pengaruh larutan nikotin terhadap penurunan kadar deoxypiridinoline serum pada...
Post on 23-Nov-2020
5 Views
Preview:
TRANSCRIPT
PENGARUH LARUTAN NIKOTIN TERHADAP PENURUNAN
KADAR DEOXYPIRIDINOLINE SERUM PADA TIKUS MODEL
OSTEOPOROSIS
TUGAS AKHIR
Untuk Memenuhi Persyaratan
Memperoleh Gelar Sarjana Kedokteran
Oleh:
Yesi Amelia
145070101111042
PROGRAM STUDI KEDOKTERAN
FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS BRAWIJAYA
MALANG
2017
DAFTAR ISI
Halaman
Judul ............................................................................................................... i
LembarPengesahan ....................................................................................... ii
Kata Pengantar ............................................................................................... iii
Abstrak ........................................................................................................... v
Abstract .......................................................................................................... vi
DaftarIsi .......................................................................................................... vii
DaftarGambar ................................................................................................. x
DaftarTabel ..................................................................................................... xi
DaftarSingkatan .............................................................................................. xii
BAB 1 PENDAHULUAN .................................................................................. 1
1.1 Latar Belakang................................................................................. 1
1.2 Rumusan Masalah ........................................................................... 3
1.3 Tujuan Penelitian ............................................................................. 3
1.3.1 Tujuan Umum ........................................................................ 3
1.3.2 Tujuan Khusus ....................................................................... 3
1.4 Manfaat Penelitian ........................................................................... 4
1.4.1 Manfaat Akademik ................................................................. 4
1.4.2 Manfaat Praktis ...................................................................... 4
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA.......................................................................... 5
2.1 StrukturTulang ................................................................................ 5
2.1.1 Fisiologi Tulang ..................................................................... 6
2.2 Osteoporosis .................................................................................. 8
2.2.1 Definisi Osteoporosis ............................................................. 8
2.2.2 Etiologi Osteoporosis ............................................................. 8
2.2.3 Peran Osteoblas dan Osteoklas pada Osteoporosis .............. 9
2.3 Nikotin ............................................................................................ 9
2.3.1 Nikotin Meningkatkan Aktivitas Osteoblas ............................. 10
2.3.2 Nikotin Menghambat Aktivitas Osteoklas ............................... 11
2.4 Kadar Deoxypiridinoline .................................................................. 12
2.5 Tikus sebagai Replikasi .................................................................. 12
2.5.1 Deskripsi Tikus Putih ............................................................. 12
2.5.2 Konversi Umur Tikus Putih .................................................... 13
2.5.3 Tikus Model Osteoporosis ..................................................... 15
2.5.3.1 Prosedur Bilateral OvariektomipadaTikus .................. 15
BAB 3 KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN ....................... 17
3.1 Kerangka Konsep ............................................................................ 17
3.2 Hipotesis Penelitian ......................................................................... 18
BAB 4 METODE PENELITIAN ........................................................................ 19
4.1 Rancangan Penelitian ..................................................................... 19
4.2 Populasi dan Replikasi Penelitian ................................................... 19
4.2.1 Populasi Target ..................................................................... 19
4.2.2 Replikasi Penelitian ............................................................... 19
4.2.2.1 Kriteria Inklusi ............................................................. 19
4.2.2.2 Kriteria Ekslusi............................................................ 20
4.2.3 Pembagian Kelompok Replikasi ............................................ 20
4.2.4 Penentuan Besar Replikasi .................................................... 20
4.3 Tempat dan Waktu Penelitian ......................................................... 21
4.4 Variabel Penelitian .......................................................................... 21
4.4.1 Variabel Bebas ...................................................................... 21
4.4.2 Variabel Terikat ..................................................................... 21
4.5 Definisi Operasional ........................................................................ 22
4.6 Bahan dan Alat/Instrumen Penelitian .............................................. 23
4.6.1 Alat dan Bahan untuk Perawatan Hewan Coba ..................... 23
4.6.2 Pengenceran dan Pemberian Larutan Nikotin ........................ 23
4.6.3 Alat dan Bahan untuk Perlakuan Ovariektomi ........................ 23
4.6.4 Alat dan Bahan untuk Pembedahan Hewan Coba ................. 23
4.6.5 Penghitungan Kadar Deoxypiridinoline Serum dengan
ELISA Kit ............................................................................... 24
4.7 Prosedur Penelitian ........................................................................ 24
4.7.1 PerawatanTikus ..................................................................... 24
4.7.2 Prosedur Ovariektomi ............................................................ 24
4.7.3 Pemberian Larutan Nikotin .................................................... 24
4.7.4 Pembedahan Tikus ................................................................ 25
4.7.5 Pengukuran Kadar Deoxypiridinoline Serum .......................... 25
4.8 Prosedur Pengumpulan dan Analisis Data ...................................... 25
4.9 Bagan Alur Penelitian ..................................................................... 26
BAB 5 HASIL PENELITIAN DAN ANALISIS DATA ......................................... 27
5.1 Hasil Penelitian ............................................................................... 27
5.2 Analisis Data ................................................................................... 29
5.2.1 Uji Normalitas Data ................................................................ 29
5.2.2 Uji Homogenitas Data ............................................................ 29
5.2.3 Uji One Way ANOVA ............................................................. 29
5.2.4 Uji Post Hoc Tukey HSD ........................................................ 30
5.2.5 Uji Regresi Linier ................................................................... 31
BAB 6 PEMBAHASAN .................................................................................... 32
BAB 7 KESIMPULAN DAN SARAN ................................................................ 38
7.1 Kesimpulan ..................................................................................... 38
7.2 Saran .............................................................................................. 39
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................ 40
LAMPIRAN ..................................................................................................... 45
v
ABSTRAK
Amelia, Yesi. 2017. Pengaruh Larutan Nikotin Terhadap Penurunan Kadar Deoxypiridinoline Serum pada Tikus Model Osteoporosis. Tugas Akhir, Program Studi Kedokteran, Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya. Pembimbing: (1) dr. Panji Sananta, Sp.OT, M.Ked, (2) dr. Asri Prameswari, Sp.PD.
