Nephelometri

Nephelometri adalah teknik yang digunakan dalam imunologi untuk menentukan tingkat

beberapa protein plasma darah. Misalnya total tingkat antibodi isotypes atau kelas:

Immunoglobulin M, imunoglobulin G, dan Imunoglobulin A. Hal ini penting dalam kuantifikasi

M - protein dalam penyakit seperti multiple myeloma (Anonim1, 2013).

Hal ini dilakukan dengan mengukur kekeruhan dalam sampel air dengan melewatkan

cahaya melalui sampel yang diukur. Dalam nephelometri pengukuran dilakukan dengan

mengukur cahaya melewati sampel di sudut (Anonim2, 2013).

Teknik ini banyak digunakan di laboratorium klinis karena relatif mudah otomatis. Hal

ini didasarkan pada prinsip bahwa suspensi encer partikel kecil akan menghamburkan cahaya

(biasanya laser) melewatinya bukan hanya menyerapnya. Jumlah menyebar ditentukan dengan

mengumpulkan cahaya pada sudut (biasanya pada 30 dan 90 derajat) (Anonim2, 2013).

Antibodi dan antigen dicampur dalam konsentrasi sehingga hanya agregat kecil dibentuk

yang tidak cepat menyelesaikan ke bawah. Jumlah menghamburkan cahaya diukur dan

dibandingkan dengan jumlah pencar dari campuran dikenal. Jumlah diketahui ditentukan dari

kurva standar (Anonim2, 2013).

Nephelometry dapat digunakan untuk mendeteksi antigen atau antibodi, tetapi biasanya

dijalankan dengan antibodi sebagai reagen dan antigen pasien sebagai diketahui (Stevens, 2010).

Titik akhir tes nephelometry dijalankan dengan memungkinkan reaksi antibodi/antigen

untuk menjalankan sampai selesai (sampai semua antibodi reagen hadir dan membawa antigen

sampel pasien yang dapat agregat telah melakukannya dan tidak lebih kompleks dapat

terbentuk). Sayangnya, partikel yang besar akan jatuh keluar dari solusi dan menyebabkan

pembacaan palsu pencar, sehingga nephelometry kinetik itu dibuat (Rahma, 2011).

Dalam nephelometri kinetik, laju pencar diukur tepat setelah reagen ditambahkan. Selama

reagen konstan laju perubahan dapat dilihat secara langsung berkaitan dengan jumlah antigen

yang ada (Rahma, 2011).

Nephelometri dan turbidimetri terkait erat dengan teknik analisis yang berdasarkan pada

hamburan radiasi dengan larutan yang mengandung materi partikulat tersebar. Ketika radiasi

yang melewati media transparan yang partikelnya padat tersebar, bagian radiasi tersebar ke

segala arah, memberikan penampilan keruh pada campuran. Penurunan kejadian radiasi, sebagai

hasil dari hamburan oleh partikel adalah dasar dari metode turbidimetri. Disisi lain, metode

nephelometri didasarkan pada pengukuran radiasi tersebar, biasanya disudut kanan insiden balok

tersebut. Pilihan antara nephelometri dan pengukuran turbidimetri tergantung pada fraksi cahaya

yang tersebar. Ketika hamburan luas, karena kehadiran banyak partikel, turbidimetri umunya

menghasilkan hasil yang lebih dapat diandalkan. Nephelometri lebih disukai pada konsentrasi

rendah karena intensitas tersebarnya kecil dengan latar belakang hitam lebih mudah untuk diukur

dibandingkan perubahan kecil dalam intensitas radiasi yang ditransmisikan intens. Hal ini

penting untuk dicatat bahwa hamburan terkait dengan kedua nephelometri dan turbidimetri tidak

melibatkan kerugian daya radiasi, hanya arah propagasi dipengaruhi (Morais, dkk, 2012).

Nephelometri didasarkan pada pengukuran radiasi tersebar oleh partikel sampel disudut

kanan pada balok. Detektor ditempatkan pada jalan insiden radiasi dari sumber. Dalam

kebanyakan kasus, detektor ditempatkan di 90 derajat relative terhadap jalur insiden radiasi. Ini

mengukur intensitas yang bagian dari radiasi tersebar yang dipancarkan tegak lurus dari sel ke

arah detektor. Untuk pengukuran nephelometric, persamaan menggambarkan hubungan antara

intensitas radiasi tersebar, intensitas kejadian radiasi, dan konsentrasi partikel yang menyebabkan

hamburan (Morais, dkk, 2012):

I = KI0C

Nilai K adalah konstan hanya untuk instrumen tertentu dan ketika eksperimental kondisi

dikendalikan dengan hati-hati. Intensitas radiasi tersebar adalah berbanding lurus dengan kedua

intensitas radiasi insiden dan konsentrasi analit. Untuk tes solusi diencerkan, hal ini

menguntungkan untuk menggunakan insiden radiasi yang memiliki intensitas tinggi (Morais,

dkk, 2012).

Sinyal yang teredeteksi tersebar mungkin timbul dari partikel bunga tetapi juga dari debu,

bercak di latar belakang, atau dari molekul lain (misalnya, protein dan lipid) dalam sampel.

Refleksi dan menyebar dari komponen optic instrumen juga dapat menyebabkan sinyal latar

belakang. Kinerja terbaik diperoleh dalam solusi encer mana penyerapan dan refleksi yang

minimal. Dengan kondisi tersebut, hubungan antara konsentrasi hamburan partikel dan intensitas

cahaya yang tersebar hampir linier atas sangat luas berbagai konsentrasi (Morais, dkk, 2012).

Dapus

Anonim1, 2013, Definition of Nephelometry, http://www.lib.mcg.edu/edu/esimmuno/ch4/nephelom.htm, (online) diakses pada tanggal 21 September 2013 pukul 21.09.

Anonim2, 2013, Quantitave Nephelometry, http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/003545.htm, (online) diakses pada tanggal 21 September 2013 pukul 21.34.

Rahma.siti., 2011, Turbidimetri dan nefelometri, ITB, Bandung.

Stevens, 2010, Clinical Immunology dan Seriology 3rd Ed, pg 127, FA Davis Company, USA.

Morais, Ines P. A., Ildiko V. Toth, and Antonio O. S. S. Rangel, 2012, Turbidimetric and Nephelometric Flow Analysis: Concepts and Applications, pg 557-559, Universidade Cato´lica Portuguesa, Portugal.