analisis total vitamin e dalam daging buah kelapa …
TRANSCRIPT
ANALISIS TOTAL VITAMIN E
DALAM DAGING BUAH KELAPA KOPYOR TUA (COCOS NUCIFERA L.)
SECARA KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI (KCKT)
AMITRI INGGARDIAYU HP
0606040545
UNIVERSITAS INDONESIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
PROGRAM STUDI SARJANA FARMASI EKSTENSI
DEPOK 2010
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
ANALISIS TOTAL VITAMIN E
DALAM DAGING BUAH KELAPA KOPYOR TUA (COCOS NUCIFERA L.)
SECARA KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI (KCKT)
Skripsi ini diajukan sebagai salah satu syarat
untuk memperoleh gelar sarjana farmasi
Oleh :
AMITRI INGGARDIAYU HP
0606040545
DEPOK 2010
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
KATA PENGANTAR
Syukur Alhamdulillah, penulis panjatkan kepada Allah subhanahu wa
ta’ala, atas rahmat dan karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan
skripsi ini. Shalawat dan salam tak lupa tercurahkan kepada junjungan nabi
Muhammad shallallaahu ‘alaihi wasallam.
Dalam kesempatan ini penulis ingin menyampaikan rasa terima kasih
kepada semua pihak yang telah membantu dalam penelitian dan penyusunan
skripsi ini, antara lain :
1. Bapak Dr. Harmita, Apt dan Dr. Herman Suryadi MS., Apt sebagai
pembimbing skripsi yang telah membimbing dan mengarahkan penulis
selama penelitian sampai penyusunan skripsi ini.
2. Ibu Dr. Berna Elya Apt., M.Si selaku pembimbing akademis yang telah
memberikan bimbingan selama masa pendidikan di Departemen Farmasi
FMIPA UI.
3. Ibu Dr. Yahdiana Harahap, MS. selaku ketua Departemen Farmasi FMIPA
UI.
4. Seluruh dosen Departemen Farmasi FMIPA UI atas segala ilmu,
bimbingan dan nasehat yang telah diberikan kepada penulis.
5. Bapak H. Rustam Paun dan para karyawan Departemen Farmasi FMIPA
UI terutama Mbak Tini, Bapak Ma’ruf dan Bapak Suroto yang telah
memberikan bantuan sampai skripsi ini selesai.
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
6. Ibu dan adik yang selalu memberikan doa, kasih sayang dan dukungan
moril serta materiil.
7. Teman-teman farmasi khususnya Ardhee, Niluh, Nanda, Iin, Mira dan Tri
serta teman-teman di laboratorium kimia kuantitatif, Dede, Esty, Rima,
Mba Fuzi, Angel, Fitri, Phieka, DJ, Fabel, Koba, Galih, Nila, Anyu dan Tika.
Terima kasih atas bantuan, kerja sama dan semangat yang telah
diberikan kepada penulis.
8. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan namanya yang juga banyak
memberikan bantuan selama penelitian dan penyusunan skripsi ini.
Penulis menyadari dalam penelitian dan penyusunan skripsi ini masih
jauh dari sempurna. Semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak
yang membutuhkan.
Penulis
2010
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
ABSTRAK
Kelapa kopyor adalah kelapa dengan daging buah yang membentuk
gumpalan-gumpalan dan menjadi satu dengan air kelapa. Vitamin E
merupakan salah satu komponen yang terkandung dalam daging buahnya,
yang berkhasiat menghambat proses oksidasi dan pembentukan radikal
bebas. Penelitian ini dilakukan untuk menganalisis kandungan vitamin E
dalam daging buah kelapa kopyor tua secara Kromatografi Cair Kinerja
Tinggi (KCKT). Sampel berupa santan dari daging buah kelapa kopyor tua
yang disaponifikasi dengan kalium hidroksida dan asam askorbat sebagai
anti oksidan kemudian diekstraksi dengan n-heksana. Analisis dilakukan
secara KCKT menggunakan kolom fase terbalik C18 Kromasil™ (25 cm x 4,6
mm) dengan fase gerak metanol dan kecepatan alir 1,0 mL/menit. Hasil
validasi menggunakan standar vitamin E memberikan linearitas kurva
kalibrasi 0,99993 dengan batas deteksi dan kuantitasi masing-masing 0,38
µg/mL dan 1,29 µg/mL. Hasil uji keterulangan vitamin E memberikan nilai
koefisien variasi di bawah 2% dan hasil uji perolehan kembali vitamin E
dalam matriks kelapa kopyor adalah 99,45%. Hasil analisis menunjukkan
bahwa dalam 100 g santan dari daging buah kelapa kopyor tua mengandung
vitamin E sebesar 0,0653 mg.
Kata kunci : Kopyor, vitamin E, KCKT, kolom C18
X + 75 hlm; gbr; tab; lam
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
Daftar acuan : 32 (1968-2009)
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
ABSTRACT
Kopyor coconut is a coconut with broken meat particles in the watery
endosperm. Vitamin E is one of the components contained in the meat kopyor
coconut that can inhibit the oxidation process and formation of free radicals.
The purpose of this research was to determine vitamin E in mature kopyor
coconut meat with High Performance Liquid Chromatography (HPLC).
Sample was coconut milk from kopyor coconut meat, saponification with
potassium hydroxide and ascorbic acid as antioxidant and then extracted with
n-hexane. Analysis was performed by HPLC with a reversed-phase column
C18 Kromasil™ (25 cm x 4.6 mm) with methanol as mobile phase and flow
rate 1.0 mL/minute. The result showed that the linearity of standard vitamin E
was 0.99993 with the limit of detection and quantitation are 0.38 µg/mL and
1.29 µg/mL. The result of vitamin E repeatability have coefficient value less
than 2% and the average of recovery value in matrix kopyor coconut was
99.45%. The result of analysis showed the concentration of vitamin E in 100 g
kopyor coconut milk was 0.0653 mg.
Key words : Kopyor, vitamin E, HPLC, C18 coloumn
X + 75 pg; pic; tab; enc
Bibliography : 32 (1968–2009)
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
DAFTAR ISI
Halaman
KATA PENGANTAR................................................................................ i
ABSTRAK................................................................................................ iii
ABSTRACT.............................................................................................. v
DAFTAR ISI............................................................................................. vi
DAFTAR GAMBAR.................................................................................. viii
DAFTAR TABEL...................................................................................... ix
DAFTAR LAMPIRAN............................................................................... x
BAB I. PENDAHULUAN
A. LATAR BELAKANG................................................................. 1
B. TUJUAN PENELITIAN............................................................ 3
BAB II. TINJAUAN PUSTAKA
A. KELAPA KOPYOR (COCOS NUCIFERA L.).......................... 4
B. VITAMIN E (TOKOFEROL)..................................................... 14
C. KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI (KCKT)............... 25
D. VALIDASI METODE ANALISIS............................................... 28
BAB III. BAHAN, ALAT DAN CARA KERJA
A. LOKASI.................................................................................... 34
B. BAHAN.................................................................................... 34
C. ALAT........................................................................................ 34
D. CARA KERJA.......................................................................... 35
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
BAB IV. HASIL PERCOBAAN DAN PEMBAHASAN
A. HASIL PERCOBAAN............................................................... 39
B. PEMBAHASAN........................................................................ 41
BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN
A. KESIMPULAN......................................................................... 47
B. SARAN.................................................................................... 47
DAFTAR ACUAN..................................................................................... 48
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
1. Komponen buah kelapa................................................................... 7
2. Tanaman kelapa.............................................................................. 10
3. Rumus kimia tokoferol dan -tokoferol asetat…………………….... 15
4. Spektrum serapan larutan standar tokoferol 100,0 µg/mL dalam
n-heksana........................................................................................ 53
5. Kromatogram larutan standar tokoferol 100,0 µg/mL, kecepatan
alir 1,0 mL/menit.............................................................................. 54
6. Kromatogram larutan standar tokoferol 100,0 µg/mL, kecepatan
alir 1,2 mL/menit.............................................................................. 55
7. Kromatogram larutan standar tokoferol 100,0 µg/mL, kecepatan
alir 1,5 mL/menit.............................................................................. 56
8. Kurva kalibrasi standar tokoferol..................................................... 57
9. Kromatogram tokoferol dalam sampel daging buah kelapa kopyor
tua (Cocos nucifera L.).................................................................... 58
10. Alat kromatograf cair kinerja tinggi.................................................. 59
11. Sampel buah kelapa kopyor (Cocos nucifera L.)............................. 60
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
1. Komposisi buah kelapa.................................................................... 7
2. Panjang gelombang maksimum dan serapan tokoferol................... 62
3. Pemilihan kondisi analisis optimum tokoferol.................................. 63
4. Kurva kalibrasi tokoferol.................................................................. 64
5. Hasil perhitungan batas deteksi (LOD) dan batas kuantitasi (LOQ) 65
6. Hasil perhitungan uji presisi............................................................. 66
7. Hasil perhitungan Uji Perolehan Kembali (UPK) pada matriks
kelapa kopyor.................................................................................. 68
8. Data penetapan kadar tokoferol dalam sampel santan dari daging
buah kelapa kopyor......................................................................... 69
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran Halaman
1. Cara memperoleh persamaan garis linier........................................ 71
2. Cara perhitungan simpangan baku dan koefisien variasi................ 72
3. Cara perhitungan batas deteksi dan batas kuantitasi...................... 73
4. Cara perhitungan uji perolehan kembali.......................................... 74
5. Sertifikat analisis tokoferol............................................................... 75
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
BAB I
PENDAHULUAN
A. LATAR BELAKANG
Kelapa merupakan tanaman perkebunan/industri berupa pohon
berbatang lurus dari famili Palmae/Arecaceae (1,2). Indonesia memiliki
keanekaragaman genetika kelapa yang besar, diantara berbagai jenis
kelapa yang ada di Indonesia, terdapat satu tipe kelapa yang tergolong
unik dan langka, yaitu kelapa kopyor (Cocos nucifera L.). Kelapa kopyor
memiliki endosperm (daging buah) yang tidak normal (lunak dan sebagian
tidak melekat pada tempurung). Buah kelapa kopyor dihasilkan dari
tanaman kelapa yang diduga mengalami penyimpangan genetik (mutasi
alami), yang ditemukan diantara populasi kelapa normal (3).
Vitamin E (tokoferol) merupakan salah satu komponen yang
terkandung dalam daging buah kelapa kopyor. Manfaat vitamin E
diantaranya adalah sebagai antioksidan yaitu zat yang dapat menghambat
radikal bebas dan menghambat proses oksidasi. Radikal bebas
merupakan molekul yang tidak stabil dan sangat berbahaya bagi tubuh
karena dapat menyebabkan perubahan pada sel-sel tubuh yang memicu
terjadinya proses penuaan dini dan penyakit degeneratif seperti kanker.
