PENELITIAN FORENSIK TENTANG PENENTUAN JENIS KELAMIN

MENGGUNAKAN PCR PADA SAMPEL GIGI

Abstrak

Dalam studi ini, penentuan jenis kelamin menggunakan polymerase chain reaction (PCR)

pada material gigi adalah ditinjau dari sudut pandang kedokteran forensik. Sensitivitas PCR

untuk deteksi Kromosom Y-spesifik urutan alphoid ulangi dan ulangi alphoid kromosom X-

spesifik urutan adalah 0,5 pg DNA genom. Seks dapat ditentukan dengan PCR DNA

diekstraksi dari pulp dari 16 baru diekstraksi gigi permanen dan dentin termasuk permukaan

bubur kertas rongga 6 segar diekstraksi gigi susu. Seks dapat ditentukan dengan

menggunakan pulp di semua 20 gigi (10 laki-laki dan 10 perempuan) disimpan pada suhu

kamar selama 22 tahun. Untuk pulp dari gigi disimpan dalam air laut, seks dapat ditentukan

di seluruh 8 gigi direndam selama 1 minggu dan pada 5 dari 6 gigi direndam selama 4

minggu. Di gigi 1 yang tersisa, di mana penentuan jenis kelamin berdasarkan bubur kertas

gagal, seks dapat ditentukan benar saat DNA yang diekstraksi dari jaringan keras gigi adalah

diperiksa. Untuk gigi disimpan dalam tanah, jenis kelamin dapat ditentukan secara akurat

dalam semua 8 gigi dimakamkan selama 1 minggu, 7 dari 8 gigi terkubur selama 4 minggu,

dan di semua 6 gigi terkubur selama 8 minggu. Ketika gigi dipanaskan selama 30 menit,

penentuan seks dari pulp itu dilakukan di semua gigi dipanaskan sampai 100, 150, dan 200

derajat C, dan bahkan dalam beberapa gigi dipanaskan hingga 250 derajat C. Ketika metode

ini adalah diterapkan untuk kasus-kasus forensik aktual, jenis kelamin tubuh mumi

diperkirakan telah ditemukan setengah tahun ke 1 tahun setelah kematian bisa ditentukan

mudah dengan pemeriksaan dari pulp gigi. Dalam kerangka dari 2 badan ditempatkan di

bawah air selama kurang lebih 1 tahun dan sekitar 11 tahun dan 7 bulan, jaringan pulp telah

larut dan hilang, tetapi penentuan seks itu mungkin DNA menggunakan diekstraksi dari

jaringan gigi yang keras. Hasil ini menunjukkan bahwa metode ini bermanfaat dalam

praktek forensik untuk menentukan jenis kelamin berdasarkan sampel gigi.

KATA KUNCI: identifikasi pribadi, penentuan jenis kelamin, gigi, asam deoksiribonukleat

(DNA). Polymerase Chain Reaction

PENELITIAN FORENSIK TENTANG PENENTUAN JENIS KELAMIN

MENGGUNAKAN PCR PADA SAMPEL GIGI

Penetuan jenis kelamin adalah tahap pertaman dalam pengidentifikasian kedokteran

forensik. Pada umumnya, pengidentifikasian jenis kelamin pada seseorang dapat ditentukan

berdasarkan karakteristik anatomi genital eksternal atau apakah dari sel telur ataupun testis.

