-
UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA GETAH JARAK TINTIR (Jatrophamultifida Linn.) TERHADAP Staphylococcus aureus ATCC 25923,Escherichia coli ATCC 25922, dan Candida albicans ATCC 10231
Skripsi
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu SyaratMemperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh:Puspita Sari
NIM : 108114153
FAKULTAS FARMASIUNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA2014
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
i
UJI AKTIVITAS ANTIMIKROBA GETAH JARAK TINTIR (Jatropha
multifida Linn.) TERHADAP Staphylococcus aureus ATCC 25923,
Escherichia coli ATCC 25922, dan Candida albicans ATCC 10231
Skripsi
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh:
Puspita Sari
NIM : 108114153
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2014
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
ii
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
iii
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
iv
Hiduplah sedemikian rupa seolah-olah
akan mati esok. Belajarlah seolah-olah kau
hidup selamanya.
Mahatma Gandhi
Kupersembahkan karya sederhanaku ini untuk :
Tuhan Yesus Kristus penolongku yang hebat.
Bapak Partijo dan Ibu Lasmi Puji Asih,kedua orang tuaku yang hebat.
Kakak – kakakku terkasih Darmiasih, Jati Nugroho, dan Sugianto.
Semua orang yang telah mengisi hidupku, dan Almamaterku.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
v
PRAKATA
Puji syukur kepada Tuhan Yang Maha Baik, karena atas penyertaan dan
pertolonganNya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Uji Aktivitas
Antimikroba Getah Jarak Tintir (Jatropha multifida Linn.) Terhadap
Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922, dan
Candida albicans ATCC 10231”.
Skripsi ini disusun sebagai syarat memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S.
Farm.) di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma. Penyusunan skripsi ini
dapat terselesaikan karena bantuan dan kerja sama dari banyak pihak. Oleh karena
itu, penulis ingin mengucapkan teima kasih yang mendalam kepada:
1. Bapak Ipang Djunarko, M.Sc., Apt., selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Sanata Dharma.
2. Bapak Prof. Dr. C. J. Soegihardjo, Apt. selaku Dosen Pembimbing dan
penguji yang telah rela meluangkan waktu untuk memberikan bimbingan,
saran, dan dukungan hingga skripsi ini terselesaikan.
3. Damiana Sapta Candrasari, M.Sc. dan Dr. Erna Tri Wulandari M.Si., Apt.
selaku Dosen Penguji yang telah meluangkan waktu untuk menguji selama
ujian tertutup dan terbuka serta untuk kritik dan sarannya yang membangun.
4. Ibu C.M. Ratna Rini Nastiti, M. Pharm., Apt., selaku Ketua Program Studi
dan Dosen Pembimbing Akademik atas bantuan yang telah diberikan selama
perkuliahan dan penyusunan skripsi.
5. Ibu Maria Dwi Jumpowati, S.Si., yang telah bersedia meluangkan waktu
untuk berdiskusi mengenai mikrobiologi.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
vi
6. Seluruh staf Dosen Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma karena telah
membagikan ilmu kepada penulis.
7. Bapak Mukminin, Bapak Wagiran, Mas Andri, Mas Sigit, seluruh laboran
dan karyawan Universitas Sanata Dharma.
8. Orang tuaku, dua orang luar biasa dalam hidupku, terima kasih atas cinta,
semangat, dukungan, dan kepercayaannya sehingga semua terasa lebih indah.
9. Ketiga kakakku terkasih (Darmiasih, Jati Nugroho, dan Sugianto) atas segala
dukungan, doa, dan penghiburan yang kalian berikan.
10. Sahabatku Trifonia Rosa, Ranny Oktaviani, Gilda Todingbua, Yohanes Ivan,
dan Yeni Natalia atas kebersamaan, dan kebaikan kalian selama ini.
11. Teman – teman Kos Agatha : Liana Risha yang selalu mengingatkan tentang
skripsi, Rosa Kurniasih, Rosalia Suryaningtyas, Gabriella Septiana, Maria
Karina, Gracia Jenny, Maria Magdalena, terima kasih atas dukungan dan
kebersamaannya selama ini.
12. Teman – teman FKK B 2010 atas kebersamaannya selama ini.
13. Semua pihak yang telah banyak membantu penyelesaian skripsi ini yang tidak
dapat penulis sebutkan satu persatu.
Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini masih jauh dari sempurna.
Oleh karena itu, kritik dan saran yang membangun akan sangat membantu penulis
dalam menyempurnakan skripsi ini. Penulis berharap semoga skripsi ini berguna
dikemudian hari.
Penulis
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
vii
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
viii
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
ix
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL .......................................................................................... i
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING................................................. ii
HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................ iii
HALAMAN PERSEMBAHAN ........................................................................ iv
PRAKATA ......................................................................................................... v
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ............................................................ vii
LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA
ILMIAH UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS ........................................... viii
DAFTAR ISI ...................................................................................................... ix
DAFTAR TABEL .............................................................................................. xiii
DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... xiv
DAFTAR LAMPIRAN ...................................................................................... xv
INTISARI ........................................................................................................... xvii
ABSTRACT ......................................................................................................... xviii
BAB I. PENGANTAR ....................................................................................... 1
A. Latar Belakang ..................................................................................... 1
1. Perumusan masalah ......................................................................... 3
2. Keaslian penelitian .......................................................................... 3
3. Manfaat penelitian .......................................................................... 4
B. Tujuan Penelitian ................................................................................. 4
BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA ............................................................... 5
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
x
A. Jarak tintir (Jatropha multifida Linn.) .................................................. 5
B. Kandungan Metabolit Sekunder Batang Jarak Tintir .......................... 6
1. Saponin ............................................................................................ 7
2. Tanin ............................................................................................... 8
3. Flavonoid ......................................................................................... 8
4. Alkaloid ........................................................................................... 9
C. Getah Jarak Tintir ................................................................................ 10
D. Bakteri Gram Positif dan Gram Negatif .............................................. 11
E. Staphylococcus aureus ......................................................................... 12
F. Escherichia coli ................................................................................... 14
G. Candida albicans ................................................................................. 15
H. Antijamur ............................................................................................. 17
I. Antibakteri ........................................................................................... 18
J. Pengukuran aktivitas antimikroba ....................................................... 20
K. Landasan Teori .................................................................................... 20
L. Hipotesis .............................................................................................. 22
BAB III. METODOLOGI PENELITIAN ......................................................... 23
A. Jenis Rancangan Penelitian ............................................................... 23
B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional ................................... 23
1. Variabel penelitian ........................................................................ 22
2. Definisi operasional ...................................................................... 24
C. Bahan Penelitian ................................................................................ 25
D. Alat atau Instrumen Penelitian .......................................................... 25
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
xi
E. Tata Cara Penelitian .......................................................................... 26
1. Determinasi tanaman .................................................................... 26
2. Pengumpulan bahan ..................................................................... 26
3. Skrining Fitokimia Getah Jarak Tintir .......................................... 26
a. Uji pendahuluan ....................................................................... 26
b. Uji tanin .................................................................................... 27
c. Uji saponin ............................................................................... 27
d. Uji flavonoida .......................................................................... 28
e. Uji alkaloida ............................................................................. 28
f. Uji antrakinon .......................................................................... 28
4. Uji aktivitas antimikroba .............................................................. 29
a. Persiapan konsentrasi getah jarak tintir .................................... 29
b. Pembuatan kultur mikroba uji .................................................. 29
c. Pengukuran zona hambat ......................................................... 29
d. Penentuan KHM (Konsentrasi Hambat Minimum) ................. 30
F. Tata cara Analisis Hasil ..................................................................... 30
BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN .......................................................... 32
A. Determinasi tanaman ......................................................................... 32
B. Pengumpulan Getah Jarak Tintir ....................................................... 33
C. Skrining Fitokimia Getah Jarak Tintir .............................................. 33
1. Uji pendahuluan ............................................................................ 34
2. Uji tanin ........................................................................................ 34
3. Uji saponin .................................................................................... 36
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
xii
4. Uji flavonoid ................................................................................. 38
5. Uji alkaloida .................................................................................. 38
6. Uji antrakinon ............................................................................... 39
D. Uji Potensi Antimikroba Getah Jarak Tintir Secara Difusi Sumuran 41
1. Uji potensi antibakteri getah jarak tintir terhadap Staphylococcus
aureus ATCC 25923 ..................................................................... 45
2. Uji potensi antibakteri getah jarak tintir terhadap Escherichia
coli ATCC 25922 .......................................................................... 47
3. Uji potensi antibakteri getah jarak tintir terhadap Candida
albicans ATCC 10231 .................................................................. 50
E. Penentuan Konsentrasi Hambat Miniman (KHM) Getah Jarak
Tintir terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923, dan
Escherichia coli ATCC 25922 secara Dilusi Cair ............................. 51
1. Penentuan KHM getah jarak tintir terhadap Staphylococcus