Selain itu vitamin E juga dapat mengurangi resiko terjadinya pembekuan
darah, mencairkan darah beku, mencegah penyumbatan pembuluh darah,
menguatkan dinding pembuluh darah kapiler, meningkatkan pembentukan
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
sel-sel darah merah, mengurangi kadar gula darah, memperbaiki kerja
insulin serta meningkatkan kekuatan otot dan stamina (4).
Telah dilakukan penelitian terhadap kandungan nutrisi dalam kelapa
kopyor. Dalam jurnal yang berjudul Nutrient Composition of Kopyor
Coconuts (Cocos nucifera L.), disebutkan bahwa dalam 100 g daging
buah kelapa kopyor tua mengandung 2,34 mg α-tokoferol dan 0,09 mg β-
tokoferol sedangkan dalam 100 g air kelapa kopyor tua mengandung 0,01
mg α-tokoferol (5).
Analisis vitamin E dapat dilakukan dengan beberapa metode seperti
Kromatografi Lapis Tipis (KLT), Kromatografi Gas (KG) dan Kromatografi
Cair Kinerja Tinggi (KCKT). Pada penelitian kali ini digunakan metode
KCKT karena memiliki kelebihan yaitu kolom KCKT dapat digunakan
berulang kali, resolusi yang didapatkan jauh lebih tinggi daripada metode
lain (KLT, spektrofotometer); teknik yang digunakan tidak terlalu
tergantung pada kemampuan operator, waktu analisisnya cepat dan cara
kerjanya relatif sederhana, selain itu KCKT juga dapat menganalisis
senyawa yang tidak mudah menguap dan termolabil (6).
Adanya kandungan nutrisi selain vitamin E dalam kelapa kopyor, maka
diperlukan suatu metode pemisahan vitamin E dari komponen lain yang
dapat mengganggu analisis vitamin tersebut. Di alam, vitamin E terdapat
dalam bentuk bebas dan bentuk esternya sehingga sebelum tokoferol
ditentukan kadarnya secara kuantitatif, ester tokoferil harus dihidrolisis
terlebih dahulu untuk membebaskan tokoferol dari bentuk ester tokoferil.
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
Hidrolisis dapat dilakukan dengan menggunakan asam atau saponifikasi
dengan alkali (7). Latar belakang penelitian ini adalah untuk membuktikan
adanya kandungan vitamin E dalam kelapa kopyor yang manfaatnya
sangat banyak bagi tubuh.
B. TUJUAN PENELITIAN
1. Mencari kondisi optimum untuk analisis vitamin E dengan KCKT.
2. Melakukan validasi terhadap metode analisis secara KCKT untuk
mengidentifikasi keberadaan vitamin E dalam sampel kelapa kopyor.
3. Menetapkan kadar vitamin E dalam sampel santan dari daging buah
kelapa kopyor tua yang berasal dari Lampung.
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
A. KELAPA KOPYOR (COCOS NUCIFERA L.)
Tanaman kelapa yang banyak tumbuh di daerah tropis seperti
Indonesia, merupakan tanaman perkebunan/industri berupa pohon
berbatang lurus dari famili Palmae/Arecaceae (1,2). Hampir semua bagian
dari tanaman ini banyak dimanfaatkan oleh manusia baik sebagai
makanan, minuman, minyak, obat dan bahan bakar. Oleh karena itu,
tanaman kelapa sering disebut sebagai pohon kehidupan (“tree of
heaven” atau “tree of life”) (1,8).
Selama ini kelapa kopyor merupakan buah langka sehingga harganya
mahal karena hanya dihasilkan dari pohon yang memiliki gen atau
pembawa sifat kopyor saja. Jadi dari sebuah hamparan kebun kelapa,
belum tentu ditemukan kelapa kopyor (9). Kelapa kopyor merupakan
kelapa yang dihasilkan karena perubahan atau mutasi genetis pada saat
pembuahan atau bahkan mungkin pada saat pembungaan. Buah kelapa
kopyor mempunyai ciri-ciri antara lain dagingnya lunak dan terlepas dari
tempurungnya, jumlah air kelapa relatif sedikit dibanding dengan kelapa
normal, aroma dan rasanya khas serta berbeda dengan daging buah
kelapa lainnya (3,10).
Buah kelapa kopyor yang relatif masih utuh dapat dikenali dengan
cara digoyang-goyangkan ke kiri dan ke kanan sehingga terdengar bunyi
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
yang berbeda dengan buah kelapa normal. Bunyi yang terdengar seolah-
olah ada kandungan isi selain air kelapa misalnya seperti pasir. Buah
kelapa kopyor sangat disukai masyarakat karena rasanya yang
menyegarkan terlebih bila disajikan sebagai minuman segar (3,10).
Buah kelapa tua memiliki ciri-ciri yaitu kulit luar yang berwarna coklat
tua dan keras sehingga lebih susah dibuka daripada kelapa muda,
memiliki kandungan air lebih sedikit, rasa yang lebih manis serta daging
buah yang lebih tebal dan keras. Daging buah kelapa kopyor tua tetap
lunak, tidak seperti kelapa tua biasa yang dagingnya akan menebal dan
mengeras (11).
Nilai nutrisi dalam 100 g daging buah kelapa berumur 8 bulan adalah
memiliki kadar air 90,59%; minyak 26,67%; protein 10,67%; serat kasar
3,98%; total karbohidrat 38,45%; pati 13,53% dan gula sebagai glukosa
24,92%. Sementara komposisi asam aminonya adalah isoleusin 2,5 g/16
g N; leusin 4,9 g/16 g N; lisin 2,7 g/16 g N; metionin 1,5 g/16 g N; treosin
2,3 g/16 g N; triptofan 0,6 g/16 g N dan valin 3,8 g/16 g N. Mineral utama
yang terkandung didalamnya adalah Fe (17 ppm); S (4,4 ppm); Cu (3,2
ppm) dan P (2,4 ppm) serta memiliki kandungan vitamin yaitu vitamin C
(10 ppm) dan vitamin E (2 ppm) (12).
Minyak kelapa sangat mudah dicerna dan diabsorbsi tubuh karena
mengandung trigliserida yang tersusun dari lemak rantai sedang (C6-C12).
Komposisi asam lemak dalam minyak kelapa adalah C8 5%, C10 6-10%
dan C12 44-45% (total 55-65% asam lemak rantai sedang). Trigliserida
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
asam lemak rantai sedang dapat digunakan untuk mengatasi
hiperlipidemia dan kegemukan serta dapat digunakan untuk pasien paska
bedah dan bayi prematur. Daging buah kelapa juga mengandung 0,2 mg
vitamin E (sebagai tokoferol), namun proses produksi minyak secara
konvensional yang biasanya mengaplikasikan panas dan tekanan dapat
mengurangi kandungan vitamin E dalam hasil akhir. Kandungan vitamin E
optimum dapat diperoleh melalui perbaikan proses, yaitu dengan proses
sentrifugasi santan (cold process) (12).
Dalam 100 g air kelapa muda berumur 7-8 bulan mengandung protein
0,13 g; minyak 0,12 g; karbohidrat 4,11 g; kandungan mineral yaitu Ca 20
mg dan Fe 0,5 mg; kandungan vitamin yaitu vitamin C 2,2-3,7 mg dan
kandungan air 95,01% (12).
Salah satu bagian terpenting dari kelapa adalah buah kelapa. Buah
kelapa terdiri dari beberapa komponen yaitu kulit luar (exocarp), sabut
kelapa (mesocarp), tempurung kelapa (endocarp), daging buah
(endosperm) dan air kelapa (13).
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
Gambar 1. Komponen buah kelapa (14)
Tabel 1. Komposisi buah kelapa (13)
Bagian buah Jumlah berat (%)
Sabut
Tempurung
Daging buah
Air kelapa
35
12
28
25
1. Kulit luar (exocarp)
Kulit luar merupakan lapisan tipis (0,14 mm) yang mempunyai
permukaan licin dengan warna bervariasi dari hijau, kuning sampai
jingga, tergantung pada tingkat kematangan buah (15).
Kulit luar (exocarp)
Sabut kelapa (mesocarp)
Tempurung kelapa (endocarp)
Kulit daging buah
Daging buah (endosperm)
Air kelapa
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
2. Sabut kelapa (mesocarp)
Sabut kelapa merupakan bagian yang cukup besar dari buah
kelapa, yaitu 35% dari berat keseluruhan buah. Sabut kelapa terdiri
dari serat dan gabus yang menghubungkan satu serat dengan serat
lainnya. Serat adalah bagian yang berharga dari sabut. Setiap butir
kelapa mengandung serat sebanyak 525 gram (75% dari sabut) dan
gabus 175 gram (25% dari sabut) (13).
3. Tempurung kelapa (endocarp)
Tempurung kelapa berfungsi sebagai pelindung inti buah dan
terletak di bagian sebelah dalam sabut dengan ketebalan berkisar
antara 3-6 mm. Tempurung merupakan lapisan keras yang terdiri dari
lignin, selulosa, metoksil dan berbagai mineral. Kandungan bahan-
bahan tersebut beragam sesuai dengan jenis kelapanya. Struktur yang
keras disebabkan oleh kandungan silikat (SiO2) yang cukup tinggi
kadarnya pada tempurung. Berat tempurung sekitar 12% dari berat
keseluruhan buah kelapa (13,15).
4. Kulit Daging Buah
Kulit daging buah adalah lapisan tipis coklat pada bagian terluar
daging buah (15).
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
5. Daging buah (endosperm)
Daging buah merupakan lapisan tebal (8-15 mm) yang berwarna
putih. Bagian ini mengandung berbagai zat gizi. Kandungan zat gizi
tersebut beragam sesuai dengan tingkat kematangan buah. Daging
buah tua merupakan bahan sumber minyak nabati (kandungan minyak
35%) (15).
6. Air Kelapa
Air kelapa adalah salah satu minuman nutrisi yang memiliki banyak
manfaat bagi kesehatan. Air kelapa mengandung komponen organik
yang dapat membantu meningkatkan kesehatan tubuh diantaranya
dapat membuat tubuh tetap dingin atau dalam suhunya yang sesuai.
Secara oral dapat mengurangi dehidrasi karena termasuk minuman
isotonik natural pengganti air, membantu penghantaran nutrisi dan
oksigen ke dalam sel, mengembalikan cairan tubuh setelah
berolahraga, meningkatkan metabolisme, mengurangi berat badan,
meningkatkan sistem imun, detoksifikasi, membantu tubuh dalam
melawan virus, membersihkan saluran pencernaan, menyeimbangkan
pH dan mengurangi resiko kanker (16).
Air kelapa juga dapat membantu meningkatkan penyerapan obat
dan dapat digunakan sebagai pengganti plasma darah karena
termasuk cairan steril, yang tidak memproduksi panas, tidak merusak
sel darah merah dan dapat diterima oleh tubuh. Air kelapa merupakan
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
minuman bebas lemak dan tinggi akan kalium, klorida, kalsium,
magnesium juga sejumlah kecil natrium, gula dan protein. Konsentrasi
gula dan protein akan meningkat seiring dengan tingkat kematangan
buah, hal ini berbeda dengan konsentrasi mineral yang tetap konstan
(16).
