ikhsan fajar setiawan - repository.ipb.ac.id · kurkuminoid pada kunyit dengan ketelitian dan...
TRANSCRIPT
PENENTUAN KADAR KURKUMINOID DALAM KUNYIT
DENGAN SPEKTROFOTOMETRI DERIVATIF
IKHSAN FAJAR SETIAWAN
DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2010
ABSTRAK
IKHSAN FAJAR SETIAWAN. Penentuan Kadar Kurkuminoid dalam Kunyit dengan
Spektrofotometri Derivatif. Dibimbing oleh MOHAMAD RAFI dan LATIFAH KOSIM
DARUSMAN.
Indonesia sebagai negara agraris mempunyai banyak jenis tanaman yang dapat
dimanfaatkan untuk obat-obatan, salah satunya adalah kunyit yang mengandung senyawa
kurkuminoid. Kurkuminoid berkhasiat sebagai antihepatoksik, antikolesterol, obat tumor, dan obat
kanker. Saat ini telah dikembangkan metode analisis yang cepat, mudah, dan murah dari
kombinasi antara spektroskopi dan kemometrik, teknik tersebut adalah spektrofotometri derivatif.
Pada penelitian ini, dilakukan ektraksi kunyit dengan metode sonikasi, kemudian dilakukan
penentuan kadar kurkuminoidnya dengan menggunakan metode spektrofotometri derivatif.
Dilakukan pula analisis dengan metode spektrofotometri UV-tampak dan kromatografi cair kinerja
tinggi (KCKT) sebagai metode pembanding. Kadar kurkuminoid dalam kunyit dengan metode
spektrofometri derivatif adalah 14.33 mg/g, sedangkan dengan metode spektrofotometri UV-
tampak dan KCKT berturut-turut sebesar 14.18 dan 45.40 mg/g. Berdasarkan analisis statistika
untuk hasil tersebut, metode spektrofotometri derivatif dapat digunakan untuk menganalisis kadar
kurkuminoid pada kunyit dengan ketelitian dan keakuratan yang baik. Metode yang dikembangkan
ini lebih mudah, cepat, dan murah. Selain itu, pengaruh matriks pada sampel dapat dihilangkan
bila menggunakan analisis ini dibandingkan dengan menggunakan metode spektrofotometri
konvensional.
ABSTRACT
IKHSAN FAJAR SETIAWAN. Determination of Curcuminoid Content in Turmeric with
Derivative Spectrophotometry. Supervised by MOHAMAD RAFI and LATIFAH KOSIM
DARUSMAN.
Indonesia as one of agricultural countries has various kinds of plant than can be used for
pharmaceutical product, including turmeric that contains curcuminoid compound. Curcuminoid
has efficacy as an antihepatoxic, anticholesterol, tumor and cancer inhibiting compound. In recent
years, research has been developing a simple, fast, and low-cost analysis method from
spectroscopy and chemometric combination, i.e. ; derivative spectrophotometry. In this research,
turmeric extraction was conducted using sonication method, and its curcuminoid content was
determined using spectrophotometry method. Analysis with UV-vis spectrophotometry and high
performance liquid chromatography (HPLC) were also conducted as reference methods.
Curcuminoid in turmeric using derivative spectrophotometry was 14.33 mg/g whereas with UV-
vis spectrophotometry and HPLC were 14.18 and 45.40 mg/g, respectively. Based on statistical
analysis for these results, derivative spectrophotometry can be applied for analyzing curcuminoid
content with good accuracy and precision. This developed method was cheaper, faster, and easier
than the conventional method. In addition, matrices influence in samples can be reduced compared
with that using conventional spectrophotometry.
PENENTUAN KADAR KURKUMINOID DALAM KUNYIT
DENGAN SPEKTROFOTOMETRI DERIVATIF
IKHSAN FAJAR SETIAWAN
Skripsi
Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
Sarjana Sains pada
Departemen Kimia
DEPARTEMEN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
INSTITUT PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2010
Judul : Penentuan Kadar Kurkuminoid dalam Kunyit dengan Spektrofotometri
Derivatif
Nama : Ikhsan Fajar Setiawan
NIM : G44204072
Menyetujui
Pembimbing I, Pembimbing II,
Mohamad Rafi, M.Si Prof. Dr. Ir. Latifah K. Darusman, MS
NIP 19770316 200604 1 010 NIP 19530824 197603 2 001
Mengetahui
Ketua Departemen,
Prof. Dr. Ir. Tun Tedja Irawadi, MS
NIP 19501227 197603 2 002
Tanggal lulus:
PRAKATA
Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Allah SWT yang senantiasa
memberikan rahmat dan hidayah-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan karya
ilmiah ini sebagai salah satu syarat memperoleh gelar Sarjana Sains pada Departemen
Kimia Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Institut Pertanian Bogor.
Shalawat dan salam disampaikan kepada Nabi Muhammad SAW beserta keluarga,
sahabat, dan pengikutnya yang tetap berada di jalan-Nya hingga akhir zaman.
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Bapak Mohamad Rafi, M.Si dan Ibu
Prof. Dr. Ir. Latifah K. Darusman, MS selaku pembimbing atas segala saran, kritik,
dorongan, dan bimbingannya selama penelitian dan dalam penyusunan karya ilmiah ini.
Penulis juga mengucapkan terima kasih kepada Pak Eman, Pak Dede, Ibu Nunung, Pak
Ridwan, dan Pak Kosasih selaku staf laboran di Laboratorium Kimia Analitik dan Agung
Zaim, S.Si selaku staf laboratorium di Pusat Studi Biofarmaka atas fasilitas, bantuan,
serta masukan yang diberikan.
Ungkapan terima kasih penulis berikan kepada keluarga tercinta, Bapak, Ibu, dan
Adik atas nasihat, semangat, bantuan materi, dan doanya. Selain itu, penulis
mengucapkan terima kasih kepada Budi, Aprian, Ali, Anto, Eka, dan Tanti atas saran dan
kritik selama penelitian; Eda dan Mega atas bantuannya, serta Maya atas semangat dan
doanya.
Semoga karya ilmiah ini bermanfaat.
Bogor, Agustus 2010
Ikhsan Fajar Setiawan
RIWAYAT HIDUP
Penulis merupakan putra pertama dari Bapak H. Pramono, M.Pd dan Ibu Hj.
Sutirah, S.Pd yang dilahirkan di Jakarta pada tanggal 7 Desember 1985.
Tahun 2004 penulis lulus dari SMA Negeri 39 Jakarta dan pada tahun yang sama
lulus seleksi masuk IPB melalui jalur Seleksi Penerimaan Mahasiswa Baru (SPMB).
Penulis memilih Program Studi Kimia, Departemen Kimia, Fakultas Matematika dan
Ilmu Pengetahuan Alam. Selama masa perkuliahan penulis pernah menjadi asisten
praktikum Spektrofotometri program diploma dan pada tahun ajaran 2007/2008. Pada
bulan Juli-Agustus 2008 penulis berkesempatan melaksanakan kegiatan Praktik Lapangan
di PT Goodyear Indonesia.
DAFTAR ISI
Halaman
DAFTAR TABEL .......................................................................................................... ix
DAFTAR GAMBAR ..................................................................................................... ix
DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................................. x
PENDAHULUAN ......................................................................................................... 1
TINJAUAN PUSTAKA
Spektrofotometri .................................................................................................. 1
Spektrofotometri Derivatif ................................................................................... 2
Kunyit ................................................................................................................... 2
Kurkuminoid ........................................................................................................ 3
Evaluasi Kinerja Analitik ..................................................................................... 3
BAHAN DAN METODE
Alat dan Bahan ..................................................................................................... 4
Metode Penelitian................................................................................................. 4
HASIL DAN PEMBAHASAN
Penentuan Kondisi Optimum ............................................................................... 6
Pengukuran Contoh dengan Metode Spektrofotometri Derivatif ......................... 7
Pengukuran Kurkuminoid dengan Metode Spektrofotometri UV-tampak dan
KCKT ................................................................................................................... 7
Validasi metode Spektrofotometri Derivatif ........................................................ 8
Perbandingan Metode Spektrofotometri Derivatif dengan
Spektrofotometri UV-tampak dan KCKT ............................................................ 9
SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan .............................................................................................................. 9
Saran ..................................................................................................................... 9
DAFTAR PUSTAKA .................................................................................................... 9
LAMPIRAN ................................................................................................................... 12
DAFTAR TABEL
Halaman
1 Waktu retensi kurkuminoid dengan metode KCKT ................................................ 8
2 Luas puncak kurkuminoid dengan metode KCKT .................................................. 8
3 Nilai perolehan kembali (% recovery) .................................................................... 8
DAFTAR GAMBAR
Halaman
1 Spektrum derivatif pita serapan Gauss ................................................................... 2
2 Kunyit ..................................................................................................................... 2
3 Struktur kurkuminoid ............................................................................................. 3
4 Spektrum standar dan contoh ................................................................................. 6
5 Spektrum standar kurkuminoid dan contoh pada orde turunan ke-1, ke-2, ke-3,
dan ke-4 .................................................................................................................. 6
6 Kurva standar kurkuminoid pada kondisi optimum ............................................... 7
7 kurva standar kurkuminoid dengan spektrofotometri konvensional ..................... 7
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
1 Tahapan penelitian .................................................................................................... 13
2 Penentuan kondisi optimum ...................................................................................... 14
3 Penentuan kadar kurkuminoid pada kunyit dengan metode spektrofotometri
UV-tampak ............................................................................................................... 23
4 Kromatogram standar kurkuminoid .......................................................................... 24
5 Kromatogram kunyit ................................................................................................. 25
6 Penentuan kadar kurkuminoid pada kunyit dengan metode KCKT ......................... 26
7 Uji linearitas, limit deteksi dan limit kuantisasi, dan presisi .................................... 27
8 Uji akurasi untuk kunyit dengan metode spektrofotometri derivatif ........................ 28
9 Uji t dan F metode spektrofotometri derivatif .......................................................... 29
1
PENDAHULUAN
Indonesia sebagai negara agraris
mempunyai banyak jenis tanaman yang dapat
dimanfaatkan untuk obat-obatan, salah satunya
adalah kunyit yang mengandung senyawa
kurkuminoid di dalamnya. Kurkuminoid
berkhasiat sebagai antihepatoksik,
antikolesterol, obat tumor, dan obat kanker
(Winarti & Nanan 2005).
Metode penentuan kurkuminoid yang ada
saat ini kurang praktis, memakan banyak
waktu, dan tidak ekonomis (Paramasivam et.
al. 2008). Analisis kurkuminoid yang biasa
dilakukan misalnya dengan cara
spektrofotometri (ASEAN 1993), HPTLC
(Gupta et al. 1999; Paramasivam et. al. 2008),
KCKT (Jayaprakasha et. al. 2002), serta titrasi
(Sotanaphun et al. 2007). Metode titrasi
membutuhkan waktu yang lama, metode
spektrofotometri konvensional memberikan
hasil yang kurang akurat karena adanya
matriks pengganggu, sedangkan metode
kromatografi membutuhkan biaya yang besar.
Oleh karena itu, diperlukan suatu metode
analisis baru yang memberikan hasil lebih
tepat, lebih cepat, mudah, dan murah.
Saat ini telah dikembangkan metode
kombinasi antara spektroskopi dan
kemometrik, teknik tersebut adalah
spektrofotometri derivatif. Metode
spektrofotometri derivatif didasarkan pada
transformasi matematika dalam membuat
spektrum derivatifnya dan menawarkan
beberapa solusi untuk masalah yang umum
ditemukan dalam analisis kimia, seperti
peningkatan resolusi spektrum, mereduksi
gangguan latar belakang, dan menghilangkan
turbiditas contoh. Selain itu, pada metode ini
proses isolasi dan pemekatan senyawa target
tidak perlu dilakukan.