aureus ATCC 25923 ..................................................................... 52
2. Penentuan KHM getah jarak tintir terhadap Escherichia coli
ATCC 25922 ................................................................................. 53
F. Mekanisme Antimikroba Golongan Senyawa yang Terkandung Dalam Getah Jarak Tintir .................................................................. 55
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ........................................................... 57
A. Kesimpulan .......................................................................................... 57
B. Saran .................................................................................................... 57
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 58
LAMPIRAN ....................................................................................................... 62
BIOGRAFI PENULIS ....................................................................................... 118
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
xiii
DAFTAR TABEL
Halaman
Tabel I. Hasil uji tabung pada skrining fitokimia getah jarak tintir ........... 40
Tabel II. Diameter zona hambat getah jarak tintir terhadap bakteri
Staphylococcus aureus ATCC 25923 ........................................... 46
Tabel III. Diameter zona hambat getah jarak tintir terhadap Escherichia
coli ATCC 25922 .......................................................................... 48
Tabel IV. Diameter zona hambat getah jarak tintir terhadap bakteri
Candida albicans ATCC 10231 ................................................... 50
Tabel V. Kekeruhan media pada dilusi cair bakteri Staphylococcus
aureus ATCC 25923 ATCC 25923 .............................................. 52
Tabel VI. Kekeruhan media pada dilusi cair bakteri Escherichia coli
ATCC 25922 ................................................................................. 54
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
xiv
DAFTAR GAMBAR
Halaman
Gambar 1. Tanaman jarak tintir ...................................................................... 6
Gambar 2. Dinding sel bakteri Gram Positif dan Gram Negatif .................... 11
Gambar 3. Bakteri Staphylococcus aureus ..................................................... 13
Gambar 4. Bakteri Escherichia coli ................................................................ 14
Gambar 5. Jamur Candida albicans ............................................................... 16
Gambar 6. Tanaman jarak tintir ...................................................................... 32
Gambar 7. Ikatan antara tanin dengan protein ................................................ 35
Gambar 8. Reaksi terpenoid dengan pereaksi Liebermann-Burchard ............ 37
Gambar 9. Mekanisme reaksi antara flavonoid dengan magnesium .............. 38
Gambar 10. Mekanisme reaksi alkaloid dengan pereaksi Mayar ..................... 36
Gambar 11. Mekanisme reaksi alkaloid dengan pereaksi Dragendorff ........... 36
Gambar 12. BD PhoenixSpecTM
Nephelometer ............................................... 43
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
xv
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
Lampiran 1. Surat Determinasi Tanaman Jarak Tintir (Jatropha multifida
Linn.) ........................................................................................... 63
Lampiran 2. Sertifikat Hasil Uji Staphylococcus aureus ATCC 25923 .......... 64
Lampiran 3. Sertifikat Hasil Uji Escherichia coli ATCC 25922 .................... 65
Lampiran 4. Sertifikat Hasil Uji Candida albicans ATCC 10231 .................. 66
Lampiran 5. Data diameter zona hambat (mm) getah jarak tintir terhadap
Escherichia coli ATCC 25922..................................................... 67
Lampiran 6. Hasil uji statistik diameter zona hambat (mm) getah jarak tintir
terhadap Escherichia coli ............................................................ 67
Lampiran 7. Hasil uji Mann-Whitney kelompok konsentrasi pada bakteri
Escherichia coli ATCC 25922 .................................................... 80
Lampiran 8. Data diameter zona hambat (mm) getah jarak tintir terhadap
Staphylococcus aureus ATCC 25923 ......................................... 80
Lampiran 9 Hasil uji statistik diameter zona hambat getah jarak tintir
terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923 .......................... 81
Lampiran 10. Hasil uji Mann-Whitney kelompok konsentrasi pada bakteri
Staphylococcus aureus ATCC 25923 ......................................... 93
Lampiran 11. Data diameter zona hambat (mm) getah jarak tintir terhadap
Candida albicans ATCC 10231 ................................................. 94
Lampiran 12. Hasil uji statistik diameter zona hambat (mm) getah jarak tintir
terhadap Candida albicans ATCC 10231 ................................... 94
Lampiran 13. Hasil uji Mann-Whitney kelompok konsentrasi pada Candida
albicans ATCC 10231 ................................................................ 107
Lampiran 14. Data pengukuran kekeruhan media pada dilusi cair bakteri
Staphylococcus aureus ATCC 25923 ......................................... 108
Lampiran 15. Data pengukuran kekeruhan media pada dilusi cair bakteri 109
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
xvi
Escherichia coli ATCC 25922 ....................................................
Lampiran 16. Foto Tanaman Jarak Tintir (Jatropha multifida Linn.) dan
Getah Jarak Tintir ........................................................................ 110
Lampiran 17. Foto Hasil Skrining Fitokimia Getah Jarak Tintir (Jatropha
multifida Linn.) ........................................................................... 111
Lampiran 18. Foto seri konsentrasi getah jarak tintir, kontrol positif, dan
kontrol negatif ............................................................................. 113
Lampiran 19. Foto hasil uji aktivitas antibakteri getah jarak tintir terhadap
Staphylococcus aureus secara difusi sumuran ............................ 114
Lampiran 20. Foto hasil uji aktivitas antibakteri getah jarak tintir terhadap
Escherichia coli secara difusi sumuran ...................................... 115
Lampiran 21. Foto hasil uji aktivitas antifungi getah jarak tintir terhadap
Candida albicans secara difusi sumuran .................................... 116
Lampiran 22. Foto pengujian aktivitas antibakteri getah jarak jarak tintir
secara dilusi cair terhadap Staphylococcus aureus dan
Escherichia coli untuk mendapatkan KHM (Konsentrasi
Hambat Minimal) ....................................................................... 117
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
xvii
INTISARI
Getah jarak tintir (Jatropha multifida Linn.) digunakan masyarakat
sebagai penyembuh luka. Hasil penelitian yang dilakukan di Filipina oleh
Ongtengco (1992) dan di Nigeria oleh Adelosa (2007) menyatakan bahwa getah
jarak tintir memiliki aktivitas antimikroba terhadap Candida albicans, Proteus
spp., Staphylococcus aureus, Citrobacter spp., Morganella morgani, Klebsiella,
Serratia, Aeromonas, Acitobacter, Pseudomonas aeruginosa, dan Eschericia coli.
Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans merupakan
mikroba yang sering menimbulkan penyakit pada manusia. Penelitian ini
bertujuan untuk mengetahui aktivitas antimikroba dari getah jarak tintir yang
tumbuh di Indonesia terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan
Candida albicans serta mengetahui senyawa golongan apa saja yang terkandung
didalamnya.
Uji aktivitas antimikroba ini dilakukan dengan metode difusi sumuran
untuk mengetahui diameter zona hambat getah jarak tintir. Selanjutnya untuk
menentukan KHM (Konsentrasi Hambat Minimal) digunakan metode dilusi cair
dan dibaca kekeruhannya menggunakan Nephelometer. Data diameter zona
hambat diolah menggunakan uji Shapiro-Wilk untuk mengetahui normalitas data
dan diuji menggunakan Kruskal-Wallis dan dilanjutkan dengan analisis Mann-
Whitney. KHM ditentukan berdasarkan konsentrasi terendah yang menunjukkan
adanya penurunan kekeruhan media pada dilusi cair. Uji tabung digunakan untuk
menentukan senyawa golongan apa saja yang terkandung dalam getah jarak tintir.
Penentuan hasil positif dengan pengamatan perubahan warna dan adanya
pengendapan.
Hasil penelitian diketahui bahwa getah jarak tintir memiliki aktivitas
antibakteri terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli dengan nilai
KHM berturut – turut, yaitu 4% dan 7%, serta memiliki aktivitas antijamur
terhadap Candida albicans dengan zona hambat iradikal. Senyawa yang diduga
terkandung dalam getah jarak tintir, yaitu saponin triterpen, tanin, alkaloid, dan
flavonoid.
Kata kunci : getah jarak tintir, Jatropha multifida Linn., Staphylococcus aureus,
Escherichia coli, Candida albicans
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
xviii
ABSTRACT
Latex of jarak tintir (Jatropha multifida Linn.) has been used as a wound
healer. The result of research that has been done by Ongtengco (1992) in
Philippines and Adelosa (2007) in Negeria is that jarak tintir‟s latex have
antimicrobiac activity against Candida albicans, Proteus spp., Staphylococcus
aureus, Citrobacter spp., Morganella morgani, Klebsiella, Serratia, Aeromonas,
Acitobacter, Pseudomonas aeruginosa, and Eschericia coli. Staphylococcus
aureus, Escherichia coli, and Candida albicans are microbe that often cause
disease to human. This study aims to determine the antimicrobial activity of jarak
tintir;‟s latex against Staphylococcus aureus, Escherichia coli, and Candida
albicans, and as well to knowing what compounds contain in it.
This antimicrobial activity test was carried out by the method of well
diffusion to determine the inhibition zone diameter of jarak tintir‟s latex.
Furthermore, to determine the MIC (Minimum Inhibitory Concentration) used
broth dilution method and the turbidity was read by Nephelometer. Data of
inhibition zone diameter were processed using Shapiro-Wilk to determine the
normality of the data and tested using Kruskal-Wallis followed by Mann-Whitney.
MIC os determined based on the lowest concentration that show decreases in
turbidity on broth media. Phytochemical screening is used to determine what
compounds were contained in jarak tintir‟s latext. Determination of positive
results with observations of color change and precipitation.
The result show thet jarak tintir‟s latex have antimicrobial activity
against Staphylococcus aureus and Escherichia coli with MIC values 4% and
7%, and have antifungal activity against Candida albicans with iradikal zone
inhibition. Compouns that contoined int the jarak tintir‟s latex are saponins
(triterpene), tannins, alkaloids, and flavonoids.
Keyword : latex of jarak tintir, Jatropha multifida Linn., Staphylococcus aureus,
Escherichia coli, Candida albicans
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
1
BAB I
PENGANTAR
A. Latar Belakang
Dewasa ini, penyakit akibat infeksi bakteri maupun jamur telah banyak
terjadi. Bakteri maupun jamur merugikan yang seringkali ditemukan tersebut
antara lain Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans.
Berbagai penelitian terkait senyawa antimikroba tersebut terus dilakukan karena
sering terjadi resistensi terhadap senyawa yang telah digunakan sebelumnya.
Menurut Priyanto (2010) resistensi antimikroba merupakan keadaan dimana
mikroba tidak lagi dapat dihambat pertumbuhannya maupun dibunuh dengan
antimikroba yang biasa digunakan.
Indonesia memiliki banyak tanaman yang dapat dimanfaatkan sebagai
antimikroba. Penelitian terhadap tanaman-tanaman tersebut telah banyak
dilakukan. Jatropha multifida (jarak tintir) atau lebih dikenal sebagai pohon
yodium telah banyak diteliti aktivitas antimikrobanya. Hasil penelitian terdahulu
menyatakan bahwa jarak tintir memiliki aktivitas antimikroba yang diduga
berasal dari kandungan senyawa saponin, alkaloid, flavonoid, dan tanin pada
batangnya.
Ekstrak metanol dari campuran daun, batang, biji, dan kulit jarak tintir
mampu menghambat pertumbuhan Candida albicans, Staphylococcus aureus,
dan Escherichia coli (Sari, 2011), sedangkan ekstrak metanol dari kulit batang
memiliki aktivitas antimikroba terhadap Candida albicans, Staphylococcus
aureus, Gardnerella vaginalis, Neisseria gonorrhoeae, Proteus mirabilis, dan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
2
Pseudomonas aeruginosa dengan nilai Konsentrasi Hambat Minimal (KHM)
berturut-turut, yaitu 0,005%, 0,00125%, 0,0000625%, 0,01%, 0,000156%,
0,00125% (Aiyelaagbe, 2008).