Namun, tulang dan gigi adalah bahan yang tersedia hanya untuk menentukan jenis kelamin di

dalam tubuh nyata busuk atau skeletonized. Jenis kelamin tubuh orang dewasa skeletonized

digunakan akan ditentukan berdasarkan karakteristik anatomi panggul dan tengkorak dan data

antropometrik. dengan metode ini, bagaimanapun, penentuan seks dianggap sulit dalam tubuh

pra-remaja, di mana seks karakteristik kerangka belum cukup berkembang. penentuan seks

sitologi uxing kromatin X dan Y telah attemped (1,2) tapi metode ini didasarkan pada asumsi

bahwa inti sel belum hancur yang limitatif efektif untuk menentukan jenis kelamin

menggunakan bahan forensik pulih dari kondisi lingkungan yang beragam.

baru-baru ini, dengan kemajuan dalam teknik analisis gen, metode untuk menentukan jenis

kelamin X dan Y menggunakan analisis kromosom DNA telah dikembangkan, dan

penyelidikan mengenai aplikasi forensik mereka telah dilakukan (3-10).

Diantara metode ini, metode untuk amplifikasi urutan kromosom Y mengulang-

spesifik alphoid centrometric (DYZ3) dengan polymerase chain reaction (PCR) melaporkan

pada tahun 1989 oleh Witt dan Erickson (11), yang dapat mendeteksi kromosom X urutan

mengulang-spesifik alphoid centrometric ( DXZ1) serta DYZ3, dianggap untuk memberikan

penentuan seks lebih akurat berdasarkan hasil pemeriksaan 2 urutan. kami sebelumnya

dilakukan verifikasi primer, dapat meningkatkan sensitivitas terhadap Y dan urutan

kromosom X-spesifik ke tingkat praktis untuk penggunaan forensik (9,12).

Dalam penelitian ini, kami menguji kromosom Y dan X-spesifik urutan ulangi alphoid

centrometric menggunakan metode diubah pada gigi tunggal dan eksperimental dievaluasi

kegunaannya untuk menentukan jenis kelamin dalam kedokteran forensik. kami juga

dikonfirmasi kegunaannya dengan mengaplikasikannya pada kasus forensik aktual

Materi dan Metode Bahan.

Materi. Gigi normal dan sedikit membusuk (65 laki-laki dan 65 perempuan) diambil dari 64

laki-laki dan 65 subyek perempuan untuk perawatan gigi digunakan sebagai bahan.

DNA yang telah diekstrak dari gigi prserved dalam keadaan kering pada suhu kamar

dari 3 bulan sampai 22 tahun, DNA diekstraksi dari pulp atau dentin termasuk permukaan

rongga pulp dari gigi direndam dalam air laut dalam ember plastik untuk maksimal 4 minggu,

dan gigi burid dalam tanah pada kedalaman 30 cm untuk maksimal 8 minggu, dan DNA

diekstraksi dari pulp dari gigi dipanaskan pada 100C ke 300C selama 30 menit diperiksa

dengan PCR, berikut ini yang menentukan jenis kelamin adalah attemped. penentuan seks

juga attemped menggunakan DNA diekstraksi dari pulp atau jaringan keras gigi dalam

beberapa kasus aktual.

Ekstraksi DNA dari gigi. DNA diekstraksi dari pulp gigi dengan memecah-belah gigi

menggunakan pemotong gigi atau palu, mengumpulkan ampas dari pulp rongga terbuka,

perawatan dengan SDS-proteinase K, ekstraksi DNA dengan fenol-kloroform, dan

pengendapan dengan isopropanol. DNA diekstraksi dari jaringan keras gigi dengan

memecah-belah dan kemudian penghancuran dalam mortir, decalcifying gigi bubuk dengan

0,5 M EDTA (pH 8,0) selama 2-4 hari, memperlakukan dengan SDS-proteanase K, ekstraksi

DNA dengan phenolform, dan pengendapan dengan isopropanol. DNA yang dikumpulkan

dilarutkan dalam buffer TE (10mm tris-HCl, 1 mM EDTA pH 8,0) dan disimpan di 4C atau-

20C sampai digunakan.

