8/10/2019 LAP.IMUNO 3

1/9

PEMERIKSAAN AVIDITAS DAN TITER ANTISERA

I. TUJUAN PERCOBAAN

Untuk mengetahui cara pengujian aviditas antisera dan uji titer antisera

Untuk mengetahui waktu terjadinya penggumpalan

II. TINJAUAN PUSTAKA

Pemeriksaan serologik sering dilakukan sebagai upaya menegakkan diagnosis.

Walaupun saat ini pemeriksaan serologik tidak terbatas pada penyakit infeksi, namun

untuk menunjang diagnosis penyakit infeksi memang hal yang sering dilkukan.

memungkinkan dilakukannya pengamatan secara in vitro terhadap perubahan kompleks

antigen-antibodi (Ag-Ab). Pengujian tersebut berdasar pada proses presipitasi atau

aglutinasi atau aktivasi komplemen yang diakibatkan oleh perubahan status fisik

kompleks.

Reaksi antigen-antibodi secara in vitro dapat dimanfaatkan untuk:1.

Identifikasi antigen

Apabila antigen tidak diketahui, misal :

a. Reaksi presipitin untuk mengklasifikasi grup streptokokus

b.

Reaksi aglutinasi untuk mengklasifikasi serotipe salmonella, shigella

c. Reaksi presipitin untuk mengidentifikasi antigen variola pada lesi smallpox

2.

Deteksi kuantitasi antibodi yang disekresi pada serum, air susu, dan cairan tubuh lainnya.

Pada kasus ini antibodi tidak diketahui. Pemeriksaan antibodi dapat digunakan untuk:

a. Menilai imunitas terhadap rubella, mumps, poliomyelitis

b. Menilai prevalensi infeksi oleh mikroorganisme dalam suatu komunitas atau survei

serologik pada kelompok umur

c. Mendeteksi jaringan yang diinvasi suatu mikroorganisme, mis: Haemophilus

influenza pada bronkitis kronis atau antibodi E. coli pada infeksi traktus urinarius.

d. Mendiagnosa penyakit, misalnya: brucellosis, tifoid, VD, DHF, dsb

8/10/2019 LAP.IMUNO 3

2/9

Pada pemeriksaan terhadap spesimen serum tunggal, konklusi yang dapat dibuat

sangat terbatas, mengingat bahwa banyak kasus antibodi dapat distimulasi setiap saat,

tidak selalu berkaitan dengan penyakit yang sedang terjadi Sebaiknya dilakukan

pemeriksaan tehadap 2 sera, satu dikoleksi pada saat penyakit timbul, dan yang lain 10-14

hari brikutnya. Kenaikan titer antibodi spesifik sampai 4 kali lipat spesimen uji,

merupakan indikasi signifikan yang menunjukkan bahwa sedang terjadi infeksi aktif.

Faktor-faktor penting yang harus diperhatikan pada uji serologi :

1. serum kontrol: dalam hal ini harus diperhatikan beberapa sifat serum kontrol

-

sifat antikomplementer

- tidak memiliki inhibitor spesifik

- tidak toksik terhadap kultur sel

-

memiliki aglutinin

- dapat menghasilkan presipitat non spesifik

2. Kontrol antigen: antigen yang digunakan harus memiliki aktivitas tinggi. Antigen dapat

bersifat antikomplementer, oto-aglutinasi, dan mungkin terkontaminasi, hal-hal tersebut

dapat berpengaruhpada pengujian.

3. Kontrol pelarut: pelarut yang digunakan ada kemungkinan terkontaminasi, hal ini dapat

menyebabkan terjadi perubahan pH, efek toksisk, dsb.

4. Antisera standar: antigen cenderung tidak stabil pada penyimpanan dibanding sera,

kontrol uji untuk standar sera negatif dan standar sera positif yang telah diketahui

titernya

8/10/2019 LAP.IMUNO 3

3/9

REAKSI ANTIGEN-ANTIBODI YANG DIGUNAKAN PADA SEROLOGI

DIAGNOSTIK

1. Uji Presipitasi

Presipitasi terjadi antara molekul Ab dan Ag pada bentuk solubel. Pada pengujian ini

antigen berbentuk koloidal. Laju presipitasi sangat tergantung pada proporsi antigen dan

antibodi pada campuran. Terdapat beberapa cara pengujian pada metode presipitasi,

yakni:

a.