Getah jarak tintir sendiri telah dikenal sebagai penyembuh luka.
Pengujian aktivitas antimikroba dari getah jarak tintir terhadap Staphylococcus
aureus, Pseudomonas aeruginosa, dan Escherichia coli telah dilakukan di
Filipina oleh Ongtengco (1992). Nilai KHM getah jarak tintir pada pengujian
tersebut terhadap Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, dan
Escherichia coli berturut – turut, yaitu 0,098%, 0,78%, dan 1,56%. Berdasarkan
penelitian Adelosa (2007), getah Jarak tintir sendiri yang diujikan sebagai
pengobatan lesi/luka pada mulut anak di Nigeria akibat infeksi Candida albicans
memiliki efek pengeringan luka lebih cepat dari obat Nystatin.
Faktor edafik atau faktor tanah tempat tumbuh yang berbeda dapat
mempengaruhi kandungan senyawa suatu tanaman meskipun spesiesnya sama.
Hal ini terbukti dari hasil penelitian Widyastuti (2003) yang menyatakan bahwa
jenis tanah mempengaruhi kadar minyak atsiri pada tanaman ketumbar
(Coriandrum sativum L.). Oleh karena itu, peneliti tertarik menguji aktivitas
antimikroba getah jarak tintir terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli,
dan Candida albicans meskipun penelitian terhadap bakteri dan jamur yang
sama pernah dilakukan sebelumnya di Filipina dan Nigeria. Selain itu, peneliti
tertarik untuk mengetahui apakah getah jarak tintir juga memiliki kandungan
senyawa golongan saponin, alkaloid, flavonoid, dan tanin seperti yang
terkandung pada batang jarak tintir.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
3
1. Perumusan masalah
a. Berapakah diameter zona hambat dan KHM getah jarak tintir terhadap
Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922, dan
Candida albicans ATCC 10231?
b. Senyawa golongan apa sajakah yang terkandung dalam getah jarak tintir?
2. Keaslian penelitian
Sejauh pengetahuan penulis, uji aktivitas antimikroba getah jarak
tintir terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida
albicans berbeda dari penelitian yang dilakukan oleh Delia C. Ongtengco di
Manila, Filipina pada tahun 1992 yang berjudul „The In Vitro Antibacterial
Activity of Jatropha multifida Linn. Latex Against Common Bacterial
Wound Isolates‟. Perbedaan penelitian ini terdapat pada metode pengujian,
mikroba uji yang digunakan dan tempat pengambilan bahan tanaman.
Penelitian yang dilakukan Ongtengco menggunakan metode pengujian
Kirby-Bauer Agar-Disk Diffusion, sedangkan pada penelitian aktivitas
antimikroba yang peneliti lakukan menggunakan metode difusi sumuran.
Mikroba uji pada penelitian Ongtengco, yaitu bakteri yang didapat dari
isolat luka, sedangkan penelitian ini menggunakan strain bakteri yang
didapat dari Balai Laboratorium Kesehatan Yogyakarta. Getah jarak tintir
yang digunakan oleh Ongtengco berasal dari Filipina, sedangkan pada
penelitian ini berasal dari Yogyakarta, Indonesia.
Penelitian ini juga berbeda dari pengujian „Daya Hambat Getah
Jarak Cina (Jatropha multifida L.) terhadap Staphylococcus aureus Secara
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
4
In Vitro‟ yang dilakukan oleh Darmawi (2013). Perbedaan tersebut terletak
pada metode yang digunakan, yaitu Kirby-Bauer Agar-Disc Diffusion
sedangan pada penelitian ini menggunakan metode difusi sumuran.
3. Manfaat penelitian
a. Manfaat teoritis : penelitian ini dapat menambah informasi tentang
aktivitas antimikroba dari getah jarak tintir yang tumbuh di Yogyakarta,
Indonesia terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia
coli ATCC 25922, dan Candida albicans ATCC 10231.
b. Manfaat praktis : penelitian ini dapat digunakan sebagai acuan dalam
penggunaan getah jarak tintir sebagai antimikroba terhadap
Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans.
B. Tujuan
1. Tujuan umum
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antimikroba getah jarak
tintir terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC
25922, dan Candida albicans ATCC 10231.
2. Tujuan khusus
a. Mengetahui diameter zona hambat dan KHM getah jarak tintir terhadap
Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922,
dan Candida albicans ATCC 10231.
b. Mengetahui senyawa golongan apa sajakah yang terkandung dalam
getah jarak tintir.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
5
BAB II
PENELAAHAN PUSTAKA
A. Jarak tintir (Jatropha multifida Linn.)
Klasifikasi jarak tintir, yaitu :
Kerajaan : Plantae
Subkerajaan : Tracheobionta
Super Divisi : Spermatophyta
Divisi : Magnoliophyta
Kelas : Magnoliopsida
Sub Kelas : Rosidae
Bangsa : Euphorbiales
Suku : Euphorbiaceae
Marga : Jatropha
Jenis : Jatropha multifida Linn. (Anonim, 2012).
Jarak tintir biasanya memiliki tinggi 3-7 kaki, terkadang bisa mencapai
20 kaki. Daunnya berwarna hijau tua, menempel berselang seling pada batang,
toreh berbagi sehingga terbentuk 9-11 lobus. Bunganya kecil berwarna merah,
dengan kelopak sejumlah 5 berwarna merah 2-3 cm, benang sari 8 berwarna
kuning. Buah berwarna kuning saat tua, berbelah tiga, dan tidak membuka
sendiri jika sudah tua. Biji yang dihasilkan berwarna putih dan berminyak
(Begg, 1994).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
6
Gambar 1. Tanaman jarak tintir
Jarak tintir disebut juga jarak cina, pohon yodium, jarak gurita dan
balacai batai. Tumbuhan ini memiliki senyawa kimia berupa α-amirin,
kampesterol, 7α-diol, stigmaterol, β-sitosterol, dan HCN. Jarak tintir telah
digunakan sebagai pengobatan untuk luka berdarah, penurun panas, dan anti-
inflamasi (Hariana, 2004).
Hasil penelitian melaporkan bahwa ekstrak metanol dari kulit batang
jarak tintir memiliki aktivitas antimikroba terhadap mikroba penyebab penyakit
kelamin seperti Candida albicans, Staphylococcus aureus, Gardnerella
vaginalis, Neisseria gonorrhoeae, Proteus mirabilis, dan Pseudomonas
aeruginosa dengan nilai Konsentrasi Hambat Minimal (KHM) berturut-turut,
yaitu 0,005%, 0,00125%, 0,0000625%, 0,01%, 0,000156%, 0,00125%
(Aiyelaagbe, 2008).
B. Kandungan Metabolit Sekunder Batang Jarak Tintir
Batang jarak tintir mengandung saponin, tanin, flavonoid, dan alkaloid
(Hariana, 2004). Golongan senyawa tersebut telah diketahui memiliki aktivitas
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
7
antimikroba sehingga diharapkan getah jarak tintir juga mengandung saponin,
tanin, flavonoid, dan alkaloid.
1. Saponin
Saponin adalah glikosida dengan berat molekul besar yang terikat
dengan aglikon triterpen atau steroid. Kebanyakan saponin bersifat sabun,
bersifat hemolitik, memiliki rasa pahit dan toksik terhadap ikan (piscicidal).
Berdasarkan jenis sapogeninnya (aglikon) saponin dibagi menjadi tiga kelas,
yaitu triterpen, steroid, dan steroid alkaloid. Semua saponin mengikat satu
atau lebih gula pada aglikonnya (Hostetmann, 2005). Mekanisme saponin
sebagai antibakteri adalah dengan menurunkan tegangan permukaan sehingga
mengakibatkan naiknya permeabilitas atau kebocoran sel dan mengakibatkan
keluarnya senyawa intraseluler (Robinson (cit., Nuria, 2009)).
Saponin triterpen memiliki aktivitas antifungi yang kuat tetapi
aktivitas antibakterinya rendah. Aktivitas antibakteri dari saponin jenis ini
lemah terhadap Gram positif dan tidak memiliki efek pada Gram negatif.
Mekanisme aksi saponin terhadap fungi, yaitu dengan membentuk kompleks
dengan sterol pada membran plasma yang akan merusak membran sel dan
akan berujung pada kematian sel (Hostetmann, 2005). Saponin steroid sering
digunakan sebagai starting material dalam sintesis cortisone, steroid diuretik,
vitamin D, dan cardiac glycosides. Contoh saponin jenis ini yang sudah
terkenal, yaitu digitoksin (Evans, 2009).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
8
2. Tanin
Tanin adalah senyawa fenolik dengan berat molekul 500-3000 Da
dan memiliki kemampuan mengendapkan protein dari suatu larutan. Tanin
larut dalam air, alkohol, gliserol, dan aseton (Evans, 2009). Tanin
dikategorikan dalam tiga grup yaitu tanin terkondensasi, tanin terhidrolisis,
dan tanin kompleks. Tanin terkondensasi disebut juga proanthocyanidin dan
merupakan flavonoid polimerik atau oligomerik yang terdiri dari unit flavan-
3-ol (catechin). Tanin kompleks adalah tanin yang unit catechinnya terikat
pada unit gallotannin ataupun ellagitannin (Vermerris, 2008).
Menurut Robinson (cit., Nuria, 2009) Sebagai antimikroba, tanin
dapat menghambat enzim reverse transkriptase dan DNA topoisomerase
sehingga sel bakteri tidak dapat terbentuk. Gilman (cit., Sari, 2011)
menyebutkan bahwa tanin dan flavonoid merupakan senyawa fenol yang
bekerja sebagai antibakteri dengan menyebabkan kerusakan pada dinding sel.
Ion H+ dari senyawa fenol akan menyerang gugus polar (gugus fosfat)
sehingga molekul fosfolipid akan terurai menjadi gliserol, asam karboksilat,
dan asam fosfat. Hal ini mengakibatkan fosfolipid tidak mampu
mempertahankan bentuk membran sel mengakibatkan membran sel bocor dan
bakteri terhambat pertumbuhannya dan bahkah kematian.
