hasil praktikum darah (1)

8/10/2019 Hasil Praktikum Darah (1)

1/9

Biokimia Darah Page 1

BAB I

TUJUAN

1.1Tujuan Umum

Mengetahui tentang aktivitas biokimia dalam darah dan hubungannya dengan penyakit

yang berhubungan dengan ganguan metabolisme yang menyebabkan perubahan kimia

darah.

1.2Tujuan Khusus

1.2.1 Uji fragilitas globular eritrosit

Mengetahui tingkat fragilitas eritrosit

1.2.2

Uji Oksihemoglobin dan deoksihemoglobin

Membuktikan hemoglobin dapat mengikat oksigen membentuk oksihemoglobin

(HbO2) dan dapat terurai kembali menjadi O2 dan deoksihemoglobin

1.2.3

Uji untuk Methemoglobin

Memperlihatkan bila besi dalam molekul hemoglobin dioksidasi enjadi Fe3+, maka

terbentuk metHb yang tidak bisa mengkat oksigen.

1.2.4

Teknik pemisahan albumin dan globulin serum dengan salting out

Mengetahui perbedaan albumin dan globulin


2/9


BAB 2

HASIL PRAKTIKUM

2.1Uji Fragilitas Globular Eritrosit

Tabung 1 2 3 4 5 6

NaCl 0,2% 0,3% 0,4% 0,5% 0,6% 0,7%

Hasil ++++ +++ +++ ++ ++ +

Keterangan: (+) kefragilan, semakin banyak (+) warna merah semakin pekat

2.2Uji Oksihemoglobin dan Deoksihemoglobin

Prosedur Tabung 1 (A) Tabung 2 (B)

A Merah terang Merah terang

B Merah terang Merah terang menjadi Merah gelap

C Merah terang Merah gelap menjadi Merah gelapdan

timbul buih

Keterangan: (A) Oksi Hb

(B) Pembentukan deoksiHB

(C) Pembentukan kembali oksiHb dan deoksiHb

2.3Uji untuk methemoglobin

Reaksi Uji Hasil pengamatan

1) 1 ml darah + 4 ml air suling

- No 1 + bbrp tetes

K3Fe(CN)6

- + pereaksi stokes

Warna merah

Warna merah menjadi warna coklat

kehitaman

Warna tetap gelap

2) 1 ml darah + 1 ml air

suling(dipanaskan)

- No 2 + 6 ml K3Fe(CN)6

Gelembung banyak


3/9


4/9


5/9


terikat karena sifat reduksi Fe2+.Selanjutnya di bagi menjadi 2 tabung (A) sebagai control

dan (B) sebagai eksperiment.

Gambar 3.1 Gambar Reaksi Oksihemoglobin

Gambar 3.2 Gambar Pembentukan Oksihemoglobin di dalam Tubuh

Pada prosedur selanjutnya larutan stokes ditambahkan ke dalam tabung (B) 10 tetes.

Larutan stokes dibuat dari 40 tetes pereaksi stokes dan 5 tetes NH4OH 10%. Pereaksi

stokes berfungsi sebagai pereduksi kuat. Fungsi NH4OH adalah untuk mencegah

pengendapan karena sifat basa yang dimilikinya mampu mencegah protonasi oleh asam

sehingga tidak terbentuk endapan pada pembuatan pereaksi stokes. Pereaksi stokes dapat

dibuat dari 20 gram Fe2SO4ditambah 30 gram asam tartrat dalam aquadest, lalu encerkan

hingga 1000 ml. NH4OH 10% dapat dibuat dengan melarutkan NH4OH 10 gram dalam

100 mL aquades. Perubahan warna merah terang menjadi merah gelap, hal ini

dikarenakan Fe2+ tereduksi melepaskan O2, dalam hal ini disebut reaksi pembentukan

Deoksihemoglobin.

Gambar 3.2 Gambar Reaksi Deoksihemoglobin

Hb + 4O2 Hb(O2)4

Hb(O2)4 Hb + 4O2


6/9


Tabung yang berisi Deoksihemoglobin langsung dikocok kuat-kuat dan warna larutan

menjadi lebih pekat, yakni merah kecoklatan dan timbul buih. Hal ini disebabkan O2

dalam oksiHb tereduksi keluar karena longgarnya ikatan koordinasi O2dengan atom besi

dalam hemoglobin, ditambah dengan adanya tekanan CO2 yang besar dari pengocokan

kuat-kuat sehingga terbentuklah deoksihemoglobin.

3.3Uji untuk Methemoglobin

Dalam uji ini memperlihatkan bila besi dalam molekul hemoglobin dioksidasi

menjadi Fe3+maka terbentuk metHb yang tidak bisa mengikat oksigen. Methemoglobin

adalah suatu hasil oksidasi hemoglobin yang tidak mempunyai kemampuan lagi untuk

mengangkut oksigen. Ini dapat dibuktikan dengan mudah secara spektrofotometri.