Gambar 2. Tanaman kelapa (17)
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
1. Klasifikasi
Kingdom : Plantae (tumbuhan)
Subkingdom : Tracheobionta (berpembuluh)
Superdivisio : Spermatophyta (menghasilkan biji)
Divisio : Magnoliophyta (berbunga)
Kelas : Liliopsida (berkeping satu/monokotil)
Sub-kelas : Arecidae
Ordo : Arecales
Familia : Palmae (1)/Arecaceae (suku pinang-pinangan) (2).
Genus : Cocos
Spesies : Cocos nucifera L. (18)
Nama umum/dagang : Kelapa
Nama daerah :
- Sumatera : Baku (Aceh), Krambil (Gayo), Krambir (Batak),
Obi (Nias), Krambie (Minangkabau), Nyiui
(Lampung).
- Jawa : Kelapa (Sunda, Jawa).
- Bali : Nyuh (Bali).
- Nusa Tenggara : Nian (Timor), No (Roti).
- Sulawesi : Bongo (Gorontalo, Buol), Aluu (Toraja), Kaluku
(Bugis, Makasar).
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
- Maluku : Nur (Aur), Niur (Seram), Ninelo (Ambon),
Niwelhoni (Buru), Igo (Ternate) (19).
2. Manfaat kelapa
Tanaman kelapa merupakan tanaman serbaguna yang memiliki
nilai ekonomi tinggi karena hampir seluruh bagian dari pohon seperti
akar, batang, daun dan buah dapat digunakan untuk memenuhi
kebutuhan kehidupan manusia sehari-hari (1).
Manfaatnya antara lain :
a. Akar kelapa dapat digunakan sebagai bahan baku pembuatan bir
dan zat warna.
b. Batang kelapa disebut glugu merupakan kayu dengan mutu
menengah digunakan sebagai bahan baku perabotan,
mebel/furniture atau bahan bangunan dan jembatan darurat.
c. Daun kelapa muda yang disebut janur digunakan sebagai bahan
anyaman dalam pembuatan ketupat atau berbagai bentuk hiasan
yang sangat menarik, digunakan terutama bagi masyarakat Jawa
dan Bali dalam berbagai upacara dan sebagai bahan baku obat
tradisional. Daun kelapa tua dapat dianyam dan digunakan sebagai
atap rumah setelah dikeringkan, sedangkan lidinya yang berasal
dari tangkai anak daun yang telah dikeringkan digunakan sebagai
bahan baku pembuat sapu lidi.
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
d. Tandan bunganya, yang disebut mayang, digunakan sebagai
hiasan dalam upacara perkawinan dengan simbol tertentu. Bunga
betinanya yang disebut bluluk (bahasa Jawa), dapat dimakan.
Cairan manis yang keluar dari tangkai bunga, disebut air nira atau
legen (bahasa Jawa), dapat diminum sebagai penyegar atau
diproses menjadi gula kelapa.
e. Hampir semua bagian buah kelapa dapat digunakan. Berat buah
kelapa yang telah masak kira-kira 2 kg per butirnya. Air kelapa
dapat digunakan sebagai minuman segar atau dapat diproses lebih
lanjut menjadi nata de coco dan kecap.
f. Daging buah kelapa muda berwarna putih dan lunak biasanya
disajikan sebagai es kelapa muda. Beberapa kelapa bermutasi
sehingga endapannya tidak melekat pada dinding batok melainkan
tercampur dengan cairan endosperm, mutasi ini disebut kelapa
kopyor. Daging buah kelapa tua berwarna putih dan mengeras.
Sarinya diperas dan cairannya dinamakan santan selain itu dapat
juga dikeringkan menjadi komoditi perdagangan bernilai yang
disebut kopra. Kopra bila diproses lebih lanjut dapat menghasilkan
minyak goreng, sabun, lilin dan es krim.
g. Sabut kelapa yang berupa serat-serat kasar dapat digunakan
sebagai bahan baku tali, anyaman keset, matras dan jok
kendaraan. Dari sabut tersebut akan diperoleh serat matras 18%,
serat berbulu 12% dan sekam/dedak atau gabus 70%. Serat
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
matras digunakan sebagai bahan pengisi jok, penyaring dan
matras. Serat berbulu digunakan untuk sikat pembersih, sapu dan
keset sedangkan sekam/gabus digunakan untuk media tanaman
atau pupuk kalium.
h. Tempurung secara tradisional digunakan sebagai gayung air,
mangkuk atau diolah lebih lanjut menjadi bahan baku obat nyamuk
bakar, arang dan karbon aktif (1).
B. VITAMIN E (TOKOFEROL)
1. Monografi
O
OH
R2
R1
CH3CH3
CH3
CH3 CH3 CH3
R1 R2
CH3 CH3 -tokoferol CH3 H -tokoferol H CH3 -tokoferol H H -tokoferol
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
O
O
CH3
CH3
CH3CH3
CH3
CH3 CH3 CH3
O
CH3
-Tokoferol asetat
Gambar 3. Rumus kimia tokoferol dan -tokoferol asetat (20)
Tokoferol adalah bentuk α-tokoferol (C29H50O2), termasuk d- atau
dl-α-tokoferol (C29H50O2), d- atau dl-α-tokoferil asetat (C31H52O3), d-
atau dl-α-tokoferil suksinat (C33H54O5) dan sediaan d- atau dl-α-
tokoferol atau d- atau dl-α-tokoferil asetat dalam pembawa yang cocok
(21). Bentuk d- secara fisiologis lebih aktif dibandingkan bentuk dl-α-
tokoferol dan bentuk dl-ester lebih aktif daripada bentuk d-ester (22).
Bentuk ester lebih sering digunakan dalam industri farmasi karena
lebih stabil terhadap oksidasi. Tokoferol terdiri dari α-tokoferol yang
memiliki 3 metil, merupakan bentuk yang paling aktif, β-tokoferol dan
γ-tokoferol, keduanya memiliki 2 metil sedangkan δ-tokoferol hanya
memiliki 1 metil (23).
2. Pemerian
Tokoferol tidak berbau atau sedikit berbau, tidak berasa atau
sedikit berasa. α-Tokoferol dan α-tokoferil asetat, cairan seperti
minyak, kuning jernih. α-Tokoferil asetat pada suhu dingin berbentuk
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
padat. α-Tokoferil suksinat berupa serbuk putih. Bentuk esternya stabil
di udara dan cahaya, tetapi tidak stabil dalam alkali. Bentuk asam
suksinatnya tidak stabil, jika dilebur. α-Tokoferol tidak stabil di udara
dan cahaya (21).
α-Tokoferol memiliki titik didih 200-220ºC dan α-tokoferol asetat
pada 224ºC. α-Tokoferol stabil terhadap asam dan cahaya tampak
kecuali sinar ultraviolet. Stabil terhadap pemanasan dan basa tanpa
adanya oksigen. Oksidasi akibat oksigen dipercepat bila terdapat basa,
terutama bila terdapat ion Fe3+, Ce4+, Ag2+ dan ion nitrat. Ion Cu2+
bereaksi dengan tokoferol membentuk tokoferol kuinon yang tidak
memiliki aktivitas antioksidan. Ion Fe3+ tereduksi menjadi Fe2+ dan
pengukuran Fe2+ menjadi dasar uji kolorimetri untuk tokoferol selama
bertahun-tahun (22,24,25).
3. Kelarutan
α-Tokoferil suksinat praktis tidak larut dalam air, sukar larut dalam
larutan alkali, larut dalam etanol 95%, dalam eter, dalam aseton dan
dalam minyak nabati, sangat mudah larut dalam kloroform. Bentuk lain
tokoferol, praktis tidak larut dalam air, larut dalam etanol 95%, dan
dapat bercampur dengan eter, dengan aseton, dengan minyak nabati
dan dengan kloroform (21).
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
4. Identifikasi
Reaksi warna : α-Tokoferol dengan alkohol dehidrat dan asam
nitrat akan menghasilkan warna orange-merah terang (26). Spektrum
ultraviolet : α-Tokoferol dalam etanol menunjukkan serapan maksimum
pada 294 nm (27). Dalam pelarut sikloheksan, menunjukkan serapan
maksimum pada 298 nm dan minimum pada 257 nm (26).
5. Sumber vitamin E
Vitamin E merupakan zat essensial dimana zat tersebut sangat
berguna bagi tubuh tetapi tubuh tidak mampu memproduksinya sendiri.
Vitamin E banyak terkandung pada makanan dan minuman seperti
sayuran-sayuran, biji-bijian dan buah-buahan seperti minyak sayur,
telur, susu dan kacang kedelai. Pada jaringan hewan dan organ juga
terdapat vitamin E dalam jumlah yang kecil. Sayuran merupakan
sumber utama vitamin E karena umumnya vitamin E terdapat dalam
kloroplas pada tanaman (23).
6. Manfaat vitamin E
Manfaat vitamin E diantaranya adalah sebagai antioksidan yaitu zat
yang dapat menghambat radikal bebas dan menghambat proses
oksidasi. Radikal bebas merupakan molekul yang tidak stabil dan
sangat berbahaya bagi tubuh karena dapat menyebabkan perubahan
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
pada sel-sel tubuh yang memicu terjadinya proses penuaan dini dan
penyakit degeneratif seperti kanker (4).
Selain itu vitamin E juga berfungsi dalam merangsang reaksi
kekebalan tubuh serta dapat mencegah penyakit jantung koroner,
gangguan menstruasi, keguguran, kemandulan, mengurangi resiko
terjadinya pembekuan darah, mencairkan darah beku, mencegah
penyumbatan pembuluh darah, menguatkan dinding pembuluh darah
kapiler, meningkatkan pembentukan sel-sel darah merah, mengurangi
kadar gula darah, memperbaiki kerja insulin dan meningkatkan
kekuatan otot dan stamina (4).
Kegunaan lainnya adalah dapat mencegah degenerasi saraf
penglihatan, mencegah kerusakan sel-sel saraf, meningkatkan gairah
seksual, serta mempertahankan kekebalan tubuh dan menguatkan
sel-sel darah putih. Vitamin ini termasuk ke dalam jenis vitamin yang
larut dalam lemak sehingga vitamin E mampu menembus lapisan
membran sel dan masuk ke dalam sel. Oleh karena itu, vitamin E
dapat mencegah terjadinya proses oksidasi lemak dan memegang
peranan sangat penting dalam melindungi lapisan jaringan lemak yang
melapisi dinding sel-sel dan organ-organ utama dalam tubuh (4).
Vitamin E bermanfaat untuk meningkatkan regenerasi sel-sel kulit,
dapat mencegah kerusakan serabut kolagen dan elastin yang memicu
terjadinya kulit keriput. Manfaat lain vitamin ini bagi kulit adalah dapat
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
digunakan untuk mengatasi jerawat, peradangan dan pembentukan
jaringan parut serta mempercepat proses penyembuhan luka (4).