3. Flavonoid
Flavonoid adalah zat aktif yang terdapat pada tanaman dan memiliki
struktur kimia C6-C3-C6 dengan tiap bagian C6 merupakan rantai alifatik
(Rompas, 2012). Flavonoid merupakan golongan terbesar dari senyawa
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
9
polifenol. Flavonoid dapat dikelompokkan berdasarkan keragaman pada
rantai C3 menjadi flavonol, flavon, isoflavon, flavanon, flavanonol, katekin,
leukoantosianidin, antosianin, khalkon, dan auron. Mekanisme kerja
flavonoid sebagai antibakteri adalah dengan membentuk senyawa kompleks
dengan protein ekstraseluler sehingga merusak membran sel bakteri yang
diikuti dengan keluarnya senyawa intraseluler. (Robinson, 1995).
4. Alkaloid
Alkaloid merupakan senyawa organik yang terdapat dalam tanaman,
bersifat basa, dan struktur kimianya memiliki sistem lingkar heterosiklik
dengan nitrogen sebagai hetero atomnya. Alkaloid tersusun atas karbon,
hidrogen, nitrogen, dan oksigen, tetapi tidak semua alkaloid mengandung
keempat unsur tersebut. Ada pula alkaloid lain yang mengandung unsur selain
yang telah disebutkan (Sumardjo, 2009).
Beberapa cara untuk mengidentifikasi alkaloid yaitu dengan
mikroskopik kristal, kelarutan dalam berbagai jenih pelarut, spektrum
absorbsi, sifat farmakologinya, maupun dengan reaksi warna. Beberapa
pereaksi yang sering digunakan untuk mengendapkan alkaloid, yaitu pereaksi
Mayer (merkuri kalium iodida), pereaksi Marme (kadmium kalium iodida),
pereaksi Hager (asam pikrat pekat), pereaksi Wagner (larutan I2 dalam kalium
iodida), pereaksi Dragendorff (bismut kalium iodida), pereaksi Sonnenschein
(asam fosfomolibdat), dan pereaksi Scheiber (asam fosfotungstrat)
(Sumardjo, 2009).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
10
Alkaloid bekerja sebagai antibakteri dengan cara menghambat sintesis protein
bakteri, mengakibatkan terdenaturasinya protein dan asam nukleat sehingga
sel bakteri rusak dan berujung pada kematian sel (Oktaviani, 2013).
C. Getah Jarak Tintir
Getah jarak tintir didapat dengan mematahkan maupun menyayat
tangkai daun dan melukai kulit batang. Getah jarak tintir berwarna kuning
sampai kuning kemerahan. Getah jarak tintir dikenal dapat membantu
penyembuhan luka sayat dan beberapa penelitian telah dilakukan untuk
membuktikannya secara ilmiah (Juniarti, 2012).
Getah jarak tintir mengandung tioglikosida yang menghasilkan minyak
bersifat iritan dan memiliki efek abortifacient Oleh karena itu, penggunaannya
secara oral harus dihindari (Begg, 1994). Labaditin merupakan senyawa yang
diisolasi dari getah jarak tintir dan memiliki efek antibakteri terhadap bakteri
Gram positif tetapi tidak pada bakteri Gram negatif (Barbosa, 2010). Getah
Jarak tintir sendiri telah diujikan sebagai pengobatan lesi/luka pada mulut anak
di Nigeria akibat infeksi Candida albicans dan efeknya lebih cepat dari obat
Nystatin (Adesola, 2007).
Pengujian aktivitas antimikroba dari getah jarak tintir terhadap bakteri
yang diisolasi dari luka telah dilakukan di Filipina tahun 1992 oleh Ongtengco.
Hasilnya, getah jarak tintir memiliki daya hambat sedang terhadap Proteus spp.,
Staphylococcus aureus, dan Citrobacter spp. dan memiliki daya hambat lemah
terhadap Morganella morgani, Klebsiella, Serratia, Aeromonas, Acitobacter,
Pseudomonas aeruginosa, dan Escherichia coli. Kriteria yang digunakan untuk
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
11
menentukan kekuatan daya hambat pada penelitian Ongtengco ini, yaitu daya
hambat kuat jika diameter zona hambat ≥ 18 mm, sedang jika 12-16 mm, dan
lemah jika 7-11 mm dengan diameter paper disk 6,35.
D. Bakteri Gram Positif dan Gram Negatif
Berdasarkan pewarnaan Gram, bakteri dibedakan menjadi dua
golongan, tergantung dari reaksi dinding sel terhadap tinta safranin atau kristal
violet, menjadi Gram positif dan Gram negatif. Bakteri yang tetap berwarna
ungu dengan pewarnaan oleh kristal violet disebut bakteri Gram positif,
sedangkan bakteri yang warna ungunya hilang jika dibilas dengan alkohol, dan
berwarna merah muda setelah penambahan safranin disebut bakteri Gram
negatif. Jamur dan ragi tidak dapat diwarnai dengan pewarnaan gram dan
biasanya diidentifikasi dengan pewarnaan pada jaringan yang terinfeksi (James,
2006).
Gambar 2. Dinding sel bakteri Gram positif dan Gram negatif (Generasibiologi, 2012)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
12
Bakteri Gram positif sebagian besar dinding selnya mengandung
peptidoglikan yang menjerat warna violet. Bakteri Gram negatif memiliki lebih
sedikit peptidoglikan yang terletak antara membran plasma dan suatu membran
bagian luar. Zat warna violet yang digunakan dalam pewarnaan Gram dapat
terbilas dari bakteri Gram negatif (Campbell, 2003). Contoh bakteri Gram
positif, yaitu Staphylococcus aureus dan Clostridium perfringens, sedangkan
contoh bakteri Gram negatif, yaitu Escherichia coli, dan Psuedomonas
aeruginosa (James, 2006).
E. Staphylococcus aureus
Staphylococcus aureus merupakan bakteri Gram positif dan diantara
spesies Staphylococcus lain merupakan patogen utama bagi manusia.
Staphylococcus aureus merupakan bentuk koagulase-positif dan hal ini yang
membedakannya dengan spesies lain. Staphylococcus mudah menjadi resisten
terhadap antibiotik sehingga menimbulkan masalah dalam pengobatannya.
Bakteri Staphylococcus aureus dapat menyebabkan penyakit kulit (jerawat,
pioderma, dan impetigo), pneunomia, meningitis, empidema, endokarditis, dan
sepsis Staphylococcus aureus tumbuh paling cepat pada suhu 350 C dan
membentuk pigmen pada suhu 20-250 C. Koloni yang dihasilkan berwarna abu –
abu sampai kuning emas tua. Koloni Staphylococcus aureus berbentuk bundar,
halus, menonjol dan berkilau (Jawetz, 1996).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
13
Gambar 3. Bakteri Staphylococcus aureus (Extension, 2010)
Kemampuan patogenik strain Staphylococcus aureus merupakan
gabungan dari faktor-faktor ekstraseluler, toksin – toksin yang dihasilkan, dan
sifat invasif dari bakteri itu sendiri. Staphylococcus aureus menghasilkan
koagulase yaitu suatu protein mirip enzim yang dapat menggumpalkan plasma
yang telah diberi oksalat atau sitrat dengan bantuan suatu faktor yang terdapat
dalam banyak serum. Koagulase ini terdapat pada permukaan dinding sel dan
terikat secara nonenzimatik dengan fibrinogen sehingga bakteri dapat
beragregasi. Selain itu, koagulasi dapat mengendapkan fibrin pada permukaan
dinding sel sehingga mungkin mengubah pola fogositosis oleh sel – sel fagosit.
Bakteri yang membentuk koagulase dianggap mempunyai potensi menjadi
invasif (Jawetz, 1996).
Staphylococcus aureus juga memiliki beberapa toksin seperti
luekosidin, eksfoliatif, toksin sindroma syok toksin-1 (TSST-1), dan
enterotoksin. Leukosidin dapat mematikan sel darah putih pada banyak hewan
yang terkena, tetapi perannya dalam patogenesis pada manusia belum jelas
karena mampu difagositosis. Toksin ini mengakibatkan deskuamasi pada
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
14
sindroma lepuh kulit stafilokukus. TSST-1 menyebabkan demam, syok, dan
ruam kulit deskuamatif. Enterotoksin bertanggung jawab pada keracunan
makanan. Enterotoksin dihasilkan ketika Staphylococcus aureus tumbuh pada
makanan yang mengandung karbohidrat dan protein. Efek muntah yang
dihasilkan mungkin akibat perangsangan sistem saraf pusat (pusat muntah)
setelah toksin bekerja pada reseptor – reseptor saraf dalam usus (Jawetz, 1996).
F. Escherichia coli
Escherichia coli adalah bakteri Gram negatif yang merupakan flora
usus normal berperan terhadap fungsi dan nutrisi normal. Bakteri ini dapat
menyebabkan diare dan mudah menjadi patogen jika berada di luar usus. Tempat
yang sering terkena infeksi, yaitu saluran kemih dan tempat lain di rongga perut
(Jawetz, 1996).
Gambar 4. Bakteri Escherichia coli (Psmicrographs, 2010)
Secara umum, mekanisme Escherichia coli menyebabkan diare yaitu
dengan melekat pada reseptor glikoprotein atau glikolipid lalu memproduksi
beberapa senyawa toksik yang merusak sel – sel usus dan mengganggu fungsi
usus (Behrman, 1998).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
15
Escherichia coli digolongkan menjadi EPEC, ETEC, EHEC, EIEC, dan
EAEC berdasarkan ciri khas sifat – sifat virulensinya dan setiap grup
menimbulkan penyakit melalui mekanisme yang berbeda- beda. Berikut ini
adalah penggolongan Escherichia coli menurut Jawetz (1996):
a) EPEC (E. coli Enteropatogenik) adalah penyebab diare pada anak. EPEC
melekat pada sel mukosa usus kecil dan infeksi tersebut mengakibatkan
diare cair yang dapat sembuh sendiri tetapi dapat juga menjadi kronik.
b) ETEC (E. coli Enterotoksigenik) adalah penyebab tersering dari traveler's
diarrhea dan diare pada bayi di negara berkembang
c) EHEC (E. coli Enterohemoragik) menghasilkan verotoksin karena memiliki
efek sitotoksik pada sel Vero, yaitu suatu sel ginjal dari monyet hijau
Afrika. EHEC berhubungan dengan kolitis hemoragik, suatu diare yang
berat, anemia hemolitik mikroangiopatik, dan trombositopenia. Pencegahan
dapat dilakukan dengan memasak daging sapi sampai matang.
d) EIEC (E. coli Enteroinvasif) menyebabkan penyakit yang mirip dengan
shigelosis.
e) EAEC (E. coli Enteroagregatif) menyebabkan diare akut dan kronik pada
negara berkembang.
