. Koagulase ini terdapat pada permukaan dinding sel dan

terikat secara nonenzimatik dengan fibrinogen sehingga bakteri dapat

beragregasi. Selain itu, koagulasi dapat mengendapkan fibrin pada permukaan

dinding sel sehingga mungkin mengubah pola fogositosis oleh sel – sel fagosit.

Bakteri yang membentuk koagulase dianggap mempunyai potensi menjadi

invasif (Jawetz, 1996).

Staphylococcus aureus juga memiliki beberapa toksin seperti

luekosidin, eksfoliatif, toksin sindroma syok toksin-1 (TSST-1), dan

enterotoksin. Leukosidin dapat mematikan sel darah putih pada banyak hewan

yang terkena, tetapi perannya dalam patogenesis pada manusia belum jelas

karena mampu difagositosis. Toksin ini mengakibatkan deskuamasi pada


14

sindroma lepuh kulit stafilokukus. TSST-1 menyebabkan demam, syok, dan

ruam kulit deskuamatif. Enterotoksin bertanggung jawab pada keracunan

makanan. Enterotoksin dihasilkan ketika Staphylococcus aureus tumbuh pada

makanan yang mengandung karbohidrat dan protein. Efek muntah yang

dihasilkan mungkin akibat perangsangan sistem saraf pusat (pusat muntah)

setelah toksin bekerja pada reseptor – reseptor saraf dalam usus (Jawetz, 1996).

F. Escherichia coli

Escherichia coli adalah bakteri Gram negatif yang merupakan flora

usus normal berperan terhadap fungsi dan nutrisi normal. Bakteri ini dapat

menyebabkan diare dan mudah menjadi patogen jika berada di luar usus. Tempat

yang sering terkena infeksi, yaitu saluran kemih dan tempat lain di rongga perut

(Jawetz, 1996).

Gambar 4. Bakteri Escherichia coli (Psmicrographs, 2010)

Secara umum, mekanisme Escherichia coli menyebabkan diare yaitu

dengan melekat pada reseptor glikoprotein atau glikolipid lalu memproduksi

beberapa senyawa toksik yang merusak sel – sel usus dan mengganggu fungsi

usus (Behrman, 1998).


15

Escherichia coli digolongkan menjadi EPEC, ETEC, EHEC, EIEC, dan

EAEC berdasarkan ciri khas sifat – sifat virulensinya dan setiap grup

menimbulkan penyakit melalui mekanisme yang berbeda- beda. Berikut ini

adalah penggolongan Escherichia coli menurut Jawetz (1996):

a) EPEC (E. coli Enteropatogenik) adalah penyebab diare pada anak. EPEC

melekat pada sel mukosa usus kecil dan infeksi tersebut mengakibatkan

diare cair yang dapat sembuh sendiri tetapi dapat juga menjadi kronik.

b) ETEC (E. coli Enterotoksigenik) adalah penyebab tersering dari traveler's

diarrhea dan diare pada bayi di negara berkembang

c) EHEC (E. coli Enterohemoragik) menghasilkan verotoksin karena memiliki

efek sitotoksik pada sel Vero, yaitu suatu sel ginjal dari monyet hijau

Afrika. EHEC berhubungan dengan kolitis hemoragik, suatu diare yang

berat, anemia hemolitik mikroangiopatik, dan trombositopenia. Pencegahan

dapat dilakukan dengan memasak daging sapi sampai matang.

d) EIEC (E. coli Enteroinvasif) menyebabkan penyakit yang mirip dengan

shigelosis.

e) EAEC (E. coli Enteroagregatif) menyebabkan diare akut dan kronik pada

negara berkembang.

G. Candida albicans

Kelompok jamur yang menyebabkan penyakit pada manusia, yaitu :

1. Mould (jamur filamentosa) tumbuh sebagai filamen panjang yang berjalin

membentuk miselium. Contohnya, yaitu dermatofita yang mampu mencerna


16

keratin dan menyebabkan beberapa penyakit seperti infeksi kuku, kulit, dan

rambut.

2. Ragi sejati, merupakan jamur bulat atau oval uniseluler. Contohnya, yaitu

Cryptococcus neoformans yang menyebabkan infeksi paru pada pasien

immunocompromised.

3. Jamur menyerupai ragi. Contohnya adalah Candida albicans yang merupakan

flora normal pada usus, mulut, dan vagina. Jamur ini dapat menyebabkan

beberapa penyakit seperti sariawan mulut, vaginitis, endokarditis, dan

septikemia (Neal, 2006).

C. albicans merupakan jamur penyebab kandidiasis pada kulit, kuku,

selaput lendir, dan organ dalam. Pada manusia sehat, C. albicans sering

ditemukan pada rongga mulut, saluran cerna, saluran pernafasan bagian atas,

mukosa vagina dan dibawah kuku sebagai saprofit atau komensal yang tidak

menyebabkan penyakit. Jamur ini merupakan jamur oportunistik yang akan

menyebabkan penyakit saat tubuh mengalami penurunan sistem imun (Susanto,

2008).

Gambar 5. Jamur Candida albicans (Bioweb, 2008)


17

Patogenesis Candida albicans terjadi dalam dua tahap, yaitu adhesi dan

invasi. Tahap pertama infeksi Candida albicans pada tubuh manusia yaitu

pelekatan (adhesi). Adhesi dilakukan dengan melekatkan dinding sel dengan sel

inang yang selanjutnya mengaktivasi mitogen activated protein kinase (Map-

kinase). Map-kinase diperlukan untuk pertumbuhna hifa invasif dan

perkembangan biofilm pada tahap selanjutnya (Kusumaningtyas, 2005).