Uji tabung

Dengan mencampur pada tabung, masukkan dilusi antigen atau antibodi dengan

jumlah tertentu. Dilusi dilakukan dari konsentrasi tinggi (tabung pertama) sampai

konsentrasi terendah (tabung terakhir). Presipitat timbul pada tabung yang

mengandung Ag dan Ab secara proporsional.

b. Presipitasi Cincin

Antigen dilapiskan pada serum (antibodi), terjadi difusi setelah mencapai ikatan

proporsional dengan antibodi akan menghasilkan presipitasi berbentuk cincin.

c. Difusi Gel

Pada pengujian ini memungkinkan antigen dan antubodi berdifusi perlahan dari arah

tertentu melalui gel. Pada cara ini homogenitas dan derajat kemurnian dari berbagai

antigen dapat diuji. Pita presipitasi terbentuk pada setiap antigen dapat saling

bertemu, atau bersilangan menunjukkan:

- bersambungan, antigen identik secara imunologik (terhadap serum uji)

-

bercabang, antigen berhubungan sebagian

-

bersilangan, menunjukkan antigen tidak berhubungan

Metode difusi tunggal

Di sini anti serum dalam agar semi solid, zona buffer dari agar dan antigen

terpisah secara vertikal dalam tabung. Garis presipitasi terbentuk dalam zona

buffer.

Metode difusi ganda

8/10/2019 LAP.IMUNO 3

4/9

Agar dituang pada plat. Di bagian tengah diisi antigen atau antiserum sedangkan

sera atau ekstrak di bagian tepi. Pita presipitasi terbentuk dalam gel pada posisi

Ag dan Ab mencapai proporsi optimal setelah berdifusi. Dapat dimodifikasi

dengan uji mikrodilusi menggunakan obyek gelas

Immunoelektroforesis

Jika terdapat sejumlah Ag dalam larutan seperti serum, sulit memisahkan pita

presipitasi yang timbul pada setiap reaksi Ab-Ag, bila hanya menggunakan cara

difusi di atas. Komponen serum dipisahkan dengan elektroforesis dalam agar gel

dan antiserum dibiarkan berdifusi melalui komponen yang dihasilkan pada pita-

pita yang terbentuk.

Elektroforesis "roket"

Merupakan metode kuantitatif, dilakukan elektroforesis antigen ke dalam gel yang

telah mengandung antibodi. Presipitasi yang terjadi berbentuk roket, panjang

masing-masing roket menunjukkan konsentrasi antigen.

Immunodifusi radial tunggal

Antiserum monospesifik ditambahkan ke dalam gel, kemudian dituang pada slide

petridisk atau lempeng plastik. Dibuat lubang gel, larutan antigen dimasukkan

pada lubang. Terjadi difusi sehingga terbentuk zona sirkuler yang menunjukkan

jarak proporsional dengan jumlah antigen yang ditambahkan pada setiap lubang.

Kuantitasi antigen yang diperiksa diketahui dari perbandingan cincin presipitasi

dibandingkan dengan cincin presipitasi kontrol.

2. Uji aglutinasi

Digunakan untuk antigen berukuran besar, pada reaksi ini antibodi dikontakkan dengan

antigen yang merupakan bagian permukaan suatu material misalnya eritrosit,

mikroorganisme atau partikel anorganik (polystyrenelatex) yang telah dicoated dengan

Ag. Reaksi Ab-Ag membentuk agregat yang dapat diamati atau aglutinasi.

3. Uji Litik

Uji ini tergantung pada proses lisis dari darah atau bakteri dari suatu sistem yang

mengandung antigen, direaksikan dengan antibodi dan komplemen. Antigen yang

digunakan berupa :

a.

Sel (uji litik langsung)

8/10/2019 LAP.IMUNO 3

5/9

8/10/2019 LAP.IMUNO 3

6/9

III. BAHAN DAN ALAT

a. Bahan yang dipakai

-Larutan eritrosit 5 % golongan A, B,AB,O dan larutan NaCl fisiologis

-Untuk kelompok 5 menggunakan golongan darah B

b. Alat yang digunakan

-Sentrifus

-Tabung reaksi

-Rak tabung

IV. CARA KERJA

A. Uji aviditas antisera

1. Pengujian aviditas dilakukan terhadap antisera yang memberikan reaksi

aglutinasi terhadap antigen erotrosit reaksi (+) pada uji spesifitas.

2.

Pengerjaan pengujian sama dengan uji spesifitas, tapi disini yang dihitung

berapa lama waktu yang diperlukan mulai di tetesi larutan eritrosit 5 % sampai

terbentuk aglutinasi.

