Nama

: Mukti Singgih H P

NIM

: 131510501256

Kelas

: Bioteknologi DSistem seleksi positive-negative Universal untuk Penargetan Gen pada tanaman dengan menggabungkan Resistance Gene Antibiotik dan RNA AntisensePenargetan gen (GT) adalah teknologi yang berguna untuk rekayasa genom akurat dalam tanaman. Pendekatan reproduksi berdasarkan sistem seleksi positif-negatif menggunakan resistens i higromisin dan toksin difteri A gen subunit sebagai penanda seleksi positif dan negatif, masing-masing. Namun, sampai saat ini, sistem seleksi ini telah diterapkan secara eksklusif di tanaman padi. Untuk membangun sistem GT positif-negatif l pada tanaman, maka dirancanglah sistem seleksi menggunakan kombinasi neomisin phosphotransferaseII (nptII) dan konstruk antisense nptII yang menekankan secara signifikan tingkat ekspresi gen nptII dan kalus transgenik dan tanaman menjadi peka terhadap geneticin antibiotik. Selain itu, mampu memanfaatkan rasa gen nptII sebagai penanda seleksi positif dan antisense nptII membangun sebagai penanda seleksi negatif untuk gen padi endogen Waxy dan 33-kD globulin melalui GT, meskipun kekurangan sistem ini adalah relatif kurang efisien dibandingkan dengan toksin difteri A subunit. Pendekatan yang dikembangkan, mulai diterapkan sebagai sistem seleksi universal untuk pengayaan sel GT di beberapa spesies tanaman.

Penargetan gen GT, dengan kata lain modifikasi urutan DNA spesifik dalam gen endogen dengan penggantian gen target dengan vektor GT melalui rekombinasi homolog [HR] adalah alat yang berguna dalam kedua studi dasar dan terapan. Pada tanaman yang lebih tinggi, sebagian besar ditransfer DNA (T-DNA) yang mengandung urutan homolog dengan gen sasaran endogen telah terintegrasi secara acak ke dalam genom tanaman melalui akhir nonhomolog yang bergabung (NHEJ), menyebabkan penurunan frekuensi GT (0.01 % -0,1% dibandingkan dengan integrasi acak. Inovasi saat ini, GT telah berkembang menjadi pendekatan yang diproduksi dalam tanaman padi, melalui penggunaan sistem seleksi positif-negatif dengan gen resistensi higromisin sebagai penanda seleksi positif dan toksin difteri A subunit ( DT-A) sebagai penanda seleksi negative.

Contoh-contoh sukses dari modifikasi gen yang ditargetkan melalui GT dengan sistem seleksi positif-negatif menggunakan DT-A belum dilaporkan pada tanaman yang lebih tinggi selain beras, bahkan pada tanaman Model, seperti Arabidopsis atau tembakau. Hal ini menimbulkan kemungkinan bahwa DT-A negatif mempengaruhi pertumbuhan sel-sel GT atau sel nontransformed sekitarnya-A-berubah DT sel karena toksisitas yang kuat untuk sel-sel tanaman yang lebih tinggi selain beras atau dari DT-A gen dari vektor GT sebelum integrasi T-DNA ke dalam genom tanaman mungkin membunuh sel GT potensial, yang menyebabkan kerugian mereka.

Telah dilakukan penelitian menunjukkan bahwa ekspresi transkrip antisense dari phosphotransferaseII neomycin (nptII) gen di transgenic ke tembakau menyebabkan penurunan yang signifikan. Menunjukkan bahwa kombinasi nptII dan antisense neomycin phosphotransferaseII (antinptII) gen dapat dimanfaatkan sebagai sistem seleksi positif-negatif untuk percobaan GT. Dengan demikian, kita hipotesis bahwa sistem seleksi yang efektif positif-negatif dapat dibentuk dengan menggunakan nptII bawah kendali CaMV35S dan antinptII bawah kendali faktor elongasi beras 1a (Pef) atau jagung (Zea mays) promotor polyubiquitin1 (Pubi ), yang menunjukkan lebih tinggi dari gen daripada CaMV35S promotor di kalus padi. Dengan tujuan membangun lebih umum yang berlaku dan lebih umum diterima. Pendekatan GT pada tanaman, penelitian ini menyelidiki apakah ekspresi seiring gen antinptII di nptII-mengekspresikan beras transgenik akan berfungsi sebagai penanda seleksi negatif beras. Sources:

Ayako Nishizawa-Yokoi,Satoko Nonaka, Keishi Osakabe,Hiroaki Saika, Seiichi Toki. A Universal Positive-Negative Selection System for Gene Targeting in Plants Combining an Antibiotic Resistance Gene and Its Antisense RNA. Plant Physiology. 169(1) :362-370.Website: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26143254