Spektrofotometri derivatif telah banyak
digunakan, di antaranya dilakukan dalam
penentuan kadar kafein dalam minuman
(Alpdogan et. al. 2002), menentukan
kandungan losartan dalam sediaan farmasi
(Ansari et. al 2004). Selain itu, metode ini
juga dilakukan untuk kuantifikasi kuinina
dalam sediaan farmasi dan kulit kina (Daryadi
2006), serta penentuan kadar kafein dalam
minuman suplemen dan ekstrak teh (Nersyanti
2006).
Pada penelitian ini, dilakukan ekstraksi
kurkuminoid dalam kunyit dengan
menggunakan metode sonikasi. Metode
tersebut digunakan karena membutuhkan
waktu ekstraksi yang lebih cepat dibandingkan
dengan metode ekstraksi konvensional, seperti
sokletasi (Wu et al. 2001). Penentuan
kurkuminoid dalam kunyit dilakukan dengan
menggunakan metode spektrofotometri
derivatif serta spektrofotometri konvensional
dan KCKT sebagai metode pembanding.
Sebagai metode baru hasil pengembangan
metode konvensional, maka perlu dilakukan
evaluasi kinerja analitik untuk mengetahui
baik tidaknya kinerja metode tersebut.
Evaluasi tersebut dilakukan untuk menjamin
keabsahan dan keakuratan data hasil analisis.
Parameter yang digunakan dalam
mengevaluasi metode ini di antaranya,
linieritas, limit deteksi, dan limit kuantisasi,
presisi, serta akurasi.
TINJAUAN PUSTAKA
Spektrofotometri
Spektrofotometri merupakan metode
pengukuran berdasarkan interaksi cahaya
dengan materi (Hendayana et al. 1994).
Spektrofotometri yang sering digunakan
berada dalam daerah spektrum ultraviolet
(UV) dan tampak (Visible).
Spektrofotometri UV-tampak merupakan
spektroskopi absorpsi berdasarkan radiasi
elektromagnetik pada panjang gelombang 160
sampai 780 nm (Skoog et al. 1998). Absorpsi
cahaya UV-tampak molekul organik
umumnya terjadi pada grup fungsional
(kromofor) yang mengandung elektron-
elektron transisi. Penyerapan sinar tampak dan
ultraviolet oleh suatu molekul akan
menghasilkan transisi di antara tingkat energi
elektronik molekul tersebut.
Pengukuran absorpsi berdasarkan radiasi
UV-tampak memiliki aplikasi yang sangat
luas, di antaranya untuk penentuan kuantitatif
dari berbagai macam senyawa organik dan
anorganik. Sumber radiasi yang dipancarkan
dan seberapa besar radiasi yang diserap oleh
suatu kumpulan atom atau molekul harus
memenuhi hukum Lambert Beer.
A = ε x b x c
Berdasarkan persamaan tersebut, A adalah
absorbansi, ε adalah absorptivitas molar
(L cm-1
mol-1
), b panjang sel (cm), dan c adalah
konsentrasi (mol L-1
). Hukum ini menyatakan
bahwa fraksi penyerapan sinar tidak
bergantung pada intensitas sumber cahaya,
tetapi sebanding dengan banyaknya molekul
yang menyerap (Sudjadi 1985).
2
dcd
d
d
Adn
n
n
n
..
Spektrofotometri Derivatif
Metode spektrofotometri derivatif telah
lama dikenal sebagai metode yang diakui
keakuratannya. Proses derivatisasi dilakukan
dengan cara menurunkan spektrum dengan
persamaan matematis. Metode
spektrofotometri derivatif dapat membedakan
pita serapan yang lebar dengan pita serapan
terdekatnya yang tumpang tindih. Hal ini
disebabkan amplitudo (nD) pita Gauss pada
turunan ke-n berbanding terbalik terhadap
lebar pita (W) turunan ke-n.
Penentuan nilai gradien tunggal dA/dλ
diplot terhadap panjang gelombang (λ) seperti
yang terlihat pada Gambar 1, akan
menghasilkan turunan pertama. Spektrum
tersebut berawal dan berakhir pada nilai
absorbans nol pada panjang gelombang yang
sama dengan nilai λmaks. Turunan ini
mempunyai pita positif dan pita negatif yang
menunjukkan nilai maksimum dan minimum
pada panjang gelombang yang sama sebagai
perubahan pita absorbansi. Turunan kedua
mempunyai ciri khas, yaitu pita negatif yang
bernilai minimum merupakan puncak dari
panjang gelombang maksimum pada pita
berorde nol. Turunan ketiga merupakan
kebalikan dari turunan pertama, begitu pula
turunan keempat merupakan kebalikan dari
turunan kedua (Owen 1996).
Gambar 1 Spektrum derivatif pita serapan
Gauss (Popovic et al. 1999).
Analisis kuantitatif pada spektrofotometri
derivatif menggunakan pengukuran amplitudo
versus konsentrasi dengan distorsi spektrum
yang dapat diterima, selama pengaruh nisbah
sinyal terhadap derau (S/N) terhadap ketelitian
pengukuran dipertahankan minimum. Dasar
analisis kuantitatifnya adalah hukum Lambert-
Beer. Hukum ini dapat menghitung kisaran
konsentrasi yang diinginkan pada panjang
gelombang monokromatik pada turunan ke-n :
A adalah absorbansi, ε adalah absorptivitas
molar (L cm-1
mol-1
), d adalah jarak tempuh
cahaya (cm), dan c adalah konsentrasi
(mol L-1
). Berdasarkan persamaan tersebut
konsentrasi analat berbanding lurus dengan
amplitudo puncak derivatif ke-n pada panjang
gelombang tertentu.
Spektrum derivatif yang dihasilkan
dipengaruhi oleh beberapa faktor, antara lain
fungsi celah monokromator dan keseluruhan
tingkat derau, karena adanya konversi analog
ke digital dan metode derivatisasi yang
digunakan (Skujins 1986). Proses derivatisasi
spektrum menghasilkan efek yang tidak
diharapkan seiring kenaikan orde turunan,
yaitu penurunan nisbah sinyal terhadap derau.
Proses penghalusan (smoothing) diiringi
dengan pengaturan peubah jumlah jendela
diperlukan untuk mengurangi pengaruh derau,
sedangkan kecepatan penyapuan, berfungsi
untuk merekam interval serapan analat tiap
panjang gelombang tertentu.
Kunyit
Kunyit (Curcuma domestica Val.) seperti
pada Gambar 2, merupakan tanaman obat
berupa semak dan bersifat tahunan (perenial).
Selain itu, kunyit tumbuh subur dan liar di
sekitar hutan/bekas kebun, pada ketinggian
1300-1600 m dpl, tumbuh bercabang dengan
tinggi 40-100 cm. Kulit luar rimpang
berwarna jingga kecoklatan, daging buah
merah jingga kekuning-kuningan.
Gambar 2 Kunyit.
Tanaman kunyit memiliki klasifikasi sebagai
berikut:
Divisio : Spermatophyta
Sub-diviso : Angiospermae
Kelas : Monocotyledoneae
Ordo : Zingiberales
Famili : Zungiberaceae
Genus : Curcuma
Species : Curcuma domestica Val.
3
3.3x
Slope Rerata
Intersep SBLoD
10x
Slope Rerata
Intersep SBLoQ
100%x
rijumlah teo
ditemukanjumlah
Di daerah Jawa, kunyit banyak digunakan
sebagai ramuan jamu karena berkhasiat
menyejukkan, membersihkan, mengeringkan,
menghilangkan gatal, dan menyembuhkan
kesemutan. Di samping itu, rimpang tanaman
kunyit juga bermanfaat sebagai antiinflamasi
dan antioksidan (Masuda et al. 1992),
antimikroba, pencegah kanker, antitumor, dan
menurunkan kadar lemak darah dan kolesterol,
serta sebagai pembersih darah. Kunyit dapat
berperan sebagai antiinflamasi karena
memiliki kandungan kurkumin sebagai
komponen utama dalam rimpangnya. Selain
itu, kunyit juga mengandung senyawa-
senyawa seperti demetoksikurkumin dan
bisdemetoksikurkumin (Araujo & Leon 2001).
Kurkuminoid
Kurkuminoid (Gambar 3) merupakan
golongan senyawa yang terdapat pada
tanaman marga Curcuma yang memberikan
warna kuning. Kurkuminoid terdiri atas
komponen senyawa kurkumin (C21H20O6),
desmetoksikurkumin (C20H18O5), dan
bisdesmetoksikurkumin (C19H16O4) yang
memiliki bobot molekul berturut-turut sebesar.
368, 308, dan 338 g/mol.
Gambar 3 Struktur kurkuminoid.
Kurkuminoid berfungsi sebagai
antioksidan, antiinflamasi, antimutagenik, dan
melindungi tubuh dari mutagen seperti asap
rokok dan polutan lainnya (Jayaprakasha et
al. 2002). Selain itu, kurkuminoid juga dapat
digunakan sebagai penginduksi enzim
glutation s-transferase, dan inhibitor produksi
prostaglandin E22 (Sharma 2004), serta
sebagai inhibitor selektif enzim
siklooksigenase-1 dan COX-1 (Handler et. al.
2007).
Kurkuminoid tidak larut sempurna dalam
air. Oleh karena itu, penggunaan pelarut
organik merupakan salah satu pilihan yang
dapat digunakan. Pelarut organik yang biasa
digunakan untuk mengekstrak kurkuminoid di
antaranya adalah etanol, aseton, metanol, dan
kloroform. Kurkuminoid dapat dianalisis
menggunakan metode KCKT, KLTKT, titrasi,
dan spektrofotometri.
Evaluasi Kinerja Analitik
Evaluasi kinerja analitik merupakan proses
evaluasi kerja suatu metode analisis diterima
dan sesuai tidak dengan tujuan serta cara-cara
yang ditentukan. Parameter-parameter dalam
evaluasi kinerja analitik meliputi linearitas,
limit deteksi, limit kuantisasi, ketepatan
(akurasi), dan ketelitian (presisi).
Linearitas merupakan kemampuan suatu
metode untuk memperoleh hasil uji yang
sebanding dengan konsentrasi analat dalam
contoh pada kisaran konsentrasi tertentu.
Syarat linearitas menurut AOAC (1993) lebih
besar dari 0.9995. Limit deteksi (LoD)
merupakan konsentrasi analat terkecil yang
menghasilkan respon yang dapat terdeteksi di
atas tingkatan derau dari sistem biasanya tiga
kali sistem derau. Limit kuantisasi (LoQ)
adalah konsentrasi analat terendah yang dapat
diukur secara tepat dan akurat. LoD dan LoQ
dapat ditentukan dengan simpangan baku (SB)
intersep, dengan rumus (ICH 1995) :
Ketepatan atau akurasi merupakan kedekatan
nilai yang telah diperoleh dari hasil percobaan
dibandingkan dengan nilai teoritis atau nilai
yang diperoleh dari metode referensi. Akurasi
dilaporkan sebagai persen perolehan kembali
dengan penambahan sejumlah standar ke
dalam contoh yang diketahui konsentrasinya
dan dibandingkan dengan nilai yang terukur
dengan nilai sebenarnya. Menurut AOAC
(1993) perolehan kembali seharusnya berkisar
80-110%. Persen perolehan kembali
ditentukan dengan rumus:
Perolehan Kembali (%) :
Presisi atau ketelitian adalah kedekatan
hasil dari sederet pengukuran yang dilakukan
pada sejumlah contoh yang diukur di bawah
kondisi yang sama. Ketelitian terbagi dua,
yaitu ketertiruan (reproducibility) dan
keterulangan (repeatibility). Presisi yang
digunakan, yaitu keterulangan pada hari yang
sama. Persen simpangan baku relatif (% SBR)
digunakan untuk melihat hasil presisi dan
dirumuskan sebagai:
4
1/2
1n
1/2 2xxiΣi(
SB
SBR (%) = n
SB x 100
Kriteria simpangan baku relatif menurut
AOAC (1993) adalah sangat teliti (%SBR <
1), teliti (%SBR = 1-2), sedang (%SBR = 2-5),
dan tidak teliti (%SBR > 5).