3. Tabelkan waktu yang diperoleh untuk terjadi aglutinasi tersebut.

B. Uji titer antisera

1.

Pada rak, letakkan secara berurutan 10 buah tabung reaksi kecil yang masing-

masingnya telah di tandai dengan , sampai 1/512 dan K (kontrol).

2.

Pada tabung reaksi ke 1 () sampai dengan tabung ke 9 (1/512 ) dimasukkan

larutan NaCL sebanyak 0,2 ml (4 tetes) dan pada tabung K 8 ml.

3. Pada tabung reaksi ke 1 di tambahkan antisera (golongan A) sebanyak 0,2 ml (

4 tetes), lalu aduk.

8/10/2019 LAP.IMUNO 3

7/9

4. Ambil 0,2 ml ( 4 tetes ) larutan pada tabung ke 1 dan masukkan ke tabung

reaksi ke 2, aduk dan begitu seterusnya sampai tabung reaksi ke 9 dan tabung

reaksi ke 9 ini dibuang 0,2 ml (4 tetes).

5. Pada masing2 tabung reaksi di tambahkan suspensi eritrosit 5 % golongan B

sebanyak 0,005 ml (1 tetes)

6.

Biarkan 10 ml , lalu disentrifugasi dengan kecepatan 1000 rpm selama 5

menit.

7. Amati pengenceran yang tertinggi yang masih mengalami aglutinasi.

V. HASIL DAN PEMBAHASAN

a.

Hasil pengamatan

b. Pembahasan

Pada praktikum kali ini dilakukan uji aviditas antisera yaitu

mengitung waktu terjadinya penggumpalan dimana waktu mulai

dihitung pada saat mulai diteteskannya larutan eritrosit 5 %.

Untuk golongan darah B waktu terjadinya penggumpalan adalah 3

menit 9 detik untuk eritrosit 5% A dan 5 menit 8 detik untuk eritrosit

5% AB.

8/10/2019 LAP.IMUNO 3

8/9

Terjadinya reaksi aglutinasi berbeda-beda untuk setiap golongan

darah karena tergantung faktor-faktor dari luar maupun dari dalam

yang mempengaruhinya.

Pada saat mengamati waktu terjadinya reaksi aglutinasi ini

menggunakan kaca pembesar karena kecilnya aglutinasi yang

terbentuk dan untuk memeudahkan pengamatan.

Sedangkan untuk uji titer antisera yang dilihat adalah pengenceran

yang tertinggi yang masih mengalami aglutinasi.

Pengenceran dibuat mulai dari , , 1/8, 1/16, 1/32, 1/64, 1/128,

1/256, 1/512 dan dibandingakn terhadap kontrol.

Pada percobaan ini untuk golongan darah B dari kelompok 5

pengenceran tertinggi yang dibandingkan terhadap kontrol hanya

sampai pada pengenceran 1/32.Ini menunjukkan secara semikuantitatif

antibodi yang ada pada darah tersebut hanya samapai pada

pengenceran 1/32.

VI. KESIMPULAN

Dari praktikum diatas dapat diambil kesimpulan yaitu :

1.

Reaksi anatara antigen dan antibodi dapat dilakukan dengan berbagi metode

salah asatunya dengan uji aviditas dan titer antisera

2.

Uji aviditas antisera adalah untuk mengitung waktu terjadinya penggumpalan

atau aglutinasi

3. Uji Titir antisera adalah suatu metode semi kuantitatif untuk melihat jumlah

antibodi yang ada dalam darah dengan melakukan suatu titer atau pengenceran

dan dilihat pada pengenceran tertinggi keberapa yang masih mengalami

aglutinasi

8/10/2019 LAP.IMUNO 3

9/9

DAFTAR PUSTAKA

Anonim, 1996, Genetika, Departemen P dan K Direktorat Jendral Pendidikan Tinggi,Jakarta.

Nanny, K H. et all.,1990, Isolasi imunogamaglobulin anti-T4 dari antisera, Seminar

Pendayagunaan Reaktor Nuklir untuk Kesejahteraan Masyarakat, PPTN- BATAN, Bandung.

Sinnott, E.W., 1958,Principles Of Genetics, 5thedition, McGraw-Hill Book Company Inc.,

New York.

Suryo, 1996, Genetika, Departemen P dan K Direktorat Jendral Pendidikan Tinggi, Jakarta.

Yovita Lisawati, 1993, Pembuatan dan Evaluasi Antisera Penentuan Golongan DarahABO, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Andalas, Padang.