Kultivasi mikroba

Pemeliharaan mikroba

ISOLASI MIKROBA

Adalah cara untuk memisahkan satu strain mikroba dari berbagai macam sampel, lingkungan, air, makanan, tanah, dan lain sebagainya.

Caranya dengan mengambi sedikit cuplikan bahan yang ingin diisolasi mikrobanya

Tahapan isolasi

1.Pembuatan media pembiakan mikroba2. Penyiapan peralatan untuk pengambilan

sampel3. Pengambilan sampel4. Penyimpanan sampel5. Isolasi mikroba6. Identifikasi7. Penyimpanan mikroba

Media

Media merupakan faktor utama untuk isolasi mikroba.

Setiap organisme dalam kelompok mikroba memerlukan media khusus yang sesuai dengan kebutuhannya.

Berdasarkan komposisi kandungan nutrisi, media digolongkan menjadi :

Media Umum

Adalah media yang kandungan nutrisi di dalamnya sesuai untuk pertumbuhan sebagian besar mikroba.

Contoh : media nutrisi agar untuk pertumbuhan bakteri

Media saburoud atau Potato Dextrose Agar untuk pertumbuhan jamur

Media diperkaya/enrichment medium

Adalah media yang ditambahkan nutrisi tertentu dengan tujuan menumbuhkan hanya mikroorganisme tertentu

Contoh : media agar nutrisi yang ditambah dengan darah, digunakan untuk mengisolasi bakteri penghidrolisis darah

Media spesifik

Adalah media yang komposisi nutrisinya hanya dapat menumbuhkan mikroorganisme tertentu.

Contoh : medium E. coli yang hanya spesifik untuk bakteri E. coli

Medium SS yang hanya spesifik untuk bakteri Salmonella dan Shigella

Bentuk media

Bentuk cair, seperti misal air pepton, media gula-gula

Bentuk semi padat, merupakan campuran media cair dengan kandungan agar atau gelatin sekitar 5%

Bentuk padat, merupakan campuran media cair dengan kandungan agar antara 1,5 hingga 2 %

Sterilisasi peralatan

Dilakukan dengan cara :1. Sterilisasi kering, yaitu menggunakan

suhu sekitar 100-200oC dengan waktu antara 1-2 jam, hanya dapat dilakukan pada alat yang tahan panas

2. Sterilisasi panas lembab/autoklaf, yaitu menggunakan suhu 121oC, dengan tekanan 1 atm, hanya memerlukan waktu sekitar 15 menit

Pengambilan sampel

Dilakukan secara aseptis, mengurangi kontak dengan lingkungan

Air diambil dengan memasukan botol steril berlawanan arus air.

Tanah diambil dengan kantung plastik steril

Bahan lain diambil dengan membersihkan permukaan bahan dengan alkohol

Penyimpanan sampel

Sampel sebaiknya langsung diolah, tujuannya adalah mengisolasi mikroba sebanyak mungkin dari sampel

Penyimpanan dilakukan pada suhu yang lebih rendah dari suhu asal sampel, tujuannya menjaga komposisi mikroba yang ada di dalam sampel agar tidak berubah

Waktu penyimpanan sampel sangat terbatas

Isolasi mikroba

Membuat serial pengenceran dari 1 gram sampel dengan memasukan sampel pada larutan buffer (misal NaCl fisiologis), secara bertahap hingga didapatkan jumlah sel yang dapat dihitung dalam suspensi sel tersebut.

Suspensi mikroba dari serial pengenceran dituangkan pada petri dengan dua macam cara yaitu secara pour plate (metode tuang) atau spread plate (metode gores). GAMBAR

Inkubasi mikroba

Mikroba dalam cawan petri dinkubasi secara terbalik untuk media yang mengandung bakteri (menghindari air kondens).

Jamur dalam cawan petri tidak perlu diletakan terbalik.

Isolat yang tumbuh terpisah digores pada agar miring

Bila isolat belum murni, digores ulang pada agar padat dalam cawan petri dengan metode Streak plate (gambar)

Pour plate

Spread plate

Streak plate

Identifikasi mikroba

Uji bentuk koloni

Uji struktur sel

Uji komponen sel

Uji biokimia sel terutama untuk kelompok bakteri Gram negatif

Penyimpanan mikroba

1. Dalam medium cair

2. Dalam plat agar

3. Dalam agar miring

4. Dalam bola kaca

5. Teknik liofilisasi

Medium cair

Plat agar