BAHAN DAN METODE
Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan ialah ultrasonic
cleaning bath Elma Transsonic 700/H,
spektrofotometer UV-tampak U-2800 Hitachi,
KCKT L-2000 series Hitachi dilengkapi
dengan detektor tampak dan kolom C18 serta
alat-alat kaca, piranti lunak UV Solutions versi
2.0 Hitachi, dan peranti lunak HP Chem
Station software.
Bahan-bahan yang digunakan ialah standar
kurkuminoid, sampel kunyit yang berasal dari
kota Semarang (Jawa Tengah), dan metanol.
Metode
Penentuan kadar kurkuminoid dalam
kunyit dimulai dengan mencari orde turunan,
orde penghalusan, dan jumlah jendela yang
optimum agar diperoleh spektrum standar dan
contoh yang berhimpit. Kondisi optimum
tersebut digunakan untuk mengukur deret
larutan standar dan dibuat kurva standar dari
amplitudo dari puncak ke puncak (DL).
Selanjutnya kurkuminoid dalam contoh diukur
dan konsentrasinya dihitung dari persamaan
kurva standar. Konsentrasi kurkuminoid yang
diperoleh dari metode spektrofotometri
derivatif dibandingkan dengan metode
rujukan, yaitu Spektrofotometri UV-tampak
dan KCKT menggunakan uji t dan uji F.
Kemudian dilakukan validasi metode untuk
spektrofotometri derivatif.
Preparasi Larutan Standar dan Contoh
Standar kurkuminoid dibuat dengan cara
melarutkan standar kurkuminoid dengan
metanol sehingga dihasilkan konsentrasi
standar sebesar 100 mg/L.
Preparasi contoh dibuat dengan
menimbang sebanyak 0.05 g contoh dan
ditambahkan 10 mL metanol, kemudian
dilakukan sonikasi selama 20 menit sebanyak
tiga kali ulangan. Setelah itu, dilakukan
penyaringan, dan filtratnya ditepatkan dengan
metanol pada labu takar 50 mL.
Penentuan Kondisi Optimum
Parameter kondisi optimum yang
dikerjakan meliputi orde turunan, orde
penghalusan, dan jumlah jendela untuk orde
penghalusan. Proses ini dilakukan untuk
mendapatkan puncak spektrum standar dan
contoh yang berhimpit pada orde turunan, orde
penghalusan, dan jumlah jendela. Parameter
kondisi optimum tersebut digunakan untuk
penentuan validasi.
Larutan standar dan contoh setara dengan
0.70 mg/L diukur serapannya pada panjang
gelombang 380-600 nm pada kecepatan
penyapuan 200 nm/menit. Spektrum standar
dan contoh yang diperoleh digabungkan dalam
satu tampilan (overlay). Spektrum turunan
standar dan contoh dibuat pada orde turunan 1,
2, 3, dan 4 dengan variasi orde penghalusan
2,3, dan 4, serta variasi jumlah jendela 15, 21,
27, 32, 37, 42, dan 47 sehingga akan
dihasilkan spektrum dengan turunan terpilih.
Proses ini bertujuan mendapatkan puncak
spektrum standar dan contoh yang berimpit
pada peubah orde turunan, orde penghalusan,
dan variasi jumlah jendela.
Pembuatan Kurva Standar
Pengukuran serapan larutan standar 0.20-
1.20 mg/L dilakukan dengan menggunakan
nilai orde turunan, orde penghalusan, dan
jumlah jendela yang optimum. Amplitudo DL
dari spektrum standar diukur dan dibuat kurva
hubungan antara konsentrasi versus amplitudo
yang digunakan untuk penentuan kadar
kurkuminoid selanjutnya.
Penentuan Konsentrasi Kurkuminoid
dalam Contoh
Larutan contoh diukur serapannya pada
panjang gelombang 380-600 nm. Konsentrasi
kurkuminoid dalam contoh ditentukan dengan
memasukkan nilai amplitudo contoh ke dalam
persamaan garis kurva standar.
Analisis dengan Spektrofotometri UV-Vis
Serbuk kunyit sebanyak 0.05 g
dimasukkan ke dalam wadah, kemudian
ditambahkan 10 mL metanol dan dilakukan
ekstraksi menggunakan cara sonikasi selama
20 menit sebanyak tiga kali ulangan. Filtrat
ditepatkan pada labu takar 50 mL, sedangkan
standar kurkuminoid, dibuat dengan
konsentrasi 0.50-3.00 mg/L. Baik sampel
kunyit maupun standar diukur serapannya
5
dengan spektrofotometer pada panjang
gelombang 419 nm.
Analisis dengan KCKT
Preparasi Larutan Stok Kurkuminoid.
Larutan stok standar kurkumin,
demetoksikurkumin, dan
bisdemetoksikurkumin dibuat dalam metanol
secara terpisah masing-masing 100 mg/L.
Preparasi Contoh. Serbuk kunyit sebanyak
0.05 g ditambahkan 10 mL metanol, kemudian
dilakukan sonikasi selama 20 menit sebanyak
tiga kali ulangan. Setelah itu, dilakukan
penyaringan, dan filtratnya ditepatkan dengan
metanol pada labu takar 50 mL.
Kondisi Kromatografi (Jayaprakasha et al.
2002). Menggunakan sistem elusi gradien
dengan laju alir 1.0 mL/min pada suhu ruang.
Fase gerak terdiri dari metanol (A), asam
asetat 2% (B), dan asetonitril (C). Kadar
kuatitatif kurkuminoid diukur dengan cara
menginjeksikan contoh pada 45–65%
asetonitril dalam B selama 0-15 menit.
Kemudian 65–45% asetonitril dalam B selama
15–20 menit dengan terus menerus dialiri 5%
A. Kandungan kurkuminoid diukur
menggunakan peranti lunak HP Chem Station
software .
Pengukuran Kurkuminoid dalam Contoh.
Sebanyak 20 μL contoh diinjeksikan ke dalam
KCKT. Konsentrasi kurkuminoid dihitung
berdasarkan fungsi kurva kalibrasi linier
dengan memperhatikan faktor pengenceran.
Evaluasi Kinerja Analitik Metode
Spektrofotometri Derivatif
Linearitas. Pengukuran serapan larutan
standar 0.40, 0.60, dan 0.80 mg/L dilakukan
menggunakan nilai kecepatan penyapuan 200
nm/menit, orde turunan, orde penghalusan,
dan jumlah jendela yang optimum. Linearitas
ditentukan dengan menggunakan metode
regresi kuadrat terkecil sebanyak tiga kali
ulangan untuk setiap konsentrasi.
Ketelitian. Penentuan ketelitian sama dengan
metode untuk preparasi contoh yang dilakukan
sebanyak enam kali pada hari yang sama.
Serapan larutan contoh diukur menggunakan
nilai kecepatan penyapuan 200 nm/menit, orde
turunan, orde penghalusan, dan jumlah jendela
yang optimum.
Ketepatan. Penentuan ketepatan dinyatakan
dengan persen perolehan kembali, yaitu nisbah
antara konsentrasi standar yang diperoleh dan
konsentrasi standar yang ditambahkan dikali
100%. Sampel dibuat dengan menimbang
sebanyak 0.05 g ditambahkan 10 mL metanol,
kemudian dilakukan sonikasi selama 3x20
menit. Setelah itu dilakukan penyaringan dan
filtratnya ditepatkan dengan metanol pada labu
takar 50 mL. Konsentrasi larutan stok standar
10 mg/L. Volume larutan standar ditambahkan
ke dalam labu takar 10 mL yang telah berisi
5.0 mL larutan contoh, sehingga diperoleh
konsentrasi akhir setara dengan 0.80; 0.85;
dan 0.90 mg/L. Masing-masing tingkat
konsentrasi disiapkan tiga kali ulangan.
Limit Deteksi dan Limit Kuantisasi. Limit
deteksi dan limit kuantisasi ditentukan
menggunakan simpangan baku intersep dan
kemiringan kurva kalibrasi.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Metode ekstraksi yang digunakan dalam
penelitian adalah metode sonikasi. Metode
ekstraksi ini mengalami pengembangan
dibandingkan metode konvensional. Hal ini
didasarkan bahwa metode ekstraksi dengan
sonikasi hanya membutuhkan waktu sebentar
dibandingkan dengan metode ekstraksi
lainnya, seperti maserasi maupun sokletasi.
Hal tersebut dibuktikan oleh penelitian Wu et
al. (2001) yang menjelaskan bahwa proses
ekstraksi dengan sonikasi dihasilkan tiga kali
lebih cepat dibandingkan dengan metode
ekstraksi konvensional (sokletasi). Selain itu,
metode ekstraksi dengan sonikasi
menghasilkan kadar kurkuminoid yang besar.
Hal tersebut karena radiasi gelombang
ultrasonik yang dihasilkan dapat menimbulkan
lokal kavitasi senyawa atsiri di dalam dinding
sel tumbuhan yang akan membantu
memaksimalkan proses ekstraksi (Vinatoru et
al. 1997). Hal ini dibuktikan dengan penelitian
Susilowati (2006) yang menggunakan
ekstraksi sonikasi selama 30 menit
menghasilkan kadar kurkuminoid pada
temulawak sebesar 3.3% (b/b). Dengan
pengukuran kadar yang sama, Suwiah (1991)
melakukan ekstraksi temulawak dengan
refluks dan maserasi (Yusro 2004)
menghasilkan kadar kurkuminoid berturut-
turut sebesar 0.56-1.94 dan 1.58% (b/b).
6
Penentuan Kondisi Optimum
Parameter kondisi optimum yang
dilakukan pada penelitian ini meliputi
kecepatan penyapuan, orde turunan, orde
penghalusan, dan jumlah jendela. Berdasarkan
penelitian sebelumnya (Daryadi (2006);
Nersyanti (2006); dan Rachmanti (2006))
kecepatan penyapuan yang digunakan adalah
200 nm/menit. Hal ini karena pada kecepatan
penyapuan tersebut menghasilkan spektrum
dengan sensitivitas dan waktu penyapuan yang
lebih cepat. Oleh karena itu, pada penelitian
ini kecepatan penyapuan yang digunakan
adalah 200 nm/menit.
Penentuan kadar kurkuminoid dalam
contoh tidak dapat dilakukan secara langsung.
Dapat dilihat dari spektrum contoh kunyit
dengan konsentrasi setara standar
kurkuminoid 0.70 mg/L (Gambar 4),
menghasilkan serapan yang identik, namun
serapan pada kunyit lebih besar dibandingkan
serapan dari standarnya. Nilai absorbansi yang
lebih besar ini terjadi akibat adanya efek
matriks dari sampel yang dianalisis walaupun
kedua spektrum ini dibuat dengan konsentrasi
kurkuminoid yang sama. Hal ini akan
menyebabkan kesalahan pembacaan kadar bila
dilakukan pembacaan kadar kurkuminoid
menggunakan spektrofotometri konvensional
(Batubara et al. 2005).
400 450 500 550 600nm
0.00
0.05
0.10
0.15
0.20
0.25
0.30
0.35
0.40
0.45
Abs
Gambar 4 Spektrum standar dan contoh. Keterangan : Hitam : Standar kurkuminoid
Biru : Kunyit
Perbedaan serapan yang terjadi dapat
diatasi dengan spektrofotometri derivatif,
karena dengan metode ini spektrum akan
diderivatisasi, sehingga dapat memilih puncak
yang tajam di antara spektrum yang lebar dan
meningkatkan resolusi dari spektrum yang
tumpang tindih (Ansari et al. 2004).
Hasil derivatisasi pada berbagai variasi
orde turunan menghasilkan adanya daerah
pada spektrum yang berhimpit antara kunyit
dengan standar kurkuminoid (Gambar 5).