Nikotin adalah zat kimia yang banyak dihasilkan dari tanaman tembakau atau diproduksi secara sintetis. Dalam penelitian invitro nikotin dapat meningkatkan aktivitas osteoblas dan menurunkan aktivitas osteoklas. Pada wanita menopause kadar estrogen cenderung menurun sehingga beresiko mengalami osteoporosis. Osteoporosis sendiri terjadi karena ketidakseimbangan aktivitas osteoblas dan osteoklas. Penelitian ini dilakukan untuk melihat pengaruh pemberian larutan nikotin terhadap kadar deoxypiridinoline (DPD) serum sebagai marker resorpsi tulang pada tikus wistar betina (Rattus novergicus) model osteoporosis. Penelitian ini adalah penelitian true experimental (eksperimental murni) di laboratorium secara in vivo. Penelitian dilakukan dengan desain post test only pada kelompok perlakuan dan kontrol. Pengelompokan objek eksperimen dilakukan dengan desain randomisasi sederhana. Tikus wistar yang digunakan berjumlah 25 ekor dan dibagi menjadi 5 kelompok, kelompok 1 sebagai kontrol negatif, kelompok kedua sebagai kontrol positif yang hanya dilakukan bilateral oovorektomi dan 3 kelompok selanjutnya sebagai kelompok perlakuan juga dilakukan bilateral oovorektomi serta pemberian dosis nikotin yang berbeda. Kelompok perlakuan 1 diberi dosis nikotin sebesar 0,25 mg/kgBB, kelompok perlakuan 2 dengan dosis nikotin 0,5 mg/kgBB dan kelompok perlakuan 3 dosis nikotin 0,75mg/kgBB. Pemberian nikotin dilakukan selama 5 minggu. Hasil penelitian menunjukkan penurunan kadar DPD serum sebesar 19,2% pada uji regresi linier dan tidak memiliki perbedaan yang bermakna pada tiap kelompok perlakuan (Post Hoc Tukey HSD, p > 0,05). Oleh karena itu dapat disimpulkan bahwa pemberian larutan nikotin terhadap kadar DPD serum tidak memiliki pengaruh yang signifikan pada tikus model osteoporosis.
Kata kunci : osteoporosis, larutan nikotin, kadar deoxypiridinoline serum
vi
ABSTRACT
Amelia, Yesi. 2017. The Effect of Nicotine Solution on Decrease Serum Deoxypiridinoline Levels in Osteoporotic Mice. Final Assignment, Medical Program, Faculty of Medicine, Universitas Brawijaya. Supervisors: (1) dr. Panji Sananta, Sp.OT, M.Ked, (2) dr. Asri Prameswari, Sp.PD.
Nicotine is a chemical substance that produced by tobacco or synthectically. In an invitro research nicotine is able to increase osteoblasts activity and decrease osteoclasts activity. In postmenopausal women, the level of estrogen tends to be decreased, giving risk of developing osteoporosis. Osteoporosis itself occurs because of the imbalance between osteoblasts and osteoclasts activity. This research have been done to look for the effect of nicotine solution on levels of serum deoxypiridinoline (DPD) as a marker of bone resorbtion in osteoporotic Rattus novergicus. This true experimental research was conducted in laboratory in vivo and was using post test only design with experimental and control groups. The experimental groups’s subjects were randomized using simple randomization design. The amount of mice that was used in this research are 25 mice, divided into 5 groups; first group as negative control, second group as positive control, that only bilateral oovorectomied and the rest of the group are treatment groups that also oovariectomied and given different doses of nicotine. The first treatment group are given the nicotine 0.25 mg/kgBB, the second treatment group are given the nicotine 0.5 mg/kgBB and the third treatment group are given nicotine 0.75 mg/kgBB. The nicotine was given for 5 weeks. The result of the research showing decreasing DPD serum levels as much as 19.2% on linear regression test and have no significant differences on each treatment group (Post Hoc Tukey HSD, p >0.05). So it can be concluded that the nicotine solution effect on serum DPD levels has no significant effect on osteoporotic mice.
