IDENTIFIKASI BAKTERI GRAM NEGATIF I. HARI / TANGGAL: Selasa, 04 Maret 2014II. LOKASI PRAKTIKUM: Laboratorium Bakteriologi III. INSTRUKTUR: Salma P. Yunus, SKMIV. KELOMPOK: Kelompok III Tingkat I B

V. TUJUAN PERCOBAAN: Mahasiswa mampu mengidentifikasi Bakteri Gram Negatif pada pemeriksaan di bawah mikroskop.

VI. PRINSIP PERCOBAAN: Pewarnaan Gram membedakan Bakteri Gram Positif dan Bakteri Gram Negatifberdasarkan kemampuan bakteri mempertahankan warna kristalin violet, kemudian diperiksa di bawah mikroskop.

VII. DASAR TEORIBakteri berasal dari bahasa Latin Bacteium. Bacteria adalah kelompok organisme yang tidak memiliki membrane inti sel. Gram Negatif dan Gram Positif adalah klasifikasi bakteri yang dibedahkan dari cirri cirri fisik bakteri tersebut. Perbedaan yang mendasar terdapat pada peptidoglikan lebih tipis terkandung dalam dinding sel kedua bakteri tersebut. Pada bakteri Gram Positif lapisan peptidoglikannya lebih tipis, sehingga saat identifikasi bakteri Gram Positif akan berwarna. Sedangkan identifikasi bakteri Gram negatif adalah bakteri yang tidak mempertahankan zat Kristal violet, sewaktu proses pewarnaan Gram sehingga akan berwarna merah bila diamati dibawah mikroskop. Bakteri Gram Positif seperti e coli memiliki sistem membrane ganda, dimana membrane plasmanya diselimuti oleh membrane luar permeable. Bakteri ini mempunyai dinding sel timbul berupa peptidoglikan yang terletak diantara membrane dalam dan membrane luarnya. Banyak spesies bakteri Gram Negatif yang bersifat pathogen yang berarti bakteri tersebut berbahaya bagi organisme inang sifat pathogen ini. Dalam sel bakteri Gram Negatif memiliki peptidoglikan ( 2,7 mm ) diantara membrane dalam dan membran luar, serta adanya membrane luar ( 7,8 mm ) yang terdiri dari lipid, protein, dan sakarida. Bentuk Bakteri Gram Negatif adalah bulat, batang lurus atau melingkar seperti koma.Contoh Bakteri Gram Negatif antara lain yaitu :1. Salmonella 2. Shigella3. Eschirechia coli4. Pseudomonas5. Cyanobakteria6. enterobacteriaceae

VIII. ALAT DAN BAHAN1. Alat Mikroskop Binokuler Object glass Lap pembersih lensa objektif2. Bahan Minyak imersi Tissue Preparat Bakteri Gram Negatif

IX. PROSEDUR KERJA1. Siapkan alat dan bahan2. Hubungkan mikroskop dengan sumber arus listrik 3. Nyalakan mikroskop dengan menekan tombol ON4. Atur Diafragma, kondensor dan refolvel5. lalu letakan preparat pada meja mikroskop, jangan sampai terbalik6. Carilah lapang pandang dengan perbesaran lensa objektif 10x atur fokus dengan menggunakan makrometer.7. Teteskan minyak Imersi pada preparat dan putar lensa objektif pada perbesaran 100x.8. Naikkan Kondensor, gunakan micrometer untuk memerjelas pengamatan objek.9. Identifikasi bakteri yang terlihat pada lapang pandang10. Setelah selesai mengamati, keluarkan preparat dari meja mikroskop kemudian kembalikan mikroskop pada posisi awal, cabut steker mikroskop dari hubungan arus listrik.11. Setelah selesai lakukan pemeliharaan mikroskop.

X. HASIL PENGAMATAN

Pada lapang pandang mikroskop terlihat bakteri berwarna merah dan berbentuk batang jadi preparat ini adalah Bakteri Gram Negatif bentuk Basil.

XI. PEMBAHASANPada dasarnya bakteri dapat dibedakan melaui teknik pewarnaan Gram. Teknik pewarnaan Gram tersebut dapat menghasilkan warna merah dan ungu. Bakteri gram negative ditandai dengan pewarnaan merah, sedangkan bakteri gram positif berwarna ungu. Hal ini bertujuan untuk memberikan warna pada bakteri dan pada akhirnya dapat diidentifikasi dengan mudah.Perbedaan respon terhadap mekanisme pewarnaan gram pada bakteri adalah didasarkan pada struktur dan komposisi dinding sel bakteri. Bakteri gram positif mengandung protein dan gram negative mengandung lipid. Pemberian alcohol pada pewarnaan bakteri gram negatif, menyebabkan terekstraksinya lipid sehingga memperbesar permeabilitas dinding sel. Pewarnaan safranin masuk ke dalam sel dan menyababkan sel menjadi berwarna merah pada bakteri gram negatiif.

XII. KESIMPULAN

Bakteri Gram Negatif memiliki lapisan peptidoglikan yang lebih tipis dibandingkan dengan bakteri Gram Positif. Identifikasi bakteri Gram Negatif adalah bakteri yang tidak mempertahankan zat warna Kristal violet, sewaktu proses pewarnaan gram sehingga akan berwarna merah berbentuk basil bila diamati dibawah preparat mikroskop.Contoh bakteri Gram Negatif misalnya Enterobactriaceae, Escherichia, Shigella, Salmonella, Vibrio cholera, Vibrio parahaemolyticus, Pseudomonadaceae, Haemophilus, Bordetella dan Brucella.

XIII. DAFTAR PUSTAKA

Staf pengajar bagian mikrobiologi fakultas kedokteran universitas kedokteran Indonesia, buku ajar mikrobiologi kedokteran, Binarupa aksara publisher, Ciputat Tangerang.Irianto, Koes. 2006. Mikrobiologi. Yrama Widia. Bandung H, R. Hasdianah. 2012. Mikrobiologi. Nuha Medika. Yogyakartahttp://id.wikipedia.org/wiki/Gram-negatifhttp://id.wikipedia.org/wiki/Kategori:Bakteri_gram-negatifhttp://mutia-12636-bakteri.blogspot.com/2011/12/bakteri-gram-positif-dan-bakteri-gram.htmlhttp://jewyner.wordpress.com/2013/09/29/bakteri-gram-positif-dan-bakteri-gram-negatif-mikrobiologi-dasar/http://id.wikipedia.org/wiki/gram-negatif

PARAF INSTRUKTUR Salma P. Yunus, SKM5