G. Candida albicans
Kelompok jamur yang menyebabkan penyakit pada manusia, yaitu :
1. Mould (jamur filamentosa) tumbuh sebagai filamen panjang yang berjalin
membentuk miselium. Contohnya, yaitu dermatofita yang mampu mencerna
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
16
keratin dan menyebabkan beberapa penyakit seperti infeksi kuku, kulit, dan
rambut.
2. Ragi sejati, merupakan jamur bulat atau oval uniseluler. Contohnya, yaitu
Cryptococcus neoformans yang menyebabkan infeksi paru pada pasien
immunocompromised.
3. Jamur menyerupai ragi. Contohnya adalah Candida albicans yang merupakan
flora normal pada usus, mulut, dan vagina. Jamur ini dapat menyebabkan
beberapa penyakit seperti sariawan mulut, vaginitis, endokarditis, dan
septikemia (Neal, 2006).
C. albicans merupakan jamur penyebab kandidiasis pada kulit, kuku,
selaput lendir, dan organ dalam. Pada manusia sehat, C. albicans sering
ditemukan pada rongga mulut, saluran cerna, saluran pernafasan bagian atas,
mukosa vagina dan dibawah kuku sebagai saprofit atau komensal yang tidak
menyebabkan penyakit. Jamur ini merupakan jamur oportunistik yang akan
menyebabkan penyakit saat tubuh mengalami penurunan sistem imun (Susanto,
2008).
Gambar 5. Jamur Candida albicans (Bioweb, 2008)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
17
Patogenesis Candida albicans terjadi dalam dua tahap, yaitu adhesi dan
invasi. Tahap pertama infeksi Candida albicans pada tubuh manusia yaitu
pelekatan (adhesi). Adhesi dilakukan dengan melekatkan dinding sel dengan sel
inang yang selanjutnya mengaktivasi mitogen activated protein kinase (Map-
kinase). Map-kinase diperlukan untuk pertumbuhna hifa invasif dan
perkembangan biofilm pada tahap selanjutnya (Kusumaningtyas, 2005).
Setelah adhesi selanjutnya tahap invasi. Hifa Candida albicans
melakukan penetrasi ke dalam permukaan epitelium melewati cell junction.
Invasi yang ditandai dengan kolonisasi tersebut dipercepat dengan keberadan
serum atau saliva. Candida albicans lalu mensekresi proteinse aspartat (SAPs)
yang bertanggung jawab terhadap perusakan pada kulit (Kusumaningtyas, 2005).
C. albicans pada media SDA (Sabouraud Dextrose Agar) dan inkubasi
suhu kamar akan berbentuk koloni lunak berwarna coklat dan berbau seperti
ragi. C. albicans meragikan glukosa dan maltosa menghasilkan asam dan gas
serta tidak bereaksi dengan laktosa (Jawetz, 1996).
H. Antijamur
Antijamur berdasarkan struktur kimianya dapat digolongkan menjadi
golongan azol, golongan polien, dan golongan lain. Contoh antijamur golongan
azol yaitu imidazol dan triazol, golongan polien yaitu amfoterisin B dan nystatin,
dan golongan lain contohnya, yaitu flusitosin, griseofulfin dan terbinafin
(Priyanto, 2010).
Nystatin merupakan antijamur golongan polien yang digunakan sebagai
terapi infeksi Candida albicans pada kulit dan membran mukosa. Nystatin tidak
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
18
dipakai sebagai antijamur oral karena bersifat toksik. Pemakaian Nystatin untuk
infeksi Candida albicans di usus tidak berbahaya karena Nystatin tidak dapat
diabsorbsi di usus (Neal, 2006).
Nystatin bekerja dengan mengikat ergosterol atau asam lemak penyusun
membran sel pada dinding sel jamur. Terikatnya ergosterol menyebabkan sel
jamur rusak dan lisis. Antijamur golongan ini hanya bersifat toksisitas selektif
pada jamur saja karena manusia tidak memiliki ergosterol melainkan kolesterol
(Priyanto, 2010).
I. Antibakteri
Spektrum antibakteri dibagi menjadi dua, yaitu berspektrum sempit
(narrow spectrum) dan berspektrum luas (broad spectrum). Antibakberi
berspektrum sempit jika hanya efektif melawan bakteri dalam jumlah terbatas
atau satu golongan saja misalnya hanya Gram positif. Jika antibakteri efektif
melawan beberapa jenis atau golongan bakteri, misalnya Gram positif dan
negatif maka antibakteri tersebut berspektrum luas (Priyanto, 2010).
Intensitas antibakteri dibedakan menjadi bakterisidal dan bakteriostatik.
Bakterisidal jika antibakteri dapat membunuh bakteri, sedangkan bakteriostarik
jika hanya bisa menghambat atau menghentikan pertumbuhan bakteri. Jika
antibakteri yang diberikan bersifat bakteriostatik maka antibodi tubuh yang
berperan membunuh bakteri (Priyanto, 2010).
Mekanisme kerja antibakteri ada beberapa, yaitu :
A. Penghambat sintesis dinding sel
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
19
Dinding sel bakteri berfungsi melindungi membran sitoplasma, memelihara
bentuk sel, dan mencegah lisis katrena tekanan osmosis. Jika dinding sel
rusak atau tidak terbentuk sempurna maka sel dapat lisis atau tidak dapat
membelah. Sel lisis terjadi karena cairan disekitar yang hipoosmosis
berdifusi ke dalam sel menyebabkan pembengkakan dan diikuti lisis.
Contoh antibakteri yang bekerja menghambat sintesis dinding bakteri, yaitu
golongan penisilin, sefalosporin, dan polipeptida.
B. Penghambat sintesis protein
Proses sintesis protein bakteri terjadi di ribosom. Antibakteri penghambat
sintesis protein biasanya bersifat toksisitas selektif karena ribosom bakteri
dan manusia berbeda. Bakteri memiliki ribosom 30 S dan 50 S sedangkan
manusia 40 S dan 60 S. Antibakteri ini akan mengikat ribosom 30 S atau 50
S atau keduanya sehingga sintesis protein bakteri terganggu. Contoh
antibakteri yang sudah digunakan, yaitu golongan aminoglikosida,
tetrasiklin, kloramfenikol, klindamisin, dan makrolida.
C. Antagonis asam folat
Asam folat digunakan bakteri untuk sintesis DNA atau RNA. Tidak seperti
manusia, bakteri tidak dapat mengabsorpsi asam folat dari makanannya.
Untuk mencukupi kebutuhannya asam folat disintesis sendiri menggunakan
paraamino benzoic acid (PABA). Antibakteri antagonis asam folat memiliki
struktur yang mirip dengan PABA sehingga dapat secara antagonis
kompetitif menduduki tempat bergabungnya PABA dengan asam
dihidropteroad dalam mensitesis asam terahidrofolat yang akan digunakan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
20
untuk membentuk asam folat. Contoh antibakteri yang sudah digunakan,
yaitu golongan sulfonamid (Priyanto, 2010).
Salah satu antibakteri yang berasal dari tanaman yaitu timol. Timol
merupakan salah satu komponen minyak atsiri golongan fenol yang berkerja
sebagai antibakteri dengan cara mendenaturasi protein sel bakteri, sehingga
terjadi perubahan struktur sel dan dapat menyebabkan kebocoran membran sel.
Akibatnya, komponen penting dalam sel akan keluar dan pertumbuhan sel
terhambat bahkan sampai terjadi kematian sel (Nio, 2004).
J. Pengukuran Aktivitas Antimikroba
Pengukuran aktivitas antimikroba dapat dilakukan dengan dua cara,
yaitu metode difusi dan dilusi. Metode difusi menggunakan kertas cakram atau
sumuran. Senyawa yang akan diuji aktivitas antimikrobanya diteteskan ke kertas
cakram atau ke dalam sumuran, kemudian dihitung luas zona hambat disekitar
kertas cakram atau sumuran. Metode dilusi dilakukan dengan cara mencampur
media pertumbuhan cair atau padat dengan mikroba dan senyawa antimikroba
yang ingin diuji, lalu diamati tingkat kekeruhannya (Edber, 1986).
K. Landasan Teori
Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans
merupakan mikroba penyebab penyakit yang sering terjadi. Beberapa penyakit
yang diakibatkan Staphylococcus aureus, yaitu penyakit kulit, pneunomia,
meningitis, empidema, endokarditis, dan sepsis. Escherichia coli menyebabkan
penyakit seperti infeksi saluran kemih, dan diare. Candida albicans
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
21
menyebabkan candidiasis yang bisa berkembang menjadi berbahaya. Penemuan
antimikroba terhadap senyawa tersebut terus dilakukan karena adanya resistensi
antimikroba.
Jarak tintir merupakan tumbuhan yang getahnya digunakan masyarakat
sebagai pengobatan luka bakar maupun iris. Batang jarak tintir mengandung
senyawa saponin, alkaloid, flavonoid, dan tanin yang dapat berperan sebagai
senyawa antimikroba. Penelitian terkait aktivitas antibakteri getah jarak tintir
terhadap bakteri yang ditemukan pada luka telah dilakukan di Filipina oleh
Ongtengco pada tahun 1992. Hasil penelitian menyatakan bahwa getah jarak
tintir memiliki aktifitas antimikroba terhadap Staphylococcus aureus,
Pseudomonas aeruginosa, dan Escherichia coli dengan nilai KHM berturut-
turut, yaitu 0,098%, 0,78%, dan 1,56%. Penelitian Adelosa (2007) di Nigeria
menyatakan bahwa getah jarak tintir lebih cepat efeknya dalam mengobati lesi
pada mulut anak akibat infeksi Candida albicans dibandingkan obat Nystatin.