PCR. Amplifikasi dari urutan ulang 172 base-pasangan kromosom-Y spesifik alphoid

dan X urutan 131-base-pasangan kromosom- X spesifik ulang alphoid dengan PCR dilakukan

pada dasarnya seperti yang dijelaskan sebelumnya (9). Secara singkat, PCR dilakukan dalam

tabung 500l menggunakan 30l dari volume campuran reaksi. komposisi buffer PCR adalah 10

mM tris-HCl pH 8,3, 50mM KCl, MgCl2 1.5mm, masing-masing 100M dNTP, 200 g / ml

serum albumin sapi, 1 unit ampliTaq Emas DNA polimerase (Perkin Elmer, kota asuh, CA,

USA), masing-masing 0.5m Y11 (ATGATAGAAACGGAAATATG) dan

(AGTAGAATGCAAAGGGCTC) Y22 primer atau X1 (AATCATCAAATGGAGATTTG)

dan (GTTCAGCTCTGTGAGTGAAA) X2 primer, dan 1l sampel, berlapis oleh sekitar 50L

minyak mineral dalam tabung masing-masing. siklus pemanasan dari PCR pemanasan pada

95C selama 30 menit dan siklus pemanasan 35 (94C selama 40 detik, 55C untuk 40seconds

dan 72C selama 40 detik) menggunakan PC-700 (Astec, Fukuoka, Jepang)

Elektroforesis dan penentuan seks. Produk PCR dalam gel dielektroforesis poliakrilamid

5% pada 200 V selama 1 jam, bromida pewarnaan dilakukan dan diperkuat band urutan Y

dan X-spesifik diamati di bawah sinar UV. Jenis kelamin subjek dianggap laki-laki ketika

kedua Y-dan urutan X-spesifik yang terdeteksi, namun wanita ketika hanya urutan X-spesifik

terdeteksi.

Sensitivitas deteksi X Y dan urutan tertentu dengan PCR. konsentrasi DNA diekstrak

dari limfosit dari 2 laki-laki dan 2 perempuan ditentukan menggunakan GeneQuant II

(Amersham Pharmacia Biotech, Cambridge, Inggris) secara spektrofotometri serapan, ini

sampel diencerkan dengan konsentrasi DNA dari 10n / l menjadi 0,1 pg / l, dan Y-dan X-

spesifik urutan terdeteksi dengan metode PCR.

Hasil

Dasar evaluasi penentuan seks dengan PCR DNA dari gigi.

Tabel 1 dan Gambar 1. menunjukkan hasil evaluasi tingkat deteksi Y dan kromosom

X urutan spesifik dari jumlah jejak DNA. Y dan kromosom X urutan khusus dalam sampel

laki-laki, dan kromosom X urutan spesifik pada sampel wanita dapat dideteksi dalam jumlah

DNA dari 5,0 pg.

Tabel 2 menunjukkan hasil penentuan seks dengan PCR pada DNA diekstraksi dari

pulpa dikumpulkan gigi dari gigi permanen baru diekstrak dan yang diekstrak dari dentin

termasuk permukaan rongga pulp dari gigi susu yang baru diekstrak. penentuan seks

memungkinkan terjadinya pengunaan di semua diperiksa 22 gigi (16 permanen dan 6 gigi

susu)

Tabel 3 menunjukkan hasil penentuan seks menggunakan pulp dikumpulkan gigi dari

gigi disimpan dalam keadaan kering pada suhu kamar. seks itu bisa ditentukan dengan benar

di semua gigi disimpan pada suhu kamar selama 3 bulan, 6 bulan, 1 tahun, dan 5 tahun (4

jantan dan 4 gigi perempuan pada setiap titik waktu). seks juga dapat ditentukan pada 20 gigi

(10 pria dan 10 gigi perempuan) disimpan pada suhu kamar selama 22 tahun. Gambar 2

menunjukkan electropherograms dari 2 laki-laki dan 2 perempuan gigi disimpan pada suhu

kamar selama 22 tahun.