400 450 500 550 600nm
-0.006
-0.005
-0.004
-0.003
-0.002
-0.001
0.000
0.001
0.002
0.003
0.004
Abs
(a)
400 450 500 550 600nm
-0.00020
-0.00015
-0.00010
-0.00005
0.00000
0.00005
0.00010
Abs
(b)
400 450 500 550 600nm
-0.000025
-0.000020
-0.000015
-0.000010
-0.000005
0.000000
0.000005
0.000010
0.000015
0.000020
0.000025
Abs
(c)
400 450 500 550 600nm
-0.000020
-0.000015
-0.000010
-0.000005
0.000000
0.000005
0.000010
0.000015
0.000020
Abs
(d)
Gambar 5 Spektrum standar kurkuminoid dan
contoh pada orde turunan (a) ke-1,
(b) ke-2, (c) ke-3, dan (d) ke-4. Keterangan :
Hitam : Standar kurkuminoid
Biru : Kunyit
Orde turunan berpengaruh terhadap
sensitivitas dan linearitas spektrum. Semakin
tinggi orde turunan yang digunakan, maka
sensitivitas dan linearitas dari spektrum akan
semakin rendah (Ansari et al. 2004). Hal ini
terjadi karena nisbah sinyal terhadap derau
(S/N) semakin kecil (Owen 1996; Popovic et
al. 1999).
Penentuan kondisi optimum juga meliputi
variasi orde penghalusan sebesar 2, 3, dan 4.
Semakin tinggi orde penghalusan yang
digunakan maka amplitudo akan semakin
Abso
rbansi
Abso
rbansi
Abso
rbansi
Abso
rbansi
Abso
rbansi
7
besar. Kondisi optimum yang dipilih
diharapkan dapat menghasilkan spektrum
yang tidak terlalu halus dan juga tidak terlalu
kasar. Apabila spektrum terlalu kasar, maka
sulit untuk membedakan serapan kurkuminoid
dari matriks contoh. Apabila spektrum terlalu
halus, maka akan ada banyak data yang hilang
akibat distorsi spektrum. Kondisi optimum
yang dipilih berdasarkan metode
spektrofometri derivatif untuk sampel kunyit,
yaitu orde turunan ketiga pada panjang
gelombang 398.5-408.5 nm, orde penghalusan
3, dengan jumlah jendela 37 (Lampiran 2).
Pada kondisi tersebut, resolusi spektrum yang
dihasilkan baik dan menghasilkan linearitas
standar yang tinggi (0.996). Turunan lebih
tinggi lagi tidak pilih sebagai kondisi optimum
walaupun menghasilkan linearitas yang tinggi.
Hal ini disebabkan semakin tinggi orde
turunan nisbah sinyal terhadap derau (S/N)
semakin kecil.
Pengukuran Contoh dengan Metode
Spektrofotometri Derivatif
Derivatisasi yang dilakukan pada spektrum
standar sesuai dengan kondisi optimum,
didapatkan persamaan garis kurva standar
untuk kurkuminoid adalah y = 0.000008x-
0.0000008 dengan koefisien korelasi sebesar
0.996 (Gambar 6).
Gambar 6 Kurva standar kurkuminoid pada
kondisi optimum.
Kadar kurkuminoid dari contoh didapatkan
dengan cara memasukkan amplitudo contoh ke
dalam persamaan garis kurva standar yang
diperoleh. Kadar kurkuminoid untuk kunyit
berdasarkan metode spektrofotometri
derivatif, yaitu sebesar 14.33 mg/g. Hasil
tersebut merupakan kadar kurkuminoid rata-
rata yang dilakukan sebanyak enam kali
ulangan pada hari yang sama.
Pengukuran Kurkuminoid dengan
Spektrofotometri UV-tampak dan KCKT
Spektrofotometri UV-tampak
konvensional dan kromatografi cair kinerja
tinggi (KCKT) digunakan sebagai
pembanding untuk analisis kurkuminoid
dalam kunyit. Linearitas standar kurkuminoid
dengan spektrofotometri konvensional
diperoleh dari standar kurkuminoid dengan
kisaran konsentrasi 0.5-3.0 mg/L
menggunakan metode kuadrat terkecil yang
digunakan untuk analisis sampel kunyit.
Persamaan garis kurva standar yang diperoleh
adalah y= 0.587x + 0.023 dengan kooefisien
korelasi sebesar 0.998 (Gambar 7).
Gambar 7 Kurva standar kurkuminoid dengan
spektrofotometri konvensional.
Rerata kadar kurkuminoid dengan
spektrofotometri konvensional diperoleh
sebesar 14.18 mg/g (Lampiran 3).
Metode KCKT digunakan untuk analisis
kualitatif maupun kuantitatif. Analisis
kualitatif dilakukan dengan cara
membandingkan waktu retensi contoh dengan
standar, sedangkan untuk analisis kuantitatif
dilakukan dengan menghitung konsentrasi
contoh berdasarkan kurva standar yang
diperoleh dari hasil plot antara luas puncak
dan konsentrasi standar.
Berdasarkan hasil analisis dengan KCKT,
diketahui bahwa kunyit mengandung tiga jenis
senyawa kurkuminoid, yaitu
bisdesmetoksikurkumin, desmetoksikurkumin,
dan kurkumin (Zhang et al. 2009).
Berdasarkan kromatogram standar yang
diperoleh (Lampiran 4), diketahui waktu
retensi dan luas puncak untuk ketiga senyawa
tersebut yang dapat dilihat pada Tabel 1 dan 2.
y = 0.000008x + 0.0000008R² = 0.996
0,00
0,50
1,00
1,50
0 0,5 1 1,5Am
plit
ud
o (
x 1
0-6
)
Konsentrasi standar kurkuminoid (mg/L)
y = 0.587x + 0.023R² = 0.998
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
0,00 2,00 4,00
Ab
sorb
ansi
konsentrasi standar kurkuminoid (mg/L)
8
Tabel 1 Waktu retensi kurkuminoid dengan
metode KCKT
Konsentrasi
(mg/L)
Waktu retensi (menit)
1 2 3
Std 0.25 7.793 8.393 9.023
Std 0.50 7.780 8.383 9.017
Std 0.75 7.797 8.397 9.030
Std 1.00 7.797 8.403 9.037
Std 1.25 7.790 8.393 9.027
Std 1.50 7.783 8.395 9.025
Sampel 7.800 8.390 9.020 Keterangan:
(1) Bisdesmetoksikurkumin, (2) desmetoksikurkumin, (3)
dan kurkumin
Std : Standar kurkuminoid
Berdasarkan data tersebut diketahui bahwa
waktu retensi untuk bisdesmetoksikurkumin,
desmetoksikurkumin, dan kurkumin berturut-
turut adalah 7.79, 8.56, dan 9.02 menit.
Tabel 2 Luas puncak kurkuminoid dengan
metode KCKT
Konsentrasi
(mg/L)
Luas puncak
1 2 3
Std 0.25 209118 171776 171580
Std 0.50 421818 351254 354921
Std 0.75 654057 537537 542097
Std 1.00 874550 716239 713821
Std 1.25 1175138 964963 965326
Std 1.50 1451498 1179460 1178046
Sampel 307244 280300 810754 Keterangan: (1) Bisdesmetoksikurkumin, (2) desmetoksikurkumin, (3)
dan kurkumin
Std : Standar kurkuminoid
Penentuan kadar kurkuminoid sampel kunyit
dengan metode KCKT dihasilkan dengan
memasukkan nilai luas puncak sampel ke
dalam persamaan kurva standar yang
dihasilkan(Lampiran 5), sehingga didapatkan
kadar kurkuminoid untuk sampel kunyit
dengan metode KCKT, yaitu sebesar 45.40
mg/g (Lampiran 6).
Validasi Metode Spektrofotometri Derivatif
Validasi metode spektrofotometri derivatif
dilakukan untuk mengavaluasi kerja metode
tersebut, karena metode ini merupakan metode
baru yang dikembangkan untuk analisis
kuantitatif kurkuminoid dalam serbuk kunyit.
Suatu metode dikatakan valid jika memenuhi
batas penerimaan parameter validasi yang
berlaku. Parameter validasi yang ditentukan
antara lain presisi, akurasi, linearitas, limit
deteksi, dan limit kuantisasi.
Uji presisi dilakukan pada larutan contoh
sebanyak enam kali ulangan. Kadar
kurkuminoid dari masing-masing contoh
diharapkan menghasilkan nilai yang
berdekatan. %SBR untuk kunyit dihasilkan
sebesar 2.34 (lampiran 7). Nilai tersebut
memiliki tingkat ketelitian yang sedang
berdasarkan kriteria AOAC (1993). Hal ini
disebabkan pada penentuan kadar
kurkuminoid dihasilkan nilai kadar yang
beragam, sehingga %SBR yang dihasilkan
relatif besar.
Uji akurasi dilakukan dengan
menambahkan standar yang telah diketahui
konsentrasinya. Metode ini ditunjukkan
dengan nilai persen perolehan kembali
(%recovery). Nilai %recovery rata-rata dari
tiga kali ulangan dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3 Nilai perolehan kembali (%recovery)
Jumlah (mg/L) * %
recovery ditambahkan Ditemukan
0.80 0.7667 95.83
0.85 0.7667 90.20
0.90 0.8704 96.71 (*) rerata dari tiga kali ulangan
Berdasarkan data tersebut, %recovery yang
dihasilkan berkisar antara 90.20 sampai
96.71% (Lampiran 8). Hasil ini masih sesuai
pada rentang nilai %recovery yang disarankan
oleh AOAC (1993), yaitu sebesar 80-110%.
Nilai linearitas diperlihatkan dengan kurva
standar yang merupakan hubungan antara
amplitudo dan konsentrasi standar 0.40; 0.60;
dan 0.80 mg/L. Persamaan garis untuk standar
kurkuminoid adalah y=0.000009x+0.0000004
dengan nilai regresi sebesar 0.996 (Lampiran
7). Nilai regresi dari persamaan garis tersebut
mendekati nilai satu, sehingga dapat dikatakan
bahwa kurva memiliki kelinearan yang tinggi. Limit deteksi metode spektrofotometri
derivatif diperoleh dari rerata deret standar
yang dilakukan sebanyak tiga kali ulangan.
Limit deteksi untuk metode ini dihasilkan
sebesar 0.55 mg/L (Lampiran 7). Hal ini
menandakan bahwa pada konsentrasi tersebut
metode spektrofotometri derivatif mampu
membedakan sinyal dengan derau. Limit
kuantisasi yang dihasilkan, yaitu sebesar 1.57
mg/L, artinya dalam jumlah kurkuminoid yang
sedikit, metode ini memberikan ketelitian dan
ketepatan yang baik.
9
Perbandingan Metode Spektrofotometri
Derivatif dengan Spektrofotometri UV-
tampak dan KCKT
Metode spektrofotometri derivatif
merupakan metode yang cepat, murah, dan
mudah bila dibandingan dengan metode
KCKT, karena tidak terlalu banyak
menggunakan bahan kimia dan tahapan
kerjanya tidak rumit. Selain itu, pada metode
KCKT, membutuhkan peralatan yang cukup
mahal, dan waktu analisis yang relatif lama.
Sedangkan keuntungan menggunakan metode
spektrofotometri derivatif dibandingkan
dengan Spektrofotometri UV-tampak, yaitu
terhindar dari kesalahan pembacaan kadar
kurkuminoid akibat adanya matriks
pengganggu dalam spektrum sampel
(Batubara et al. 2005).
Analisis kadar kurkuminoid dengan
metode spektrofotometri derivatif
dibandingkan dengan metode spektrofometri
UV-tampak dan KCKT menggunakan analisis
statistika, seperti uji t dan uji F. Uji t
digunakan untuk membandingkan rerata nilai
kadar yang diperoleh, sedangkan uji F untuk
mengetahui ketelitian dari kedua metode
tersebut dengan membandingkan dua ragam.
Ragam adalah ukuran yang menggambarkan
besarnya perbedaan antara satu pengukuran
dengan pengukuran lainnya.