Key words: osteoporotic, nicotine solutions, serum deoxypiridinoline levels
1
BAB 1
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Osteoporosis adalah kelainan sistemik pada tulang yang ditandai dengan
rendahnya massa tulang (kepadatan tulang) dan perubahan mikroarsitektur
jaringan tulang sehingga resiko fraktur menjadi meningkat (Gibney, 2009). Pada
osteoporosis terjadi ketidakseimbangan antara aktivitas osteoklas (peresorpsi)
dan osteoblast (pembentuk tulang). Ketidakseimbangan ini dapat meningkatkan
kerapuhan pada tulang (Burge,et al., 2007). Menurut WHO (2012), osteoporosis
menduduki peringkat kedua di bawah penyakit jantung sebagai masalah
kesehatan utama dunia. Berdasarkan data International Osteoporosis Foundation
menunjukkan bahwa lebih dari 30% wanita diseluruh dunia mengalami resiko
patah tulang akibat osteoporosis, bahkan mendekati 40%. Sedangkan pada pria,
resiko terkena osteoporosis lebih rendah yaitu 13%. Kejadian patah tulang
(fraktur) akibat osteoporosis diseluruh dunia mencapai angka 1,7 juta orang dan
diperkirakan angka ini akan terus meningkat hingga mencapai 6,3 juta orang
pada tahun 2050. Di Indonesia osteoporosis merupakan salah satu penyakit tidak
menular yang memiliki tingkat fatalitas,disabilitas dan morbiditas yang tinggi
(Depkes RI, 2007).
Beberapa obat osteoporosis saat ini digunakan sebagai terapi untuk
osteoporosis seperti terapi hormon estrogen konvensional, biofosfonat (misalnya
alendronate, ibandronate, risedronate, zoledronic acid), selective estrogen
receptor modulators (misalnya raloxifene), paratiroid hormon (misalnya
teriparatide), dan penghambat ligand RANK (misalnya denosumab). Semua obat
ini telah menunjukkan efeknya dalam pencegahan osteoporosis dan fraktur
2
terkait osteoporosis, terutama fraktur vertebra pada wanita pascamenopause
(Lee WL,et al., 2013). Namun terapi ini juga memiliki resiko efek samping jika
digunakan dalam jangka waktu yang lama seperti pada penggunaan oral
biofosfonat akan menimbulkan gangguan gastrointestinal seperti sakit perut,
dispepsia, diare, sembelit, atau reaksi esofagus parah seperti esofagitis, erosi
dan ulserasi. Kemudian biofosfonat juga memiliki efek samping osteonekrosis
pada rahang (Sweetman, 2009). Osteoporosis juga memiliki implikasi yang
penting pada keadaan sosial dan ekonomi. Pengobatan untuk kasus fraktur
osteoporosis terbilang besar. Pada tahun 2000 di Indonesia dengan kasus fraktur
akibat osteoporosis sebesar 227.850 dibutuhkan biaya sebesar $2,7 milyar, dan
diperkirakan pada tahun 2020 dengan kasus yang sama dibutuhkan dana $3,8
milyar. Pada tahun 2050 diperkirakan Indonesia akan membutuhkan dana yang
lebih besar lagi hanya untuk menangani kasus osteoporosis saja. Oleh karena itu
dibutuhkan suatu alternatif terapi yang baru untuk osteoposis yang bisa dijadikan
solusi untuk permasalahan diatas (Ichramsyah, et al., 2005).
Nikotin merupakan suatu jenis senyawa kimia yang termasuk ke dalam
golongan alkaloid dengan nama kimia 3-(1-metil-2-pirolidil) piridin (Adietomo,et
al,2013). Saat ini nikotin sangat mudah didapatkan karena terdapat banyak
tanaman tembakau di Indonesia. Beberapa literatur menyatakan bahwa nikotin
dengan dosis yang tepat dapat digunakan sebagai terapi osteoporosis. Nikotin
memiliki potensi yang besar sebagai terapi pada pasien osteoporosis dengan
meningkatkan aktivitas dan proliferasi osteoblas, menghambat resorpsi tulang
oleh osteoklas, serta meningkatkan kadar insulin dan antioksidan yang penting
untuk menjaga kepadatan massa tulang (Tanaka,et al., 2013).
3
Matriks tulang organik terdiri dari 90% kolagen tipe I dalam struktur
protein triple-helical. Kolagen tipe I pada tulang adalah hubungan silang (cross-
link) oleh senyawa spesifik kolagen. Pada manusia cross-link ini adalah turunan
dari hydroxypyridinium: pyridinoline (PYD) dan deoxypiridinoline (DPD)
(Fassbender,et al., 2009). Kadar DPD sebagai marker resorpsi tulang dapat
digunakan untuk menentukan efek terapi dari nikotin pada tulang (Norazlina,et
al,2009). Saat ini belum banyak diteliti mengenai potensi nikotin sebagai terapi
osteoporosis, oleh karena itu, pada penelitian ini penulis ingin mengetahui
pengaruh pemberian larutan nikotin terhadap penurunan kadar deoxypiridinoline
(DPD) serum sebagai terapi osteoporosis.
1.2 Rumusan Masalah
Bagaimana pengaruh pemberian larutan nikotin terhadap penurunan
kadar deoxypiridinoline serum pada tikus model osteoporosis?
1.3 Tujuan Penelitian
1.3.1 Tujuan Umum
Mengetahui pengaruh pemberian larutan nikotin terhadap penurunan
kadar deoxypiridinoline serum pada tikus model osteoporosis.
