LAMPIRAN

50

Lampiran 1. Fungsi Peralatan Penelitian

1. Tabung hungate ukuran 30 mL

Berfungsi sebagai tempat perkembangbiakan bakteri anaerob dan produksi

biogas.

2. Tabung reaksi

Berfungsi sebagai tempat untuk pengenceran sampel.

3. Rak tabung reaksi

Berfungsi sebagai tempat dudukan tabung-tabung yang berisi media maupun

larutan untuk pengenceran.

4. Syringe 5 mL

Berfungsi untuk mentransfer hasil pengenceran dari tabung pengenceran ke

dalam tabung hungate.

5. Syringe 50 mL

Berfungsi untuk mengambil gas dari tabung hungate dan dipindahkan kedalam

tabung vakum.

6. Beaker glass 1000 mL

Berfungsi untuk preparasi media.

7. Labu Erlenmeyer 1000 mL

Berfungsi untuk menampung larutan, bahan, atau cairan yang akan digunakan.

Untuk menghomogenkan bahan-bahan, media, menampung akuades, kultivasi

mikroba dalam kultur cair pada media NA, RGCA, dan larutan untuk

pengenceran sebelum dimasukkan ke dalam tabung hungate

8. Sumbat karet

Berfungsi untuk menutup labu didih maupun Erlenmeyer.

51

9. Round bottomed flask (Labu didih)

Berfungsi sebagai tempat pembuatan media.

10. Tabung Scott 200 mL dan 500 mL

Berfungsi sebagai tempat penyimpanan ekstrak isi rumen saat direfrigrator.

11. Gelas ukur

Berfungsi untuk mengukur bahan-bahan yang bersifat cair.

12. Spatula

Berfungsi sebagai alat untuk pengaduk media ataupun larutan yang digunakan.

13. Timbangan Analitik

Berfungsi untuk menimbang bahan-bahan yang akan digunakan.

14. Autoclave

Berfungsi untuk mensterilkan media. Tekanan yang digunakan umumnya 1,5 atm

pada suhu 121oC (250oF) selama 15-20 menit, bergantung pada banyak

sedikitnya media yang perlu disterilkan.

15. Water bath

Berfungsi untuk menurunkan suhu media yang telah disterilisasi dari autoclave

hingga mencapai 45o -50oC.

16. Oven kering

Berfungsi untuk mensterilkan alat-alat yang digunakan pada penelitian seperti

tabung-tabung dan gelas kaca secara kering selama 2-3 jam pada temperatur

160o-170oC, bergantung pada banyak sedikitnya peralatan yang dimasukkan ke

dalam oven.

52

17. Inkubator

Berfungsi untuk menginkubasi mikroorganisme pada sampel yang berada

didalam tabung hungate pada suhu yang terkontrol. .

18. Hot plate stirrer

Berfungsi untuk memasak media NA.

19. Roll tube

Berfungsi sebagai pemutar tabung hungate untuk mendapatkan lapisan media

agar yang tipis pada sekeliling tabung hungate.

20. Counter plate

Berfungsi untuk membantu pengamatan makroskopis terhadap koloni bakteri

anaerob yang terbentuk pada tabung hungate.

21. Tabung Mix gas (80% H2 + 20% CO2)

Berfungsi sebagai tempat penyimpan gas H2 dan CO2 untuk menciptakan suasana

anaerob pada tabung hungate dan mencegah akses dari oksigen.

22. Tabung vakum

Berfungsi sebagai tempat penyimpanan gas yang telah diambil dari tabung

hungate untuk diperiksa menggunakan GCMS.

23. Gas Chromatography Mass Spectrometry (GCMS)

Berfungsi untuk mengukur keberadaan gas metana (CH4) pada biogas yang

terbentuk. Untuk mengidentifikasi suatu senyawa yang terdapat pada campuran

gas dan juga menentukan konsentrasi suatu senyawa dalam fase gas.

53

24. Refrigrator dan Freezer

Berfungsi sebagai tempat penyimpanan dan pendingin ekstrak isi rumen sebelum

digunakan. Freezer digunakan untuk memproduksi es batu yang akan digunakan

pada saat proses roll tube.