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan sebelumnya getah jarak
tintir terbukti merupakan zat yang potensial sebagai antimikroba. Faktor tempat
tumbuh tanaman dapat mempengaruhi kadar kandungan senyawa suatu tanaman
sehingga aktivitas antimikroba jarak tintir yang tumbuh di Indonesia mungkin
saja berbeda dengan yang tumbuh di Nigeria dan Filipina. Hal ini terbukti dari
hasil penelitian Widyastuti (2003) yang menyatakan bahwa jenis tanah
mempengaruhi kadar minyak atsiri pada tanaman ketumbar (Coriandrum
sativum L.).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
22
Pengujian aktivitas antimikroba dapat dilakukan dengan metode dilusi
dan difusi. Metode difusi untuk mengetahui diameter zona hambat sedangkan
metode dilusi untuk mengetahui KHM suatu senyawa antimikroba.
L. Hipotesis
Getah jarak tintir memiliki aktifitas antimikroba terhadap
Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922, dan
Candida albicans ATCC 10231 serta dapat ditentukan diameter zona hambat
dan KHM. Golongan senyawa yang diduga terkandung dalam getah jarak tintir,
yaitu saponin, alkaloid, flavonoid, dan tanin.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
23
BAB III
METODOLOGI PENELITIAN
A. Jenis Rancangan Penelitian
Penelitian tentang Uji Aktivitas Antimikroba getah jarak tintir terhadap
Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922, dan
Candida albicans ATCC 10231 merupakan jenis penelitian eksperimental murni
dengan menggunakan rancangan acak lengkap pola searah.
B. Variabel Penelitian dan Definisi Operasional
1) Variabel penelitian
a. Variabel utama
1) Variabel bebas : getah jarak tintir konsentrasi 12,5 % v/v, 25 % v/v,
50 % v/v, dan 100 % v/v. Seri konsentrasi pada penentuan KHM.
2) Variabel tergantung : diameter zona hambat getah jarak tintir
terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan
Candida albicans serta kekeruhan media pada dilusi cair.
b. Variabel pengacau
1) Variabel pengacau terkendali : waktu inkubasi 24 jam, suhu
inkubasi 350C, volume media dan suspensi mikroba, serta
kekeruhan suspensi mikroba (setara dengan Standard Mac Farland
II).
2) Variabel pengacau tak terkendali : umur tanaman jarak tintir
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
24
2) Definisi operasional
a. Getah jarak tintir adalah getah yang didapat pada pagi hari dengan
melukai tangkai daun sampai getah tidak menetes pada tanaman jarak
tintir yang tumbuh di Universitas Sanata Dharma.
b. Diameter zona hambat adalah zona radikal (jernih) dan iradikal (masi ada
pertumbuhan bakteri tetapi lebih sedikit dibandingkan pertumbuhan
disekitarnya) disekitar lubang sumuran yang berisi getah jarak tintir
dengan berbagai konsentrasi.
c. Difusi sumuran adalah metode yang digunakan untuk mengetahui
diameter zona hambat getah jarak tintir dengan cara melubangi media
dengan pelubang sumuran diameter lima milimeter dan mengisinya
dengan senyawa uji lalu diinkubasi selama 24 jam pada suhu 350C.
d. Dilusi merupakan metode yang digunakan untuk menentukan KHM
dengan cara memasukkan masing – masing satu mililiter senyawa uji dan
bakteri pada media cair lalu diinkubasi selama 24 dan 48 jam pada suhu
350C lalu dibaca kekeruhannya menggunakan Nephelometer.
e. KHM adalah konsentrasi terkecil getah jarak tintir yang masih bisa
menghambat pertumbuhan mikroba uji.
f. Media adalah tempat tumbuh mikroba dan untuk bakteri Staphylococcus
aureus, dan Escherichia coli menggunakan media Mueller-Hinton Agar
(MHA) dan Mueller-Hinton Broth (MHB), sedangkan untuk jamur
Candida albicans menggunakan media Potato Dextrose Agar (PDA) dan
Brain Heart Infusion (BHI).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
25
g. Kontrol positif adalah senyawa yang telah teruji memiliki efek
antimikroba terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan
Candida albicans. Timol 0,2 % digunakan sebagai kontrol positif untuk
Staphylococcus aureus dan Escherichia coli, sedangkan Nystatin 100.000
IU sebagai kontrol positif untuk Candida albicans.
h. Waktu inkubasi adalah waktu yang diperlukan Staphylococcus aureus,
Escherichia coli, dan Candida albicans untuk tumbuh, yaitu 24 jam.
i. Suhu inkubasi merupakan suhu optimum untuk pertumbuhan
Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Candida albicans, yaitu
pada 350
C.
C. Bahan Penelitian
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini, yaitu getah Jarak
tintir yang diambil dari Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta, bakteri
Staphylococcus aureus ATCC 25923, dan Escherichia coli ATCC 25922, serta
jamur Candida albicans ATCC 10231 dari Balai Laboratorium Kesehatan,
Yogyakarta, aquadest, Aquadest steril, timol 0,2 % dari Labotatorium Farmasi
Biologi Universitas Gadjah Mada, Nystatin® 100.000 IU Lapi, media Mueller-
Hinton Agar (MHA), Mueller-Hinton Broth (MHB) Oxoid, Potato Dextrose
Agar (PDA) Oxoid, Brain Heart Infusion (BHI) Oxoid.
D. Alat atau Instrumen Penelitian
Alat yang digunakan dalam penelitian ini, yaitu alat – alat gelas (Pyrex)
seperti erlemeyer, tabung reaksi, cawan petri, dan gelas beker, gelas ukur, labu
ukur, Bunsen, flakon, ball pipet, pipet ukur, jarum ose, pelubang sumuran
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
26
(diameter 5 mm), mikropipet (Pipetman), jangka sorong, autoklave (tipe STMN
Y.222 100VAC), oven (Memmert), inkubator (Binder), class II BSC (Biological
Safety Cabinet) ESCO, BD PhoenixSpecTM
Nephelometer.
E. Tata Cara Penelitian
1. Determinasi tanaman
Determinasi tanaman dilakukan dengan menggunakan daun, bunga, dan
buah/biji yang dilakukan secara benar menggunakan kunci determinasi
berdasarkan acuan, di Laboratorium Kebun Tanaman Obat Fakultas Farmasi
Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.
2. Pengumpulan bahan
Getah jarak tintir didapat dari Universitas Sanata Dharma dengan melukai
tangkai daun yang tidak terlalu muda dan tua, dan getah ditampung sampai
tidak menetes lagi. Pengambilan getah jarak cina dilakukan pagi hari jam 7
sebelum pengujian.
3. Skrining fitokimia getah jarak tintir
Larutan stok dibuat dengan melarutkan dua mililiter getah jarak tintir
menggunakan aquadest hingga 10 ml.
a. Uji pendahuluan
Sebanyak dua mililiter larutan stok ditambah 10 ml aquadest,
dipanaskan selama 30 menit di atas air mendidih. Larutan disaring
melalui kapas. Suatu larutan berwarna kuning sampai merah
menunjukkan adanya senyawa yang mengandung kromofor
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
27
(flavonoida, antrakinon) dengan gugus hidrofilik (gula, asam, fenolat).
Pada penambahan larutan kalium hidroksida LP (beberapa tetes) warna
menjadi lebih intensif (Dwiatmaka, 2012).
b. Uji tanin
Sebanyak dua mililiter larutan stok ditambah 10 ml aquadest,
dipanaskan 30 menit dalam penangas air mendidih dan disaring. Lima
mililiter filtrat ditambahkan larutan natrium klorida 2% sebanyak satu
mililiter, bila terjadi suspensi atau endapan disaring melalui kertas
saring, kemudian filtrat ditambah larutan gelatin 1% sebanyak lima
mililiter. Terbentuknya endapan menunjukkan adanya tanin
(Dwiatmaka, 2012).
c. Uji saponin
Sebanyak dua mililiter larutan stok ditambah 10 ml aquadest, ditutup
dan dikocok kuat – kuat selama 30 detik. Tabung dibiarkan dalam
posisi tegak selama 30 menit. Terbentuknya buih setinggi lebih dari tiga
centimeter dari permukaan cairan menunjukkan adanya saponin.
Uji saponin tersebut jika didapat hasil positif dilanjutkan dengan
menentukan jenis saponin. Dua mililiter larutan stok ditambah 10 ml
kloroform, digojog dan diambil lapisan bawahnya. Lalu ditambah
beberapa tetes asam asetat anhidrat dan asam sulfat pekat.
Terbentuknya cincin warna merah sampai ungu menunjukkan adanya
kandungan saponin triterpen sedangkan warna biru sampai hijau
menunjukkan saponin steroid (Depkes RI, 1995).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
28
d. Uji flavonoida
Sebanyak satu mililiter larutan stok ditambah satu mililiter etanol 95%
P lalu ditambahkan lagi dengan 0,1 Gram serbuk magnesium P dan 10
ml asam klorida pekat P. Warna kuning menunjukkan senyawa flavon,
kalkon, dan auron. Sedangkan warna jingga menunjukkan flavonoid
(Depkes RI, 1995).
e. Uji alkaloida
Sebanyak dua mililiter larutan stok ditambah asam klorida 1% sebanyak
10 ml, panaskan selama 30 menit dalam penangas air mendidih.