7. Penetapan kadar
Pada sampel dengan kadar lemak yang rendah, vitamin E dapat
langsung diekstraksi dengan pelarut organik non polar seperti heksana,
aseton, dietil eter. Sedangkan pada sampel yang berlemak, dianjurkan
untuk dilakukan saponifikasi. Saponifikasi bertujuan untuk
memisahkan komponen yang dapat tersabunkan (gliserol, garam
asam lemak) yang dapat mengganggu analisis vitamin E kemudian
komponen tersebut dihilangkan dengan air karena komponen ini larut
dalam air (23).
Sebelum tokoferol ditentukan kadarnya secara kuantitatif, ester
tokoferil harus dihidrolisis terlebih dahulu untuk membebaskan
tokoferol dari bentuk ester tokoferil. Hidrolisis dapat dilakukan dengan
menggunakan asam atau saponifikasi dengan alkali. Hidrolisis dengan
asam membutuhkan waktu 3 jam sedangkan saponifikasi dengan
alkali hanya 30 menit tetapi membutuhkan prosedur yang lebih
panjang mulai dari ekstraksi pelarut, pencucian dan penguapan (7).
Saponifikasi dilakukan menggunakan kalium hidroksida yang
digabungkan dengan antioksidan untuk menghindari terjadinya
oksidasi. Setelah dilakukan saponifikasi, komponen yang tidak
tersabunkan seperti vitamin E dapat diekstraksi dengan pelarut
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
organik non polar. Asam lemak, gliserol dan komponen yang tidak
diinginkan berada pada fase air alkali sehingga tidak akan
mengganggu analisis vitamin E (23).
Penetapan kadar vitamin E dapat dilakukan dengan berbagai metode,
diantaranya adalah :
a. Serimetri
Tokoferol mudah dioksidasi dengan seri sulfat dan membentuk
tokoferol kuinon. Larutan yang mengandung vitamin E dititrasi
dengan larutan standar seri sulfat dan menggunakan difenilamin
sebagai indikator, ion seri yang dibebaskan dalam larutan akan
mengoksidasi indikator. Titik akhir ditunjukkan oleh adanya warna
biru (7).
Ester tokoferil misalnya tokoferil asetat atau tokoferil suksinat,
yang biasanya digunakan dalam industri farmasi, tidak dapat
dioksidasi apabila tidak dihidrolisis dengan kalium hidroksida
sebelumnya. Hidrolisis dilakukan untuk menghilangkan gugus ester.
Titrasi dengan seri sulfat hanya bisa dilakukan pada sampel yang
mengandung vitamin E konsentrasi tinggi (7).
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
b. Kolorimetri
- Dengan feri klorida
Tokoferol akan mereduksi ion Fe3+ (feri klorida) menjadi ion
Fe2+, kemudian Fe2+ bereaksi dengan 2,2’-dipiridin membentuk
kompleks berwarna merah yang memberikan serapan pada
panjang gelombang 520 nm. Reaksi ini tidak stabil sehingga
pengukurannya harus dilakukan 30 detik setelah reaksi dimulai.
Zat-zat yang dapat mereduksi seperti karotenoid, vitamin A dan
sterol dapat mengganggu penetapan kadar vitamin E. Metode
ini sesuai untuk ekstrak murni dan fraksi hasil elusi dari
kromatografi lapis tipis, kertas atau kolom (24).
Emmerie dan Engel melakukan modifikasi pada metode ini
dimana 2,2’-dipiridin digantikan oleh batofenantrolin (4,7-difenil-
1,10-fenantrolin) dan menggunakan garam nitroso sebagai
kompleksan, menghasilkan warna hijau apabila bereaksi
dengan ion Fe2+. Modifikasi ini menghasilkan kromofor yang
lebih stabil dan sensitif (24).
- Dengan asam sulfat
Tokoferol akan menghasilkan warna kuning dalam 90% v/v
asam sulfat. Pada metode ini, saponifikasi tidak diperlukan
karena tokoferol maupun tokoferol asetat akan memberikan
warna yang sama. Metode ini dapat digunakan untuk
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
mengetahui kadar vitamin E dalam tablet maupun dalam injeksi
minyak. Vitamin A, kalsiferol dan kolesterol dalam asam sulfat
juga akan memberikan warna yang hampir sama dengan
vitamin E, oleh karena itu, perlu dilakukan pemisahan terlebih
dahulu sebelum menggunakan metode ini (7).
- Dengan asam fosfomolibdat
Asam fosfomolibdat dalam etanol akan bereaksi dengan
vitamin E menghasilkan larutan berwarna kuning kehijauan
yang memberikan serapan maksimum pada panjang
gelombang 640-700 nm. Pengukuran ini dapat digunakan pada
minyak hati ikan hiu (7).
- Dengan asam nitrat
Tokoferol, apabila dioksidasi dengan asam nitrat akan
menghasilkan senyawa berwarna merah kecoklatan (7).
c. Kromatografi kertas
Pemisahan dan identifikasi vitamin E dengan metode ini
mengikuti kromatografi 2 dimensi dengan menggunakan kertas
yang mengandung zink karbonat dan campuran pelarut benzena
dalam sikloheksana (30% v/v) untuk dimensi yang pertama, 75%
etanol dalam H2O untuk dimensi yang kedua. Bercak vitamin E
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
diidentifikasi di bawah sinar ultraviolet, setelah disemprot dengan
0,7% natrium fluoresens dalam H2O. Metode ini tidak praktis,
menghabiskan banyak waktu dan tidak akurat dalam pemisahan
komponen vitamin E (24).
d. TLC (Thin Layer Chromatography)
TLC 2 dimensi dengan silika gel G, alumina atau magnesium
fosfat, sangat efisien dalam memisahkan komponen vitamin E.
Perbedaan pelarut seperti benzena-etanol, heksana-etanol,
benzena-etil eter, sikloheksana-benzena dan petroleum eter
isopropil sering digunakan pada metode ini. Pelapis adsorben yang
mengandung natrium fluoresens digunakan untuk melihat bercak
vitamin E di bawah sinar ultraviolet. Ester vitamin E juga dapat
dianalisis dengan merubah bentuk ester menjadi bentuk bebasnya
menggunakan litium alumunium hidroksida. Bercak yang dihasilkan
dapat diambil dengan etanol kemudian dianalisis lebih lanjut
dengan kolorimetri atau spektrofluorometri (24).
e. Kromatografi kolom
Kromatografi kolom efektif dalam memisahkan komponen
lemak yang bercampur dengan vitamin E. Pada metode ini
biasanya digunakan adsorben seperti Florex, Decalso dan Celite
545-digitonin. Florex dengan HCl dan SnCl2 direkomendasikan
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
penggunaannya untuk menghilangkan pengganggu seperti
karotenoid, vitamin A dan sterol (24).
Pemisahan sempurna tokoferol dengan tokotrienol dengan
kromatografi kolom tidak dapat dilakukan. Tetapi hampir dicapai
dengan menggunakan adsorben seperti alumina deaktivasi, zink
karbonat, magnesium fosfat, florisil dan asam silika (24).
f. KCKT (Kromatografi Cair Kinerja Tinggi)
KCKT dapat digunakan untuk memisahkan dan menganalisis
vitamin E. Penggunaan kolom corosil II dengan fase gerak 5%
diisopropil eter dalam heksana atau dengan 0,5% tetrahidrofuran
dalam heksana pada laju alir 1-1,5 ml/menit; baik untuk pemisahan
semua bentuk tokoferol dan tokotrienol. Kolom lain (Jasopack WC-
03-500) juga telah dikembangkan penggunaannya pada KCKT
untuk komponen vitamin E dalam minyak sayuran, dengan fase
gerak 2% diisopropil eter dalam heksana pada laju alir 0,8 ml/menit.
Metode KCKT sering digunakan dalam analisis rutin dan analisis
quality control pada pemerintah dan industri laboratorium (24).
g. Gas-liquid chromatography (GLC)
GLC terbukti efektif dalam menganalisis tokoferol, ester
tokoferol dan derivat tokoferol seperti trimetil silil ester. Metode ini
memberikan uji perolehan kembali yang tinggi, standar deviasi kecil,
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
lebih sederhana, spesifik dan cukup sensitif karena dapat
mendeteksi vitamin E dalam jumlah mikrogram. Kolom yang
digunakan adalah SE-30 3% dalam Gas-Krom Q 100/120 mesh,
SE-30 1,5% dalam Kromosorb W 60/80 mesh, OV-1 dalam Gas-
Krom Q, SE-52, XE-60, QF-1, Apiezon N atau L, DB-5, Silar-9CP
10% dalam Kromosorb WHP 100/120 mesh dan JXR 3% dalam
Gas-Krom Q 100/120 mesh. Detektor yang digunakan adalah
detektor ionisasi nyala dengan gas pembawa N2 atau He.
Penetapan kadar vitamin E menggunakan metode ini dapat
dilakukan untuk produk susu, telur, multivitamin, kapsul, krim dan
injeksi. Metode ini juga digunakan dalam menganalisis produk
kosmetik (24,28,29).
C. KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI (KCKT)
Analisis KCKT dapat dilakukan secara kualitatif dan kuantitatif.
Analisis kualitatif
Analisis kualitatif dilakukan dengan memperhatikan waktu retensi.
Data waktu retensi khas tetapi tidak spesifik, artinya terdapat lebih dari
satu komponen zat yang mempunyai waktu retensi yang sama (30,31).
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
Analisis kuantitatif
Dasar perhitungan kuantitatif untuk suatu komponen zat yang
dianalisis adalah dengan mengukur luas puncaknya. Ada beberapa
metode yang dapat digunakan, yaitu :
a. Baku dalam
Cara ini mencakup penambahan senyawa baku yang jumlahnya
diketahui, kemudian campuran itu dibuat untuk disuntikkan ke alat
kromatografi, lalu dihitung perbandingan luas puncak kedua zat
tersebut. Setelah itu dibuat kurva antara perbandingan luas puncak
terhadap konsentrasi komponen standar. Kadar sampel diperoleh
dengan memplot perbandingan luas puncak komponen sampel.
Keuntungan menggunakan cara ini adalah kesalahan pada volume
injeksi dapat dieliminasi, tetapi kesulitannya adalah diperlukan baku
dalam yang tepat.
Ada beberapa persyaratan yang harus dipenuhi oleh senyawa yang
digunakan sebagai baku dalam, yaitu :
- Harus terpisah sama sekali dari puncak cuplikan.
- Harus terelusi dekat dengan puncak yang diukur.
- Konsentrasi dan tanggapan detektornya harus sama dengan
konsentrasi dan tanggapan detektor puncak yang diukur.
- Tidak boleh bereaksi dengan komponen cuplikan.
- Tidak terdapat dalam cuplikan asal.