Nilai keterulangan pada hari yang sama
untuk kunyit dengan metode spektrofotometri
derivatif menghasilkan nilai %SBR yang lebih
besar, yaitu 2.34% (Lampiran 7). Sedangkan
%SBR dengan metode spektrofotometri UV-
tampak dan KCKT, yaitu sebesar 0.65%
(Lampiran 3) dan 0.84% (Lampiran 6).
Walaupun demikian, %SBR yang dihasilkan
untuk metode spektrofotometri derivatif
berdasarkan kriteria %SBR menurut AOAC
(1993) masih berada pada rentang ketelitian
sedang (%SBR = 2-5), sehingga metode ini
masih dapat digunakan untuk menentukan
kadar kurkuminoid dalam sampel kunyit.
Nilai thitung dan Fhitung dari kunyit yang
dibandingkan dengan metode spektrofometri
UV-tampak sebesar 1.056 dan 0.075. Nilai
tersebut kurang dari ttabel dan Ftabel. Hal ini
menunjukkan bahwa metode spektrofotometri
derivatif dan spektrofometri UV-tampak untuk
pengukuran kadar kurkuminoid pada kunyit
memiliki nilai ragam yang sama dan nilai rata-
rata kadar kurkuminoid kedua metode tidak
berbeda nyata. Sedangkan untuk metode
KCKT, thitung dan Fhitung dihasilkan sebesar
150.09 dan 1.29. Nilai thitung lebih besar
dibandingkan dengan ttabel sehingga nilai rata-
rata kadar kurkuminoid metode
spektrofotometri derivatif dengan KCKT
berbeda nyata, tetapi memiliki nilai ragam
yang sama karena Fhitung masih lebih kecil dari
Ftabel (Lampiran 9).
SIMPULAN DAN SARAN
Simpulan
Analisis kadar kurkuminoid dalam kunyit
dengan metode spektrofometri derivatif, yaitu
sebesar 14.33 mg/g, sedangkan dengan
metode Spektrofotometri konvensional dan
KCKT dihasilkan berturut-turut sebesar 14.18
dan 45.40 mg/g. Meskipun hasil uji t kadar
kurkuminoid dengan spektrofotometri
derivatif berbeda nyata dengan metode KCKT,
namun metode spektrofotometri derivatif
dapat digunakan untuk menganalisis kadar
kurkuminoid pada kunyit dengan
menghasilkan ketelitian dan keakuratan yang
baik.
Saran
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut
mengenai perbedaan kadar kurkuminoid
metode spektrofotometri derivatif dengan
metode KCKT. Selain itu, dilakukan validasi
metode spektrofotometri derivatif dan metode
KCKT pada parameter yang lain seperti
presisi menengah, reprodusibilitas,
spesifisitas, dan uji kesesuaian sistem,
sehingga lebih meyakinkan bahwa metode ini
dapat digunakan untuk penentuan kadar
kurkuminoid dalam kunyit.
DAFTAR PUSTAKA
Afifah E, Tim Lentera. 2003. Khasiat dan
Manfaat Kunyit. Jakarta: Agromedia
Pustaka.
Alpdogan G, Karabina K, Sungur S. 2002.
Derivative spectrophotometric
determination of caffein in some
beverages. Turkey Jounal of Chemistry
26:295-302.
Ansari M, Kazemipour M, Baradaran M,
Jalalizadeh H. 2004. Derivative
spectrophotometric methode for
determination of losartan in
pharmaceutical formulation. Iranian
10
Jounal of Pharmachology and
Therapeutics 3:21-25.
[AOAC] Association Official of Analytical
Chemistry. 1993. AOAC Peer – Verified
Method Program. USA: AOAC
International.
[ASEAN] Association of South East Asian
Nation. 1993. Standard of ASEAN
Herbal Medicine Vol. 1. Jakarta: Aksara
Buana Printing.
Araujo CAC, Leon LL. 2001. Biological
activities of Curcuma longa L. Memorias
do Instituto Oswaldo Cruz 96(5): 723-
728.
Astuti W. 2006. Metode cepat untuk
penentuan kadar yohimbin dalam
Pausinystalia yohimbe dan produk
komersialnya secara spektrofotometri
derivatif ultraviolet. [skripsi]. Bogor:
Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam, Institut Pertanian
Bogor.
Batubara I, M Rafi, Latifah KD. 2005.
Estimasi kandungan kurkumin pada
sediaan herbal komersial secara
spektrofometri derivatif. Jurnal Sains
Kimia. 9: 28-34.
Daryadi E. 2006. Metode cepat kuantifikasi
kuinina dalam sediaan farmasi dan kulit
kina secara spektrofotometri derivatif
ultraviolet. [skripsi]. Bogor: Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan
Alam, Institut Pertanian Bogor.
Effendy. 2004. Kromatografi Cair Kinerja
Tinggi dalam Farmasi. Sumatera Utara.
Gupta AP, Gupta MM, Sushil K. 1999.
Simultaneous determination of
curcuminoids in curcuma samples using
high performance thin layer
chromatography. Jounal Liquid
Chromatography & Related
Technologies: 22(10):1561–1569.
Handler N et al. 2007. Synthesis of novel
urcumin analogues and their evaluation
as selective cyclooxygenase-1 (COX-1)
Inhibitors. Chemestry Pharmacology
55:64-71.
Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia. Ed.
Ke-2. Kosasih Fadmawinata,
penerjemah; Bandung: ITB.
Hein CS, PI Marsden, AS Shurtleff. 1988.
Evaluation of methods 3540 (soxhlet)
and 3550 (sonication) for evaluationof
appendix IX analytes from solid samples.
[terhubung berkala]. www.epa.gov. [15
Maret 2010].
Hendayana S, Kadarohman A, Sumarna A,
Supriatna A. 1994. Kimia Analitik
Instrumen. Ed ke-1. Semarang: IKIP
Semarang Press.
[ICH]. International Conference and
Harmonization. 1995. Text on validation
of analytical procedures. [terhubung
berkala]. www.ich.org. [15 Maret 2010].
Jayaprakasha GK, Rao MLJ, and Sakariah
KK. 2002. Improved HPLC method for
the determination of curcumin,
demethoxycurcumin, and
bisdemethoxycurcumin. Journal
Agricultural and Food Chemistry 50
(13): 3668-3672.
Masuda J et al. 1992. Complicating infective
endocarditis histopathological analysis of
the mechanisms of intracranial
hemorrhage. Journal of the American
Heart Association 23: 843-850.
Nersyanti F. 2006. Spektrofotometri derivatif
ultraviolet untuk penentuan kadar kafein
dalam minuman suplemen dan ekstrak
teh. [skripsi]. Bogor: Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan
Alam, Institut Pertanian Bogor.
Owen T. 1996. Fundamental of UV-visible
Spectroscopy. Waldbronn: Hewlett-
Packard.
Paramasivam M, Aktar MW, Poi R, Banerjee
H, and Bandyopadhyay A. 2008.
Occurrence of curcuminoids in Curcuma
longa: a quality standardization by
HPTLC. Bangladesh Journal
Pharmacology 3: 55-58.
Popovic GV, Pfendt LB, Stevanovic VM.
1999. Analytical application of
derivative spectrophotometry. Journal of
the Serbian Chemical Society 65 (7):
457-472.
11
Rachmanti WD. 2006. Metode cepat untuk
kuantifikasi reserpin dalam obat dan
ekstrak Rauwolfia serpentina secara
spektrofotometri derivatif ultraviolet.
[skripsi]. Bogor: Fakultas Matematika
dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut
Pertanian Bogor.
Rukmana R. 1995. Kunyit: Tanaman Rempah
dan Obat. Yogyakarta : Kanisius.
Sharma RA. 2004. Phase I clinical trial of oral
curcumin biomakers of systemic activity
and compliance. Clynical Cancer
research 10:6847-6854.
Skoog DA, Holler FJ, Nieman TA. 1998.
Principles of Instrumental Analysis. Ed
ke-5. Philadelphia: Saunders College.
Skujins S. 1986. Application of UV-Visible
Derivative Spectrofotometry.
Steinhauser-tasse: Varian AG.
Sotanaphun U, Phaechamud T, and
Dechwisissakul P. 2007. Rapid screening
method for curcuminoid content in
turmeric (Curcuma longa Linn.). Thai
Pharmaceutical Health Science Jornal.
2(2):125-130.
Sudjadi. 1985. Penentuan struktur Senyawa
Organik. Jakarta: Ghalia Indonesia.
Susilowati E. 2006. Optimalisasi senyawa
kukumin dai rimpang temulawak dengan
metode sonikasi. [skripsi]. Bogor:
Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam, Institut Pertanian
Bogor.
Suwiah A. 1991. Pengaruh perlakuan bahan
dan jenis pelarut yang digunakan pada
pembuatan temulawak instan terhadap
rendemen dan mutunya. [skripsi]. Bogor:
Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam, Institut Pertanian
Bogor.
Vinatoru M, Toma M, Radu O, PI Filip, D
Lazurca & TJ Mason. 1997. The use of
ultasound for the extraction of bioactive
principle from plant materials.
Ultrasonics Sonochemistry 4: 135-139.
Winarti C dan Nurdjanah N. 2005. Peluang
Tanaman Rempah dan Obat Sebagai
Sumber Pangan Fungsional. Jurnal
Litbang Pertanian, 24(2), 2005
Wu J, Lin L, Chau. 2001. Ultrasound-assisted
extraction of ginseng saponins from
ginseng roots and cultured ginseng cells.
Jounal of Ultrasonics Sonochemistry 8:
347-352.
Yusro A. 2004. Pengaruh waktu, suhu, dan
nisbah pelarut pada ekstraksi kurkumin
dari temulawak dengan pelaut etanol.
[skripsi] Bogor: Fakultas Matematika
dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut
Pertanian Bogor.
Zhang J et al. 2009. A simple HPLC-
fluorecence method for quantitation of
curcuminoids and its application to
tumeric products. Analytical Science 25:
385-388.
