ISOLASI DNA

Didalam sel materi genetic berupa DNA terdapat dalam inti sel (DNA nucleus)

dan mitokondria (DNA mitokondria) sehingga secara keseluruhan disebut

DNA genomic. Selain DNA,didalam sel dijumpai pula RNA dan protein.

Prinsip isolasi DNA adalah dengan melisiskan membran sel dan membrane

nucleus sehingga DNA,RNA dan protein dapat keluar dari sel. Selanjutnya

dilakukan presipitasi terhadap RNA dan protein sehingga didapatkan DNA

yang murni. Metode isolasi DNA bermacam-macam,salah satunya adalah

menggunakan ion excharge Chelex-100.

Alat dan Bahan

Alat-alat yang diperlukan untuk isolasi DNA genom dari sel darah putih

Herrrmh :

-Tabung sentrigugasi 15ml yang steril

-Rak tabung

-Micropipettor (Biorad) dengan berbagai ukuran (10-100 µl dan 100-1000 µl)

-Pipet tip untuk volume 1000 µl dan 100 µl

-Freezer -20 derajat celcius

-Alat vortex

-Waterbath

-Mesin Inkubator

-Ice bath

Mesin sentrifugasi

-Tabung eppendorf 1,5ml

-Kertas absorban / tissue

Bahan-bahan :

-Phosphate Buffer Saline (PBS) Ph 7,4

-Saponin 0,5% dalam PBS

-Chelex-100 20% dalam ddH2O

Cara kerja :

Isolaso dilakukan dengan menggunakan metode ekstrasi DNA Chelex-100

dengan menggunakan Phosphate Buffer Saline (PBS) pH 7,4 ; Saponin

0,5% dalam PBS ; dan Chelex 20% dalam ddH2O Ph 10,5.

Adapun cara kerjanya sebagai berikut :

1. Ambil 200 l darah dimasukkan kedalam tabung 1,5ml steril

2. Tambahkan PBS Ph 7,4 sebanyak 1ml kemudian disentrifuge dengan

kecepatan 5000rpm selama 5 menit

3. Buang supernatant. Ulangi pencucian ini sebanyak 3x

4. Tambahkan 500 µl 0,5% Saponin dalam PBS dicampur dengan baik

menggunakan vortex kemudian diinkubasi dalam es selama 5 menit

5. Untuk mendapatkan hasil yug sempurna,inkubasikan campuran

tersebut pada suhu -20 derajat celcius selama semalam

6. Keesokannya,dilakukan sentrifuge dengan kecepatan 12.000rpm

selama 10 menit

7. Supernatan dibuang,ditambahkan 50 µl Chelex 20% dalam ddH20 Ph

10,5 dan ditambah 100ml ddH20

8. Diinkubasi dalam air mendidih selama 10 menit.

Selanjutnya,disentrifuge dengan kecepatan 12.000 rpm selama 10

menit

9. DNA akan berada pada bagian supernatant (DNA containing water)

lalu bagian bawah ini dipindahkan dalam tabung eppedorf 1,5ml steril

dan disimpan pada suhu -20 derajat celcius