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
- Harus sangat murni dan mudah didapat (30,31).
b. Baku luar
Cara ini digunakan untuk analisis pada konsentrasi yang sangat
rendah dimana larutan baku dengan berbagai konsentrasi disuntikkan
dan diukur luas puncaknya. Kemudian dibuat kurva kalibrasi antara
luas puncak terhadap konsentrasi. Lalu larutan sampel yang akan
dianalisis disuntikkan dan diukur luas puncaknya. Kadar sampel
diperoleh dengan cara memplot luas puncak sampel pada kurva
kalibrasi baku atau dengan perbandingan langsung. Kekurangan cara
ini adalah diperlukan baku murni serta diperlukan ketelitian dalam
pengenceran dan penimbangan karena harus menyuntikkan volume
yang tepat sama.
Tahapan analisis kuantitatif adalah :
a. Membuat spektrum serapan komponen-komponen yang ada di
dalam sampel.
b. Mencari panjang gelombang optimum untuk campuran komponen
zat dalam sampel.
c. Mencari fase gerak yang sesuai agar komponen-komponen
tersebut memisah (R ≥ 1,5) (30,31).
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
D. VALIDASI METODE ANALISIS
Validasi metode analisis adalah suatu tindakan penilaian terhadap
parameter tertentu, berdasarkan percobaan laboratorium untuk
membuktikan bahwa parameter tersebut memenuhi persyaratan untuk
penggunaannya (32).
Validasi metode diperlukan dalam suatu proses analisis untuk
memastikan hasil analisis dapat dipertanggungjawabkan. Suatu metode
analisis perlu divalidasi apabila metode tersebut baru dikembangkan
untuk suatu permasalahan khusus. Validasi juga dilakukan jika ada revisi
dari metode yang sudah ada untuk memecahkan suatu permasalahan
analisis yang baru. Selain itu proses validasi juga diperlukan jika
diterapkan metode rutin pada laboratorium yang berbeda dengan alat dan
oleh analis yang berbeda pula. Seiring dengan berjalannya waktu, proses
validasi metode juga perlu dilakukan untuk memastikan bahwa metode
tersebut masih dapat diandalkan (32).
Ada beberapa parameter analisis yang harus dipertimbangkan dalam
validasi metode analisis. Untuk menentukan parameter-parameter yang
digunakan, perlu diperhatikan tujuan dari penelitian yang akan dilakukan.
Parameter yang sering digunakan untuk pengembangan metode analisis
antara lain kecermatan (accuracy), keseksamaan (precision), selektifitas
(selectivity), linearitas (linearity) dan rentang (Range), batas deteksi (LOD)
dan batas kuantitasi (LOQ), ketangguhan (ruggedness) serta kekuatan
(robustness) (32).
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
1. Kecermatan (accuracy)
Kecermatan adalah ukuran yang menunjukan derajat kedekatan
hasil analisis dengan kadar analit yang sebenarnya. Kecermatan
dinyatakan sebagai persen perolehan kembali (recovery) analit yang
ditambahkan. Uji perolehan kembali dapat dilakukan dengan
menambahkan sejumlah analit dengan konsentrasi tertentu pada
matriks sampel, lalu persen perolehan kembali dinyatakan sebagai
rasio antara hasil yang diperoleh dengan hasil yang sebenarnya.
Rentang kesalahan perolehan kembali yang diijinkan berbeda-beda
tergantung pada konsentrasi analit pada matriks sampel, semakin kecil
konsentrasi analit, semakin kecil perolehan kembalinya. Akurasi yang
baik adalah 98%-102%, untuk sampel hayati (biologis/nabati) adalah ±
10% (32).
2. Keseksamaan (precision)
Keseksamaan adalah ukuran yang menunjukkan derajat
kesesuaian antara hasil uji individual, diukur melalui penyebaran hasil
individual dari rata-rata jika prosedur diterapkan secara berulang pada
sampel-sampel yang diambil dari campuran yang homogen.
Keseksamaan diukur sebagai simpangan baku atau simpangan baku
relatif (koefisien variasi). Keseksamaan dapat dinyatakan sebagai
keterulangan (repeatibility) atau ketertiruan (reproducibility).
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
Keterulangan adalah keseksamaan metode jika dilakukan berulang
kali oleh analis yang sama pada kondisi sama dalam interval waktu
yang pendek. Ketertiruan adalah keseksamaan metode jika dikerjakan
pada kondisi berbeda. Biasanya analisis dilakukan dalam
laboratorium-laboratorium yang berbeda atau sama dengan
menggunakan peralatan, pereaksi, pelarut, dan analisis yang berbeda
pula. Kriteria seksama diberikan jika metode memberikan simpangan
baku relatif 2% atau kurang. Akan tetapi, kriteria ini sangat fleksibel
bergantung pada konsentrasi analit yang diperiksa, jumlah sampel dan
kondisi laboratorium (32).
3. Selektivitas (selectivity)
Selektivitas suatu metode adalah kemampuan metode untuk
mengukur zat tertentu saja secara cermat dan seksama dengan
adanya komponen lain yang mungkin ada dalam matriks sampel.
Selektivitas sering dinyatakan sebagai derajat penyimpangan (degree
of bias). Selektivitas metode ditentukan dengan membandingkan hasil
analisis sampel yang mengandung cemaran, hasil urai, senyawa
sejenis, senyawa asing lainnya atau pembawa dengan hasil analisis
sampel tanpa penambahan bahan-bahan tadi. Penyimpangan hasil
jika ada merupakan selisih dari hasil uji keduanya (32).
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
4. Linearitas (linearity) dan Rentang (Range)
Linearitas adalah kemampuan metode analisis yang memberikan
respon yang secara langsung atau dengan bantuan transformasi
matematik yang baik, proporsional terhadap konsentrasi analit dalam
sampel. Rentang metode adalah pernyataan batas terendah dan
tertinggi analit yang sudah ditunjukkan dapat diterapkan dengan
kecermatan, keseksamaan, dan linearitas yang dapat diterima. Dalam
praktek, digunakan satu seri larutan yang berbeda konsentrasinya
antara 50-150% kadar analit dalam sampel.
Di dalam pustaka sering ditemukan rentang konsentrasi yang
digunakan antara 0-200%. Jumlah sampel yang dianalisis sekurang-
kurangnya delapan buah sampel blangko. Sebagai parameter adanya
hubungan linier digunakan koefisien korelasi (r) pada analisis regresi
linier y = a + bx. Hubungan linier yang ideal dicapai jika b = 0, r = +1
atau -1 bergantung pada arah garis. Sedangkan nilai a menunjukkan
kepekaan analisis terutama instrument yang digunakan (32).
5. Batas deteksi (LOD) dan batas kuantitasi (LOQ)
Batas deteksi adalah jumlah terkecil analit dalam sampel yang
dapat dideteksi dan masih memberikan respon signifikan dibandingkan
dengan blangko. Sedangkan batas kuantitasi adalah batas kuantitas
terkecil analit dalam sampel yang masih dapat memenuhi kriteria
cermat dan seksama.
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
Batas deteksi dan kuantitasi dapat dihitung secara statistik melalui
garis regresi linier dari kurva kalibrasi.
a. Batas deteksi
LOD = 3 Sy/x
b
b. Batas kuantitasi
LOQ = 10 Sy/x
b
Sy/x : Simpangan baku respon analit dari blangko.
b : Arah garis linier (kepekaan arah) dari kurva respon terhadap
konsentrasi = slope (b pada persamaan garis y = a + bx) (32).
6. Ketangguhan metode (Rugedness)
Ketangguhan metode adalah derajat ketertiruan hasil uji yang
diperoleh dari hasil analisis sampel yang sama dalam berbagai kondisi
uji normal, seperti laboratorium, analisis, instrumen, bahan pereaksi,
suhu, hari yang berbeda, dan lain-lain. Ketangguhan biasanya
dinyatakan sebagai tidak adanya pengaruh perbedaan operasi atau
lingkungan kerja pada hasil uji. Ketangguhan metode merupakan
ukuran ketertiruan pada kondisi normal antara laboratorium dan antar
analis. Ketangguhan metode ditentukan dengan menganalisis suatu lot
sampel yang homogen pada laboratorium yang berbeda oleh analis
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
yang berbeda, kondisi dan lingkungan yang berbeda, tetapi
menggunakan prosedur dan parameter uji yang sama (32).
7. Kekuatan (Robustness)
Untuk memvalidasi kekuatan suatu metode perlu dibuat perubahan
metodologi yang kecil dan terus-menerus dan mengevaluasi respon
analitik dan efek presisi dan akurasi (32).
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
BAB III
BAHAN, ALAT DAN CARA KERJA
A. LOKASI
Penelitian dilakukan di Laboratorium Penelitian Kimia Analisis
Instrumen, Departemen Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan Alam, Universitas Indonesia.
B. BAHAN
dl-Alfa-tokoferol (DSM Nutritional Produtcs Asia Pasific Pte. Ltd.),
asam askorbat (Brataco Chemika), KOH (Merck), metanol pro HPLC
(Merck), n-heksana pro HPLC (Mallinckrodt), alkohol 96% (BE Reagen),
aquabidestilata (Otsuka Pharmaceuticals) dan sampel kelapa kopyor tua
sebanyak 2 buah, yang berasal dari Lampung.
C. ALAT
Pompa KCKT LC 6A (Shimadzu) yang dilengkapi dengan kolom
kromasil 100-5C18 (25 cm x 4,6 mm), detektor spektrofotometer UV SPD-
6AV (Shimadzu), pemroses data Class LC-10 dan interface CBM 102
(Shimadzu), spektrofotometer UV-Vis Jasco V-530 (Shimadzu) dan kuvet,
microliterTM syringe 25,0 µL (Hamilton), filter eluen dan sampel 0,45 µm
(Whatman), timbangan analitik, ultrasonik (Elma S60H), magnetic stirrer,
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
lemari es, blender, saringan berdiameter 12 cm dan kasa, balon karet,
alumunium voil, vial coklat dan alat-alat gelas.
D. CARA KERJA
1. Pembuatan larutan induk standar tokoferol 1000 µg/mL
Timbang seksama 100,0 mg tokoferol masukkan ke dalam labu
ukur 100,0 mL dan dilarutkan dengan n-heksana sampai tanda batas.
Diperoleh konsentrasi larutan induk standar tokoferol sebesar 1 mg/mL
(1000 µg/mL = 1000 ppm). Lakukan pengenceran larutan induk untuk
mendapatkan larutan standar tokoferol dengan konsentrasi 5, 10, 15,
20, 25, 30 dan 100 µg/mL.
2. Optimasi kondisi analisis tokoferol
a. Penentuan panjang gelombang maksimum
Larutan standar tokoferol 100 µg/mL dibuat spektrum
serapannya dengan spektrofotometer UV-Vis pada rentang
panjang gelombang 200-400 nm. Dari kurva serapan akan
didapatkan panjang gelombang maksimum tokoferol.
b. Pemilihan kecepatan alir untuk analisis vitamin E
Larutan standar tokoferol 100,0 µg/mL disuntikkan sebanyak
20,0 µL ke alat KCKT menggunakan fase gerak metanol dengan
variasi kecepatan alir 1,0; 1,2 dan 1,5 mL/menit dan dideteksi pada
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
panjang gelombang maksimum yang diperoleh pada percobaan a.