1.3.2 Tujuan Khusus
Mengetahui hubungan dosis larutan nikotin dengan kadar
deoxypiridinoline serum pada tikus model osteoporosis.
4
1.4 Manfaat Penelitian
1.4.1 Manfaat Akademik
Penelitian ini diharapkan dapat dijadikan sebagai dasar teori untuk
menambah ilmu pengetahuan dan dapat dikembangkan lagi pada penelitian
selanjutnya dalam bidang kesehatan, khususnya tentang pengaruh larutan
nikotin terhadap kadar deoxypiridinoline serum pada tikus model osteoporosis.
1.4.2 Manfaat Praktis
Penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi kepada masyarakat
mengenai pengaruh larutan nikotin sebagai terapi untuk osteoporosis.
5
5
BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Struktur Tulang
Tulang adalah substansi paling keras pada tubuh manusia yang terdiri dari
banyak selserta materi ekstraseluler yang keras. Tulang terdiri dari 20-40%
komponen organik yaitu kolagen, 50-70%komponen anorganik yaitu mineral, 5-10%
air dan <3% lipid. Mineral utama dari komposisi intraselular adalah kalsium dan
fosfat yang berfungsi untuk menyediakan rigiditas mekanik dan kekuatan load-
bearing tulang, sementara matriks organik menyediakan elastisitas daan fleksibilitas
tulang.Matriks ekstraselular tulang terdiri atas 85-90% protein kolagen, terutama
kolagen tipe I (Guyton dan Hall, 2006).Kolagen tipe I pada tulang adalah hubungan
silang (cross-link) oleh senyawa spesifik kolagen. Pada manusia cross-link ini adalah
turunan dari hydroxypiridinium: pyridinoline (PYD) dan deoxypiridinoline (DPD)
(Fassbender, et al., 2009). Keseimbangan yang baik antara kedua komponen ini
dibutuhkan agar tulangdapat menahan stres dan mencegah fraktur.
Ketidakseimbangan kedua komponen tersebut dapat mengakibatkan kerusakan
tulang dan mengakibatkan penurunan kekuatan tulang (Rogers, 2011)
Orang dewasa memiliki dua tipe tulang yaitu : tulang kortikal (compact) dan
tulang trabekular (spongy atau cancellous). Jumlah komponen tulang kortikal adalah
80% dan tulang trabecular adalah 20%. Tulang kortikal adalah bagian yang tersusun
rapat dan merupakan bagian yang kuat sehingga memenuhi sebagian besar struktur
tulang dan berfungsi sebagai protektor tulang. Tulang trabekular adalah bagian yang
6
berbentuk seperti spon atau sarang lebah, merupakan bagian yang kurang kuat dan
memiliki luas permukaan yang lebih besar sehingga memungkinkan untuk menjadi
metabolik aktif.Hal ini menyebabkan tulang trabecular lebih cepat mengalami proses
remodelling daripada tulang kortikal dan memiliki efek yang lebih cepat terpengaruh
oleh kondisi yang terkait dengan peningkatan pergantian tulang dibandingkan
dengan tulang kortikal. Oleh karena itu tulang trabekular rentan untuk mengalami
kehilangan massa tulang (Walsh, 2014).
Ada empat jenis dari sel-sel tulang utama yaitu: osteoblas, liningcells,
osteosit dan osteoklas. Osteoblas merupakan sel yang berasal dari selinduk
mesenchymal atau yang disebut dengan osteoblastic stromal cell yang terletak di
sum-sum tulang.Sel osteoblas berperan pada modulasi pembentukan tulang baru
(formasi tulang).Lining cells merupakan sel osteoblas yang sedang istirahat atau
tidak bekerja untuk sistem pembentukan tulang. Osteosit adalah osteoblas yang
tertanam pada tulang selama proses pembentukan dan mineralisasi tulang. Sel
osteoklas merupakan sel yang berperan pada proses resorpsi tulang (Geusens, et
al., 2004).
2.1.1 Fisiologi Tulang
Sel-sel tulang mengalamimodelling danremodellingyang memungkinkan
tulang untuk tumbuh dan beradaptasi sesuai kebutuhan. Proses modelling terjadi
ketika resorpsi tulang dan pembentukan tulang terjadipada permukaan yang terpisah
(pembentukan dan resorpsi tidak digabungkan). Contoh dari proses ini adalah
selama peningkatan panjang dan diameter tulang panjang. Remodellingadalah
7
proses penggantian jaringan lama dengan jaringan tulang baru, terutama terjadi
padakerangka dewasa untuk mempertahankan massa tulang (IOF,2017) Proses
remodelling melibatkan pembentukan tulang dan resorpsi tulang yangsaling
berkaitan. Remodelling memungkinkan perubahan arsitektur tulang dalam
menanggapi faktor-faktor seperti beban mekanis, tapi tanpa merubah ukuran
kerangka keseluruhan. Dalam kerangka dewasa, 5-10% dari tulang diremodeling
setiap tahun. Remodelling tidak terjadi merata di seluruh kerangka, 80% dari
renovasi terjadi di tulang trabekular (David, 2011).