Setelah adhesi selanjutnya tahap invasi. Hifa Candida albicans

melakukan penetrasi ke dalam permukaan epitelium melewati cell junction.

Invasi yang ditandai dengan kolonisasi tersebut dipercepat dengan keberadan

serum atau saliva. Candida albicans lalu mensekresi proteinse aspartat (SAPs)

yang bertanggung jawab terhadap perusakan pada kulit (Kusumaningtyas, 2005).

C. albicans pada media SDA (Sabouraud Dextrose Agar) dan inkubasi

suhu kamar akan berbentuk koloni lunak berwarna coklat dan berbau seperti

ragi. C. albicans meragikan glukosa dan maltosa menghasilkan asam dan gas

serta tidak bereaksi dengan laktosa (Jawetz, 1996).

H. Antijamur

Antijamur berdasarkan struktur kimianya dapat digolongkan menjadi

golongan azol, golongan polien, dan golongan lain. Contoh antijamur golongan

azol yaitu imidazol dan triazol, golongan polien yaitu amfoterisin B dan nystatin,

dan golongan lain contohnya, yaitu flusitosin, griseofulfin dan terbinafin

(Priyanto, 2010).

Nystatin merupakan antijamur golongan polien yang digunakan sebagai

terapi infeksi Candida albicans pada kulit dan membran mukosa. Nystatin tidak


18

dipakai sebagai antijamur oral karena bersifat toksik. Pemakaian Nystatin untuk

infeksi Candida albicans di usus tidak berbahaya karena Nystatin tidak dapat

diabsorbsi di usus (Neal, 2006).

Nystatin bekerja dengan mengikat ergosterol atau asam lemak penyusun

membran sel pada dinding sel jamur. Terikatnya ergosterol menyebabkan sel

jamur rusak dan lisis. Antijamur golongan ini hanya bersifat toksisitas selektif

pada jamur saja karena manusia tidak memiliki ergosterol melainkan kolesterol

(Priyanto, 2010).

I. Antibakteri

Spektrum antibakteri dibagi menjadi dua, yaitu berspektrum sempit

(narrow spectrum) dan berspektrum luas (broad spectrum). Antibakberi

berspektrum sempit jika hanya efektif melawan bakteri dalam jumlah terbatas

atau satu golongan saja misalnya hanya Gram positif. Jika antibakteri efektif

melawan beberapa jenis atau golongan bakteri, misalnya Gram positif dan

negatif maka antibakteri tersebut berspektrum luas (Priyanto, 2010).

Intensitas antibakteri dibedakan menjadi bakterisidal dan bakteriostatik.

Bakterisidal jika antibakteri dapat membunuh bakteri, sedangkan bakteriostarik

jika hanya bisa menghambat atau menghentikan pertumbuhan bakteri. Jika

antibakteri yang diberikan bersifat bakteriostatik maka antibodi tubuh yang

berperan membunuh bakteri (Priyanto, 2010).

Mekanisme kerja antibakteri ada beberapa, yaitu :

A. Penghambat sintesis dinding sel


19

Dinding sel bakteri berfungsi melindungi membran sitoplasma, memelihara

bentuk sel, dan mencegah lisis katrena tekanan osmosis. Jika dinding sel

rusak atau tidak terbentuk sempurna maka sel dapat lisis atau tidak dapat

membelah. Sel lisis terjadi karena cairan disekitar yang hipoosmosis

berdifusi ke dalam sel menyebabkan pembengkakan dan diikuti lisis.

Contoh antibakteri yang bekerja menghambat sintesis dinding bakteri, yaitu

golongan penisilin, sefalosporin, dan polipeptida.

B. Penghambat sintesis protein

Proses sintesis protein bakteri terjadi di ribosom. Antibakteri penghambat

sintesis protein biasanya bersifat toksisitas selektif karena ribosom bakteri

dan manusia berbeda. Bakteri memiliki ribosom 30 S dan 50 S sedangkan

manusia 40 S dan 60 S. Antibakteri ini akan mengikat ribosom 30 S atau 50

S atau keduanya sehingga sintesis protein bakteri terganggu. Contoh

antibakteri yang sudah digunakan, yaitu golongan aminoglikosida,

tetrasiklin, kloramfenikol, klindamisin, dan makrolida.

C. Antagonis asam folat

Asam folat digunakan bakteri untuk sintesis DNA atau RNA. Tidak seperti

manusia, bakteri tidak dapat mengabsorpsi asam folat dari makanannya.

Untuk mencukupi kebutuhannya asam folat disintesis sendiri menggunakan

paraamino benzoic acid (PABA). Antibakteri antagonis asam folat memiliki

struktur yang mirip dengan PABA sehingga dapat secara antagonis

kompetitif menduduki tempat bergabungnya PABA dengan asam

dihidropteroad dalam mensitesis asam terahidrofolat yang akan digunakan


20

untuk membentuk asam folat. Contoh antibakteri yang sudah digunakan,

yaitu golongan sulfonamid (Priyanto, 2010).

Salah satu antibakteri yang berasal dari tanaman yaitu timol. Timol

merupakan salah satu komponen minyak atsiri golongan fenol yang berkerja

sebagai antibakteri dengan cara mendenaturasi protein sel bakteri, sehingga

terjadi perubahan struktur sel dan dapat menyebabkan kebocoran membran sel.

Akibatnya, komponen penting dalam sel akan keluar dan pertumbuhan sel

terhambat bahkan sampai terjadi kematian sel (Nio, 2004).