Masing-masing kondisi di atas dicatat waktu retensi (tR), dihitung
faktor ikutan (Tf), jumlah plat teoritis (N) dan HETP. Kondisi terpilih
adalah kondisi yang menunjukkan nilai plat teoritis (N) yang
terbesar dan HETP terkecil.
3. Validasi metode analisis tokoferol
a. Pembuatan kurva kalibrasi dan uji linearitas
Masing-masing larutan standar tokoferol dengan konsentrasi 5,
10, 15, 20, 25 dan 30 µg/mL disuntikkan sebanyak 20,0 µL ke alat
KCKT dengan kondisi fase gerak metanol dan kecepatan alir
terpilih. Dari data pengukuran kemudian dibuat kurva kalibrasi
analisis hubungan antara konsentrasi tokoferol dengan luas puncak
sehingga didapat persamaan garis linear y = a + bx dan koefisien
korelasi (r) yang menunjukkan linearitasnya.
b. Penentuan batas deteksi (LOD) dan batas kuantitasi (LOQ)
Dengan metode statistik, LOD dan LOQ ditentukan dari hasil
kurva kalibrasi yang diperoleh. Rumus untuk perhitungannya
adalah sebagai berikut :
LOD = 3 Sy/x LOQ = 10 Sy/x
b b
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
c. Uji presisi
Larutan standar tokoferol dengan konsentrasi 5, 15 dan 30
µg/mL disuntikkan ke alat KCKT sebanyak 20,0 µL dengan kondisi
fase gerak metanol dan kecepatan alir terpilih, diulang sebanyak
enam kali untuk masing-masing konsentrasi. Kemudian dicatat luas
puncaknya dan dihitung koefisien variasinya (KV).
d. Uji Perolehan Kembali (UPK)
Sampel berupa santan dari daging buah kelapa kopyor tua yang
ditimbang seksama sebanyak 20 g dan ditambahkan 1,0 mL
larutan standar tokoferol 25,1 µg/mL (untuk UPK konsentrasi
rendah), 125 mL alkohol 96%, 12,5 mL larutan asam askorbat 10%,
25 mL larutan KOH 80% dan 62,5 mL air. Kemudian disaponifikasi
selama 4 jam dengan menggunakan magnetic stirrer pada suhu
ruang dan terlindung dari cahaya. Lalu diekstraksi dengan 2 dan 3
mL n-heksana, ekstrak dicuci dengan 2 x 10 mL air. Ekstrak yang
diperoleh dimasukkan ke dalam labu ukur 5,0 mL dan dicukupkan
volumenya hingga tanda batas dengan n-heksana. Suntikkan
sampel sebanyak 20,0 µL ke alat KCKT, dicatat luas puncaknya
dan dihitung persentase uji perolehan kembalinya. Hal yang sama
dilakukan untuk UPK pada konsentrasi sedang dan tinggi.
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
4. Analisis tokoferol dalam sampel
Sampel berupa santan dari daging buah kelapa kopyor tua yang
ditimbang seksama sebanyak 100 g dan ditambahkan 125 mL alkohol
96%, 12,5 mL larutan asam askorbat 10%, 25 mL larutan KOH 80%
dan 62,5 mL air. Kemudian disaponifikasi selama 4 jam dengan
menggunakan magnetic stirrer pada suhu ruang dan terlindung dari
cahaya. Lalu diekstraksi dengan 2 x 5 mL n-heksana, ekstrak dicuci
dengan 2 x 10 mL air. Ekstrak yang diperoleh dimasukkan ke dalam
labu ukur 10,0 mL dan dicukupkan volumenya hingga tanda batas
dengan n-heksana. Suntikkan sampel sebanyak 20,0 µL ke alat KCKT
dan dicatat luas puncaknya. Kadar tokoferol dalam sampel dihitung
berdasarkan persamaan kurva kalibrasi yang telah diperoleh.
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
BAB IV
HASIL PERCOBAAN DAN PEMBAHASAN
A. HASIL PERCOBAAN
1. Optimasi kondisi analisis tokoferol
a. Penentuan panjang gelombang maksimum
Panjang gelombang maksimum tokoferol dalam n-heksana
ditentukan dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada
rentang panjang gelombang 200-400 nm. Dari hasil pengukuran
diperoleh panjang gelombang maksimum tokoferol adalah pada
297 nm. Spektrum serapan tokoferol dapat dilihat pada Gambar 4
dan Tabel 2.
b. Pemilihan kecepatan alir untuk analisis tokoferol
Berdasarkan literatur acuan (23), analisis tokoferol dilakukan
dengan menggunakan fase gerak metanol. Dari hasil percobaan
dipilih kecepatan alir 1,0 mL/menit. Hasil percobaan dapat diliat
pada Gambar 5, 6, 7 dan Tabel 3.
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
2. Validasi metode analisis tokoferol
a. Pembuatan kurva kalibrasi dan uji linearitas
Persamaan garis kurva kalibrasi yang didapat yaitu y = 398,466
+ 934,51x dengan koefisien korelasi (r) adalah 0,99993. Hasil
selengkapnya dapat dilihat pada Gambar 8 dan Tabel 4.
b. Penentuan batas deteksi (LOD) dan batas kuantitasi (LOQ)
Batas deteksi dan batas kuantitasi tokoferol yaitu masing-
masing sebesar 0,38 µg/mL dan 1,29 µg/mL. Hasil selengkapnya
dapat dilihat pada Tabel 5.
c. Uji presisi
Larutan standar tokoferol dengan konsentrasi 5,3 µg/mL; 15,9
µg/mL dan 31,8 µg/mL masing-masing memberikan nilai koefisien
variasi (KV) berturut-turut 0,703%; 0,82% dan 1,101%. Hasil
selengkapnya dapat dilihat pada Tabel 6.
d. Uji Perolehan Kembali (UPK)
Hasil rata-rata uji perolehan kembali tokoferol pada matriks
santan dari daging buah kelapa kopyor tua adalah 99,45%. Hasil
selengkapnya dapat dilihat pada Tabel 7.
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
3. Analisis tokoferol dalam sampel kelapa kopyor
Kadar rata-rata tokoferol dalam 100 g santan dari daging buah
kelapa kopyor tua yaitu sebesar 0,0653 mg. Hasil selengkapnya dapat
dilihat pada Gambar 9 dan Tabel 8.
B. PEMBAHASAN
Dalam penelitian ini dilakukan analisis total tokoferol dalam sampel
berupa santan dari daging buah kelapa kopyor tua (Cocos nucifera L.).
Analisis tokoferol pada buah kelapa kopyor sebelumnya pernah dilakukan
secara kromatografi cair kinerja tinggi. Analisis tokoferol dilakukan
menggunakan alat KCKT yang dilengkapi dengan detektor UV-Vis.
Metode KCKT dipilih karena waktu analisis yang cepat dan cara kerjanya
relatif sederhana (6). Detektor UV-Vis digunakan karena tokoferol memiliki
gugus kromofor (gugus yang memiliki ikatan rangkap terkonjugasi) dan
gugus ausokrom (gugus yang memiliki pasangan elektron bebas).
Sebelum dilakukan optimasi dan validasi metode, terlebih dahulu
dilakukan pencarian panjang gelombang maksimum tokoferol. Dari hasil
percobaan, didapat panjang gelombang maksimum tokoferol adalah pada
297 nm. Setelah didapat panjang gelombang maksimum, lalu dilakukan
optimasi fase gerak. Pemilihan fase gerak adalah berdasarkan pada
literatur yaitu menggunakan metanol, dimana metanol merupakan pelarut
polar yang memenuhi persyaratan fase gerak antara lain harganya lebih
murah dibandingkan fase gerak lain dan mudah didapat.
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
Pada kecepatan alir 1,0 mL/menit, didapat waktu retensi tokoferol
adalah pada 14,087 menit dan menghasilkan jumlah plat teoritis paling
besar serta HETP paling kecil. Pada kecepatan alir 1,2 mL/menit,
menghasilkan tekanan kolom yang lebih besar daripada 1,0 mL/menit dan
waktu retensi yang lebih cepat yaitu 12,040 menit. Pada kecepatan ini
menghasilkan jumlah plat teoritis yang lebih kecil dan HETP lebih besar
daripada kecepatan 1,0 mL/menit. Pada kecepatan alir 1,5 mL/menit,
didapat waktu retensi 9,665 menit. Waktu retensi ini lebih cepat tetapi
tekanan kolom menjadi lebih besar dan menghasilkan jumlah plat teoritis
yang lebih kecil dan HETP lebih besar dibandingkan dua kecepatan alir
sebelumnya. Tekanan kolom KCKT yang besar, tidak baik untuk kolom
karena dapat mengurangi umur kolom atau kolom menjadi lebih cepat
rusak.
Validasi metode dilakukan sebelum melakukan analisis sampel.
Validasi yang dilakukan pertama kali adalah pembuatan kurva kalibrasi.
Tujuan pembuatan kurva kalibrasi adalah untuk mengetahui kelinieran
hubungan antara konsentrasi tokoferol dengan luas puncak yang
dihasilkan. Koefisien korelasi, r, yang semakin mendekati 1 berarti
semakin linier.
Pembuatan kurva kalibrasi tokoferol dilakukan dengan
menghubungkan enam titik pada berbagai konsentrasi yaitu 5,3; 10,6;
15,9; 21,2; 26,5 dan 31,8 ìg/mL. Persamaan kurva kalibrasi merupakan
hubungan antara sumbu x dan sumbu y. Deretan konsentrasi yang dibuat
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
dinyatakan sebagai sumbu x, sedangkan luas puncak tokoferol yang
diperoleh dari hasil pengukuran dinyatakan sebagai nilai sumbu y.
Persamaan garis kurva kalibrasi tokoferol adalah y = 398,466 + 934,51x,
dengan nilai koefisien korelasi 0,99993. Koefisien korelasi yang semakin
mendekati nilai 1 menyatakan hubungan yang semakin linier antara
konsentrasi dengan luas puncak kromatogram yang dihasilkan.
Batas deteksi dan batas kuantitasi dihitung dengan menggunakan
persamaan garis regresi linier kurva kalibrasi yang telah diperoleh. Batas
deteksi adalah jumlah terkecil analit dalam sampel yang dapat dideteksi
yang masih memberikan respon signifikan dibandingkan dengan blangko.
Batas kuantitasi merupakan parameter pada analisis renik dan diartikan
sebagai kuantitas terkecil analit dalam sampel yang masih dapat
memenuhi kriteria cermat dan seksama (32). Berdasarkan perhitungan
statistik, maka diperoleh batas deteksi tokoferol sebesar 0,38 µg/mL,
sedangkan batas kuantitasi tokoferol sebesar 1,29 µg/mL. Konsentrasi
tersebut berada dibawah konsentrasi terkecil pembuatan kurva kalibrasi.
Setelah pembuatan kurva kalibrasi lalu dilakukan uji presisi.