Fisiologi remodeling tulang diawali dengan sinyal dari sel lining atau osteosit
yang dipicu oleh stres, microfracture, sistem biofeedback, dan penyakit tertentu yang
berpotensi serta pengobatannya. Sinyal dari liningcell melepaskan berbagai sitokin
dan faktor pertumbuhan. Macrophage Colony-Stimulating Factor (M-CSF) dihasilkan
oleh sel stroma untukproliferasi, kelangsungan hidup, dan diferensiasi dari prekursor
osteoklas. Pada tahap kedua prekursor osteoblas menghasilkan RANK-Ligand
(receptoractivator of nuclear factor kappa B ligand) untuk berikatan dengan
reseptoryang ada pada permukaan prekursor osteoklas yaitu RANK, setelah itu akan
terbentuk sel osteoklas yang matang dan aktif untuk meresorpsi tulang. Tahap
ketiga yaitu osteoklas yang berikatan dengan matriks tulang melalui reseptor integrin
pada membran osteoklas yang menghubungkan dengan matriks peptida
tulang(Tanaka, et al.,2013).
Setelah tulang telah selesai diresorpsi dan terbentuk rongga pada tulang,
pada tahap keempat adalah dilepaskannyasitokin-sitokin dan faktor-faktor
pertumbuhan yang merupakan osteoblas dewasa pertama dari mesenchymal stem
8
cells yang kemudian menstimulasi pembentukan sel osteoblas. Osteoblas dewasa
memproduksi osteoprotegerin (OPG) yang mengikat RANK-L, sehingga ikatan
antara RANK-L dan RANK pada osteoklas terganggu akibatnya osteoklas
mengalami apoptosis sehingga resorpsi tulang berhenti. Pada tahap kelima,
pembentukan tulang dibagi menjadi dua tahap yaitu, pertama osteoblas mengisi
rongga yang telah diresorpsi dengan osteoid dan yang kedua terjadi proses
mineralisasi. Tahap keenam adalah ketika pembentukan tulang selesai, osteoblas
dewasa mengalami apoptosis atau berubah menjadi lapisan sel atau osteosit(Clarke,
2008).
2.2 Osteoporosis
2.2.1 Definisi Osteoporosis
Osteoporosis adalah gangguan metabolisme tulang dimana terjadi
ketidakseimbangan kerja osteoblas (sel pembangun) dan osteoklas (sel
pembongkar) sehingga kepadatan tulang menurun disertai rusaknya mikroarsitektur
tulang yang menyebabkan tulang menjadi mudah mengalami fraktur
(Infodatin,2015).Menurut kriteria dari WHO, osteoporosis didefinisikan apabila Bone
Mass Density [BMD] pada -2,5 standar deviasi atau dibawahnya [T-score <-2,5
SD].Osteoporosis merupakan penyakit yang kurang cepat untuk disadari (silent
disease) sehingga diagnosis dan penanganannya sering terlambat. Keterlambatan
diagnosis dan penanganan dari osteoporosis menyebabkan komplikasi yang serius,
yaitu fraktur dan perubahan postur tubuh pasien (kifosis) yang dapat menurunkan
9
kualitas hidup dan meningkatkan disabilitas pada pasien osteoporosis (Assuntaet
al.,2013).
2.2.2 Etiologi Osteoporosis
Mekanisme dasar terjadinya osteoporosis adalah pertumbuhan dan
perkembangan massa tulang yang buruk dan pengeroposan tulang pada periode
setelah puncak massa tulang tercapai. Kedua faktor ini dipengaruhi oleh faktor
lingkungan dan genetik. Sekitar dua pertiga resiko fraktur pada wanita
pascamenopause ditentukan oleh puncak massa tulang pada saat pramenopause.
Sekitar setengah dari massa tulang terakumulasi selama masa pubertas. Hal ini
terkait dengan peningkatan kadar hormon seks dan hampir selesai dengan
penutupan end plate. Hanya ada akumulasi mineral tulang minimal selama 5 sampai
15 tahun berikutnya (sceletal consolidation). Puncak massa tulang dicapai sekitar
umur 30. Studi pada pasangan kembar ibu dan anak menunjukkan bahwa 40%
sampai 80% variabilitas pada massa tulang ditentukan oleh faktor genetik. Gen yang
terlibat dalam osteoporosis termasuk reseptor estrogen, transformasi growth-β,dan
apolipoprotein E dan kolagen.Pengeroposan tulangterjadi sebaliknya, sebagian
besar ditentukan oleh faktor lingkungan (gizi, kebiasaan, dan obat-
obatan)(Skugor,2010).
2.2.3 Peran Osteoblas dan Osteoklas Pada Osteoporosis
Osteoporosis terjadi ketika metabolisme tulang seseorang terganggu.
Metabolisme tulang secara normal adalah adanya keseimbangan antara aktivitas
osteoklas dalam mengabsorbsi tulang dan aktivitas osteoblas dalam mengisi rongga
10
tulang yang telah diabsorbsi oleh osteoklas. Seseorang beresiko menderita
osteoporosis apabila aktivitas osteoklas lebih tinggi daripada osteoblas, sehingga
osteoblas tidak mampu mencukupi atau mengisi rongga tulang yang telah
diabsorpsi(Raisz,2005).