Suspensi disaring dengan kapas ke dalam tabung reaksi A dan B sama
banyak. Larutan A ditambah pereaksi Dragendroff 3 tetes dan larutan B
ditambahkan pereaksi Mayer 3 tetes. Terbentuknya endapan pada kedua
larutan tersebut menunjukkan adanya alkaloida (Dwiatmaka, 2012).
f. Uji antrakinon
Sebanyak dua mililiter larutan stok ditambah 10 ml kalium hidroksida
0,5 N dan satu mililiter larutan hidrogen peroksida, lalu dididihkan 2
menit. Setelah dingin suspensi disaring melalui kapas. Filtrat sebanyak
lima mililiter ditambah asam asetat glasial 10 tetes sampai pH 5, lalu
ditambahkan toluena 10 ml. Lapisan atas sebanyak lima mililiter
diambil menggunakan pipet dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi,
kemudian ditambah 0,5 – satu mililiter kalium hidroksida 0,5 N. Warna
merah pada lapisan air (basa) menunjukkan adanya senyawa antrakinon
(Dwiatmaka, 2012).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
29
4. Uji aktivitas antimikroba
a. Persiapan konsentrasi getah jarak tintir
Getah jarak tintir diambil sesuai perhitungan dan dimasukkan ke dalam
labu ukur lalu ditambahkan aquadest steril hingga tanda sehingga
didapat konsentrasi 100%, 50%, 25%, dan 12,5%. Perlakuan tersebut
dilakukan secara aseptis untuk mengurangi kemungkinan kontaminasi.
b. Pembuatan kultur mikroba uji
Kultur murni Staphylococcus aureus, Escherichia coli dan Candida
albicans dalam media agar miring diambil satu ose dan diinokulasikan
pada media cair yang sesuai. Media cair yang digunakan untuk
Staphylococcus aureus dan Escherichia coli digunakan MHB, dan
media yang digunakan untuk Candida albicans yaitu BHI. Selanjutnya
media iinkubasi selama 24 jam pada suhu 350 C. Kekeruhan bakteri
disamakan dengan Standard Mac Farland II (Kepadatan populasi
bakteri 6.108 CFU/ml).
c. Pengukuran diameter zona hambat
10 ml media agar dituang ke dalam cawan petri sebagai base. Setelah
mengeras ditambahkan 20 ml media yang telah dicampur satu mililiter
kultur mikroba uji dan biarkan mengeras. Cara tersebut untuk
memudahkan pembuatan sumuran. Setelah mengeras media dilubangi
dengan pelubang sumuran diameter 5 mm sebanyak 6 lubang. 1 untuk
kontrol negatif, yaitu aquadest steril, 1 lubang kontrol positif, dan 4
untuk tingkatan konsentrasi getah jarak tintir. Senyawa uji yang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
30
dimasukkan ke dalam lubang sumuran sebanyak 50 µl dan ditunggu
kering. Selanjutnya media diinkubasi terbalik dan dihitung diameter
zona hambat menggunakan jangka sorong.
d. Penentuan KHM
Satu mililiter kultur mikroba uji dan satu mililiter getah jarak tintir
diinokulasikan pada 4 ml media cair lalu diukur kekeruhannya
menggunakan Nephelometer. Media diinkubasi di dalam inkubator dan
diukur kembali kekeruhannya pada jam ke 24 dan 48 jam. KHM
ditentukan dari konsentrasi terendah yang tidak memperlihatkan adanya
pertambahan kekeruhan media.
F. Tata Cara Analisis Hasil
Hasil positif uji tabung sebagai skrining fitokimia ditentukan dengan
perubahan warna dan atau terjadinya endapan dan diamati secara visual.
Data zona hambat yang didapat dalam satuan mm dan ditentukan
normalitasnya menggunakan uji Shapiro-Wilk. Selain normalitas dihitung juga
variansi datanya sebagai syarat uji one way ANOVA. Jika memiliki distribusi
normal dan variansi data yang sama maka digunakan uji one way ANOVA untuk
mengetahui apakah ada perbedaan antara dua kelompok atau lebih. Selanjutnya,
diteruskan dengan uji Post Hoc untuk mengetahui kelompok mana saja yang
memiliki perbedaan. Jika salah satu syarat uji one way ANOVA tidak terpenuhi
maka digunakan uji Kruskal-Wallis dan dilanjutkan dengan analisis Mann-
Whitney.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
31
Data pada uji dilusi cair untuk menentukan KHM dihitung rata-rata dan
simpangan deviasinya (SD) lalu dilihat mulai konsentrasi ke berapa terjadi
penurunan kekeruhan dan ditentukan sebagai KHM.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
32
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Determinasi tanaman
Determinasi tanaman dilakukan untuk meyakinkan bahwa tanaman
yang getahnya digunakan dalam penelitian ini benar – benar jarak tintir.
Determinasi tanaman dilakukan di Laboratorium Kebun Tanaman Obat Fakultas
Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta berdasarkan acuan Flora of Java
(Backer, 1965 ). Ciri- ciri jarak tintir yaitu daun berbentuk bangun perisai
(peltatus) atau bulat (orbicularis), lebar 15-35 cm, bertoreh berbagi sampai lebih
dari setengah daun menjadi beberapa bagian. Tangkai daun (petiole) 15-35 cm,
solid; daun penumpu (stipula) terbagi menjadi beberapa, panjang dan tidak
mengeras. Calyx (kelopak) merah tua; daun mahkota (petalae) berbentuk oval,
merah muda, panjang 6-7 mm; buah biasanya obovoid, dengan 3 belahan
vertikal, 3 ruang, berwarna kuning ketika matang. Dari hasil determinasi
diketahui bahwa tanaman yang getahnya digunakan dalam penelitian benar –
benar jarak tintir (Jatropha multifida Linn.).
Gambar 6. Tanaman jarak tintir
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
33
B. Pengumpulan Getah Jarak Tintir
Getah jarak tintir diambil dari tanaman jarak tintir di lingkungan
Kampus III Universitas Sanata Dharma. Getah jarak tintir yang didapat berwarna
orange cair (gambar getah dapat dilihat pada lampiran halaman 110).
Pengambilan getah dilakukan pada pagi hari karena getah yang didapat lebih
banyak. Ada beberapa cara pengambilan getah, yaitu mematahkan tangkai daun,
melukai tangkai daun dan melukai batang daun. Peneliti menggunakan cara
pematahan tangkai daun dan melukai tangkai daun.
Pematahan tangkai daun digunakan jika ingin mendapatkan getah lebih
banyak, tetapi cara ini tidak boleh terlalu sering digunakan karena daun tanaman
bisa habis. Proses melukai tangkai daun dapat dilakukan dengan menggunakan
pisau atau cutter sehingga getah mengalir dari luka goresan. Hasil yang didapat
dengan cara ini lebih sedikit daripada mematahkan tangkai daun tetapi bisa
dilakukan berkali – kali karena daun tanaman masih ada. Pada penelitian ini
menggunakan cara melukai tangkai daun dan sesekali menggunakan cara
mematahkan tangkai daun saat ingin mendapat getah dalam jumlah yang lebih
banyak.
C. Skrining Fitokimia Getah Jarak Tintir
Batang jarak tintir sendiri mengandung senyawa tanin, saponin,
flavonoid, dan alkaloid. Skrining fitokimia bertujuan untuk mengetahui apakah
getah jarak tintir memiliki golongan senyawa yang sama dengan batangnya.
Beberapa senyawa yang ingin diketahui keberadaannya antara lain tanin,
saponin, flavonoid, dan alkaloid. Sebelum dilakukan uji tabung, getah jarak tintir
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
34
diencerken menggunakan aquadest menjadi larutan stok. Getah jarak tintir dapat
larut dalam aquadest sehingga digunakan aquades sebagai pelarut. Larutan stok
dibuat dengan melarutkan dua mililiter getah jarak tintir menggunakan aquadest
hingga 10 ml (gambar hasil skrining fitokimia dapat dilihat pada lampiran
halaman 111).
1. Uji pendahuluan
Uji pendahuluan bertujuan untuk mengetahui adanya senyawa yang
mengandung kromofor seperti senyawa flavonoid dan antrakinon dengan gugus
hidrofilik (gula, asam, fenolat). Hasil positif uji pendahuluan yaitu warna
senyawa yang berubah menjadi kuning sampai merah dan dengan penambahan
larutan KOH (kalium hidroksida) warna menjadi lebih intensif. Hasil uji
pendahuluan yang peneliti lakukan yaitu terbentuk warna kuning kemerahan dari
warna awal kuning bening dan setelah penambahan kalium hidroksida warna
menjadi merah pekat (intensif). Hal tersebut berarti bahwa getah jarak tintir
mengandung golongan senyawa seperti flavonoid dan antrakinon dengan gugus
hidrofilik (gula, asam, fenolat). Oleh karena adanya kemungkinan adanya
kandungan antrakinon dalam getah jarak tintir maka peneliti menguji juga
kandungan antrakinon dalam getah jarak tintir.
2. Uji tanin
Tanin merupakan pengkelat logam, dan dapat mengendapkan protein.
Uji tanin dilakukan dengan menambahkan natrium klorida 2%, jika pada
pengujian terjadi suspensi maka harus disaring. Filtrat yang didapat ditambah
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
35
larutan gelatin 1% lalu didiamkan beberapa saat sampai terbentuk endapan yang
menunjukkan adanya tanin.
Gelatin merupakan senyawa yang mengandung protein sehingga jika
ditambahkan pada larutan yang mengandung tanin maka tanin akan
mengendapkan protein tersebut. Reaksi pengendapan ini lebih cepat dengan
penambahan natrium klorida (Prasetyo, 2013). Tanin dapat mengikat atau
mengendapkan protein melalui ikatan hidrogen, ikatan ionik, hidrofobik, dan
ikatan kovalen, tetapi ikatan hidrogen merupakan ikatan yang paling dominan.
Ikatan hidrogen terjadi antara gugus hidroksi fenol pada tanin dengan gugus
amida dan asam amino bebas (Swain, 1965). Hasil uji tanin yaitu adanya
endapan setelah penambahan gelatin sehingga disimpulkan bahwa getah jarak
tintir mengandung tanin. Ikatan antara tanin dengan protein yang mengakibatkan
terbentuknya endapan dapat dilihat pada gambar 7.
Gambar 7. Ikatan antara tanin dengan protein (Lee, 2014).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
36
3. Uji saponin
Uji saponin dilakukan dengan menambahkan aquadest ke dalam tabung
berisi larutan stok lalu digojog kuat – kuat selama beberapa detik detik.
Terbentuknya buih dengan tinggi lebih dari 3 cm yang bertahan selama lebih
dari 30 menit menandakan adanya tanin. Sebelum penarikan kesimpulan
ditunggu 30 menit supaya buih yang terbentuk murni karena saponin dan bukan
karena penggojogan yang kuat.
Saponin mempunyai gugus hidrofob dan hidrofil sehingga menyerupai
surfaktan/sabun yang dapat menurunkan tegangan permukaan antara udara/gas
dengan air sehingga terbentuk emulsi gas dalam air (Prasetyo, 2013). Uji tanin
yang dilakukan terbentuk buih setinggi 4 cm yang bertahan selama 30 menit
lebih berarti bahwa getah jarak tintir mengandung saponin.