Percobaan ini bertujuan untuk mengetahui hasil keterulangan penyuntikan
satu larutan dalam satu hari. Presisi diukur sebagai simpangan baku atau
simpangan baku relatif (koefisien variasi). Kriteria seksama diberikan jika
metode memberikan simpangan baku relatif 2% atau kurang (32). Untuk
konsentrasi 5,3; 15,9 dan 31,8 ìg/mL masing-masing memberikan nilai
koefisien variasi berturut-turut 0,703%; 0,82% dan 1,101%. Dari ketiga
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
konsentrasi tersebut simpangan baku relatifnya kurang dari 2%, oleh
karena itu analisis ini dapat disimpulkan memberikan nilai dengan
keseksamaan yang baik.
Untuk menilai kedekatan hasil analisis dengan kadar analit yang
sebenarnya dapat dilakukan melalui uji perolehan kembali yang bertujuan
untuk mengetahui keakuratan metode yang digunakan. Uji Perolehan
Kembali (UPK) merupakan cara untuk menentukan kecermatan hasil
analisis suatu metode. Kecermatan atau akurasi adalah kedekatan hasil
penetapan yang diperoleh dengan hasil sebenarnya. UPK dapat dilakukan
dengan dua cara, yaitu metode simulasi dan metode penambahan bahan
baku (adisi) (32).
UPK dilakukan dengan menggunakan metode simulasi, dimana kelapa
kopyor yang tidak mengandung tokoferol dijadikan sebagai blanko,
kemudian ditambahkan standar tokoferol yang diketahui kadarnya. Lalu
UPK diketahui dengan membagi hasil yang didapat dengan konsentrasi
tokoferol yang sebenarnya. Hasil selengkapnya dapat dilihat pada Tabel 7.
Metode ekstraksi yang digunakan pada penelitian ini disesuaikan
dengan kondisi alat dan bahan yang terdapat di laboratorium. Sampel
yang digunakan pada penelitian ini adalah buah kelapa kopyor tua. Buah
kelapa tua memiliki ciri-ciri yaitu kulit luar yang berwarna coklat tua dan
keras sehingga lebih susah dibuka daripada kelapa muda, memiliki
kandungan air lebih sedikit, rasa yang lebih manis serta daging buah yang
lebih tebal dan keras. Daging buah kelapa kopyor tua tetap lunak, tidak
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
seperti kelapa tua biasa yang dagingnya akan menebal dan mengeras
(11).
Satu buah kelapa kopyor tua menghasilkan 417,9 g daging buah dan
213,3 g air kelapa. Daging buah kelapa kopyor tua diblender dan diperas
untuk memperoleh santannya. Dari 417,9 g daging buah kelapa kopyor
tua, diperoleh santan sebanyak 287,9 g. Santan ditimbang sebanyak 100
g dan disaponifikasi dengan alkohol, asam askorbat, KOH dan air selama
empat jam dengan menggunakan magnetic stirrer. Saponifikasi perlu
dilakukan pada sampel yang berlemak, bertujuan untuk memisahkan
komponen yang dapat tersabunkan (gliserol, garam asam lemak) dimana
dapat mengganggu analisis tokoferol (lalu dihilangkan dengan air karena
komponen ini larut dalam air) dan untuk membebaskan tokoferol dari
bentuk ester tokoferil (7,23). Saponifikasi dilakukan menggunakan
campuran kalium hidroksida dengan antioksidan untuk menghindari
terjadinya oksidasi.
Setelah disaponifikasi, sampel diekstraksi dengan 2 x 5 mL n-heksana,
fase n-heksana yang diperoleh kemudian dicuci dengan 2 x 10 mL air,
dan dimasukkan ke dalam labu ukur 10,0 mL kemudian dicukupkan
volumenya hingga batas dengan n-heksana. Analisis dilakukan dengan
melihat kromatogram yang muncul pada waktu retensi yang sama atau
hampir sama dibandingkan dengan waktu retensi dari zat standar yang
dipisahkan pada kondisi fase gerak dan kecepatan alir yang sama. Hasil
analisis menunjukkan bahwa dalam 100 g santan dari daging buah kelapa
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
kopyor tua mengandung kadar tokoferol rata-rata adalah 0,0653 mg.
Secara keseluruhan dari hasil percobaan, kondisi yang diperoleh pada
penelitian ini dapat digunakan untuk menganalisis tokoferol dalam sampel
makanan buah kelapa kopyor.
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
A. KESIMPULAN
1. Kondisi optimum untuk analisis tokoferol secara Kromatografi Cair
Kinerja Tinggi (KCKT) dengan kolom fase terbalik C18 Kromasil™ (25
cm x 4,6 mm) dan detektor UV-Vis pada panjang gelombang 297 nm,
volume penyuntikkan 20,0 µL; diperoleh dengan fase gerak metanol
dan kecepatan alir 1,0 mL/menit.
2. Metode analisis tokoferol dengan alat KCKT pada penelitian ini sudah
valid, kesimpulan ini dipertimbangkan dengan melihat nilai parameter
kelinieran, batas deteksi dan batas kuantitasi, koefisien variasi, serta
nilai uji perolehan kembali yang masuk ke dalam batas yang
diperbolehkan.
3. Kadar rata-rata tokoferol dalam 100 g sampel santan dari daging buah
kelapa kopyor tua (Cocos nucifera L.) adalah 0,0653 mg.
B. SARAN
1. Perlunya dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mencari kondisi lain
yang lebih baik untuk analisis tokoferol.
2. Pada penelitian selanjutnya disarankan untuk menganalisis tokoferol
dalam sumber makanan lainnya.
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
DAFTAR ACUAN
1. Anonim. Budidaya Kelapa (Cocos nucifera L.).
http://dekindo.com/content/artikel/budidaya_kelapa.pdf, 12 Januari
2009, pk. 14.00.
2. Anonim. 2009. Arecaceae.
http://en.wikipedia.org/wiki/Arecaceae#cite_note-1, 23 Januari 2009,
pk. 20.00.
3. Maskromo, Ismail, Nuraini Mashud & Hengky Novarianto. 2007. Potensi
Pengembangan Kelapa Kopyor di Indonesia. Warta Penelitian dan
Pengembangan. 13 (1) : 3.
4. Kurniati, Irma. 2009. Saatnya Rutin Konsumsi Vitamin E.
http://nasional.vivanews.com/news/read/32673-
saatnya_rutin_konsumsi_vitamin_e, 23 Januari 2009, pk. 21.00.
5. Kazuhiro, Kubo, Umar Santoso, Toru Ota, Tadahiro Tadokoro & Akio
Maekawa. 1996. Nutrient Composition of Kopyor Coconuts (Cocos
nucifera L.). Food Chemistry. 57 (2) : 299-304.
6. Ekasari, Ratna Kencana. 2008. Optimasi Fase Gerak Metanol-Air untuk
Analisis Kuantitatif Campuran Kaptopril dan Hidroklorotiazida dalam
Sediaan Simulasi Tablet. Indoskripsi, Kumpulan Skripsi Online Full
Content.
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
7. Hashmi, Manzur-Ul-Haque. 1973. Assay of Vitamins in Pharmaceutical
Preparations. New York : John Wiley & Sons Ltd. Hlm. 360-362 & 365-
387.
8. Chan, Edward & Craig R. Elevitch. 2006. Cocos nucifera (Coconut).
Species Profiles for Pasific Island Agroforestry. Hlm. 2.
9. Anonim. 2007. Bibit Kelapa Kopyor melalui Kultur Embrio. Badan
Penelitian dan Pengembangan Pertanian.
10. Anonim. 2008. Kelapa Kopyor.
http://id.wikipedia.org/wiki/Kelapa_kopyor, 13 Januari 2009, pk. 14.00.
11. Grygus, Andrew. Coconut.
http://www.clovegarden.com/ingred/coconut.html, 23 Januari 2009, pk.
21.00.
12. Kristina, Natalini Nova & Siti Fatimah Syahid. 2008. Penggunaan
Tanaman Kelapa (Cocos nucifera), Pinang (Areca catechu) dan Aren
(Arenga pinnata) sebagai Tanaman Obat. Balai Penelitian Tanaman
Obat dan Aromatik. Hlm. 1.
13. Prananta, Juni. 2008. Pemanfaatan Sabut dan Tempurung Kelapa serta
Cangkang Sawit untuk Pembuatan Asap Cair sebagai Pengawet
Makanan Alami. Scribd. Hlm. 4-6.
14. Anonim. 2009. Coconut.
http://en.wikipedia.org/wiki/Cocos_nucifera, 23 Januari 2009, pk. 21.00.
15. Esti & Sawedi. 2001. Tanaman Perkebunan, Kelapa. IPTEKnet, Sentra
Informasi IPTEK.
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
16. Anonim. 2004. Introduction about Coconut Water. Cocoinfo International.
11 (1).
17. Anonim. 2009. Cocos nucifera.
http://commons.wikimedia.org/wiki/Cocos_nucifera, 11 Januari 2009,
pk. 20.00.
18. Anonim. 2008. Informasi Spesies, Kelapa, Cocos nucifera L. Plantamor,
Situs Dunia Tumbuhan.
19. Hutapea, Johnny Ria, dkk. 1993. Inventaris Tanaman Obat Indonesia (II).
Departemen Kesehatan RI, Badan Penelitian dan Pengembangan
Kesehatan. Hlm. 139.
20. Greenfield, H. Southgate & D.A.T. 2003. Food Composition Data. Food
and Agriculture Organization of The United Nations Chapter 7.
21. Anonim. 1979. Farmakope Indonesia Edisi Ketiga. Departemen
Kesehatan Republik Indonesia. Hlm. 606-607.
22. Andarwulan, Nuri & Sutrisno Koswara. 1992. Kimia Vitamin. Jakarta :
Rajawali Press. Hlm. 209-219.
23. A., Ubaldi, Delbono G., Fusari A. & Serventi P. 2005. Quick HPLC Method
to Determine Vitamin E Concentration in Cow’s Milk. Ann. Fac. Medic.
Vet. di Parma. XXV : 101.
24. Augustin, Jorg, Barbara P. Klein, Deborah Becker & Paul B. Venugopal.
1985. Methods of Vitamin Assay. New York : John Wiley & Sons, Inc.
Hlm. 225-259 & 263-277.
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
25. Anonim. 1995. Farmakope Indonesia Edisi IV. Departemen Kesehatan
Republik Indonesia. Hlm. 77-78 & 796-798.
26. Meronda, Rahma G. 2008. Bahan Tambahan Makanan Antioksidan &
Sekuesteran. Makasar : Fakultas Farmasi, Universitas Hasanuddin.
Hlm. 15.
27. Anonim. 2006. The Merck Index an Encyclopedia of Chemicals, Drugs &
Biological. USA : Merck & Co., Inc., Whitehouse Station, WJ. Hlm.
1632.
28. Mahn, F.P., V. Viswanathan, C. Plinton, A. Menyharth & B.Z. Senkowski.
1968. Determination of Vitamin E in Multivitamin Products by Gas-
Liquid Chromatography. Journal of Pharmaceutical Sciences. 57 (12) :
2149-2153.