Ketika penentuan seks dicoba menggunakan pulp gigi gigi direndam dalam air laut,

seks dapat ditentukan di seluruh 8 gigi direndam selama 1 minggu dan 5 dari 6 gigi direndam

selama 4 minggu (Tabel 4). Di gigi 1 di mana untuk menentukan jenis kelamin tidak benar,

band diperkuat dari urutan kromosom Y-spesifik tidak terdeteksi (sampel Nomor 4 pada

gambar 3) meskipun sampel laki-laki. Namun, urutan kromosom Y dan X-spesifik dapat

dideteksi dengan menggunakan metode yang sama pada DNA yang diekstraksi dari jaringan

keras gigi dan DNA diekstraksi dari darah dari donor yang sama (gambar 4), yang

memungkinkan penentuan seks yang benar.

Untuk gigi yang terkubur di tanah pada kedalaman 30 cm, jenis kelamin dapat

ditentukan di seluruh 8 gigi terkubur selama 1 minggu, 7 dari 8 gigi terkubur selama

berminggu-minggu, dan 6 gigi terkubur selama 8 minggu (Tabel 5). Gambar 5 menunjukkan

electropherograms dari 2 laki-laki dan 2 gigi perempuan. Sangat band yang jelas yang

ditunjukkan dengan metode ini bahkan dalam sampel disimpan di bawah kondisi ini. Di gigi

1 laki-laki terkubur di dalam tanah selama 4 minggu di mana penentuan jenis kelamin tidak

benar, penentuan seks itu mungkin menggunakan DNA yang diekstraksi dari jaringan keras.

untuk gigi dipanaskan dalam tanur listrik selama 30 menit, seks dapat ditentukan dalam 2

laki-laki dan 2 perempuan masing-masing gigi dipanaskan pada 100, 150, dan 200C, dan

penentuan seks adalah mungkin dalam beberapa gigi dipanaskan pada suhu 250C selama 30

menit, walaupun band amplifikasi yang sangat samar (Tabel 6)

Penentuan Seks dalam Kasus-Kasus Aktual

Kasus 1: penentuan jenis kelamin tubuh mumi dan skeletonized. Gambar 6

menunjukkan tubuh skeletonized ditemukan di rumah di sebuah kota Okayama Preferecture,

bagian barat Jepang, pada Mei 1992. Jenazah itu diperkirakan telah ditemukan antara

setengah tahun dengan 1 tahun setelah kematian dan hampir benar-benar skeletonized dengan

terurai jaringan lunak mumi yang hanya sebagian tersisa di belakang. Fitur anatomi dari

kedua organ seks eksternal dan internal benar-benar dihapuskan.

Pada otopsi, jenis kelamin tubuh diperkirakan perempuan dari ciri-ciri anatomi dari

tengkorak dan panggul dan nilai-nilai antropometrik, dan umur untuk menjadi 40-50 tahun,

tetapi penentuan seks telah berusaha dengan menggunakan metode PCR terhadap pulpa gigi

dari 2 gigi untuk konfirmasi. Seperti yang ditunjukkan pada gambar 7, hanya urutan

kromosom X-spesifik diamplifikasi di kedua gigi, dan jenis kelamin mayat itu dinilai

perempuan.

Menurut penyelidikan polisi, seorang saudara 46 tahun dan seorang saudara

perempuan 39 tahun, keduanya memiliki kelainan jiwa, tinggal di rumah di mana tubuh itu

ditemukan, tetapi adik telah hilang selama 10 bulan. Meskipun konfirmasi oleh saudara itu

immpossible karena gangguan kejiwaan itu, polisi yakin bahwa tubuh itu adalah adiknya.

Temuan otopsi dan hasil penentuan seks dengan PCR setuju dengan pendapat ini.