J. Pengukuran Aktivitas Antimikroba

Pengukuran aktivitas antimikroba dapat dilakukan dengan dua cara,

yaitu metode difusi dan dilusi. Metode difusi menggunakan kertas cakram atau

sumuran. Senyawa yang akan diuji aktivitas antimikrobanya diteteskan ke kertas

cakram atau ke dalam sumuran, kemudian dihitung luas zona hambat disekitar

kertas cakram atau sumuran. Metode dilusi dilakukan dengan cara mencampur

media pertumbuhan cair atau padat dengan mikroba dan senyawa antimikroba

yang ingin diuji, lalu diamati tingkat kekeruhannya (Edber, 1986).

K. Landasan Teori

Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans

merupakan mikroba penyebab penyakit yang sering terjadi. Beberapa penyakit

yang diakibatkan Staphylococcus aureus, yaitu penyakit kulit, pneunomia,

meningitis, empidema, endokarditis, dan sepsis. Escherichia coli menyebabkan

penyakit seperti infeksi saluran kemih, dan diare. Candida albicans


21

menyebabkan candidiasis yang bisa berkembang menjadi berbahaya. Penemuan

antimikroba terhadap senyawa tersebut terus dilakukan karena adanya resistensi

antimikroba.

Jarak tintir merupakan tumbuhan yang getahnya digunakan masyarakat

sebagai pengobatan luka bakar maupun iris. Batang jarak tintir mengandung

senyawa saponin, alkaloid, flavonoid, dan tanin yang dapat berperan sebagai

senyawa antimikroba. Penelitian terkait aktivitas antibakteri getah jarak tintir

terhadap bakteri yang ditemukan pada luka telah dilakukan di Filipina oleh

Ongtengco pada tahun 1992. Hasil penelitian menyatakan bahwa getah jarak

tintir memiliki aktifitas antimikroba terhadap Staphylococcus aureus,

Pseudomonas aeruginosa, dan Escherichia coli dengan nilai KHM berturut-

turut, yaitu 0,098%, 0,78%, dan 1,56%. Penelitian Adelosa (2007) di Nigeria

menyatakan bahwa getah jarak tintir lebih cepat efeknya dalam mengobati lesi

pada mulut anak akibat infeksi Candida albicans dibandingkan obat Nystatin.

Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan sebelumnya getah jarak

tintir terbukti merupakan zat yang potensial sebagai antimikroba. Faktor tempat

tumbuh tanaman dapat mempengaruhi kadar kandungan senyawa suatu tanaman

sehingga aktivitas antimikroba jarak tintir yang tumbuh di Indonesia mungkin

saja berbeda dengan yang tumbuh di Nigeria dan Filipina. Hal ini terbukti dari

hasil penelitian Widyastuti (2003) yang menyatakan bahwa jenis tanah

mempengaruhi kadar minyak atsiri pada tanaman ketumbar (Coriandrum

sativum L.).


22

Pengujian aktivitas antimikroba dapat dilakukan dengan metode dilusi

dan difusi. Metode difusi untuk mengetahui diameter zona hambat sedangkan

metode dilusi untuk mengetahui KHM suatu senyawa antimikroba.

L. Hipotesis

Getah jarak tintir memiliki aktifitas antimikroba terhadap


Candida albicans ATCC 10231 serta dapat ditentukan diameter zona hambat

dan KHM. Golongan senyawa yang diduga terkandung dalam getah jarak tintir,

yaitu saponin, alkaloid, flavonoid, dan tanin.


23

BAB III

METODOLOGI PENELITIAN

A. Jenis Rancangan Penelitian

Penelitian tentang Uji Aktivitas Antimikroba getah jarak tintir terhadap


Candida albicans ATCC 10231 merupakan jenis penelitian eksperimental murni

dengan menggunakan rancangan acak lengkap pola searah.

B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional

1) Variabel penelitian

a. Variabel utama

1) Variabel bebas : getah jarak tintir konsentrasi 12,5 % v/v, 25 % v/v,

50 % v/v, dan 100 % v/v. Seri konsentrasi pada penentuan KHM.

2) Variabel tergantung : diameter zona hambat getah jarak tintir

terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan

Candida albicans serta kekeruhan media pada dilusi cair.

b. Variabel pengacau

1) Variabel pengacau terkendali : waktu inkubasi 24 jam, suhu

inkubasi 350C, volume media dan suspensi mikroba, serta

kekeruhan suspensi mikroba (setara dengan Standard Mac Farland

II).

2) Variabel pengacau tak terkendali : umur tanaman jarak tintir


24

2) Definisi operasional

a. Getah jarak tintir adalah getah yang didapat pada pagi hari dengan

melukai tangkai daun sampai getah tidak menetes pada tanaman jarak

tintir yang tumbuh di Universitas Sanata Dharma.

b. Diameter zona hambat adalah zona radikal (jernih) dan iradikal (masi ada

pertumbuhan bakteri tetapi lebih sedikit dibandingkan pertumbuhan

disekitarnya) disekitar lubang sumuran yang berisi getah jarak tintir

dengan berbagai konsentrasi.

c. Difusi sumuran adalah metode yang digunakan untuk mengetahui

diameter zona hambat getah jarak tintir dengan cara melubangi media

dengan pelubang sumuran diameter lima milimeter dan mengisinya

dengan senyawa uji lalu diinkubasi selama 24 jam pada suhu 350C.

d. Dilusi merupakan metode yang digunakan untuk menentukan KHM

dengan cara memasukkan masing – masing satu mililiter senyawa uji dan

bakteri pada media cair lalu diinkubasi selama 24 dan 48 jam pada suhu

350C lalu dibaca kekeruhannya menggunakan Nephelometer.

e. KHM adalah konsentrasi terkecil getah jarak tintir yang masih bisa

menghambat pertumbuhan mikroba uji.

f. Media adalah tempat tumbuh mikroba dan untuk bakteri Staphylococcus

aureus, dan Escherichia coli menggunakan media Mueller-Hinton Agar

(MHA) dan Mueller-Hinton Broth (MHB), sedangkan untuk jamur

Candida albicans menggunakan media Potato Dextrose Agar (PDA) dan

Brain Heart Infusion (BHI).


