hem agglutination inhibition test and dengue blot

5/14/2018 Hem Agglutination Inhibition Test and Dengue Blot - slidepdf.com

http://slidepdf.com/reader/full/hem-agglutination-inhibition-test-and-dengue-blot 1/3

HEMAGGLUTINATION INHIBITION TEST AND DENGUE BLOT

Tujuan

Untuk menentukan adanya infeksi virus dengue yang dicurigai pada pasien klinis

latar Belakang:

Test untuk mengukur antibodi seperti penghambatan hemaglutinasi (Hl), fiksasi complernent (CF), dan

tes netralisasi mengeksploitasi tanda-tanda biologis virus dengue. Ada tes yang dapat diandalkan untuk

mengukur antibodi, tetapi mereka tidak membedakan lgM dari IgG. Untuk alasan ini tes ini biasanya

equire contoh pasangan (akut dan konvalesen) untuk membuat diagnosis. Teknik serologi yang lebih

baru seperti ELISA, antibodi neon dan tes dot blot telah dikembangkan untuk mengukur antibodi kelas

individual.

Tes hl telah menjadi Organisasi Kesehatan Dunia uji standar untuk konfirmasi serologis dan klasifikasi

serologi infeksi dengue. Pengujian tergantung pada kemampuan antibodi untuk menghambat virus

glikoprotein yang tergantung aglutinasi dari angsa atau manusia tipe O merah sel darah. Spesimen

serum untuk pengujian harus diperlakukan untuk menghapus non-spesifik penghambat aglutinasi

dengan aseton atau ekstraksi kaolin diikuti oleh adsorpsi sel darah merah. Titik akhir titrasi adalahpengenceran tertinggi serum yang menghambat aglutinasi dari jumlah standar antigen. Empat

perubahan kali lipat atau lebih Hl titer serum dipasangkan dianggap diagnostik untuk infeksi baru.

lnterpretation uji Hl ini didasarkan pada titer dan waktu setelah timbulnya gejala. Pada infeksi primer,

antibodi terdeteksi Hl umumnya muncul setelah hari kelima dan naik perlahan-lahan selama beberapa

minggu, titer umumnya tidak melebihi 1/640. Dalam kasus infeksi sekunder atau tersier, ada respon

anamnestic, yang menghasilkan ketinggian cepat titer dalam beberapa hari onset. Titer 1/2560 to

1/20480 sering dicapai dalam sampel sembuh dan dapat bertahan selama beberapa minggu.

Dengue Blot (dot blot) tes, yang tidak memerlukan peralatan yang diperlukan untuk tes serologikonvensional, sederhana dan cepat. Keterbatasan tes ini, bagaimanapun, adalah bahwa mereka tidak

berguna untuk menguji sejumlah besar sampel, karena individu strip kertas atau membran harus

ditangani untuk setiap serum diuji. Di samping itu mereka mahal. Keuntungan dari tes ini adalah bahwa

mereka dapat digunakan untuk membedakan IgG dari lgM dan ukuran titer antibodi IgG setengah

kuantitas.

Tes dot blot khusus untuk lgM anti dengue telah rnodeled setelah lgM menyerap ELISA untuk

menghindari efek mengganggu dari IgG antibodi dari infeksi sebelumnya. Ini bisa dicapai dengan

menggunakan membran nitroselulosa dilapisi dengan anti-antibodi lgM manusia.

Sebuah dot blot tes untuk antibodi IgG memiliki potensi untuk menggantikan tes serologi lebih rumit

seperti Hl dan ELISA IgG tes. Masalah dengan jenis tes adalah sifat subjektif dari kuantifikasi nya, karena

memerlukan penilaian visual intensitas warna. Pada pengenceran 1: 1000 tes ini tidak cukup sensitif

untuk mendeteksi antibodi IgG rendah terkikik dari infeksi sebelumnya, sampel serum tunggal sehingga

cukup untuk identifikasi infeksi baru.

PERALATAN DAN BAHAN



Hemaglutinasi inhibisi uji:

- 96-baik lempeng mikro

- mikropipet

- lncubator

- kaolin

- serum

- antigen dengue

- eritrosit angsa

Dengue Blot:

-pelat

-handuk kertas

-Membran dengan dot-dihapuskan antigen dengue

- mengkonjugasikan/mentasrifkan

-substrat

-aquadest

-mencuci penyangga

-pengencer penyangga

PROSEDUR:

Hemaglutinasi inhibisi uji:

1. Ekstrak sampel serum dengan kaolin untuk menghapus non-spesifik inhibitor

2. Menyerap sampel dengan eritrosit angsa untuk menghapus agglutinin

3. Buatlah pengenceran dua kali lipat dari sarnple yang dimulai pada 1/10 sampai 1/10240 pengenceran

4. Masukan sarnple dilusian ke nos juga. 1 - 11. Nah No.12 diisi dengan 1 dilusian serum: 1 dan berfungsi

sebagai kontrol

5. Tambahkan 25 ul (4 unit) dari antigen dengue untuk setiap sumur. lncubate di 4o C semalam.

6. Pada hari berikutnya menambahkan 25 ul eritrosit angsa tersuspensi dalam VAD (pH 6.2). lncubate

pelat pada 360 C selama 45 menit.

7. Hasil positif akan menunjukkan eritrosit utuh terakumulasi di bagian bawah sumur.

Dengue Blot:

1. Mencuci persiapan buffer: 10 ml penyangga dengan konsentrasi 20 x cuci + 190 ml aquadest (dapatdisimpan untuk seminggu)

2. Penyangga pengencer: 20 ml buffer cuci + 1 gram tanpa lemak susu skim. Aduk rata (harus baru

nnade)

3. Preparasi sampel: 5 ul buffer serum + 500 ul buffer pengencer

4. Masukan membran ke dalam sumur



5. Isi sumur dengan 450 ul buffer pengencer

6. Tambahkan 50 ul sampel diencerkan, tutup piring dengan kertas, dan tahan pada suhu kamar selama

60 menit

7. Menyedot cairan dari sumur, mencuci membran dengan pencucian penyangga 3 kali (3 menit setiap

kali)

8. Conjugate persiapan: 6 ul konjugat + 3 ml bufer pengencer

9. Isi sumur dengan 250 ul konjugat, menetaskan pada suhu kamar selama 60 menit

10. Ambil cairan keluar dari sumur, mencuci membran dengan pencucian penyangga seperti dijelaskan

di atas

11. Substrat persiapan: 1,5 ml substrat A + 1,5 ml substrat B (mempersiapkan itu sebelum digunakan)

12. Tambahkan 250 ul larutan substrat ke dalam sumur

13. Menutupi piring, diamkan pada suhu kamar selama 30 menit

14. Suck cairan dan menambahkan akuades ke dalam sumur

15. Periksa pengembangan titik berwarna pada membran

hem agglutination inhibition test and dengue blot

Documents