Kasus 2: penentuan jenis kelamin tengkorak skeletonized direndam dalam air selama

1 tahun setelah kematian. Gambar 8 menunjukkan tengkorak ditemukan di sebuah saluran

irigasi di Prefektur Okayama pada bulan Agustus 1997. Tengkorak ini diperkirakan telah di

kanal selama sekitar 1 tahun setelah kematian, dan jaringan lunak benar-benar hilang kecuali

bahwa bahan lumpur seperti dianggap sebagai otak busuk diamati dalam tempurung kepala.

pemeriksaan anatomi menyarankan bahwa tubuh itu mungkin telah menjadi laki-laki berusia

30-50 tahun.

Penentuan jenis kelamin dengan menggunakan PCR dicoba menggunakan 2 geraham

di antara gigi yang tersisa di rahang atas tempurung kepala. Karena pulp ini sudah terurai,

DNA diekstraksi dari jaringan keras gigi diperiksa. Seperti ditunjukkan dalam gambar 9, baik

X dan urutan kromosom Y-spesifik diamplifikasi dari 2 gigi, dan jenis kelamin tubuh dinilai

telah laki-laki.

Kasus 3: seks penentuan badan skeletonized adipoceratous direndam dalam air selama

11 tahun dan 7 bulan setelah kematian. penentuan Seks attemped dalam tubuh skeletonized

adipoceratous direndam dalam air selama 11 tahun dan 7 bulan setelah menggunakan

kematian gigi dan jaringan lunak adipoceratous. Badan itu skeletonized di kursi pengemudi

mobil ditemukan di dasar kolam di prefektur Okayama barat selama kekeringan pada tahun

1994. Pada penemuan, sebagian besar tubuh dilaporkan telah terkubur dalam lumpur di dasar

kolam. Seperti ditunjukkan dalam gambar 10, tubuh hampir skeletonized dengan jaringan

lunak adipoceratous tersisa hanya di perut, pinggul, dan lutut bilateral. nekropsi temuan

menunjukkan bahwa tubuh adalah laki-laki usia 50-55 tahun. Juga, berdasarkan mobil di

mana mayat itu ditemukan, piyama dikenakan oleh tubuh, dan barang, termasuk kartu kredit

pompa bensin, tubuh diperkirakan menjadi laki-laki 55-tahun yang meninggalkan rumahnya

di mobilnya dalam piyama pada bulan Januari 1983 dan sejak itu hilang.

Penentuan jenis kelamin tubuh ini skeletonized dicoba dengan PCR. Seperti

ditunjukkan dalam gambar 11, baik X dan urutan kromosom Y-specifc diamplifikasi dalam

sampel termasuk jaringan keras gigi, dan tubuh itu dinilai laki-laki.

Diskusi

Seks penentuan menggunakan gigi adalah penting dalam tubuh nyata busuk atau

skeletonized. enamel gigi adalah jaringan tersulit dari tubuh manusia, dan gigi tetap lama

setelah kematian. Untuk alasan ini, banyak penelitian untuk menentukan jenis kelamin

individu menurut perbedaan seksual dalam morfometri anatomi gigi (perempuan> laki-laki)

telah dilakukan (13-20). Namun, seks perbedaan nilai morfometrik gigi tidak berbeda kecuali

pada gigi taring, dan penentuan seks dari sebuah gigi tunggal acak sangat sulit. Tidak ada

metode penentuan diandalkan seks di gigi tunggal terlepas dari apakah itu bersifat permanen

atau susu atau apakah itu sebuah gigi seri, taring, atau molar.

Baru-baru ini, dengan perkembangan analisis DNA, penentuan jenis kelamin

berdasarkan analisis DNA kromosom Y menjadi mungkin, tetapi uji menggunakan analisis

blot Southern membutuhkan jumlah yang relatif besar berat molekul tinggi (HMW) DNA

sehingga tidak sangat berlaku untuk menentukan jenis kelamin dari gigi tubuh busuk atau

skeletonized. Metode untuk menentukan jenis kelamin menggunakan PCR kemudian

dikembangkan, dan aplikasi untuk kedokteran forensik telah dievaluasi (8-10)

Pada tahun 1989, Witt dan Erickson (11) melaporkan suatu metode untuk

memperkuat ulangi urutan tertentu alphoid centrometric oleh PCR dan untuk menentukan

jenis kelamin berdasarkan noda darah. Metode ini diharapkan dapat memungkinkan

penentuan seks lebih akurat karena urutan kromosom X ulangi spesifik alphoid dapat

dideteksi bersama dengan mengulangi urutan kromosom Y-spesifik. Namun, ketika kami

melakukan PCR sesuai untuk memungkinkan deteksi dalam waktu kurang dari 100 pg DNA.