25

g. Kontrol positif adalah senyawa yang telah teruji memiliki efek

antimikroba terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan

Candida albicans. Timol 0,2 % digunakan sebagai kontrol positif untuk

Staphylococcus aureus dan Escherichia coli, sedangkan Nystatin 100.000

IU sebagai kontrol positif untuk Candida albicans.

h. Waktu inkubasi adalah waktu yang diperlukan Staphylococcus aureus,

Escherichia coli, dan Candida albicans untuk tumbuh, yaitu 24 jam.

i. Suhu inkubasi merupakan suhu optimum untuk pertumbuhan

Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans, yaitu

pada 350

C.

C. Bahan Penelitian

Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini, yaitu getah Jarak

tintir yang diambil dari Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta, bakteri

Staphylococcus aureus ATCC 25923, dan Escherichia coli ATCC 25922, serta

jamur Candida albicans ATCC 10231 dari Balai Laboratorium Kesehatan,

Yogyakarta, aquadest, Aquadest steril, timol 0,2 % dari Labotatorium Farmasi

Biologi Universitas Gadjah Mada, Nystatin® 100.000 IU Lapi, media Mueller-

Hinton Agar (MHA), Mueller-Hinton Broth (MHB) Oxoid, Potato Dextrose

Agar (PDA) Oxoid, Brain Heart Infusion (BHI) Oxoid.

D. Alat atau Instrumen Penelitian

Alat yang digunakan dalam penelitian ini, yaitu alat – alat gelas (Pyrex)

seperti erlemeyer, tabung reaksi, cawan petri, dan gelas beker, gelas ukur, labu

ukur, Bunsen, flakon, ball pipet, pipet ukur, jarum ose, pelubang sumuran


26

(diameter 5 mm), mikropipet (Pipetman), jangka sorong, autoklave (tipe STMN

Y.222 100VAC), oven (Memmert), inkubator (Binder), class II BSC (Biological

Safety Cabinet) ESCO, BD PhoenixSpecTM

Nephelometer.

E. Tata Cara Penelitian

1. Determinasi tanaman

Determinasi tanaman dilakukan dengan menggunakan daun, bunga, dan

buah/biji yang dilakukan secara benar menggunakan kunci determinasi

berdasarkan acuan, di Laboratorium Kebun Tanaman Obat Fakultas Farmasi

Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.

2. Pengumpulan bahan

Getah jarak tintir didapat dari Universitas Sanata Dharma dengan melukai

tangkai daun yang tidak terlalu muda dan tua, dan getah ditampung sampai

tidak menetes lagi. Pengambilan getah jarak cina dilakukan pagi hari jam 7

sebelum pengujian.

3. Skrining fitokimia getah jarak tintir

Larutan stok dibuat dengan melarutkan dua mililiter getah jarak tintir

menggunakan aquadest hingga 10 ml.

a. Uji pendahuluan

Sebanyak dua mililiter larutan stok ditambah 10 ml aquadest,

dipanaskan selama 30 menit di atas air mendidih. Larutan disaring

melalui kapas. Suatu larutan berwarna kuning sampai merah

menunjukkan adanya senyawa yang mengandung kromofor


27

(flavonoida, antrakinon) dengan gugus hidrofilik (gula, asam, fenolat).

Pada penambahan larutan kalium hidroksida LP (beberapa tetes) warna

menjadi lebih intensif (Dwiatmaka, 2012).

b. Uji tanin

Sebanyak dua mililiter larutan stok ditambah 10 ml aquadest,

dipanaskan 30 menit dalam penangas air mendidih dan disaring. Lima

mililiter filtrat ditambahkan larutan natrium klorida 2% sebanyak satu

mililiter, bila terjadi suspensi atau endapan disaring melalui kertas

saring, kemudian filtrat ditambah larutan gelatin 1% sebanyak lima

mililiter. Terbentuknya endapan menunjukkan adanya tanin

(Dwiatmaka, 2012).

c. Uji saponin

Sebanyak dua mililiter larutan stok ditambah 10 ml aquadest, ditutup

dan dikocok kuat – kuat selama 30 detik. Tabung dibiarkan dalam

posisi tegak selama 30 menit. Terbentuknya buih setinggi lebih dari tiga

centimeter dari permukaan cairan menunjukkan adanya saponin.

Uji saponin tersebut jika didapat hasil positif dilanjutkan dengan

menentukan jenis saponin. Dua mililiter larutan stok ditambah 10 ml

kloroform, digojog dan diambil lapisan bawahnya. Lalu ditambah

beberapa tetes asam asetat anhidrat dan asam sulfat pekat.

Terbentuknya cincin warna merah sampai ungu menunjukkan adanya

kandungan saponin triterpen sedangkan warna biru sampai hijau

menunjukkan saponin steroid (Depkes RI, 1995).


28

d. Uji flavonoida

Sebanyak satu mililiter larutan stok ditambah satu mililiter etanol 95%

P lalu ditambahkan lagi dengan 0,1 Gram serbuk magnesium P dan 10

ml asam klorida pekat P. Warna kuning menunjukkan senyawa flavon,

kalkon, dan auron. Sedangkan warna jingga menunjukkan flavonoid

(Depkes RI, 1995).

e. Uji alkaloida

Sebanyak dua mililiter larutan stok ditambah asam klorida 1% sebanyak

10 ml, panaskan selama 30 menit dalam penangas air mendidih.