29. Osterlof, G. & A. Nyheim. 1980. The Estimation of α-Tocopherol in
Biological Material by Gas Chromatography. Journal of
Chromatography. 183 : 487-491.
30. Harmita. 2006. Buku Ajar Analisis Fisikokimia. Depok : Departemen
Farmasi FMIPA UI. Hlm. 140-143.
31. Johnson, E. L. & Robert S. 1991. Dasar Kromatografi Cair. Bandung :
Penerbit ITB. Hlm. 1-51, 230-255 & 278-301.
32. Harmita. 2004. Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara
Perhitungannya. Majalah Ilmu Kefarmasian. 1 (3) : 117-135.
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
GAMBAR
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
Gambar 4. Spektrum serapan larutan standar tokoferol 100 µg/mL dalam n-
heksana
Panjang gelombang (nm)
Sera
pan
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
Gambar 5. Kromatogram larutan standar tokoferol 100,0 µg/mL, kecepatan
alir 1,0 mL/menit
Keterangan gambar :
A : tokoferol
Waktu retensi : 14,087 menit
Kondisi : Kolom fase terbalik C18 Kromasil™ (25 cm x 4,6 mm), fase gerak
metanol, panjang gelombang 297 nm, volume penyuntikan 20,0 µL
A
Waktu retensi (menit)
Res
pon
dete
ktor
(V/
s)
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
Gambar 6. Kromatogram larutan standar tokoferol 100,0 µg/mL, kecepatan
alir 1,2 mL/menit
Keterangan gambar :
A : tokoferol
Waktu retensi : 12,040 menit
Kondisi : Kolom fase terbalik C18 Kromasil™ (25 cm x 4,6 mm), fase gerak
metanol, panjang gelombang 297 nm, volume penyuntikan 20,0 µL
Waktu retensi (menit)
Res
pon
dete
ktor
(V/
s)
A
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
Gambar 7. Kromatogram larutan standar tokoferol 100,0 µg/mL, kecepatan
alir 1,5 mL/menit
Keterangan gambar :
A : tokoferol
Waktu retensi : 9,666 menit
Kondisi : Kolom fase terbalik C18 Kromasil™ (25 cm x 4,6 mm), fase gerak
metanol, panjang gelombang 297 nm, volume penyuntikan 20,0 µL
Waktu retensi (menit)
Res
pon
dete
ktor
(V/
s)
A
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
Gambar 8. Kurva kalibrasi standar tokoferol
Persamaan garis kurva kalibrasi tokoferol : y = 398,466 + 934,51x dengan
koefisien korelasi (r) : 0,99993.
Kondisi : Kolom fase terbalik C18 Kromasil™ (25 cm x 4,6 mm), fase gerak
metanol, panjang gelombang 297 nm, volume penyuntikan 20,0 µL
Luas
pun
cak
(V/
s)
Konsentrasi (µg/mL)
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
Gambar 9. Kromatogram tokoferol dalam sampel daging buah kelapa kopyor
tua (Cocos nucifera L.)
Kondisi : Kolom fase terbalik C18 Kromasil™ (25 cm x 4,6 mm), fase gerak
metanol, panjang gelombang 297 nm, volume penyuntikan 20,0 µL
Waktu retensi (menit)
Res
pon
dete
ktor
(V/
s)
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
Gambar 10. Alat kromatograf cair kinerja tinggi
Keterangan :
1. Kolom fase terbalik C18 Kromasil™ (25 cm x 4,6 mm)
2. Injektor
3. Pompa LC-6A (Shimadzu)
4. Detektor UV-Vis SPD 6AV (Shimadzu)
5. Interface CBM 102 (Shimadzu)
6. Komputer processor Class LC-10
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
Gambar 11. Sampel buah kelapa kopyor (Cocos nucifera L.)
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
TABEL
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
Tabel 2
Panjang Gelombang Maksimum dan Serapan Tokoferol
Konsentrasi (C) (Panjang gelombang) A (Serapan)
(µg/mL) (nm)
100 296,5 0,9475
100 297 0,9494
100 297,5 0,9464
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
Tabel 3
Pemilihan Kondisi Analisis Optimum Tokoferol
Hubungan antara waktu retensi (tR), jumlah plat teoritis (N), efisiensi kolom
(HETP) dan faktor ikutan (Tf) kromatogram tokoferol terhadap perubahan
kecepatan alir fase gerak
Kecepatan alir Waktu retensi Jumlah plat teoritis HETP Faktor ikutan (Tf)
(mL/menit) (menit) (N)
1,0 14,087 2287,33 0,0109 1
1,2 12,040 1863,36 0,013 1
1,5 9,665 1713,24 0,014 1
Kondisi : Kolom fase terbalik C18 Kromasil™ (25 cm x 4,6 mm), fase gerak
metanol, panjang gelombang 297 nm, volume penyuntikan 20,0 µL
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
Tabel 4
Kurva Kalibrasi Tokoferol
Konsentrasi (C) Luas puncak (A)
(µg/mL) (µV/s)
5,3 5388 10,6 10308 15,9 15330 21,2 20003 26,5 25161 31,8 30212
Persamaan garis : y = 398,466 + 934,51x dengan koefisien korelasi (r) :
0,99993
Kondisi : Kolom fase terbalik C18 Kromasil™ (25 cm x 4,6 mm), fase gerak
metanol, panjang gelombang 297 nm, volume penyuntikan 20,0 µL
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
Tabel 5
Hasil Perhitungan Batas Deteksi (LOD) dan Batas Kuantitasi (LOQ)
Konsentrasi (C) Luas puncak (A) Yi (Y-Yi)2 ∆ y/x
(µg/mL) (µV/s)
5,3 5388 5351,38 1340,95 10,6 10308 10304,29 13,72 928,30 15,9 15330 15257,20 5298,45 947,54 21,2 20003 20210,12 42900,27 881,69 26,5 25161 25163,03 4,15 973,20 31,8 30212 30115,95 9225,14 953,01
(Y-Yi)2 = 58782,70
S (y/x) : 121,22
Batas deteksi (LOD) : 0,38 µg/mL
Batas kuantitasi (LOQ) : 1,29 µg/mL
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
Tabel 6
Hasil Perhitungan Uji Presisi
Konsentrasi (C) Luas puncak (A) Konsentrasi pengukuran
Konsentrasi rata - rata
Simpangan baku
(µg/mL) (µV/s) (µg/mL) (µg/mL)
5388 5,33 5,39 0,037 5417 5,37 5490 5,44 5429 5,38 5460 5,41
5,3
5447 5,40
15330 15,97 15,77 0,130 15088 15,71 15007 15,63 15048 15,67 15135 15,76
15,9
15235 15,87
30212 31,902 31,85 0,350 30309 32,006 30299 31,99 29549 31,19 30504 32,21
31,8
30118 31,802
Kondisi : Kolom fase terbalik C18 Kromasil™ (25 cm x 4,6 mm), fase gerak
metanol, panjang gelombang 297 nm, volume penyuntikan 20,0 µL
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
Tabel 7
Hasil Perhitungan Uji Perolehan Kembali (UPK) pada Matriks Kelapa Kopyor
Konsentrasi (C) Luas puncak Konsentrasi pengukuran UPK UPK rata-rata
(µg/mL) (µV/s) (µg/mL) (%) (%)
5117 5,04 100,58 5148 5,08 101,24 5,02 5057 4,98 99,30
5921 5,90 98,16 5952 5,94 98,71 99,45 6,02 5924 5,91 98,21
7832 7,95 99,05 7975 8,10 100,96 8,03 7822 7,94 98,92
Kondisi : Kolom fase terbalik C18 Kromasil™ (25 cm x 4,6 mm), fase gerak
metanol, panjang gelombang 297 nm, volume penyuntikan 20,0 µL
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
Tabel 8
Data Penetapan Kadar Tokoferol dalam Sampel Santan dari Daging Buah
Kelapa Kopyor
Luas puncak (A) Konsentrasi (C)
(ìV/s) (ìg/mL)
6421 6,44 6797 6,84 6308 6,32
C rata – rata = 6,53
Kondisi : Kolom fase terbalik C18 Kromasil™ (25 cm x 4,6 mm), fase gerak
metanol, panjang gelombang 297 nm, volume penyuntikan 20,0 µL
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
LAMPIRAN
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
Lampiran 1
Cara Memperoleh Persamaan Garis Linier
Persamaan garis y = a + bx
Untuk memperoleh nilai a dan b digunakan kuadrat terkecil (least square)
Linearitas ditentukan berdasarkan nilai koefisien korelasi (r)
22
2
xixiN
yixixiyia
22
.
xixiN
yixiyixiNb
2222 .
yyNxxN
yxxyNr
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
Lampiran 2
Cara Perhitungan Simpangan Baku dan Koefisien Variasi
Rata-rata : n
xx
Simpangan Baku : 1
1
2
n
xxiSB
n
i
Koefisien Variasi : %100
x
SBKV
Contoh :
Hasil uji presisi standar tokoferol 5,3 g/mL :
Konsentrasi rata-rata ( x
) = 5,39 g/mL
SB = 0,0379
KV = %100 5,39
0,0379 = 0,703%
16
5,3931 - 5,4023.....5,3931 - 5,3391 22
SB
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
b
xySLOD /3
b
xySLOQ /10
26
30115,95-30212....5351,38-5388 22
Lampiran 3
Cara Perhitungan Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi
Batas deteksi :
Batas kuantitasi :
Contoh :
Persamaan kurva kalibrasi tokoferol : y = 398,466 + 934,51x
S(y/x) =
= 121,22
Batas deteksi tokoferol : LOD =
Batas kuantitasi tokoferol : LOQ =
2
/2
n
yiyxyS
µg/mL 0,3851,934
22,1213
µg/mL 1,2951,934
22,12110
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
Lampiran 4
Cara Perhitungan Uji Perolehan Kembali
Rumus :
% Perolehan kembali = Konsentrasi pengukuran (c’) x 100%
Konsentrasi sebenarnya (c)
Keterangan :
c’ = Konsentrasi pengukuran didapat dari nilai luas puncak (V/s) yang
dimasukkan ke dalam persamaan kurva kalibrasi.
C = Konsentrasi sebenarnya merupakan konsentrasi standar tokoferol yang
ditambahkan ke dalam sampel.
Contoh :
Untuk uji perolehan kembali pada konsentrasi 5,02 g/mL didapat luas
puncak sebesar 5117, kemudian luas puncak tersebut dimasukkan ke dalam
persamaan kurva kalibrasi dan didapatkan konsentrasi sebesar 5,04 g/mL.
Jadi uji perolehan kembalinya adalah :
% Perolehan kembali = 5,04 x 100%
5,02
% Perolehan kembali = 100,58%
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010
Lampiran 5
Sertifikat Analisis Tokoferol
Analisis total..., Amitri Inggardiayu HP, FMIPA UI, 2010