bab iv

7/17/2019 BAB IV

http://slidepdf.com/reader/full/bab-iv-568f512d9c02c 1/8

1

BAB IV

METODE PENELITIAN

4.1 Pendekatan penelitian

Penelitian ini menggunakan jenis eksperimental laboratorium dengan

metode post test only with control dengan tujuan untuk mengetahui kadar TNF-α

lambung tikus wistar yang diinduksi aspirin 200 mg/g!! selama " hari#"$

Penelitian ini menggunakan tikus putih strain wistar jantan% berjumlah 1& ekor%

berusia 12 minggu% dipelihara di 'aboratorium Faal Fakultas edokteran

(ni)ersitas !rawijaya# Terapi yang diberikan setelah paparan dengan diberikan

ekstrak daun sirih merah *0 mg/kg!!% 100 mg/g!!% 200 mg/g!! dan

misoprostol +00 ,g/g!! selama hari se.ara peroral#2*%"&%+

4.2 Tempat dan waktu penelitian

Penelitian ini dilakukan pada Pebruari hingga uli 201"% dengan

pelaksanaan awal yaitu pembuatan ekstraksi daun daun sirih merah dilakukan di

laboratorium !iokimia Fakultas edokteran (ni)ersitas slam alang% e)aporasi

ekstrak daun sirih merah dilakukan di laboratorium Program 3tudi Farmasi

Fakultas edokteran (ni)ersitas !rawijaya% aklimatisasi tikus dan pemberian

pajanan menggunakan 4asilitas laboratorium ilmu Faal di 5edung ebidanan

Fakultas edokteran (ni)ersitas !rawijaya% pembedahan hewan .oba% dan

pemeriksaan kadar TNF-α dilakukan di laboratorium Faal Fakultas edokteran

(ni)ersitas !rawijaya#

Tabel +#1 6en.ana jadwal penelitian

7/17/2019 BAB IV


2

4.3 Populasi dan sampel

3ampel yang digunakan adalah tikus jantan putih strain wistar 7 Rattus

novergicus strain wistar 8 dengan berat 1+0-1$0 gram berusia 12 minggu% karena

lambung tikus memiliki anatomi dan 4isiologi yang sama dengan manusia yaitu

monogastrik dan lapisan glandular yang terdiri dari sel mukus% sel parietal% sel

.hie4 dan sel# 9stimasi besar sampel penelitian menggunakan rumus Faderer yaitu:

7pn-18 ; 7p-18 < 1*

7$n-18 ; 7$-18 < 1*

$n ; * < 1*

n < "%""

maka jumlah sampel tikus sebanyak 1& ekor dengan $ kelompok uji yang

masing-masing terdiri dari " ekor dan metode pembagian kelompok dengan Non

Probability Sampling#

4.4 Bahan dan alat

4.4.1 Alat dan bahan pemeliharaan tikus

Pemeliharaan tikus dalam penelitian ini% menggunakan beberapa peralatan

dan bahan antara lain: tikus% kandang tikus% pakan% botol air % sekam% timbangan%

sarung tangan dan masker#

4.4.2 Alat dan bahan pembuatan dan evaporasi ekstraksi daun sirih merah

Piper crocatum!

9kstraksi daun sirih merah menggunakan peralatan dan bahan% meliputi

simplisia daun sirih merah% tabung enlemeyer% beker glass% gelas ukur% .orong%

batang pengaduk% aluminium )oil% kertas saring% kertas label% sarung tangan% klip

plastik% pipet % rota)apor % wadah porselen dan timbangan#

7/17/2019 BAB IV


"