25. Alumunium foil gulung

Berfungsi untuk membungkus tabung ataupun labu yang akan disterilisasi pada

autoclave dan untuk membungkus bagian atas tabung hungate untuk mencegah

kebocoran dan menjaga agar keadaan didalam tabung tetap anaerob.

26. Parafilm

Berfungsi sebagai perekat dan pembungkus yang digunakan pada tutup dan

bagian atas tabung hungate dan tabung vakum untuk mencegah kebocoran gas.

27. Benang Kasur

Berfungsi untuk mengikat dan mengencangkan bungkusan alumunium foil yang

membungkus tabung ataupun labu.

28. Label

Berfungsi untuk penamaan pada peralatan yang digunakan.

29. Botol plastik

Berfungsi sebagai tempat penyimpanan sampel sludge biogas feses sapi perah

sebelum digunakan.

30. Sekop

Berfungsi untuk mengambil sampel sludge biogas feses sapi perah dari lubang

pengeluaran (outlet) pada reaktor biogas fixed dome.

54

31. Ember plastik

Berfungsi untuk menampung ekstrak isi rumen yang didapatkan dari isi rumen.

32. Kain kasa

Berfungsi sebagai kain penyaring ekstrak isi rumen untuk mengurangi partikel

besar.

33. Termos

Berfungsi sebagai tempat penyimpanan esktrak isi rumen yang dihasilkan setelah

penyaringan.

34. Kain lap

Berfungsi untuk membersihkan peralatan maupun kotoran yang ada dilingkungan

penelitian.

35. Spidol warna

Berfungsi untuk menandai koloni bakteri yang terbentuk pada tabung hungate.

36. Alat tulis

Berfungsi untuk mencatat seluruh kegiatan penelitian dan hasil pengamatan yang

didapatkan.

55

Lampiran 2. Uraian Bahan Media RGCA dan Larutan untuk Pengenceran

1. Media RGCA (Rumen Fluid-Glucose-Cellobiose-Agar Medium) (Bryant dan

Burkey, 1953 dalam Ogimoto dan Imai, 1980):

a. Larutan mineral I 7.5 mL

terdiri atas:

K2HPO4 (Potasium Hidrogen Fosfat) 0,6 gram

Akuades 100 mL

b. Larutan mineral II 7.5 mL

terdiri atas:

NaCl (Natrium Klorida) 1,2 gram

(NH4)2SO4 (Diazanium Sulfat) 1,2 gram

KH2PO4 (Potasium Dihidrogen Fosfat) 0,6 gram

CaCl2 (Kalsium Klorida) 0,12 gram

MgSO4.7H2O (Magnesium Sulfat) 0,25 gram

Akuades 100 mL

c. Larutan resazurin 0,1% 0,1 mL

d. Akuades 50 mL

e. Bacto agar (Oxoid) 2 gram

f. Ekstrak isi rumen 40 mL

g. Glukosa 0,05 gram

h. Selobiosa 0,05 gram

i. Sistein-HCL.H2O 0,05 gram

j. Larutan Na2CO3 (Natrium Karbonat) 8% 5 mL

56

2. Larutan untuk Pengenceran (Bryant dan Burkey, 1953 dalam Ogimoto dan

Imai, 1980):

a. Larutan mineral I 7.5 mL

terdiri atas:

K2HPO4 (Potasium Hidrogen Fosfat) 0,6 gram

Akuades 100 mL

b. Larutan mineral II 7.5 mL

terdiri atas:

NaCl (Natrium Klorida) 1,2 gram

(NH4)2SO4 (Diazanium Sulfat) 1,2 gram

KH2PO4 (Potasium Dihidrogen Fosfat) 0,6 gram

CaCl2 (Kalsium Klorida) 0,12 gram

MgSO4.7H2O (Magnesium Sulfat) 0,25 gram

Akuades 100 mL

c. Sistein-HCL.H2O 0,05 gram

d. Larutan Na2CO3 (Natrium Karbonat) 8% 0,3 gram

e. Larutan resazurin 0,1% 0,1 mL

f. Akuades 100 mL

57

Lampiran 3. Diagram Alir Prosedur Kerja Penelitian

A. Diagram Alir Prosedur Kerja Penelitian

Sterilisasi alat dan media

Pembuatan media dan pengencer

Pengambilan sampel

Penanaman sampel bakteri

Pengenceran sampel

Inkubasi 0-14 hari

Metode Roll Tube

Pengamatan hasil penelitian

58

B. Diagram Alir Pembuatan Media NA (Nutrient Agar)

Memasukkan nutrient agar dan

lactose broth instan pada akuades

Menambahkan resazurin dan

ekstrak isi rumen

Memanaskan di atas hot plate

stirrer

Mensterilkan dalam autoclave

Memasukkan ke dalam tabung

hungate sebanyak 10 ml

Mendinginkan 45°C - 60°C pada

water bath

Membebaskan media dari oksigen

dengan pemberian mix gas

59

C. Diagram Alir Pembuatan Media RGCA (Rumen Fluid-Glucose-Cellobiose-

Agar Medium)

Mencampurkan larutan mineral I

dan larutan mineral II, glukosa,

selobios

Menambahkan resazurin, bacto

agar, ekstrak isi rumen, dan

akuades

Memanaskan di atas hot plate

stirrer

Memasukkan ke dalam tabung

hungate sebanyak 10 ml

Memasukkan sistein HCl.H2O

dan larutan Na2CO3

Mensterilkan dalam autoclave

Mendinginkan 45°C - 60°C pada

water bath

Membebaskan media dari oksigen

dengan pemberian mix gas

60

D. Diagram Alir Pembuatan Larutan untuk Pengenceran

Mencampurkan larutan mineral I

dan larutan mineral II

Menambahkan resazurin dan

akuades

Memanaskan di atas hot plate

stirrer

Mensterilkan dalam autoclave

Memasukkan ke dalam tabung

reaksi sebanyak 4,5 ml

Mendinginkan 45°C - 60°C pada

water bath

Membebaskan pengencer dari

oksigen dengan pemberian mix

gas

61

E. Diagram Alir Pengenceran Sampel dan Penanaman Bakteri

Sludge Biogas

Feses Sapi Perah

4,5 ml

10-1

4,5 ml

10-2

4,5 ml

10-3

0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml

10-3

Masing- masing 0,2 ml

Tabung hungate berisi 10 ml

media NA dan RGCA

62

Lampiran 4. Hasil Penelitian

A. Jumlah Koloni Bakteri Anaerob yang Tumbuh

Media NA Media RGCA

Ulangan Hari ke- (x103 cfu/mL) (x103 cfu/mL)

2 15 45

1 5 165 195

10 310 750

14 185 630

2 30 30

2 5 190 105

10 395 790

14 265 550

2 30 35

3 5 140 125

10 365 470

14 225 380

B. Hasil Analisis Statistik Jumlah Koloni Bakteri Anaerob yang Tumbuh

Media/ Hari Rata-rata

jumlah bakteri

(x103 cfu/mL)

S. Baku Varian

KV (%) Penaksiran

rata- rata

(±)

NA/H-2 25,00 8,66 75,00 34,64 21,54

NA/H-5 165,00 25,00 625,00 15,15 62,18

NA/H-10 356,67 43,11 1858,33 12,09 107,21

NA/H-14 225,00 40,00 1600,00 17,78 99,48

RGCA/H-2 36,67 7,64 58,33 20,83 19,00

RGCA/H-5 141,67 47,26 2233,33 33,36 117,53

RGCA/H-10 670,00 174,36 30400,00 26,02 433,64

RGCA/H-14 520,00 127,67 16300,00 24,55 317,53

63

C. Persentase Biogas yang Dihasilkan

a. Media NA

Gas (%)

Ulangan Hari ke- Metana Karbon dioksida Nitrogen

2 - 100 -

1 5 0,09 99,91 0,00

10 9,86 90,14 0,00

14 0,51 99,48 0,00

2 - 100 -

2 5 0,11 99,89 0,00

10 12,02 87,97 0,01

14 0,44 99,56 0,00

2 - 100 -

3 5 0,13 99,87 0,00

10 9,82 90,18 0,00

14 0,32 99,68 0,00

b. Media RGCA

Gas(%)