2.3 Nikotin
Nikotin merupakan suatu jenis senyawa kimia yang termasuk ke dalam
golongan alkaloid dengan nama kimia 3-(1-metil-2-pirolidil) piridin(Adietomo et
al.,2013).Nikotin sangat mudah didapatkan karena banyaknya tanaman tembakau di
Indonesia. Selain itu, nikotin juga terdapat dalam sayur-sayuran seperti kentang,
kembang kol, terong dan tomat dengan kadar yang berbeda-beda (anonim,2012).
2.3.1 Nikotin Meningkatkan Aktivitas Osteoblas
Nikotin dapat meningkatkan aktivitas, proliferasi, dan pelepasan sitokin dari
osteoblas. Stimulasi α4nAChR pada osteoblas dapat meningkatkan proliferasi
osteoblas (Daffner,2012). Aktivasi reseptor α3 dan α5 nACH akan meningkatkan
bone morphogenic protein-2(protein yang memiliki peran penting dalam regulasi
induksi tulang), dan pemeliharaan dan perbaikan selama penyembuhan fraktur pada
model tikus (Rothem,2011).Administrasi nikotin juga meningkatkan deposisi kalsium
dan alkaline fosfatase yang mendorong mineralisasi tulang (Daffner,2012).
Administrasi nikotin juga meningkatkan calcitonin gene related peptide
[CGRP](Dussor,et al.,2003). CGRP memiliki efek pleiotropik pada sel-sel tulang.
CGRP menghambat maturasi sel osteoklas dan resorpsi tulang, dan anabolik untuk
11
sel osteoblas. Terdapat 2 jenis CFRP; CGRP-α and CGRP-β. CGRP-α dapat
meningkatkan proliferasi dari osteoblas dan mencegah pengeroposan tulang pada
tikus yang telah diovariektomi. CGRP-α dapat meningkatkan massa kepadatan
tulang(SamplAe,2011).
Dalam studi yang telah dilakukan oleh Park, J., Kang, J. W., dan Lee, S. M.
(2013) penggunaan dosis nikotin 1 mg/KgBB pada mencit dapat menurunkan ROS.
Maka pada penelitian ini digunakan dosis setengahnya karena ekstrapolasi dari
dosis mencit ke dosis tikus (Freireich, 1966).
2.3.2 Nikotin Menghambat Aktivitas Osteoklas
Nikotin dapat menurunkan aktivitas osteoklas dan resorpsi tulang dengan
mekanisme kerja di nicotine acetylcholine receptor (nAChR) yang akan menurunkan
ekspresi RANK-L, sehingga mencegah terjadinya ikatan kompleks antara RANK-L
dengan RANK. Terganggunya ikatan RANK-L dengan RANK akan menghambat
diferensiasi sel prekursor osteoklas dan menghambat aktivasi osteoklas sehingga
proses resorpsi tulang menurun(Tanaka, et al., 2013). Aktivasi reseptor nikotin dapat
menghambat diferensiasi sel prekursor osteoklas dan menurunkan aktivasi
osteoklas dapat dilihat padagambar 2.1.
Gambar 2.1 Jalur pensinyalan RANK: protein transmembran tipe I RANK pada permukaan sel
dalam hubungannya dengan fakto
Nikotin menurunkan ekspresi
dengan RANK yang kemudian
aktivasi osteoklas.
2.4 Kadar Deoxypiridinoline
Proses metabolisme tul
dengan remodelling tulang. Termasuk didalamnya adalah proses degradasi yaitu
resorpsi tulang oleh ost
Matriks tulang organik sekitar 90% terdiri dari kolagen tipe I, yaitu
protein.Kolagen tipe I dihubungkan secara silang (
spesifik yang memberikan kekuatan pada tulang.
mature adalah pyridinium
Deoxypyridinoline (DPD) adalah bagian kecil dari struktur amino siklik yang
menghubungkan rantai peptide molekul kolagen
resorpsi tulang karena merupakan
12
Jalur pensinyalan RANK: protein transmembran tipe I RANK pada permukaan sel
dalam hubungannya dengan faktor-faktor sitoplasmik yang menyangkut transduksi sinyal RANK.
ekspresi RANK-L yang akan mencegah terjadinya ikatan kompleks antara RANK
n RANK yang kemudianmenghambat diferensiasi sel prekursor osteoklas dan
Deoxypiridinoline
Proses metabolisme tulang terjadi secara terus menerus yang disebut
dengan remodelling tulang. Termasuk didalamnya adalah proses degradasi yaitu
resorpsi tulang oleh osteoklas serta proses pembentukan tulang oleh ost
Matriks tulang organik sekitar 90% terdiri dari kolagen tipe I, yaitu
.Kolagen tipe I dihubungkan secara silang (cross-linked) oleh molekul
spesifik yang memberikan kekuatan pada tulang.Cross-links dari kolagen tipe I yang
mature adalah pyridinium cross-link, pyridinoline (PYD) dan deoxypiridinoline (DPD).
oxypyridinoline (DPD) adalah bagian kecil dari struktur amino siklik yang
menghubungkan rantai peptide molekul kolagen.DPD berfungsi sebagai i
karena merupakan fragmen kolagen tulang yang diproduksi oleh
Jalur pensinyalan RANK: protein transmembran tipe I RANK pada permukaan sel
faktor sitoplasmik yang menyangkut transduksi sinyal RANK.
akan mencegah terjadinya ikatan kompleks antara RANK-L
menghambat diferensiasi sel prekursor osteoklas dan menghambat
menerus yang disebut
dengan remodelling tulang. Termasuk didalamnya adalah proses degradasi yaitu
oklas serta proses pembentukan tulang oleh osteoblas.