Uji saponin dilanjutkan untuk mengetahui jenis saponin yaitu triterpen
atau steroid. Larutan stok ditambahkan kloroform untuk menyari triterpen dan
steroid, hasilnya terbentuk dua lapisan dan kloroform akan berada dibagian
bawah tabung reaksi. Lapisan bagian atas dipisahkan dengan asumsi tidak
terkandung senyawa yang dituju lagi. Selanjutnya ditambahkan asam asetat
anhidrat dan asam sulfat pekat (pereaksi Liebermann-Burchard) dan hasil positif
ditandai dengan terbentuknya warna hijau sampai biru (steroid) dan merah
sampai ungu (triterpen). Hasil uji triterpen/steroid menunjukkan terbentuknya
warna merah jingga sehingga dapat disimpulkan bahwa getah jarak tintir
mengandung saponin jenis triterpen.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
37
Mekanisme reaksi terpenoid dengan pereaksi Liebermann-Burchard
diawali dengan proses asetilasi gugus hidroksil menggunakan asam asetat
anhidrida. Gugus asetil akan lepas sehingga terbentuk ikatan rangkap.
Selanjutnya, terjadi pelepasan hidrogen sehingga senyawa mengalami resonansi
yang bertindak sebagai elektrofil atau karbokation. Serangan karbokation
mengakibatkan adisi elektrofilik yang diikuti pelepasan hidrogen mengakibatkan
perpanjangan konjugasi sehingga muncul warna merah – ungu. Reaksi terpenoid
dengan pereaksi Liebermann-Burchard menghasilkan warna merah-ungu dapat
dilihat pada gambar 8.
Gambar 8. Reaksi terpenoid dengan pereaksi Liebermann-Burchard (Siadi, 2012)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
38
4. Uji flavonoid
Pada uji flavonoid ditambahkan etanol untuk menyari flavonoid dari
getah jarak tintir. Reaksi antara flavonoid yang merupakan senyawa fenol
dengan magnesium dalam suasana asam membentuk warna kuning atau jingga.
Hasil uji flavonoid menunjukkan warna kuning yang berangsur – angsur berubah
menjadi jingga sehingga disimpulkan bahwa getah jarak tintir mengandung
flavonoid. Mekanisme terbentuknnya warna ungu/jingga pada uji flavonoid
dapat dilihat pada gambar 9.
Gambar 9. Mekanisme reaksi antara flavonoid dengan magnesium (Raharjo, 2010)
5. Uji alkaloida
Penambahan asam klorida pada uji alkaloid bertujuan untuk mengubah
alkaloid menjadi garam alkaloid yang larut air. Pereaksi yang digunakan dalam
uji alkaloid ini yaitu, Mayer, Dragendroff dan asam pikrat. Hasil positif jika
terbentuk endapan. Pada uji alkaloid getah jarak tintir didapat hasil adanya
endapan pada tabung dengan penambahan pereaksi Dragendroff dan asam pikrat
sehingga disimpulkan bahwa getah jarak tintir mengandung alkaloid. Endapan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
39
pada penambahan pereaksi Dragendroff berwarna coklat bening sedangkan pada
penambahan pereaksi asam pikrat terbentuk endapan coklat kehitaman.
Alkaloid mengandung atom hidrogen yang dapat bereaksi dengan
logam K+ pereaksi Mayer (kalium tertaiodomerkurat(II)) dan pereaksi
Dragendorff (Kalium tertaiodobismutat) membentuk kompleks kalium - alkaloid
yang mengendap. Mekanisme reaksinya dapat dilihat pada gambar 10 dan 11.
Gambar 10. Mekanisme reaksi alkaloid dengan pereaksi Mayer (Marliana, 2005)
Gambar 11. Mekanisme reaksi alkaloid dengan pereaksi Dragendorff (Marliana, 2005)
6. Uji antrakinon
Uji antrakinon dilakukan dengan menambahkan 10 ml kalium
hidroksida dan hidrogen peroksida lalu dididihkan. Setelah dingin ditambahkan
asam asetat glasial dan toluen. Lapisan atas pada tabung uji diambil dan
ditambahkan kalium hidroksida. Hasil positif yaitu adanya warna merah. Hasil
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
40
uji antrakinon getah jarak tintir tidak memberikan warna merah sehingga dapat
disimpulkan bahwa getah jarak tintir tidak mengandung antrakinon.
Hasil keseluruhan uji tabung pada skrining fitokimia yang telah
dilakukan dapat dilihat pada tabel I.
Tabel I. Hasil uji tabung pada skrining fitokimia getah jarak tintir
No. Pengujian Hasil
1 Uji pendahuluan +
2 Uji tanin +
3 Uji saponin +
4 Uji triterpen/steroid +
(triterpen)
5 Uji flavonoid +
6 Uji alkaloid +
7 Uji antrakinon -
Kelemahan penelitian ini, yaitu pada skrining fitokimia yang dilakukan
hanya sebatas uji tabung dan tidak menggunakan standar sehingga tidak bisa
langsung menyatakan bahwa benar-benar terkandung senyawa tersebut diatas
pada getah jarak tintir. Untuk meyakinkan bahwa senyawa tersebut benar –
benar terkandung dalam getah jarak tintir, peneliti menyarankan dilakukannya
KLT (Kromatografi Lapis Tipis). Menurut Sudjadi (2010) kelebihan KLT yaitu
senyawa yang dituju akan dipisahkan dahulu sebelum diidentifikasi sehingga
senyawa yang teridentifikasi lebih spesifik. Indikasi pemisahan komponen dapat
dilakukan dengan pereaksi warna, fluoresensi, atau dengan radiasi menggunakan
sinar ultraviolet.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
41
D. Uji Potensi Antimikroba Getah Jarak Tintir Secara Difusi Sumuran
Uji potensi antimikroba bertujuan untuk mengetahui apakah getah jarak
tintir memiliki daya hambat terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli,
dan Candida albicans. Pengujian antimikroba ini menggunakan metode difusi
sumuran dan teknik aseptis seperti penggunaan bunsen dan mengerjakan
pengujian dalam BSC. Teknik aseptis dilakukan supaya mengurangi
kemungkinan kontaminasi.
Metode difusi untuk menentukan diameter zona hambat sendiri ada 2
yaitu sumuran dan paper disc. Prinsip metode difusi sumuran, yaitu senyawa uji
yang berada di lubang sumuran akan berdifusi ke sekelilingnya dan menghambat
pertumbuhan bakteri maupun jamur pada media. Prinsip metode paper disc,
yaitu senyawa uji diserap oleh paper disc dan akan berdifusi ke sekelilingnya.
Senyawa uji yang memiliki efek antibakteri maupun antifungi akan memberikan
zona jernih disekitar lubang sumuran ataupun paper disc.
Pemilihan metode yang digunakan yaitu berdasarkan kepolaran
senyawa yang akan diuji. Metode sumuran dapat digunakan untuk senyawa polar
maupun nonpolar, sedangkan paper disc hanya bisa untuk senyawa yang polar.
Getah jarak tintir merupakan senyawa polar sehingga bisa menggunakan metode
sumuran maupun paper disc. Penelitian mengenai aktivitas antibakteri getah
jarak tintir terhadap bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923 yang dilakukan
oleh Darmawi (2013) menggunakan metode difusi paper disc, sedangkan pada
penelitian ini menggunakan metode difusi sumuran. Peneliti menggunakan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
42
metode yang berbeda karena ingin membandingkan apakan dengan metode yang
berbeda akan memberikan hasil yang berbeda.
Mikroba uji yang digunakan yaitu Staphylococcus aureus ATCC
25923, Escherichia coli ATCC 25922, dan Candida albicans ATCC 10231.
ATCC sendiri adalah kepanjangan dari American Type Culture Collection.
Sistem penomoran ini berguna untuk membedakan strain mikroba pada jenis
mikroba yang sama. Jenis mikroba yang sama bisa memiliki nomor ATCC yang
berbeda karena memiliki gen yang berbeda. Strain ATCC pada bakteri maupun
jamur ini digunakan sebagai referensi dengan mencocokkan sifat- sifat/
karakteristik mikrobanya. Bakteri Escherichia coli ATCC 25922 memiliki
antigen serotype 06 biotype 1, Candida albicans ATCC 10231 memiliki antigen
serotype A, sedangkan pada Staphylococcus aureus ATCC 25923 belum
diketahui.
Media yang digunakan pada uji antibakteri Staphylococcus aureus dan
Escherichia coli yaitu MHB (Mueller-Hinton Broth) dan MHA (Mueller-Hinton
Agar), sedangkan media yang digunakan sebagai uji antifungi Candida albicans
yaitu PDA (Potato Dextrose Agar) dan BHI (Brain Heart Infusion). Media uji
yang digunakan harus bisa menumbuhkan bakteri atau jamur uji. Berdasarkan
orientasi, bakteri dan jamur uji dapat tumbuh merata pada media uji.
Langkah awal pengujian yaitu menumbuhkan bakteri pada media MHB
dan jamur pada media BHI selama 24 jam. Media uji akan bertambah keruh
dibandingkan semula karena adanya pertumbuhan mikroba. Kekeruhan media
dibaca menggunakan alat Nephelometer dan disetarakan dengan Standard Mac
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
-
43
Farland II (Kepadatan populasi bakteri 6.108 CFU/ml). Penyetaraan ini bertujuan
supaya bakteri dan jamur yang ditambahkan selalu sama jumlahnya.
Nephelometer merupakan alat yang digunakan untuk mengukur
pertumbuhan mikroba melalui kekeruhan media. Satuan yang digunakan, yaitu
CFU (colony forming unit) per ml. Prinsip alat tersebut hampir mirip dengan
spektrofotometri di mana sinar yang datang akan mengenai objek dan sinar yang
diteruskan akan dibaca oleh detektor dan diolah menjadi output data dalam
satuan CFU/ml.
Gambar 12. BD PhoenixSpecTM
Nephelometer (Miclev, 2014)
Suspensi bakteri dan jamur yang telah setara dengan Standard Mac
Farland II diinokulasikan ke dalam media yang akan digunakan dalam difusi
sumuran. Untuk bakteri uji digunakan media MHA sedangkan untuk jamur
digunakan media PDA. Satu cawan petri berisi 10 ml agar base tanpa mikroba
uji dan 20 ml media dengan penambahan satu mililiter suspensi mikroba uji.
Penggunaan agar base ini bertujuan untuk memudahkan pembuatan lubang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TER