12
LAMPIRAN
13
Lampiran 1 Tahapan penelitian
Serbuk kunyit
Dilakukan
pengukuran kadar
kurkuminoid dengan
KCKT pada λ= 425
nm
Sonikasi t= 3x20
menit, T= 25°C
konsentrasi contoh
setara dengan
standar 0.70 mg/L
Dilakukan pengukuran kadar
kurkuminoid dengan
Spektrofotometer UV-Vis
pada λ= 380-500 nm, dengan
variasi kecepatan penyapuan,
orde turunan, dan Δλ
Kondisi optimum
penentuan kadar
kurkuminoid dengan
Spektrofotometri derivatif
Validasi metode
Spektrofotometri derivatif
, meliputi linearitas, limit
deteksi dan limit kuantisasi,
presisi, dan akurasi
Analisis kuantitatif
KCKT Spektrofotometri derivatif Spektrofotometri UV-tampak
Dilakukan pengukuran
kadar kurkuminoid
dengan Spektrofometri
UV-Vis pada λ= 419
nm
14
Lampiran 2 Penentuan kondisi optimum metode spektrofotometri derivatif
Variasi
Kondisi
(a,b,c)
Panjang
gelombang
(nm)
amplitudo persamaan garis R2
Kadar
kurkuminoid
(mg/g)
1,2,15 396-457 0.0082026 y=0.010x-0.00004 0.999 16.42
1,2,21 397-456.5 0.0081525 y=0.010x-0.00004 1.000 16.32
1,2,27 396-456.5 0.0081250 y=0.010x-0.00004 1.000 16.26
1,2,32 396.5-457 0.0080736 y=0.010x-0.00005 1.000 16.18
1,2,37 396-457 0.0080559 y=0.010x-0.00005 1.000 16.15
1,2,42 397.5-456.5 0.0080080 y=0.010x-0.00005 1.000 16.05
1,2,47 397-456 0.0079779 y=0.010x-0.00005 1.000 15.99
1,3,15 398-456.5 0.0082870 y=0.010x+0.00006 0.999 16.39
1,3,21 398-456 0.0082272 y=0.010x+0.00004 0.999 16.31
1,3,27 397.5-456.5 0.0082188 y=0.010x-0.000005 0.999 16.38
1,3,32 397-456.5 0.0082033 y=0.010x-0.00003 0.999 16.40
1,3,37 397.5-456 0.0081782 y=0.010x-0.00004 1.000 16.37
1,3,42 397-456 0.0081673 y=0.010x-0.00004 1.000 16.35
1,3,47 398-456.5 0.0081548 y=0.010x-0.00005 1.000 16.34
1,4,15 397-457.5 0.0082557 y=0.010x+0.00004 0.999 16.37
1,4,21 398-457 0.0082363 y=0.010x+0.00003 0.999 16.35
1,4,27 396-457 0.0082362 y=0.010x-0.00003 0.999 16.47
1,4,32 396.5-456 0.0082078 y=0.010x-0.00003 0.999 16.41
1,4,37 397-456.5 0.0081887 y=0.010x-0.00004 1.000 16.39
1,4,42 397-456.5 0.0081656 y=0.010x-0.00004 1.000 16.35
1,4,47 397.5-456 0.0081635 y=0.010x-0.00005 1.000 16.36
2,2,15 403.5-416.5 0.0001441 y=0.00016x+0.000016 0.989 15.95
416.5-428 0.0000930 y=0.00013x+0.000001 0.996 14.10
428-444 0.0000879 y=0.00009x+0.000009 0.938 17.46
444-471 0.0002178 y=0.00026x+0.00001 0.999 15.92
2,2,21 403.5-416 0.0001337 y=0.00015x+0.000007 0.993 16.83
416-429 0.0000822 y=0.00011x-0.0000002 0.986 14.92
429-441 0.0000729 y=0.00009x+0.000003 0.993 15.47
441-471 0.0002073 y=0.00026x+0.000005 0.999 15.50
2,2,27 402.5-416.5 0.0001226 y=0.00015x-0.0000007 0.994 16.37
416.5-429 0.0000738 y=0.00010x-0.000002 0.990 15.10
429-442.5 0.0000717 y=0.00008x+0.000002 0.996 17.36
442.5-473.5 0.0002093 y=0.00024x+0.000005 0.998 16.96
2,2,32 401.5-416 0.0001151 y=0.00014x-0.000001 0.997 16.52
416-428.5 0.0000629 y=0.00009x-0.000002 0.993 14.36
428.5-441 0.0000626 y=0.00008x-0.0000006 0.998 15.74
441-473 0.0002047 y=0.00025x+0.000002 0.999 16.15
2,2,37 400.5-416.5 0.0001128 y=0.00014x-0.0000005 0.997 16.12
416.5-428.5 0.0000579 y=0.00008x-0.000002 0.993 14.92
428.5-442 0.0000574 y=0.00007x-0.0000004 0.999 16.45
15
(Lanjutan) Lampiran 2 Penentuan kondisi optimum metode spektrofotometri
derivatif
Variasi
Kondisi
(a,b,c)
Panjang
gelombang
(nm)
amplitudo persamaan garis R2
Kadar
kurkuminoid
(mg/g)
442-474 0.0002030 y=0.00024x+0.0000015 0.999 16.72
2,2,42 400.5-416.5 0.0001067 y=0.00013x+0.0000004 0.998 16.29
416.5-428 0.0000482 y=0.00007x-0.000001 0.994 14.00
428-441 0.0000475 y=0.00006x-0.0000007 0.997 16.00
441-473.5 0.0001967 y=0.00024x+0.000000007 0.999 16.33
2,2,47 400.5-416 0.0001013 y=0.00013x+0.0000008 0.999 15.40
416-428.5 0.0000421 y=0.00007x-0.0000003 0.995 12.07
428.5-441.5 0.0000421 y=0.00005x-0.0000003 0.998 16.89
441.5-474.5 0.0001933 y=0.00024x+0.0000002 0.999 16.03
2,3,15 403.5-416 0.0000918 y=0.00011x+0.0000006 0.998 16.52
416-429 0.0000423 y=0.00006x-0.0000001 0.996 14.08
429-441.5 0.0000423 y=0.00005x-0.00000009 0.998 16.86
441.5-471.5 0.0001875 y=0.00024x-0.0000005 0.999 15.60
2,3,21 404-416.5 0.0001367 y=0.00015x+0.000008 0.992 17.09
416.5-428.5 0.0000848 y=0.00011x-0.000002 0.985 15.72
428.5-442 0.0000767 y=0.00009x+0.000003 0.996 16.31
442-473 0.0002082 y=0.00024x+0.000008 0.997 16.62
2,3,27 403-416 0.0001214 y=0.00015x+0.0000005 0.995 16.06
416-428.5 0.0000721 y=0.00011x-0.000002 0.992 13.42
428.5-441 0.0000685 y=0.00009x-0.0000001 0.998 15.18
441-473.5 0.0002066 y=0.00025x+0.0000035 0.997 16.18
2,3,32 402-416 0.0001147 y=0.00015X-0.0000007 0.997 15.33
416-428.5 0.0000629 Y=0.00009X-0.000002 0.993 14.36
428.5-441 0.0000626 y=0.00008x-0.0000006 0.998 15.74
441-473.5 0.0002052 y=0.00025x+0.000002 0.999 16.19
2,3,37 401.5-415.5 0.0001099 y=0.00014x+0.0000004 0.997 15.58
415.5-428 0.0000550 y=0.00009x-0.000002 0.991 12.62
428-441 0.0000565 y=0.00021x+0.0000006 0.999 5.30
441-474 0.0002028 y=0.00025x+0.000001 0.999 16.08
2,3,42 400.5-416 0.0001060 y=0.00013x+0.0000006 0.998 16.15
416-428.5 0.0000480 y=0.00007x-0.0000009 0.994 13.92
428.5-440.5 0.0000477 y=0.00006x-0.0000007 0.997 16.07
440.5-474 0.0001970 y=0.00024x+0.0000001 0.999 16.34
2,3,47 400.5-416 0.0001013 y=0.00013x+0.0000008 0.999 15.40
416-428 0.0000414 y=0.00007x-0.0000004 0.995 11.90
428-440.5 0.0000414 y=0.00005x-0.0000008 0.997 16.81
440.5-474.5 0.0001933 y=0.00024x-0.0000002` 0.999 16.06
2,4,15 405-417.5 0.0001740 y=0.00017x+0.00003 0.915 16.87
16
(Lanjutan) Lampiran 2 Penentuan kondisi optimum metode spektrofotometri
derivatif
Variasi
Kondisi
(a,b,c)
Panjang
gelombang
(nm)
amplitudo persamaan garis R2
Kadar
Kurkuminoid
(mg/g)
417.5-429 0.0001181 y=0.00017x-0.000008 0.908 14.78
429-441.5 0.0001084 y=0.00012x-0.000006 0.855 18.99
441.5-471.5 0.0002348 y=0.00025x+0.00001 0.954 18.63
2,4,21 403.5-417 0.0001518 y=0.00017x+0.00002 0.982 15.44
417-428.5 0.0001014 y=0.00014x+0.000001 0.986 14.29
428.5-441.5 0.0000974 y=0.00011x-0.000005 0.962 18.54
441.5-471 0.0002252 y=0.00027x+0.00000003 0.996 16.61
2,4,27 404-416.5 0.0001569 y=0.00016x+0.00002 0.985 17.04
416.5-428.5 0.0001003 y=0.00013x+0.0000003 0.977 15.32
428.5-444 0.0000933 y=0.00009x+0.000009 0.950 18.66
444-470.5 0.0002251 y=0.00026x+0.00001 0.991 16.48
2,4,32 404-416.5 0.0001450 y=0.00016x+0.00001 0.988 16.81
416.5-429 0.0000939 y=0.00012x+0.00000006 0.982 15.58
429-441 0.0000814 y=0.0001x+0.000003 0.995 15.62
441-471 0.0002112 y=0.00027x+0.000005 0.999 15.21
2,4,37 403-416 0.0001373 y=0.00017x+0.000001 0.994 15.97
416-429 0.0000890 y=0.00012x-0.000002 0.991 15.11
429-441.5 0.0000848 y=0.0001x+0.000001 0.999 16.69
441.5-474 0.0002143 y=0.00025x+0.000006 0.998 16.60
2,4,42 403-415.5 0.0001293 y=0.00017x-0.000001 0.997 15.27
415.5-428.5 0.0000826 y=0.00012x-0.000004 0.992 14.38
428.5-440.5 0.0000802 y=0.00010x-0.0000008 0.998 16.14
440.5-473 0.0002142 y=0.00026x+0.000004 0.998 16.10
2,4,47 402.5-415.5 0.0001288 y=0.00017x-0.0000004 0.996 15.14
415.5-428.5 0.0000802 y=0.00012x-0.000004 0.990 13.98
428.5-441 0.0000800 y=0.0001x-0.0000006 0.999 16.06
441-473.5 0.0002175 y=0.00027x+0.000003 0.998 15.83
3,3,15 384.5-387 0.0000284 y=0.00002x+0.0000007 0.481 27.59
387-391 0.0000245 y=0.00002x+0.000003 0.726 21.41
391-393 0.0000100 y=0.000007x+0.000006 0.263 11.38
400-402 0.0000189 y=-0.00001x+0.00002 0.753 2.19
401.5-407.5 0.0000256 y=0.000008x+0.00002 0.390 13.94
434.5-437 0.0000129 y=0.000006x+0.000004 0.597 29.55
440-442 0.0000095 y=0.000004x+0.000005 0.211 22.41
442-443.5 0.0000078 y=0.000008x+0.0000007 0.656 17.68
443.5-448 0.0000199 y=0.00002x+0.000002 0.710 17.83
448-451.5 0.0000181 y=0.00002x+0.000003 0.698 15.04
17
(Lanjutan) Lampiran 2 Penentuan kondisi optimum metode spektrofotometri
derivatif
Variasi
Kondisi
(a,b,c)
Panjang
gelombang
(nm)
amplitudo persamaan garis R2
Kadar
Kurkuminoid
(mg/g)
454-457 0.0000093 y=0.000008x+0.000008 0.388 3.24
457-461.5 0.0000130 y=0.00001x+0.000007 0.716 11.95
461.5-467 0.0000086 y=0.000009x+0.0.000006 0.904 5.75
467-472.5 0.0000107 y=0.00002x+0.000002 0.790 8.67
472.5-476 0.0000102 y=0.00002x-0.0000008 0.715 10.96
483.5-486.5 0.0000079 y=0.0000007x+0.000007 0.011 25.61
3,3,21 387.5-391.5 0.0000091 y=0.000007x+0.000007 0.340 5.98
402-407.5 0.0000150 y=0.000004x+0.00001 0.151 24.90