Matriks tulang organik sekitar 90% terdiri dari kolagen tipe I, yaitu triple helical
) oleh molekul
dari kolagen tipe I yang
, pyridinoline (PYD) dan deoxypiridinoline (DPD).
oxypyridinoline (DPD) adalah bagian kecil dari struktur amino siklik yang
.DPD berfungsi sebagai indikator
fragmen kolagen tulang yang diproduksi oleh
13
aktivitas osteoklas (Thomas, 2012).DPD dibentuk oleh enzim lysl oxidase pada
asam amino lisin. DPD dilepaskan ke sirkulasi selama proses resorpsi tulang
(Hesley,et al,1998).Aktifitas osteoklas dan osteoblas pada tulang dapat dinilai
melalui biomarker resorpsi dan formasi tulang dan dalam beberapa kondisi dapat
digunakan sebagai pengganti pemeriksaan histologis tulang. Biomarker tulang ini
juga bisa digunakan untuk menentukan efek dari agen terapeutik pada beberapa
pasien dengan osteoporosis (Singer dan Eyre, 2008).
2.4 Tikus sebagai Replikasi
2.4.1 Deskripsi Tikus Putih
Hewan percobaan atau hewan laboratorium adalah hewan yang sengaja
dipelihara sebagai hewan model pengujian untuk mempelajari dan mengembangkan
ilmu pengetahuan dari berbagai macam bidang dalam skala penelitian
laboratoris.Tikus putih adalah salah satu hewan yang sering digunakan sebagai
hewan coba dalam suatu penelitian.Hal ini karena tikus putih mudah diperoleh dalam
jumlah banyak, mempunyai respon yang cepat dan memberikan gambaran secara
ilmiah yang mungkin terjadi pada manusia, selain itu harganya yang relatif murah
dijadikan sebagai salah satu pertimbangan dalam pemilihan hewan coba (Sihombing
dan Tuminah,2011). Tikus galur wistar adalah salah satu galur tikus putih yang
sering digunakan pada penelitian sebagai hewan percobaan.
2.4.2 Konversi Umur Tikus Putih
Informasi konversi umur pada hewan coba adalah hal penting dalam suatu
penelitian agar hasilnya bisa diaplikasikan pada manusia.Jika dibandingkan dengan
14
manusia pada masa mudanya tikus memiliki pertumbuhan yang pesat dan waktu
hidup yang lebih singkat.Tikus berkembang sangat cepat pada masa muda dan
mulai matang saat umur 6 minggu.Hal ini berbeda dengan manusia yang
meengalami pertumbuhan yang lambat dan pubertas kira-kira pada usia 12 sampai
13 tahun. Pada masa dewasa setiap bulan umur tikus setara dengan 2,5 tahun umur
manusia.Tikus betina menopause pada kisaran umur 15-18 bulan dimana pada
manusia kira-kira terjadi pada umur 48-55 tahun.Tikus yang digunakan sebagai
hewan coba mempunyai waktu hidup 3 tahun dengan ekspektasi umur manusia
yaitu 70 tahun (Andrello et al., 2012). Hubungan antara umur tikus dalam bulan
dengan umur manusia dalam tahun pada fase dewasa dapat dilihat pada tabel 2.1
Tabel 2.1 Hubungan antara umur tikus dengan umur manusia pada fase dewasa
Umur tikus (bulan) Umur manusia (tahun)
6 18 12 30
18 45 24 60 30 75 36 90 42 105 45 113 48 120
(Andreollo,et al.,2012)
Beberapa tahun terakhir juga telah diteliti hubungan antara umur tikus dan
manusia yang menghubungan beberapa parameter yang yang mempengaruhi tikus
maupun manusia. Beberapa diantaranya adalah total waktu hidup, periode
menyusui, periode pra pubertas, periode remaja, fase dewasa dan masa tua. Hasil
15
analisis perbandingan umur tikus dan manusia dengan fase hidup yang sama dapat
dilihat pada tabel 2.2.
Tabel 2.2Konversi Umur Tikus dan Manusia Berdasarkan Fase Hidup yang Sama
Parameter Perbandingan Umur
Tikus (hari) Manusia (tahun) Masa hidup 13,8 =1
Masa menyusui 42,4 =1 Masa pra remaja 3,3 =1
Masa remaja 10,5 =1 Fase dewasa 11,8 =1
Masa tua 17,1 =1 Rata-Rata 16,4 =1
(Andreollo, et al.,2012)
Penggunaan metode perbandingan umur tikus dan manusia tergantung dari
konteks yang akan dianalisis oleh peneliti, sehingga banyak metode yang
digunakan. Semua teknik merupakan metode yang relatif. Oleh karena itu para
peneliti secara umum menggunakan lebih dari satu metode untuk mendapatkan
informasi umur (Sengupta,2013).