Namun, beberapa ratus nanogram DNA neede untuk mendeteksi urutan kromosom Y-

spesifik, yang menunjukkan perbedaan luas dalam sensitivitas selama 2 urutan, dan kepekaan

untuk urutan kromosom Y-spesifik tidak cukup untuk penggunaan praktis. Kami dievaluasi

lebih lanjut metode dan berhasil meningkatkan sensitivitas untuk kedua Y dan X urutan

chromoosome khusus untuk sekitar 5pg DNA (sekitar 0,0002 l sebagai keseluruhan darah)

oleh sebagian memodifikasi urutan dari oligonukleotida primer untuk amplifikasi urutan Y-

spesifik ( 9). Kami mencoba untuk menentukan jenis kelamin menggunakan metode

menggunakan bahan-bahan forensik berbagai dengan resluts baik (9,12).

Sebelum kita menggunakan metode untuk menentukan jenis kelamin dari gigi, kita

memeriksa batas-batas deteksi dari Y dan urutan kromosom X-spesifik dengan metode ini

dengan sedikit modifikasi dari protokol sebelumnya (9) dalam DNA diekstraksi dari limfosit.

Akibatnya sensitivitas metode ini sangat tinggi menunjukkan, dengan batas deteksi urutan

kedua menjadi 0,5 pg DNA. Hanaoka et al. (21) juga telah melaporkan penentuan seks

berdasarkan gigi dengan menggunakan metode Witt dan Erickson (11). Namun, mereka

menggunakan primer yang sama dijelaskan dalam metode asli (11), sehingga nilai-nilai Tm

primer untuk amplifikasi urutan Y-spesifik discrepant satu sama lain dan sensitivitasnya tidak

setinggi metode kami. Jadi, ketika sampel DNA menit dan / atau rusak diuji, metode mereka

dianggap cenderung Gove hasil negatif palsu tentang urutan Y-spesifik bahkan dalam

spesimen laki-laki. analisis DNA gigi untuk penentuan seks harus bisa dilakukan dalam tubuh

seperti badan nyata busuk atau skeletonized yang tidak memberikan bahan lainnya. Dalam

badan tersebut, DNA gigi dianggap cukup terurai dan terfragmentasi. Oleh karena itu, suatu

metode yang sangat sensitif seperti metode kita sekarang dianggap cocok untuk menentukan

jenis kelamin menggunakan DNA dari gigi. Y dan kromosom X urutan spesifik ulangi

alphoid, yang kami diperiksa dalam penelitian ini, adalah 100 dan diulang beberapa ribu kali

per genom (22,23), masing-masing, dan dapat diamplifikasi dengan PCR jika bagian dari

salinan ini tetap utuh. Oleh karena itu, metode ini lebih menguntungkan berkaitan dengan

sensitivitas daripada metode menggunakan salinan urutan basa (10,24,25). Di antara urutan

basa salinan, X_Y sekuens gen homolog amelogenin telah terdeteksi untuk menentukan jenis

kelamin dari spesimen forensik karena produk X-spesifik dapat bertindak sebagai kontrol

internal untuk PCR (26,27). Namun, metode amelogenin gen itu tidak sensitif sebagai metode

kami untuk mendeteksi urutan multicopy alpha-satelit. Selanjutnya, urutan salinan tunggal

terkadang tidak diperkuat dari DNA menit seperti template seperti dalam beberapa sel karena

template dikeluarkan ke dalam tabung arection tidak mungkin secara kebetulan berisi urutan.