4.4.3 Alat dan bahan pemberian pa"anan Aspirin# misoprostol dan ekstrak

daun sirih merah pada tikus

Pajanan aspirin% misoprostol% dan ekstrak daun sirih merah menggunakan

peralatan dan bahan% meliputi mikrotube% aspirin 200 mg/g!!% misoprostol

+00 ,g/g!!% a=uades% sonde% kertas label% ekstrak daun sirih merah dosis

*0 mg/g!!% 100 mg/g!!% dan 200 mg/g!!#

4.4.4 Alat dan bahan pembedahan tikus

Pembedahan tikus menggunakan peralatan dan bahan% meliputi gunting%

pinset% pengait jaringan% sarung tangan% papan pembedahan dan wadah organ#

4.4.5 Alat dan bahan pemeriksaan kadar TN$%& Lambun'

Pemeriksaan TNF-α menggunakan peralatan dan bahan% meliputi

ependro4% pipet mikro% yellow tip% blue tip% )orte> VELP Scientifica% inkubator%

elisa reader Awereness Tech. nc% reagen : standart% sample diluents% antibody

TNF-α% 3?-@6P% !3?% @A'% P!3% wash buffer % sure blue T! dan

mi.rowell#

()* Tahapan Penelitian

()*)+ Aklimatiasasi Tikus

Tikus diadaptasikan dalam kandang di menggunakan 4asilitas laboratorium

ilmu Faal di 5edung ebidanan Fakultas edokteran (ni)ersitas !rawijaya

alang selama inggu# Pada adaptasi tikus% dilakukan penimbangan berat

7/17/2019 BAB IV


+

badan setiap minggunya% pemberian makan sebanyak *0gr/ekor/hari dengan

menggunakan makanan standart% pemberian minum ad libitum% pen.ahayaan

menggunakan lampu hanya pada malam hari#

()*), Pembuatan ekstrak daun sirih

3erbuk daun sirih merah 7 Piper crocatum8 "0 gram dimaserasi dengan

larutan "00 ml ethanol $B selama 2+ jam dan diambil 4iltratnya dengan

penyaringan#$* emudian dilakukan remaserasi " > 2+ am# @asil saringan

diuapkan dengan rotary vacuum evaporator pada suhu +00A dengan ke.epatan

putaran 0 rpm# 9kstrak daun sirih merah 7 Piper crocatum8 dien.erkan dengan

?=uades sesuai dengan dosis yang telah ditentukan#

()*)- Proses perlakuan

3ampel di bagi dalam $ perlakuan sebagai berikut:

Tabel +#2 Pembagian kelompok penelitian

Normal 1. ontrol negati)e Cisonde 1 ml a=uades dan dilakukan pembedahan

bersama kelompok perlakuan#

Perlakuan 2. ontrol Positi4 Puasa 2+ jam dan diinduksi ?spirin 7200 mg/kg!!8

sebelum makan selama " hari tanpa terapi serta

dilakukan pembedahan bersama kelompok perlakuan#

3. Perlakuan 1 Puasa 2+ jam dan diinduksi ?spirin 7200 mg/kg!!8

sebelum makan selama " hari serta diberikan ekstrak

daun sirih pada hari ke-+ dengan dosis *0

mg/kg!!/hari selama 1 minggu% kemudian dilakukan

pembedahan#

4. Perlakuan 2 Puasa 2+ jam dan diinduksi ?spirin 7200 mg/kg!!8


daun sirih pada hari ke-+ dengan dosis 100

mg/kg!!/hari selama 1 minggu% kemudian dilakukan

pembedahan#

5. Perlakuan " Puasa 2+ jam dan diinduksi ?spirin 7200 mg/kg!!8


7/17/2019 BAB IV


*

daun sirih pada hari ke-+ dengan dosis 200 mg/kg!!

selama 1 minggu# emudian dilakukan pembedahan

setelah 1 minggu#

6.Perlakuan +

Puasa 2+ jam dan diinduksi ?spirin 7200 mg/kg!!8

sebelum makan selama " hari serta diberikan terapi

misoprostol 7+00 ,g/g!!8 pada hari ke-+ selama 1

minggu 2 kali sehari# emudian dilakukan

pembedahan setelah 1 minggu#

4.5.4 Teknik pembedahan Tikus

'angkah awal yang harus dilakukan adalah tikus dianestesi menggunakan eter

dengan .ara memasukkan tikus ke dalam wadah tertutup yang berisi kapas yang

dibasahi eter% dan ditunggu selama 1* menit# emudian tikus dibedah dengan hati-

hati# Pembedahan dilakukan pada bagian perut% tikus diletakkan dengan posisi perut

di atas pada papan pembedahan# emudian diambil bagian lambung% diisolasi dan

dipotong# lambung dibilas dengan NaAl-4isiologis 0%B% dimasukkan dalam larutan

Phospate !uffer Saline-aDida 7P!3-aDida8 p@ %+#

4.5.5 Pemeriksaan kadar TN$%& Lambun'

Pemeriksaan kadar TNF-α 'ambung tikus dilakukan di 'aboratorium 4aal

(ni)ersitas !rawijaya# etode yang digunakan dalam pengukuran kadar TNF-α

adalah metode 9lisa ndire.t# enurut Arowther% langkah-langkah pengukuran

sebagai berikut:

1. 3ebanyak 1 gram sampel jaringan lambung diambil lalu di.u.i dengan

Pbs% dihan.urkan sampai halus#

2. Citambahkan .airan P3F 1 ml: 100 mg kemudian pindahkan ke tube

di.ampur menggunakan Eorte> selama kurang lebih * detik dan

diinkubasi "0 menit dalam suhu +0⁰A#

3. Cilakukan sentri4ugasi selama 20 menit dengan microcentrifuge

20006pm#

7/17/2019 BAB IV


$

4. 3upernatan * ,l dilarutkan dalam .oating bu44er dengan perbandingan

1:20 hingga 200,l/well% dipindahkan kedalam tube dan diinkubasi pada

suhu +0⁰A semalam# 3etelah itu% di.u.i dalam P!3-Tween 2B sebanyak

dua kali% * menit#

5. Ciblok dengan !lo.king bu44er 7!3? 1B dalam P!38 *0,'/well% 'alu

diinkubasi selama +* menit dalam suhu ruangan dan di.u.i P!3-Tween

2B sebanyak dua kali% * menit#

6. "oating Ab Primer *0 ,l/well '-1G 1:1*00 dalam P!3% ditutup dengan

aluminium 4oil yang baru% diinkubasi selama 1 jam suhu ruangan dan

di.u.i P!3-Tween 2B sebanyak dua kali% * menit#

7. "oating Ab Se#un$er 1:1000 dalam P!3 dengan ?b sekunder yang

digunakan adalah g5 !iotin ?nti ouse% ditutup dengan aluminium

4oil yang baru% diinkubasi selama 1 jam dalam suhu rungan dan di.u.i

P!3-Tween 2B sebanyak dua kali% * menit#

8. Citambahkan substrat 3?-@6P 1:1000% diinkubasi selama 1 jam dalam

suhu rungan dan di.u.i P!3-Tween 2B sebanyak dua kali% * menit#

9. Citambahkan 100 ,l substrat sureblue T! pada tiap sumur# nkubasi

selama 10-"0 menit pada suhu "⁰A#

10. Citambahkan @Al 1N sebagai stop rea.tion dan diinkubasi selama 1*

menit pada suhu "⁰A#

11. Ciba.a dengan 9'3? reader pada panjang gelombang +*0 nm#

(). Pen'umpulan dan analisa data

@asil pengukuran kadar TNF-α akan dikumpulkan dan dianalisa se.ara

statisti. dengan menggunakan ?NHE? yang dilanjutkan dengan uji !NT 7!eda

Nyata e.il8% hasil dinyatakan bermakna bila pI0#0*#

7/17/2019 BAB IV


()/ Dia'ram Alur Penelitian

elompok Normal 0ontrol Ne'ati1

?=uades

elompok Perlakuan

0ontrol Positi1

Puasa 2+ am

?spirin 200 mg/g!! 7"hari8

Perlakuan +


Puasa 2+ jam

Perlakuan ,


Puasa 2+ am

Perlakuan -

?spirin 200mg/g!! 7"hari8

Puasa 2+ jam

Perlakuan (

?spirin 200 mg/g!! 7"hari 8

Puasa 2+ jam

?daptasi inggu

2+ ekor Tikus Jistar

7/17/2019 BAB IV


&

?nalisa Hne way ?NHE?

@asil Ciskusi esimpulan

9kstrak Caun 3irih erah 100mg/g!! 7 hari8

9kstrak Caun 3irih erah *0mg/g!! 7 hari89kstrak Caun 3irih erah 200mg/g!! 7 hari8

isoprostol +00,g/g!! 7 hari8

Pengambilan lambung

Pemeriksaan TNF-α dengan metode 9'3?

bab iv

Documents