407.5-410 0.0000058 y=0.000005x+0.000007 0.703 -4.78
415-420 0.0000101 y=0.000006x+0.000006 0.201 13.61
433.5-448 0.0000157 y=0.00002x+0.000002 0.937 13.65
448-452.5 0.0000107 y=0.00002x+0.0000004 0.727 10.26
452.5-457.5 0.0000073 y=0.000008x+0.000004 0.338 8.22
457.5-461.5 0.0000078 y=0.000007x+0.000005 0.413 7.97
461.5-466.5 0.0000061 y=0.000005x+0.000004 0.393 8.37
466.5-472 0.0000072 y=0.00001x-0.000001 0.924 16.33
472-476.5 0.0000035 y=0.000008x+0.0000004 0.491 7.72
476.5-482.5 0.0000053 y=0.000007x-0.000004 0.868 26.47
482.5-486.5 0.0000037 y=0.000006x-0.0000003 0.972 13.28
3,3,27 401-408.5 0.0000092 y=0.000008x+0.000005 0.964 10.46
408.5-420.5 0.0000126 y=0.00002x+0.000002 0.985 10.56
420.5-433.5 0.0000096 y=0.00001x-0.00000009 0.971 19.30
433.5-447.5 0.0000120 y=0.00002x+0.0000003 0.978 11.65
447.5-453 0.0000057 y=0.000009x+0.00000008 0.765 12.44
453-457 0.0000037 y=0.000009x+0.0000006 0.993 6.86
457-462 0.0000051 y=0.000007x+0.0000008 0.846 12.24
462-467 0.0000053 y=0.000004x+0.0000008 0.783 22.41
3,3,32 401-408 0.0000077 y=0.000008x+0.000001 0.996 16.68
408-421 0.0000112 y=0.00001x+0.0000007 0.995 20.92
421-433.5 0.0000086 y=0.00001x-0.0000005 0.987 18.13
433.5-447.5 0.0000105 y=0.00001x-0.00000008 0.995 21.08
447.5-453 0.0000028 y=0.000005x+0.0000002 0.790 10.36
453-457 0.0000012 y=0.000002x+0.0000002 0.619 9.96
457-462.5 0.0000028 y=0.000009x-0.000001 0.984 8.41
462.5-467 0.0000018 y=0.0000006x+0.000001 0.074 26.56
3,3,37 398.5-408.5 0.0000070 y=0.000008x+0.0000007 0.995 15.69
408.5-421.5 0.0000109 y=0.00001x+0.0000002 0.997 21.31
421.5-434 0.0000081 y=0.00001x-0.0000004 0.990 16.93
18
(Lanjutan) Lampiran 2 Penentuan kondisi optimum metode spektrofotometri
derivatif
Variasi
Kondisi
(a,b,c)
Panjang
gelombang
(nm)
amplitudo persamaan garis R2
Kadar
Kurkuminoid
(mg/g)
434-447.5 0.0000093 y=0.00001x-0.00000003 0.997 18.53
3,3,42 397.5-409.5 0.0000062 y=0.000008x+0.0000001 0.987 15.19
409.5-422.5 0.0000098 y=0.00001x-0.00000002 0.996 19.56
422.5-434.5 0.0000073 y=0.00001x-0.0000004 0.991 15.34
434.5-448.5 0.0000084 y=0.00001x-0.00000007 0.999 16.87
3,3,47 397.5-409.5 0.0000057 y=0.000007x+0.0000002 0.992 15.65
409.5-422.5 0.0000089 y=0.00001x-0.00000009 0.996 17.91
422.5-434.5 0.0000066 y=0.000009x-0.0000003 0.992 15.27
434.5-448 0.0000080 y=0.00001x-0.00000009 0.999 16.12
3,4,15 386.5-388 0.0000223 y=0.00001x+0.000009 0.820 26.49
388-391 0.000009 y=0.000003x+0.000008 0.081 6.64
391-393 0.0000071 y=-0.000004x+0.00001 0.117 14.44
402-407.5 0.0000256 y=0.000005x+0.00002 0.108 22.31
445-448 0.0000199 y=0.00002x+0.000001 0.704 18.82
448-451.5 0.0000184 y=0.00002x+0.000002 0.772 16.33
451.5-457 0.0000082 y=0.00002x+0.000005 0.796 3.19
457-461 0.0000154 y=0.00001x+0.000006 0.717 18.73
3,4,21 402-407.5 0.0000154 y=0.000007x+0.00001 0.912 15.37
407.5-412.5 0.0000172 y=0.000006x+0.000006 0.822 37.18
414-419.5 0.0000103 y=0.000009x+0.000002 0.725 18.37
419.5-433.5 0.0000089 y=0.00001x+0.000003 0.831 11.75
433.5-448 0.0000154 y=0.00002x+0.000001 0.957 14.34
448-452.5 0.0000113 y=0.00001x+0.000001 0.712 20.52
452.5-457.5 0.0000073 y=0.00001x+0.000002 0.653 10.56
457.5-461.5 0.0000078 y=0.000008x+0.000003 0.708 11.95
461.5-466.5 0.0000062 y=0.000006x+0.000003 0.850 10.62
466.5-472.5 0.0000065 y=0.00001x+0.0000004 0.830 12.15
472.5-476.5 0.0000027 y=0.000009x-0.0000008 0.647 7.75
476.5-482.5 0.0000051 y=0.000006x+0.0000008 0.845 14.28
482.5-486.5 0.0000031 y=0.000002x+0.000002 0.920 10.96
486.5-490 0.0000032 y=0.0000009x+0.000003 0.231 4.43
3,4,27 401.5-408.5 0.0000092 y=0.000008x+0.000005 0.944 10.46
408.5-421 0.0000126 y=0.00002x+0.000002 0.984 10.56
421-433 0.0000096 y=0.00001x+0.00000004 0.961 18.33
433-448 0.0000119 y=0.00002x+0.0000007 0.978 11.16
448-453 0.0000056 y=0.000008x+0.0000006 0.076 12.45
453-457 0.0000037 y=0.000006+0.0000004 0.738 10.96
457-461.5 0.0000052 y=0.000007x+0.000001 0.837 11.95
19
(Lanjutan) Lampiran 2 Penentuan kondisi optimum metode spektrofotometri
derivatif
Variasi
Kondisi
(a,b,c)
Panjang
gelombang
(nm)
amplitudo persamaan garis R2
Kadar
kurkuminoid
(mg/g)
461.5-467 0.0000042 y=0.000004x+0.0000007 0.805 17.43
467-472.5 0.0000049 y=0.000008x+0.00000004 0.932 12.10
472.5-477 0.0000006 y=0.000005x-0.0000007 0.813 5.18
477-481.5 0.0000034 y=0.000005x-0.0000003 0.945 14.74
3,4,32 400.5-408.5 0.0000077 y=0.000009x+0.000001 0.999 14.83
408.5-421.5 0.0000118 y=0.00001x+0.0000007 0.995 22.11
421.5-434 0.0000088 y=0.00001x-0.0000004 0.990 18.33
434-448 0.0000102 y=0.00001x+0.0000001 0.989 20.12
448-453.5 0.0000029 y=0.000005x+0.0000003 0.781 10.36
453.5-457 0.0000012 y=0.000002x+0.0000002 0.646 9.96
457-462.5 0.0000028 y=0.000004x+0.0000007 0.758 10.46
462.5-467 0.0000018 y=0.000001x+0.0000007 0.488 21.91
3,4,37 399.5-409 0.0000071 y=0.000008x+0.0000006 0.997 16.19
409-421.5 0.000011 y=0.00001x+0.0000002 0.997 21.51
421.5-434 0.0000082 y=0.00001x-0.0000004 0.990 17.13
434-447.5 0.0000093 y=0.00001x-0.00000003 0.997 18.59
3,4,42 398-409 0.0000063 y=0.000009x-0.0000005 0.934 15.05
409-422.5 0.0000098 y=0.00001x+0.00000006 0.996 19.40
422.5-434 0.0000073 y=0.00001x-0.0000004 0.989 15.34
434-448 0.0000084 y=0.00001x-0.0000001 0.999 16.93
3,4,47 397.5-409 0.0000057 y=0.000007x+0.0000003 0.990 15.37
409-422.5 0.0000089 y=0.00001x-0.00000009 0.996 17.91
422.5-434.5 0.0000066 y=0.000009x-0.0000002 0.992 15.05
434.5-447.5 0.000008 y=0.00001x-0.00000002 0.999 15.98
4,4,15 386.5-389.5 0.0000183 y=0.00001x+0.000007 0.279 22.51
389.5-392 0.0000176 y=-0.000002x+0.00001 0.024 -75.70
392-392.5 0.0000143 y=-0.000005x+0.00001 0.264 -17.13
392.5-395 0.000008 y=0.000001x+0.00001 0.005 -39.84
395-396.5 0.0000061 y=0.000002x+0.000008 0.011 -18.92
396.5-397.5 0.0000098 y=0.000004x+0.000005 0.056 23.90
399-400.5 0.0000173 y=-0.000008x+0.00002 0.598 6.72
400.5-403.5 0.0000122 y=-0.00001x+0.00002 0.508 15.54
405-410 0.0000125 y=0.00001x+0.000004 0.509 16.93
410-411.5 0.0000138 y=0.00001x+0.000002 0.455 23.51
411.5-414 0.0000172 y=0.000004x+0.000004 0.164 65.74
414-417 0.0000116 y=0.000005x+0.000007 0.310 18.33
438-441.5 0.0000088 y=-0.000002x+0.000007 0.075 17.93
441.5-444.5 0.0000072 y=-0.000003x+0.000008 0.125 5.31
20
(Lanjutan) Lampiran 2 Penentuan kondisi optimum metode spektrofotometri
derivatif
Variasi
Kondisi
(a,b,c)
Panjang
gelombang
(nm)
amplitudo persamaan garis R2
Kadar
Kurkuminoid
(mg/g)
444.5-447 0.0000105 y=0.000001x+0.000005 0.072 109.56
447-449.5 0.0000117 y=0.000009x+0.000002 0.640 21.47
453.5-456 0.0000064 y=0.000007x+0.000004 0.636 6.83
456-458.5 0.000009 y=0.000007x+0.000006 0.507 8.54
471.5-474 0.0000073 y=0.000008x+0.000002 0.774 13.20
474-476.5 0.0000077 y=0.000004x+0.000003 0.866 23.41
495-496.5 0.0000043 y=0.000005x+0.000001 0.691 13.15
496.5-498.5 0.0000069 y=-0.0000002x+0.000005 0.001 -189.24
498.5-500.5 0.0000079 y=-0.0000005x+0.000008 0.002 3.98
4,4,21 385.5-389.5 0.000007 y=0.000005x+0.000001 0.630 23.90
389.5-393 0.0000039 y=0.000003x+0.000003 0.266 5.98
393-394 0.0000025 y=0.0000002x+0.000003 0.002 -49.80
394-396.5 0.0000036 y=-0.000002x+0.000004 0.212 3.98
396.5-401.5 0.000004 y=-0.000003x+0.000006 0.650 13.28
401.5-406.5 0.000004 y=-0.0000009x+0.000006 0.225 44.27
406-411 0.0000044 y=0.000002x+0.000004 0.273 3.98
444-446 0.000003 y=0.0000001x+0.000003 0.000 0.00
446-450 0.0000037 y=0.000004x+0.000001 0.445 13.45
450-455.5 0.0000024 y=0.000005x+0.0000007 0.734 6.77
455.5-459.5 0.0000032 y=0.000004x+0.000001 0.629 10.96
459.5-463.5 0.0000032 y=0.000003x+0.000001 0.393 14.61
463.5-470.5 0.0000025 y=0.000003x+0.000001 0.627 9.96
470.5-474 0.0000025 y=0.000004x+0.0000004 0.621 10.46
474-477 0.0000023 y=0.000003x+0.0000004 0.671 12.62
4,4,27 389.5-395 0.0000018 y=0.000002x+0.0000003 0.705 14.94
395-399.5 0.0000013 y=-0.0000005x+0.000002 0.115 27.89
399.5-405 0.0000026 y=0.000003x 0.000 17.26
405-410.5 0.0000023 y=0.000002x+0.000002 0.640 2.99
410.5-413 0.0000006 y=0.0000003x+0.000001 0.076 -26.56
413-416.5 0.0000012 y=0.000001x+0.0000006 0.748 11.95
416.5-421.5 0.000001 y=0.000001x+0.0000006 0.589 7.97
446.5-450.5 0.0000023 y=0.000003x+0.0000008 0.697 9.96
450.5-455 0.0000023 y=0.000003x+0.0000003 0.731 13.28
455-459.5 0.0000027 y=0.000003x+0.0000002 0.651 16.60
459.5-464 0.0000023 y=0.000002x+0.0000004 0.780 18.92