Sedangkan dalam metode kami, urutan sasaran dapat dideteksi dengan mudah dari seperti

jumlah menit DNA template, dan karena kepekaan deteksi urutan Y-spesifik disesuaikan agar

sesuai atau lebih tinggi dari urutan X-spesifik pada tujuan, kami metode dapat memberikan

hasil yang handal bahkan ketika sampel DNA menit dekat dengan batas deteksi, sekitar 1 pg

DNA, diperiksa.

Penentuan seks itu mungkin dengan menggunakan metode ini pada DNA diekstraksi

dari pulp dari gigi tetap segar diekstraksi terlepas dari jenis gigi. Sejak pulp tidak dapat

diperoleh dari gigi susu yang baru diekstrak, penentuan seks dilakukan dengan metode PCR

menggunakan DNA diekstraksi dari dentin termasuk permukaan rongga pulp, tetapi seks

dapat ditentukan dengan benar di semua gigi. Penentuan seks gigi susu menggunakan

prectically mungkin telah menggunakan metode morfometrik konvensional. Dengan analisis

DNA, bagaimanapun, penentuan seks dapat dilakukan dengan mudah pada gigi susu maupun

gigi permanen.

Telah dilaporkan bahwa DNA dari pulp gigi gigi diekstraksi diawetkan pada suhu

kamar yang stabil dan pemulihan HMW DNA mungkin bahkan setelah 19 tahun (28). Dalam

studi ini, juga, determinataion seks adalah mungkin dalam pulp dari seluruh 20 gigi

diawetkan selama 22 tahun dalam keadaan kering pada suhu kamar.

berikutnya, penentuan seks adalah attemped menggunakan gigi ditempatkan dalam keadaan

basah, yaitu, di bawah air atau dalam tanah. Karena degradasi pembusukan atau DNA

disebabkan oleh proses autolytic dalam keadaan basah, analisis DNA dalam sampel berusia

dianggap sulit (28).

Pada gigi yang direndam dalam air laut, jenis kelamin dapat ditentukan secara akurat

dalam 5 dari 6 gigi bahkan setelah 4 minggu. Untuk gigi 1 sisa di mana seks tidak bisa

ditentukan secara benar, tidak ada band yang diperkuat dari urutan kromosom Y-spesifik

obatained dari laki-laki, dan amplifikasi produk aan hampir 150 pb terdeteksi. Jelas band

diperkuat dari X dan urutan kromosom Y-spesifik terdeteksi dalam DNA diekstrak dari

jaringan keras gigi ini dan yang diekstrak dari darah donor yang sama. Dalam gigi ini, karena

itu, pembusukan karena bakteri dianggap telah berkembang tajam oleh infiltrasi air laut ke

rongga pulp, dan DNA jaringan pulp dianggap telah berkembang tajam oleh infiltrasi air laut

ke dalam rongga pulp, dan DNA dari jaringan pupl dianggap telah terdegradasi sedemikian

rupa sehingga amplifikasi urutan kromosom Y-spesifik dengan PCR menjadi tidak mungkin,

dan sejumlah kecil produk amplifikasi berasal dari DNA bakteri mungkin telah dihasilkan

pada 150 bp. Dalam sampel ini, band diperkuat dari urutan kromosom X-spesifik terdeteksi

meskipun itu dari urutan kromosom Y-spesifik tidak, mungkin karena amplifikasi fragmen

dari urutan kromosom X-spesifik tidak, mungkin karena amplifikasi fragmen dari urutan X-

kromosom-tertentu yang lebih pendek dari urutan kromosom Y-spesifik, kurang bertanggung

jawab yang akan dipengaruhi oleh degradasi DNA karena busuk dan bacause jumlah

pengulangan dari urutan kromosom X-spesifik dalam genom tunggal beberapa puluhan kali