Suspensi disaring dengan kapas ke dalam tabung reaksi A dan B sama

banyak. Larutan A ditambah pereaksi Dragendroff 3 tetes dan larutan B

ditambahkan pereaksi Mayer 3 tetes. Terbentuknya endapan pada kedua

larutan tersebut menunjukkan adanya alkaloida (Dwiatmaka, 2012).

f. Uji antrakinon

Sebanyak dua mililiter larutan stok ditambah 10 ml kalium hidroksida

0,5 N dan satu mililiter larutan hidrogen peroksida, lalu dididihkan 2

menit. Setelah dingin suspensi disaring melalui kapas. Filtrat sebanyak

lima mililiter ditambah asam asetat glasial 10 tetes sampai pH 5, lalu

ditambahkan toluena 10 ml. Lapisan atas sebanyak lima mililiter

diambil menggunakan pipet dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi,

kemudian ditambah 0,5 – satu mililiter kalium hidroksida 0,5 N. Warna

merah pada lapisan air (basa) menunjukkan adanya senyawa antrakinon

(Dwiatmaka, 2012).


29

4. Uji aktivitas antimikroba

a. Persiapan konsentrasi getah jarak tintir

Getah jarak tintir diambil sesuai perhitungan dan dimasukkan ke dalam

labu ukur lalu ditambahkan aquadest steril hingga tanda sehingga

didapat konsentrasi 100%, 50%, 25%, dan 12,5%. Perlakuan tersebut

dilakukan secara aseptis untuk mengurangi kemungkinan kontaminasi.

b. Pembuatan kultur mikroba uji

Kultur murni Staphylococcus aureus, Escherichia coli dan Candida

albicans dalam media agar miring diambil satu ose dan diinokulasikan

pada media cair yang sesuai. Media cair yang digunakan untuk

Staphylococcus aureus dan Escherichia coli digunakan MHB, dan

media yang digunakan untuk Candida albicans yaitu BHI. Selanjutnya

media iinkubasi selama 24 jam pada suhu 350 C. Kekeruhan bakteri

disamakan dengan Standard Mac Farland II (Kepadatan populasi

bakteri 6.108 CFU/ml).

c. Pengukuran diameter zona hambat

10 ml media agar dituang ke dalam cawan petri sebagai base. Setelah

mengeras ditambahkan 20 ml media yang telah dicampur satu mililiter

kultur mikroba uji dan biarkan mengeras. Cara tersebut untuk

memudahkan pembuatan sumuran. Setelah mengeras media dilubangi

dengan pelubang sumuran diameter 5 mm sebanyak 6 lubang. 1 untuk

kontrol negatif, yaitu aquadest steril, 1 lubang kontrol positif, dan 4

untuk tingkatan konsentrasi getah jarak tintir. Senyawa uji yang


30

dimasukkan ke dalam lubang sumuran sebanyak 50 µl dan ditunggu

kering. Selanjutnya media diinkubasi terbalik dan dihitung diameter

zona hambat menggunakan jangka sorong.

d. Penentuan KHM

Satu mililiter kultur mikroba uji dan satu mililiter getah jarak tintir

diinokulasikan pada 4 ml media cair lalu diukur kekeruhannya

menggunakan Nephelometer. Media diinkubasi di dalam inkubator dan

diukur kembali kekeruhannya pada jam ke 24 dan 48 jam. KHM

ditentukan dari konsentrasi terendah yang tidak memperlihatkan adanya

pertambahan kekeruhan media.

F. Tata Cara Analisis Hasil

Hasil positif uji tabung sebagai skrining fitokimia ditentukan dengan

perubahan warna dan atau terjadinya endapan dan diamati secara visual.

Data zona hambat yang didapat dalam satuan mm dan ditentukan

normalitasnya menggunakan uji Shapiro-Wilk. Selain normalitas dihitung juga

variansi datanya sebagai syarat uji one way ANOVA. Jika memiliki distribusi

normal dan variansi data yang sama maka digunakan uji one way ANOVA untuk

mengetahui apakah ada perbedaan antara dua kelompok atau lebih. Selanjutnya,

diteruskan dengan uji Post Hoc untuk mengetahui kelompok mana saja yang

memiliki perbedaan. Jika salah satu syarat uji one way ANOVA tidak terpenuhi

maka digunakan uji Kruskal-Wallis dan dilanjutkan dengan analisis Mann-

Whitney.


31

Data pada uji dilusi cair untuk menentukan KHM dihitung rata-rata dan

simpangan deviasinya (SD) lalu dilihat mulai konsentrasi ke berapa terjadi

penurunan kekeruhan dan ditentukan sebagai KHM.


32

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Determinasi tanaman

Determinasi tanaman dilakukan untuk meyakinkan bahwa tanaman

yang getahnya digunakan dalam penelitian ini benar – benar jarak tintir.

Determinasi tanaman dilakukan di Laboratorium Kebun Tanaman Obat Fakultas

Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta berdasarkan acuan Flora of Java

(Backer, 1965 ). Ciri- ciri jarak tintir yaitu daun berbentuk bangun perisai

(peltatus) atau bulat (orbicularis), lebar 15-35 cm, bertoreh berbagi sampai lebih

dari setengah daun menjadi beberapa bagian. Tangkai daun (petiole) 15-35 cm,

solid; daun penumpu (stipula) terbagi menjadi beberapa, panjang dan tidak

mengeras. Calyx (kelopak) merah tua; daun mahkota (petalae) berbentuk oval,

merah muda, panjang 6-7 mm; buah biasanya obovoid, dengan 3 belahan

vertikal, 3 ruang, berwarna kuning ketika matang. Dari hasil determinasi

diketahui bahwa tanaman yang getahnya digunakan dalam penelitian benar –

benar jarak tintir (Jatropha multifida Linn.).

