Pemeriksaan Sampel Sputum BTA

I. Pra analitik sampel

A. Cara pengumpulan dahak

Pasien diberi arahan terlebih dahulu sebelum dilakukan pengumpulan dahak.

Adapun prosedur pengumpulan dahak sebagai berikut :

a) Berkumur dengan air hangat sebelum mengeluarkan dahak.

b) Untuk sputum BTA dapat menggosok gigi terlebih dahulu.

c) Jika pasien menggunakan gigi palsu maka lepaskan sebelum berkumur.

d) Tarik nafas dalam 2-3 kali dan setiap kali hembusan nafas dengan kuat.

e) Pot diletakkan dekat mulut dan batukkan dengan keras dari dalam dada lalu keluarkan

dahak dan masukkan ke dalam pot yang bermulut lebar transparan dan bertutup ulir

volume 50 mL.

f) Pot yang sudah berisi dahak ditutup rapat dengan cara memutar tutupnya.

g) Setelah mengeluarkan dahak, mulut dibersihkan dengan tissue, kemudian buang tissue

ke dalam tempat sampah yang bertutup, lalu cuci tangan.

h) Bila perlu, hal di atas dapat diulang sampai mendapatkan dahak yang berkualitas baik

dengan volume cukup ( 3-5 mL).

i) Bila dahak sulit dikeluarkan, dapat dilakukan hal sebagai berikut :

1. Lakukan olahraga ringan kemudian menarik nafas dalam beberapa kali. Bila terasa

akan batuk, nafas ditahan selama mungkin lalu batukkan.

2. Malam hari sebelum tidur, banyak minum air, menelan tablet gliseril glikolat

200mg atau minum ekspektoran untuk mencairkan dahak.

B. Pemeriksaan kualitas spesimen dahak

Kualitas spesimen dahak

Spesimen dahak yang dapat digunakan untuk bahan pemeriksaan adalah dahak

yang memenuhi standar. Standar dahak yang dapat digunakan adalah dahak yang bersifat

mukoid, purulen, atau bercampur darah. Sedangkan spesimen dahak yang kualitasnya

buruk, seperti bersifat encer atau hanya air liur tidak dapat digunakan untuk pemeriksaan.

Apabila spesimen berupa air liur maka pengumpulan sampel diulang.

II. Analitik specimen

1. Pemeriksaan mikroskopik bakteri tahan asam (BTA)

a. Pembuatan sediaan apus

1) Alat dan bahan

- Api bunsen/ lampu spirtus

- Kaca objek

- rak kaca objek

- Lysol

- Spidol

- lidi steril

- Sputum

2) Cara kerja

- Kaca objek dipersiapkan dan ditulis nomor identitas dahak pasien di sebelah

tepi kiri kaca objek.

- Dahak yang purulen diambil dengan menggunakan lidi steril yang ujungnya

runcing kemudian dioleskan pada kaca objek dengan membuat pola 2x3 cm.

Dilakukan secara aseptis di bio safety cabinet class II A.

- Sediaan diratakan dengan membuat spiral-spiral kecil sewaktu sediaan setengah

kering.

- Lidi dibuang ke botol yang berisi lysol.

- Sediaan apus dikeringkan pada suhu ruangan, kemudiaan difiksasi di atas api 2-

3 kali setelah itu sediaan siap diwarnai.

b) Pewarnaan sediaan apus metode Zielhl Neelsen

1) Prinsip pewarnaan

Dinding bakteri yang tahan asam (BTA) mempunyai lilin dan lemak yang

sukar ditembus cat, oleh karena pengaruh fenol dan pemanasan maka lapisan lilin

dan lemak itu dapat ditembus cat basic fuchsin. Pada penambahan asam alkohol 3%

BTA akan tetap berwarna merah sedangkan bakteri non-BTA dan sel lain

melapaskan warna. Kemudian dengan penambahan zat warna methylen blue, maka

sediaan akan berlatar belakang biru dan BTA terlihat berwarna merah.

2) Alat dan bahan

- Sediaan apus dahak yang sudah difiksasi

- Karbol Fuchsin 0,3%

- Asam alkohol 3%

- Methylen blue 0,3%

- Rak stainless steel

- Timer

- Rak pewarnaan

- Lampu spirtus (Bunsen)

- Kran dengan selang air sedang

- Kasa

- Kapas

3) Cara kerja

- Sediaan apus diletakkan dengan bagian apusan menghadap ke atas rak yang

ditempatkan di wastafel. Sediaan disusun dengan jarak kurang lebih satu jari.

- Seluruh permukaan sediaan digenangi dengan karbol Fuchsin.

- Sediaan dipanaskan dengan api dari bawah sampai keluar uap dan tidak sampai

mendidih.

- Diamkan selama 5 menit.

- Sediaan dibilas dengan air mengalir sampai bersih.

- Sediaan dimiringkan untuk membuang air.

- Sediaan kemudian digenangi dengan asam alkohol sampai sediaan terlihat

pucat. Maksimal 3x2 menit.

- Sediaan dibilas dengan air mengalir.

- Sediaan dimiringkan untuk membuang air.

- Genangi sediaan dengan methylen blue selama 10-20 detik kemudian dicuci

dengan air mengalir sampai bersih.

- Sediaan dikeringkan pada rak pengering.

4) Pembacaan sediaan apus dahak

-Gunakan lensa objektif 10x untuk menetapkan fokus dan lapang pandang. Periksa

sediaan untuk menentukan kualitas sediaan. Pada sediaan dahak pada umumnya

ditemukan labih banyak sel leukosit atau sel radang dari pada sel epitel.

-Teteskan satu tetes minyak emersi dengan aplikator minyak emersi tidak

menyentuh kaca objek.

-Putarlah lensa objektif 100x dengan hati-hati ke atas sediaan apus.

-Sesuaikan fokus dengan hati-hati sampai sel-sel terlihat dengan jelas.

-Baca sediaan secara sistematis sehingga daerah yang diperiksa benar-benar

reperesentatif. Sediaan dibaca sebanyak 300 LPB dengan arah pembacaan

sebagai berikut:

III. Pra analitik

a. Pelaporan pemeriksaan sediaan apus

Menurut IUATLD ( International Union Against Tubercullosis and Lung Disease)

sebagai berikut:

Hasil pengamatan Pelaporan hasil

Tidak ditemukan BTA per 100 lapang

pandang (minimal 300 lapang pandang)

Tidak ditemukan

Hasil pengamatan Pelaporan hasil

1-9 BTA per 100 lapang pandang Ditulis jumlahnya

(+n)

10-99 BTA per 100 lapang pandang 1+

1-10 BTA per lapang pandang

(dibaca paling sedikit 50 lapang pandang)2+

>10 BTA per lapang pandang

(dibaca paling sedikit 20 lapang pandang)3+