Ulangan Hari ke- Metana Karbon dioksida Nitrogen

2 - 100 -

1 5 3,25 96,73 0,02

10 11,40 88,60 0,00

14 0,32 99,68 0,00

2 - 100 -

2 5 4,48 95,49 0,03

10 12,20 87,79 0,01

14 0,32 99,67 0,00

2 - 100 -

3 5 4,72 95,25 0,03

10 12,42 87,53 0,05

14 0,27 99,73 0,00

64

D. Hasil Analisis Statistik Produksi Biogas yang Dihasilkan

a. Metana

Media/ Hari Rata-rata

Metana (%)

S. Baku Varian

KV (%) Penaksiran

rata- rata

(±)

NA/H-2 - - - - -

NA/H-5 0,11 0,02 0,00 16,95 0,05

NA/H-10 10,57 1,26 1,59 11,94 3,14

NA/H-14 0,42 0,10 0,01 22,61 0,24

RGCA/H-2 - - - - -

RGCA/H-5 4,15 0,79 0,62 19,01 1,96

RGCA/H-10 12,01 0,54 0,29 4,47 1,33

RGCA/H-14 0,31 0,03 0,00 10,31 0,08

b. Karbon dioksida

Media/ Hari Rata-rata

Karbon

dioksida (%)

S. Baku Varian

KV (%) Penaksiran

rata- rata

(±)

NA/H-2 100,00 0,00 0,00 0,00 0,00

NA/H-5 99,89 0,02 0,00 0,02 0,05

NA/H-10 89,43 1,27 1,60 1,41 3,15

NA/H-14 99,57 0,10 0,01 0,10 0,25

RGCA/H-2 100,00 0,00 0,00 0,00 0,00

RGCA/H-5 95,82 0,79 0,63 0,83 1,97

RGCA/H-10 87,97 0,56 0,31 0,63 1,39

RGCA/H-14 99,69 0,03 0,00 0,03 0,08

65

c. Nitrogen

Media/ Hari Rata-rata

Nitrogen (%)

S. Baku Varian

KV (%) Penaksiran

rata- rata

(±)

NA/H-2 - - - - -

NA/H-5 0,001 0,000 0,000 21,938 0,001

NA/H-10 0,005 0,003 0,000 73,043 0,031

NA/H-14 0,003 0,001 0,000 18,283 0,001

RGCA/H-2 - - - - -

RGCA/H-5 0,025 0,005 0,000 18,029 0,011

RGCA/H-10 0,020 0,025 0,001 128,497 0,063

RGCA/H-14 0,002 0,001 0,000 29,711 0,002

66

Lampiran 5. Dokumentasi Penelitian

Pengambilan Sampel Sludge Sampel Sludge

Pemasakan Media pada Hot Plate Stirrer Sterilisasi Media pada Autoclave

67

Penurunan Suhu media pada Water Bath Pengenceran dan Penanaman Bakteri

Pemberian Mix Gas Proses Roll Tube

68

Media yang Sudah Siap Diinkubasi Perhitungan Jumlah Koloni Bakteri

Pengambilan Biogas yang Terbentuk

69

BIODATA

Penulis dilahirkan di kota Medan, Sumatera Utara pada

tanggal 14 Oktober 1994. Penulis merupakan anak pertama

dari tiga bersaudara dari pasangan Budi Purwanto dan Tuti

Akbariah. Penulis menuntut ilmu di Sekolah Dasar Negeri

Cisaranten Kidul 03 pada tahun 2000-2006, Sekolah

Menengah Pertama Negeri 2 Bandung pada tahun 2006-

2009, Sekolah Menengah Atas Negeri 12 Bandung pada

tahun 2009-2012, masuk ke Perguruan Tinggi Negeri Universitas Padjadjaran di

Fakultas Peternakan pada tahun 2012. Penulis mengambil minat Teknologi Hasil

Ternak dan menyelesaikan pendidikan Sarjana pada tanggal 18 Juli 2016.

Farida Alia Dewi

18 Juli 2016