Banyak zat, misalnya, amina aromatik atau senyawa nitro aromatik yang dalam

organisme direduksi menjadi amina aromatik, sulfonamida, asetanilid, asam

aminosalisilat, nitrofurantoin, primakuina, kinina atau nitrit, menyebabkan pembentukan

methemoglobin dari hemoglobin. Jika methemoglobin hanya dibentuk dalam jumlah

kecil, maka methemoglobin dapat direduksi kembali menjadi hemoglobin di dalam

eritrosit. Jika sebaliknya pembentukan methemoglobin naik sampai jumlah tertentu,

proses regenerasi pada eritrosit tidak cukup dan kemampuan darah untuk transport

oksigen berkurang dengan nyata.

Hemoglobin yang terikat pada oksigen disebut oksihemoglobin ( HbO2 ), sedangkan

hemoglobin yang melepaskan oksigen disebut deoksihemoglobin (HbCO).

Ikatan Hb dengan CO ini 200 kali lebih kuat daripada ikatan Hb dengan oksigen dan ini

mengakibatkan Hb tidak dapat lagi mengikat, membawa, dan mendistribusikan oksigen

ke jaringan tubuh. Muatan Fe yang terdapat pada pusat hem dapat berubah menjadi Fe3+.

Hal ini dikarenakan adanya oksidasi oleh senyawa-senyawa pengoksidasi. Hemoglobin

yang mengalami oksidasi disebut methemoglobin atau HbFe3+. Hb dalam bentuk ini tidak

dapat mengikat oksigen dan perubahan warna yang terjadi pada hemoglobin adalah warna

gelap. Warna gelap ini ditunjukkan tidak terbentuknya HbO2 karena larutan K3Fe(CN)6

mengoksidasi Fe2+ dalam hemoglobin, dioksidasi oleh oksidator K3Fe(CN)6 sehingga

terbentuk HbFe3+dan menyebabkan warna hemoglobin menjadi gelap karena hemoglobin

tidak mampu lagi mengikat oksigen.

Gambar 3.1 Reaksi oksidasi ion ferro menjadi ion ferri


7/9


Gambar 3.2 Reaksi oksidasi membentuk metHb

3.4 Teknik Pemisahan Albumin dan Globulin Serum dengan Salting Out

Serum adalah gabungan antara albumin dan globulin.

Larutan globulin dapat diendapkan oleh penambahan garam amonium sulfat hingga

setengah jenuh menjadi presipitat, larutan albumin juga dapat diendapkan dengan

penambahan amonium sulfat (NH4)2SO4 hingga jenuh, namun jika diencerkan akan larut

kembali (dibuat setengah jenuh).

Memang sebelum digojok, ada endapan albumin di dasar tabung dan setelah digojok,

endapan larut kembali hal tersebut di sebabkan Albumin mengalami denaturasi akibat adanya

pengocokan dengan kuat. Denaturasi adalah perubahan dalam struktur sekunder, tersier dan

kuartener dari suatu protein, baik itu dalam bentuk enzim maupun hormon. Sehingga albumin

dapat disaring dan didapatkan presipitat globulin.

Kemudian ekstrak globulin (presipitat) yang diperoleh ditambahkan air,tetapi tidak

dapat larut dan tetap mengendap. Hal tersebut sesuai dengan sifat globulin yang tidak larut

dengan air.

Lalu dilakukan uji biuret pada larutan presipitat (campuran globulin dan air) tetapi

hasil percobaan ini positif. Hal tersebut menandakan bahwa larutan tersebut tidak

mengandung protein globulin. Dan setelah pemanasan ditambahkan asam yang bertujuan

untuk menurunkan pH darah,untuk mencapai titik isoelektriknya yang menyebabkan protein

mengalami koagulasi. Tetapi karena globulin mengendap (tidak larut dalam air) sehingga

pada larutan tersebut tidak terdapat globulin, maka tidak terjadi koagulasi. Sedangkan,

Albumin adalah protein yang dapat larut dalam air serta dapat terkoagulasi oleh panas. Maka

saat filtrat (albumin dididihkan dalam pengangas air terjadi koagulasi).


8/9


BAB IV

PENUTUP

4.1 Kesimpulan

Semakin hipertonis larutan, maka fragilitas sel darah merah semakin kecil dan

semakin hipotonis larutan, maka semakin besar fragilitas sel darah merahnya.

Larutan K3Fe(CN)6 mengoksidasi Fe2+ menjadi Fe3+ dalam hemoglobin sehingga

terbentuk HbFe3+yang berwarna gelap dan hemoglobin tidak mampu lagi mengikat

oksigen

Hemoglobin dalam darah mengandung ion Fe2+

dalam keadaan tereduksi sehingga pada

penambahan air menyebabkan 4O2terikat ke dalam Hb membentuk oksihemoglobin.

Oksihemoglobin dapat tereduksi oleh larutan stokes menjadi deoksihemoglobin dan 4O2.

Serum adalah gabungan antara albumin dan globulin.

Larutan globulin tidak larut air, tetapi albumin larut air.


9/9


DAFTAR PUSTAKA

hasil praktikum darah (1)

Documents