464-469.5 0.000002 y=0.000002x+0.0000006 0.830 13.94
469.5-474 0.0000019 y=0.000002x+0.0000001 0.737 17.93
474-478.5 0.0000017 y=0.000002x-0.0000002 0.706 18.92
21
(Lanjutan) Lampiran 2 Penentuan kondisi optimum metode spektrofotometri
derivatif
Variasi
Kondisi
(a,b,c)
Panjang
gelombang
(nm)
amplitudo persamaan garis R2
Kadar
Kurkuminoid
(mg/g)
478.5-485.5 0.0000012 y=0.000001x+0.0000003 0.755 17.93
4,4,32 392-394.5 0.0000011 y=0.0000008x+0.0000005 0.767 14.94
394.5-400 0.0000006 y=-0.00000009x+0.0000008 0.045 44.27
400-404.5 0.0000014 y=-0.000003x+0.000005 0.097 23.90
404.5-416.5 0.0000018 y=-0.000002x+0.000005 0.058 31.87
416.5-429 0.0000015 y=0.000002x+0.0000005 0.991 9.96
429-444.5 0.0000018 y=0.000002x+0.0000002 0.916 15.94
444.5-450.5 0.0000017 y=0.000002x+0.0000002 0.779 14.94
450.5-455 0.0000012 y=0.000002x+0.0000001 0.672 10.96
455-460 0.0000011 y=0.000001x+0.0000002 0.668 17.93
460-464.5 0.0000011 y=0.000001x+0.0000002 0.788 17.93
464.5-469 0.0000011 y=0.000002x+0.00000007 0.890 10.26
469-474 0.0000007 y=0.000001x-0.00000005 0.838 14.94
474-479.5 0.0000005 y=0.000001x+0.00000007 0.783 8.57
4,4,37 395.5-398.5 0.0000003 y=-0.00000009x+0.0000005 0.051 44.27
398.5-404.5 0.0000003 y=0.000001x+0.0000006 0.953 -5.98
404.5-415.5 0.0000014 y=0.000001x+0.0000006 0.953 15.94
415.5-429 0.0000013 y=0.000001x+0.0000003 0.992 19.92
429-443.5 0.0000015 y=0.000002x+).0000002 0.947 12.95
443.5-450.5 0.0000012 y=0.000001x+0.0000002 0.809 19.92
450.5-455 0.0000007 y=0.0000009x+0.0000002 0.645 11.07
455-459.5 0.0000007 y=0.0000009x+0.0000002 0.676 11.07
459.5-464.5 0.0000007 y=0.0000008x+0.0000002 0.751 12.45
464.5-469.5 0.0000007 y=0.0000009x+0.00000006 0.914 14.17
469.5-474.5 0.0000004 y=0.000001x-0.0000001 0.872 9.96
474.5-479.5 0.0000003 y=0.0000007x-0.0000001 0.714 11.38
479.5-484 0.0000004 y=0.0000005x+0.0000001 0.854 11.95
4,4,42 404.5-415.5 0.000001 y=0.000001x+0.0000002 0.980 15.94
415.5-429 0.0000011 y=0.000001x+0.00000007 0.992 20.52
429-442 0.0000012 y=0.000001x+0.00000003 0.985 23.31
442-450 0.0000008 y=0.0000009x+0.00000009 0.954 15.71
450-456 0.0000002 y=0.0000004x+0.00000006 0.775 6.97
456-459.5 0.0000002 y=0.0000003x+0.00000009 0.617 7.30
459.5-464.5 0.0000003 y=0.0000002x+0.0000001 0.391 19.92
464.5-470 0.0000003 y=0.0000004x+0.00000005 0.811 12.45
470-474.5 0.0000001 y=0.0000005x-0.00000002 0.914 4.78
4,4,47 403-414.5 0.000001 y=0.000001x+0.0000001 0.993 17.93
414.5-428 0.000001 y=0.000001x+0.00000008 0.992 18.33
22
(Lanjutan) Lampiran 2 Penentuan kondisi optimum metode spektrofotometri
derivatif
Keterangan :
a : orde turunan
b : orde penghalusan (smoothing)
c : jumlah jendela
Variasi
Kondisi
(a,b,c)
Panjang
gelombang
(nm)
amplitudo persamaan garis R2
Kadar
Kurkuminoid
(mg/g)
428-441 0.000001 y=0.000001x+0.000000007 0.979 19.78
441-450.5 0.0000006 y=0.0000008x+0.000000007 0.946 14.77
465-471 0.0000002 y=0.0000004x+0.000000007 0.852 9.61
23
Lampiran 3 Penentuan kadar kurkuminoid pada kunyit dengan metode
spektrofometri UV-tampak
Tabel Penentuan kadar kurkuminoid dengan metode spektrofometri UV-tampak
ulangan Bobot
contoh (g) Absorbans
Konsentrasi terbaca Konsentrasi contoh
(mg/L) (mg/g)
1 0.0503 0.850 1.4089 14.00
2 0.0508 0.872 1.4463 14.24
3 0.0508 0.873 1.4480 14.25
4 0.0506 0.865 1.4344 14.17
5 0.0500 0.854 1.4157 14.16
6 0.0513 0.880 1.4600 14.23
rerata 14.18
Simpangan baku 0.0917
%SBR 0.65
Contoh perhitungan pada ulangan ke-1 :
Bobot timbang : 0.0503 g
Absorbans : 0.850
Persamaan kurva standar : y= 0.587x+0.023
0.850-0.023 = 0.587x
X = 1.4089 mg/L
Kadar (mg/g) =
= = 14.00 mg/g
Rerata kadar kurkuminoid = = 14.18
Simpangan Baku = = 0.092
%SBR = = 0.65
24
Lampiran 4 Kromatogram standar kurkuminoid konsentrasi (a) 0,25; (b) 0,50; (c)
0,75; (d) 1,00; (e) 1,25; dan (f) 1,50 mg/L
(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
25
Lampiran 5 Kromatogram kunyit ulangan (a) 1, (b) 2, (c) 3, (d) 4, (e) 5, dan (f) 6
(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
26
Lampiran 6 Penentuan kadar kurkuminoid pada kunyit dengan metode KCKT
Tabel Penentuan kadar kurkuminoid dengan metode KCKT
n
Bobot
Contoh
(g)
Bisdesmetoksikurkumin Desmetoksikurkumin kurkumin Kadar
kurkuminoid
(mg/g) Luas area
Kadar
(mg/g) Luas area
Kadar
(mg/g)
Luas
area
Kadar
(mg/g)
1 0.0500 307244 8.765 280300 9.762 810754 26.197 44.72
2 0.0500 315560 8.978 287697 9.992 828019 26.735 45.70
3 0.0506 310040 8.732 286397 9.833 835365 26.644 45.21
4 0.0504 316839 8.939 287455 9.905 832940 26.674 45.52
5 0.0501 314768 8.940 286010 9.920 833632 26.856 45.71
6 0.0500 307822 8.780 283617 9.865 833758 26.913 45.56
Rata-rata 45.40
Simpangan baku 0.381
%SBR 0.84 Keterangan : n : ulangan;
Contoh perhitungan pada ulangan ke-1 :
Bobot timbang : 0.0500 g
Luas area bisdemetoksikurkumin : 307244
Persamaan kurva standar : y= 976129.92x-34981
307244 + 34981 = 976129.92x
x = 0.3506 mg/L
Kadar (mg/g) =
= = 8.765 mg/g
Kadar kurkuminoid = Kadar (bisdemetoksikurkumin + demetoksikurkumin +
kurkumin) = 44.72 mg/g
Rerata kadar kurkuminoid = = 45.40
Simpangan Baku = = 0.381
%SBR = = 0.84
27
Lampiran 7 Uji linearitas, limit deteksi dan limit kuantisasi, dan presisi
Tabel Uji linearitas standar kurkuminoid dengan metode spektrofotometri
derivatif
ulangan Konsetrasi standar kurkuminoid (mg/L)
Persamaan garis Regresi 0.40 0.60 0.80
1 0.0000040 0.0000071 0.0000094 y=0.00001x-0.000001 0.992
2 0.0000051 0.0000065 0.0000080 y=0.000007x+0.000002 0.999
3 0.0000042 0.0000064 0.0000082 y=0.00001x+0.0000003 0.996
Rata-rata Y=0.000009x+0.0000004 0.996
Standar deviasi intersep 0.0000015
Limit deteksi (LoD) = = 0.55 mg/L
Limit kuantisasi (LoQ) = = 1.67 mg/L
Tabel Uji presisi metode spektrofotometri derivatif pada kondisi optimum
Contoh Bobot
contoh (g) Amplitudo
Konsentrasi
terbaca (mg/L)
Kadar kurkuminoid
dalam contoh (mg/g)
1 0.0502 0.0000068 0.7111 14.17
2 0.0501 0.0000069 0.7222 14.42
3 0.0502 0.0000066 0.6889 13.72
4 0.0504 0.0000070 0.7333 14.55
5 0.0503 0.0000070 0.7333 14.58
6 0.0504 0.0000070 0.7333 14.55
Rerata 14.33
Simpangan baku 0.335
%SBR 2.34
Rerata kadar kurkuminoid = = = 14.33
Simpangan Baku = = 0.335
%SBR = = 2.34
28
Lampiran 8 Uji Akurasi untuk kunyit dengan metode spektrofotometri derivatif
Tabel Uji akurasi metode spektrofotometri derivatif
Ulangan Konsentrasi
diharapkan Amplitudo Pers.garis Regresi
Konsentrasi
terbaca %Recovery
(mg/L) (mg/L)
1 0.80 0.0000080 Y=0.00009x+0.0000004 0.996 0.8444 105.56
2 0.80 0.0000071 Y=0.00009x+0.0000004 0.996 0.7444 93.06
3 0.80 0.0000068 Y=0.00009x+0.0000004 0.996 0.7111 88.89
1 0.85 0.0000072 Y=0.00009x+0.0000004 0.996 0.7556 88.89
2 0.85 0.0000074 Y=0.00009x+0.0000004 0.996 0.7778 91.50
3 0.85 0.0000073 Y=0.00009x+0.0000004 0.996 0.7667 90.20
1 0.90 0.0000084 Y=0.00009x+0.0000004 0.996 0.8889 98.77
2 0.90 0.0000082 Y=0.00009x+0.0000004 0.996 0.8667 96.30
3 0.90 0.0000081 Y=0.00009x+0.0000004 0.996 0.8556 95.06
Rerata % recovery
0.80 95.83
0.85 90.20
0.90 96.71
Contoh perhitungan : pada konsentrasi standar 0.8 mg/L ulangan 1
%recovery = = =
105.56%
Rerata% recovery = = 95.83%
29
Lampiran 9 Uji t dan uji F metode spektrofotometri derivatif
Uji t dan uji F metode spektrofotometri derivatif dengan KCKT
Simpangan baku spektrofotometri derivatif (S1) = 0.335
Simpangan baku KCKT (S2) = 0.381
Kadar spektrofotometri derivatif rata-rata ( ) = 14.33
Kadar KCKT rata-rata ( ) = 45.40
t hitung = = = 150.09
Derajat bebas = = 9.84 ≈ 10
t tabel untuk derajat bebas = 10 pada selang kepercayaan 95% = 2.23
t hitung > t tabel (berbeda nyata)
F hitung = = 1.29
F tabel pada selang kepercayaan 95% = 5.050
F hitung < F tabel (tidak berbeda nyata)
Uji t dan uji F metode spektrofotometri derivatif dengan spektrofotometri UV-
tampak
Simpangan baku spektrofotometri derivatif (S1) = 0.335
Simpangan baku Spektrofotometri UV-tampak (S2) = 0.092
Kadar spektrofotometri derivatif rata-rata ( ) = 14.33
Kadar Spektrofotometri UV-tampak rata-rata ( ) = 14.18
t hitung = = 1.056
Derajat bebas = = 5.75 ≈ 6
t tabel untuk derajat bebas = 6 pada selang kepercayaan 95% = 2.45
t hitung < t tabel (tidak berbeda nyata)
F hitung = = 0.075
F tabel pada selang kepercayaan 95% = 5.050
F hitung < F tabel (tidak berbeda nyata)