Gambar 6. Tanaman jarak tintir


33

B. Pengumpulan Getah Jarak Tintir

Getah jarak tintir diambil dari tanaman jarak tintir di lingkungan

Kampus III Universitas Sanata Dharma. Getah jarak tintir yang didapat berwarna

orange cair (gambar getah dapat dilihat pada lampiran halaman 110).

Pengambilan getah dilakukan pada pagi hari karena getah yang didapat lebih

banyak. Ada beberapa cara pengambilan getah, yaitu mematahkan tangkai daun,

melukai tangkai daun dan melukai batang daun. Peneliti menggunakan cara

pematahan tangkai daun dan melukai tangkai daun.

Pematahan tangkai daun digunakan jika ingin mendapatkan getah lebih

banyak, tetapi cara ini tidak boleh terlalu sering digunakan karena daun tanaman

bisa habis. Proses melukai tangkai daun dapat dilakukan dengan menggunakan

pisau atau cutter sehingga getah mengalir dari luka goresan. Hasil yang didapat

dengan cara ini lebih sedikit daripada mematahkan tangkai daun tetapi bisa

dilakukan berkali – kali karena daun tanaman masih ada. Pada penelitian ini

menggunakan cara melukai tangkai daun dan sesekali menggunakan cara

mematahkan tangkai daun saat ingin mendapat getah dalam jumlah yang lebih

banyak.

C. Skrining Fitokimia Getah Jarak Tintir

Batang jarak tintir sendiri mengandung senyawa tanin, saponin,

flavonoid, dan alkaloid. Skrining fitokimia bertujuan untuk mengetahui apakah

getah jarak tintir memiliki golongan senyawa yang sama dengan batangnya.

Beberapa senyawa yang ingin diketahui keberadaannya antara lain tanin,

saponin, flavonoid, dan alkaloid. Sebelum dilakukan uji tabung, getah jarak tintir


34

diencerken menggunakan aquadest menjadi larutan stok. Getah jarak tintir dapat

larut dalam aquadest sehingga digunakan aquades sebagai pelarut. Larutan stok

dibuat dengan melarutkan dua mililiter getah jarak tintir menggunakan aquadest

hingga 10 ml (gambar hasil skrining fitokimia dapat dilihat pada lampiran

halaman 111).

1. Uji pendahuluan

Uji pendahuluan bertujuan untuk mengetahui adanya senyawa yang

mengandung kromofor seperti senyawa flavonoid dan antrakinon dengan gugus

hidrofilik (gula, asam, fenolat). Hasil positif uji pendahuluan yaitu warna

senyawa yang berubah menjadi kuning sampai merah dan dengan penambahan

larutan KOH (kalium hidroksida) warna menjadi lebih intensif. Hasil uji

pendahuluan yang peneliti lakukan yaitu terbentuk warna kuning kemerahan dari

warna awal kuning bening dan setelah penambahan kalium hidroksida warna

menjadi merah pekat (intensif). Hal tersebut berarti bahwa getah jarak tintir

mengandung golongan senyawa seperti flavonoid dan antrakinon dengan gugus

hidrofilik (gula, asam, fenolat). Oleh karena adanya kemungkinan adanya

kandungan antrakinon dalam getah jarak tintir maka peneliti menguji juga

kandungan antrakinon dalam getah jarak tintir.

2. Uji tanin

Tanin merupakan pengkelat logam, dan dapat mengendapkan protein.

Uji tanin dilakukan dengan menambahkan natrium klorida 2%, jika pada

pengujian terjadi suspensi maka harus disaring. Filtrat yang didapat ditambah


35

larutan gelatin 1% lalu didiamkan beberapa saat sampai terbentuk endapan yang

menunjukkan adanya tanin.

Gelatin merupakan senyawa yang mengandung protein sehingga jika

ditambahkan pada larutan yang mengandung tanin maka tanin akan

mengendapkan protein tersebut. Reaksi pengendapan ini lebih cepat dengan

penambahan natrium klorida (Prasetyo, 2013). Tanin dapat mengikat atau

mengendapkan protein melalui ikatan hidrogen, ikatan ionik, hidrofobik, dan

ikatan kovalen, tetapi ikatan hidrogen merupakan ikatan yang paling dominan.

Ikatan hidrogen terjadi antara gugus hidroksi fenol pada tanin dengan gugus

amida dan asam amino bebas (Swain, 1965). Hasil uji tanin yaitu adanya

endapan setelah penambahan gelatin sehingga disimpulkan bahwa getah jarak

tintir mengandung tanin. Ikatan antara tanin dengan protein yang mengakibatkan

terbentuknya endapan dapat dilihat pada gambar 7.

Gambar 7. Ikatan antara tanin dengan protein (Lee, 2014).


36

3. Uji saponin

Uji saponin dilakukan dengan menambahkan aquadest ke dalam tabung

berisi larutan stok lalu digojog kuat – kuat selama beberapa detik detik.

Terbentuknya buih dengan tinggi lebih dari 3 cm yang bertahan selama lebih

dari 30 menit menandakan adanya tanin. Sebelum penarikan kesimpulan

ditunggu 30 menit supaya buih yang terbentuk murni karena saponin dan bukan

karena penggojogan yang kuat.