lebih besar daripada urutan kromosom Y-spesifik

Meskipun penentuan seks adalah mungkin dalam semua 6 laki-laki dan perempuan 8

minggu setelah sampel dikuburkan di tanah, dalam 1 dari 4 sampel buuried selama 4 minggu

di dalam tanah band diperkuat dari urutan kromosom X-spesifik tidak terdeteksi oleh PCR

dan penentuan seks tidak mungkin. Decay dalam rongga pulp dianggap telah berkembang

lebih cepat, dan DNA telah terdegradasi ke tingkat yang lebih besar, di gigi ini daripada di

urutan gigi karena ketidakmatangan akar gigi ini's.

Dalam keadaan basah, jaringan pulpa secara bertahap lisis karena otolisis dan

membusuk, dan sampling nya menjadi sulit. Selanjutnya, DNA yang terkandung dalam

jaringan pulp terdegradasi dan fragmentaed sehingga deteksi DNA kromosom seks khusus

dengan PCR menjadi tidak mungkin. Dalam kasus seperti itu, penentuan seks dapat dilakukan

dengan mengumpulkan DNA dari jaringan keras gigi, yang tersisa setelah perkembangan

pembusukan. Dalam studi ini, juga, seks DNA kromosom-spesifik dapat terdeteksi oleh PCR

di ekstrak dari jaringan keras gigi, memungkinkan determinatin seks, bahkan ketika

penentuan seks menggunakan jaringan pulpa sulit.

Seks bisa ditentukan di semua 4 gigi dipanaskan pada 200C selama 30 menit dan 2

dari 4 gigi dipanaskan pada suhu 250C. Sebelumnya, kami melaporkan bahwa penentuan

seks mungkin ketika noda darah dipanaskan di 150C atau kurang selama 30 menit tetapi

bahwa tidak ada urutan X Y atau kromosom-spesifik terdeteksi ketika mereka dipanaskan

pada 200C selama 30 menit (12). Dibandingkan dengan noda darah, DNA dalam pulpa gigi

lebih stabil versus pemanasan, mungkin karena rongga pulp dilindungi oleh jaringan keras

gigi mengurangi efek pemanasan.

Ketika metode ini telah diberikan untuk penentuan seks sebenarnya tubuh

skeletonized, jenis kelamin tubuh mumi skaletonized dalam keadaan kering dapat ditentukan

dengan mengekstrak DNA dari jaringan pulpa sisa kering. Yang 2 lainnya kasus skelotons

ditemukan dalam air setelah terendam selama kurang lebih 1 tahun dan sekitar 11 tahun dan 7

bulan, masing-masing. Karena jaringan pulpa benar-benar segaris dan kehilangan, penentuan

seks adalah attemped menggunakan DNA yang diekstraksi dari jaringan keras gigi. Tidak

seperti gigi yang telah dicabut, akar gigi dalam tubuh skeletonized sebenarnya terletak di

alveoli, sehingga mereka dianggap kurang tepat untuk mengizinkan masuk atau proliferasi

bakteri dan perubahan fisikokimia bahkan di air atau tanah. Juga, dalam tubuh skeletonized

direndam dalam air selama sekitar 11 tahun dan 7 bulan setelah kematian, tubuh bagian atas

termasuk kepala dianggap telah terkubur di lumpur. Juga, dalam tubuh skeletonized

direndam dalam air selama sekitar 11 tahun dan 7 bulan setelah kematian, tubuh bagian atas

termasuk kepala dianggap telah berada dalam kondisi anaerob. Hal ini dianggap telah

melindungi gigi dari efek di atas dan telah menunda perkembangan fragmentasi DNA.

Dari hasil ini, jenis kelamin penentuan gigi dengan cara PCR dianggap sangat

berguna untuk identifikasi atau nyata busuk atau skeletonized badan, yang sulit menggunakan

metode morfologi konvensional.