Saponin mempunyai gugus hidrofob dan hidrofil sehingga menyerupai

surfaktan/sabun yang dapat menurunkan tegangan permukaan antara udara/gas

dengan air sehingga terbentuk emulsi gas dalam air (Prasetyo, 2013). Uji tanin

yang dilakukan terbentuk buih setinggi 4 cm yang bertahan selama 30 menit

lebih berarti bahwa getah jarak tintir mengandung saponin.

Uji saponin dilanjutkan untuk mengetahui jenis saponin yaitu triterpen

atau steroid. Larutan stok ditambahkan kloroform untuk menyari triterpen dan

steroid, hasilnya terbentuk dua lapisan dan kloroform akan berada dibagian

bawah tabung reaksi. Lapisan bagian atas dipisahkan dengan asumsi tidak

terkandung senyawa yang dituju lagi. Selanjutnya ditambahkan asam asetat

anhidrat dan asam sulfat pekat (pereaksi Liebermann-Burchard) dan hasil positif

ditandai dengan terbentuknya warna hijau sampai biru (steroid) dan merah

sampai ungu (triterpen). Hasil uji triterpen/steroid menunjukkan terbentuknya

warna merah jingga sehingga dapat disimpulkan bahwa getah jarak tintir

mengandung saponin jenis triterpen.


37

Mekanisme reaksi terpenoid dengan pereaksi Liebermann-Burchard

diawali dengan proses asetilasi gugus hidroksil menggunakan asam asetat

anhidrida. Gugus asetil akan lepas sehingga terbentuk ikatan rangkap.

Selanjutnya, terjadi pelepasan hidrogen sehingga senyawa mengalami resonansi

yang bertindak sebagai elektrofil atau karbokation. Serangan karbokation

mengakibatkan adisi elektrofilik yang diikuti pelepasan hidrogen mengakibatkan

perpanjangan konjugasi sehingga muncul warna merah – ungu. Reaksi terpenoid

dengan pereaksi Liebermann-Burchard menghasilkan warna merah-ungu dapat

dilihat pada gambar 8.

Gambar 8. Reaksi terpenoid dengan pereaksi Liebermann-Burchard (Siadi, 2012)


38

4. Uji flavonoid

Pada uji flavonoid ditambahkan etanol untuk menyari flavonoid dari

getah jarak tintir. Reaksi antara flavonoid yang merupakan senyawa fenol

dengan magnesium dalam suasana asam membentuk warna kuning atau jingga.

Hasil uji flavonoid menunjukkan warna kuning yang berangsur – angsur berubah

menjadi jingga sehingga disimpulkan bahwa getah jarak tintir mengandung

flavonoid. Mekanisme terbentuknnya warna ungu/jingga pada uji flavonoid

dapat dilihat pada gambar 9.

Gambar 9. Mekanisme reaksi antara flavonoid dengan magnesium (Raharjo, 2010)

5. Uji alkaloida

Penambahan asam klorida pada uji alkaloid bertujuan untuk mengubah

alkaloid menjadi garam alkaloid yang larut air. Pereaksi yang digunakan dalam

uji alkaloid ini yaitu, Mayer, Dragendroff dan asam pikrat. Hasil positif jika

terbentuk endapan. Pada uji alkaloid getah jarak tintir didapat hasil adanya

endapan pada tabung dengan penambahan pereaksi Dragendroff dan asam pikrat

sehingga disimpulkan bahwa getah jarak tintir mengandung alkaloid. Endapan


39

pada penambahan pereaksi Dragendroff berwarna coklat bening sedangkan pada

penambahan pereaksi asam pikrat terbentuk endapan coklat kehitaman.

Alkaloid mengandung atom hidrogen yang dapat bereaksi dengan

logam K+ pereaksi Mayer (kalium tertaiodomerkurat(II)) dan pereaksi

Dragendorff (Kalium tertaiodobismutat) membentuk kompleks kalium - alkaloid

yang mengendap. Mekanisme reaksinya dapat dilihat pada gambar 10 dan 11.

Gambar 10. Mekanisme reaksi alkaloid dengan pereaksi Mayer (Marliana, 2005)

Gambar 11. Mekanisme reaksi alkaloid dengan pereaksi Dragendorff (Marliana, 2005)

6. Uji antrakinon

Uji antrakinon dilakukan dengan menambahkan 10 ml kalium

hidroksida dan hidrogen peroksida lalu dididihkan. Setelah dingin ditambahkan

asam asetat glasial dan toluen. Lapisan atas pada tabung uji diambil dan

ditambahkan kalium hidroksida. Hasil positif yaitu adanya warna merah. Hasil


40

uji antrakinon getah jarak tintir tidak memberikan warna merah sehingga dapat

disimpulkan bahwa getah jarak tintir tidak mengandung antrakinon.

Hasil keseluruhan uji tabung pada skrining fitokimia yang telah

dilakukan dapat dilihat pada tabel I.

Tabel I. Hasil uji tabung pada skrining fitokimia getah jarak tintir

No. Pengujian Hasil

1 Uji pendahuluan +

2 Uji tanin +

3 Uji saponin +

4 Uji triterpen/steroid +

(triterpen)

5 Uji flavonoid +

6 Uji alkaloid +

7 Uji antrakinon -

Kelemahan penelitian ini, yaitu pada skrining fitokimia yang dilakukan

hanya sebatas uji tabung dan tidak menggunakan standar sehingga tidak bisa

langsung menyatakan bahwa benar-benar terkandung senyawa tersebut diatas

pada getah jarak tintir. Untuk meyakinkan bahwa senyawa tersebut benar –

benar terkandung dalam getah jarak tintir, peneliti menyarankan dilakukannya

KLT (Kromatografi Lapis Tipis). Menurut Sudjadi (2010) kelebihan KLT yaitu

senyawa yang dituju akan dipisahkan dahulu sebelum diidentifikasi sehingga

senyawa yang teridentifikasi lebih spesifik. Indikasi pemisahan komponen dapat

dilakukan dengan pereaksi warna, fluoresensi, atau dengan radiasi menggunakan

sinar ultraviolet.


41

D. Uji Potensi Antimikroba Getah Jarak Tintir Secara Difusi Sumuran

Uji potensi antimikroba bertujuan untuk mengetahui apakah getah jarak

tintir memiliki daya hambat terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli,

dan Candida albicans. Pengujian antimikroba ini menggunakan metode difusi

sumuran dan teknik aseptis seperti penggunaan bunsen dan mengerjakan

pengujian dalam BSC. Teknik aseptis dilakukan supaya mengurangi

kemungkinan kontaminasi.

Metode difusi untuk menentukan diameter zona hambat sendiri ada 2

yaitu sumuran dan paper disc. Prinsip metode difusi sumuran, yaitu senyawa uji

yang berada di lubang sumuran akan berdifusi ke sekelilingnya dan menghambat

pertumbuhan bakteri maupun jamur pada media. Prinsip metode paper disc,

yaitu senyawa uji diserap oleh paper disc dan akan berdifusi ke sekelilingnya.

Senyawa uji yang memiliki efek antibakteri maupun antifungi akan memberikan

zona jernih disekitar lubang sumuran ataupun paper disc.

Pemilihan metode yang digunakan yaitu berdasarkan kepolaran

senyawa yang akan diuji. Metode sumuran dapat digunakan untuk senyawa polar

maupun nonpolar, sedangkan paper disc hanya bisa untuk senyawa yang polar.

Getah jarak tintir merupakan senyawa polar sehingga bisa menggunakan metode

sumuran maupun paper disc. Penelitian mengenai aktivitas antibakteri getah

jarak tintir terhadap bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923 yang dilakukan

oleh Darmawi (2013) menggunakan metode difusi paper disc, sedangkan pada

penelitian ini menggunakan metode difusi sumuran. Peneliti menggunakan


42

metode yang berbeda karena ingin membandingkan apakan dengan metode yang

berbeda akan memberikan hasil yang berbeda.

Mikroba uji yang digunakan yaitu Staphylococcus aureus ATCC

25923, Escherichia coli ATCC 25922, dan Candida albicans ATCC 10231.

ATCC sendiri adalah kepanjangan dari American Type Culture Collection.

Sistem penomoran ini berguna untuk membedakan strain mikroba pada jenis

mikroba yang sama. Jenis mikroba yang sama bisa memiliki nomor ATCC yang

berbeda karena memiliki gen yang berbeda. Strain ATCC pada bakteri maupun

jamur ini digunakan sebagai referensi dengan mencocokkan sifat- sifat/

karakteristik mikrobanya. Bakteri Escherichia coli ATCC 25922 memiliki

antigen serotype 06 biotype 1, Candida albicans ATCC 10231 memiliki antigen

serotype A, sedangkan pada Staphylococcus aureus ATCC 25923 belum

diketahui.

Media yang digunakan pada uji antibakteri Staphylococcus aureus dan

Escherichia coli yaitu MHB (Mueller-Hinton Broth) dan MHA (Mueller-Hinton

Agar), sedangkan media yang digunakan sebagai uji antifungi Candida albicans

yaitu PDA (Potato Dextrose Agar) dan BHI (Brain Heart Infusion). Media uji

yang digunakan harus bisa menumbuhkan bakteri atau jamur uji. Berdasarkan

orientasi, bakteri dan jamur uji dapat tumbuh merata pada media uji.

Langkah awal pengujian yaitu menumbuhkan bakteri pada media MHB

dan jamur pada media BHI selama 24 jam. Media uji akan bertambah keruh

dibandingkan semula karena adanya pertumbuhan mikroba. Kekeruhan media

dibaca menggunakan alat Nephelometer dan disetarakan dengan Standard Mac


43

Farland II (Kepadatan populasi bakteri 6.108 CFU/ml). Penyetaraan ini bertujuan

supaya bakteri dan jamur yang ditambahkan selalu sama jumlahnya.

Nephelometer merupakan alat yang digunakan untuk mengukur

pertumbuhan mikroba melalui kekeruhan media. Satuan yang digunakan, yaitu

CFU (colony forming unit) per ml. Prinsip alat tersebut hampir mirip dengan

spektrofotometri di mana sinar yang datang akan mengenai objek dan sinar yang

diteruskan akan dibaca oleh detektor dan diolah menjadi output data dalam

satuan CFU/ml.

Gambar 12. BD PhoenixSpecTM

Nephelometer (Miclev, 2014)

Suspensi bakteri dan jamur yang telah setara dengan Standard Mac

Farland II diinokulasikan ke dalam media yang akan digunakan dalam difusi

sumuran. Untuk bakteri uji digunakan media MHA sedangkan untuk jamur

digunakan media PDA. Satu cawan petri berisi 10 ml agar base tanpa mikroba

uji dan 20 ml media dengan penambahan satu mililiter suspensi mikroba uji.

Penggunaan agar base ini bertujuan untuk memudahkan pembuatan lubang

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TER

plagiat merupakan tindakan tidak terpujidan yeni natalia atas kebersamaan, dan kebaikan kalian...

Documents