2.5.3 Tikus Model Osteoporosis
Pemahaman osteoporosis pascamenopause terhambat oleh sulitnya
mempelajari penyakit yang dibatasi untuk manusia. Hal ini memungkinkan untuk
menggunakan model hewan coba untuk menilai terapi pada osteoporosis (Khajuria,
et al.,2012). Model hewan coba berperan penting dalam meningkatkan pengetahuan
tentang etiologi, patofisiologi, dan diagnosis, serta teknik pencegahan dan terapeutik
tentang osteoporosis. Saat ini tikus banyak digunakan sebagai model hewan coba
untuk memperlajari osteoporosis karena harganya murah, bisa tumbuh dengan
16
cepat, memiliki lifespan yang relatif pendek dan tersedia dalam jumlah banyak
(Lasota dan Danowska,2004).
Ada beberapa metode untuk mendapatkan pola osteoporosis standar, seperti
diet rendah kalsium, agonis LHRH atau ovariektomi. Metode ovariektomi dianggap
sebagai prosedur terbaik yang memberi model osteoporosis pada hewan coba
(Yamazaki dan Yamaguchi,1989). Ovariektomi sendiri bisa dilakukan dengan
berbagai cara.Pilihan prosedur bedah sangat penting, terutama jika menggunakan
hewan coba dalam jumlah yang banyak dalam waktu yang singkat.
2.5.3.1 Prosedur Bilateral Oovorektomi pada Tikus
Prosedur bilateral oovorektomi dilakukan menurut metode Ingle DJ dan Grith
JQ yang dimodifikasi yaitu tikus dianestesi dengan menggunakan Ketamin i.m dosis
40 mg/kgBB.Bulu abdomen dicukur kira-kira 1 cm garisan di atas ovarium, lalu
dilakukan sterilisasi menggunakan alkohol 70% dan betadine solution. Kemudian
dilakukan insisi transabdominal di atas uterus sepanjang 1,5-2 cm. Oviduk bagian
distal dan ovarium diligasi kemudian diangkat.Luka potongan diberi Basitrasin serbu
(Nebacetin). Prosedur yang sama dilakukan untuk ovarium kanan. Luka insisi dijahit
dengan catgut kemudian diolesi Betadine dan Nebacetin, lalu ditutup dengan kasa
steril. Kemudian diberikan Gentamisin i.m dengan dosis 60-80 mg/kgBB 1 kali
perhari selama 3 hari dan Novalgin i.m dengan dosis 0,3 ml selama 1 hari
(Raden,2011).
BAB 3
KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN
3.1 Kerangka Konsep
Nikotin
Tikus model osteoporosis
Nicotinic acetylcholine receptor (nAChr) Menekan ekspresi
RANK-L
Mencegah ikatan RANK-L dengan reseptor RANK
Menghambat aktivasi
osteoklas
Menghambat diferensiasi sel prekursor osteoklas
Penurunan resorpsi tulang
Penurunan kadar deoxypiridinoline
serum
Meningkatkan kerja osteoblas
Peningkatan kadar alkaline phospatase serum
Peningkatan kadar osteocalcin serum
Peningkatan kadar calcitonin serum
Keterangan gambar :
Variabel yang tidak diteliti
Variabel yang diteliti
Variabel yang tidak diteliti
Variabel yang diteliti
Larutan nikotin yang diberikan pada tikus model osteoporosis akan
bekerja di nicotine acetylcholine receptor (nAChR) yang akan meningkatkan kerja
osteoblas dan menekan ekspresi RANK-L, sehingga mencegah terjadinya ikatan
kompleks antara RANK-L dengan RANK. Terganggunya ikatan RANK-L dengan
RANK akan menghambat diferensiasi sel prekursor osteoklas dan menghambat
aktivasi osteoklas sehingga proses resorpsi tulang menurun. Hal ini dapat dinilai
dari kadar deoxypiridinoline (DPD) serum sebagai salah satu marker resorpsi
tulang.
3.2 Hipotesis Penelitian
Hipotesis dari penelitian ini adalah pemberian larutan nikotin dapat
menurunkan kadar deoxypiridinoline (DPD) serum sebagai penanda penurunan
aktivitas osteoklas sehingga bisa digunakan sebagai terapi osteoporosis.
17
BAB 4
METODE PENELITIAN
4.1 Rancangan Penelitian
Rancangan penelitian ini adalah penelitian true experimental (eksperimental
murni) di laboratorium secara in vivo. Penelitian dilakukan dengan desain post test
only pada kelompok perlakuan dan kontrol. Pengelompokan objek eksperimen
dilakukan dengan desain randomisasi sederhana.
4.2 Populasi dan Replikasi Penelitian
4.2.1 Populasi Target
Replikasi penelitian adalah tikus Wistar betina (Rattus norvegicus) berusia 3
bulan. Tikus diperoleh dengan pembelian dari Laboratorium Farmakologi Fakultas
Kedokteran Universitas Brawijaya.
4.2.2 Replikasi Penelitian
4.2.2.1 Kriteria Inklusi
1. Tikus putih galur wistar berjenis kelamin betina.
2. Usia 3 bulan, yang kemudian diaklimatisasi/diadaptasi selama satu
minggu. Usia tikus dikonfirmasi dengan catatan kelahiran tikus yang
didapat dari penjual.
3. Berat badan tikus 200-350 gram.
4. Tikus sehat dan aktif
4.2.2.2 Kriteria Eksklusi
1. Tikus yang mati dalam pemeliharaan penelitian.
2. Tikus yang tidak mau makan, tidak mau minum.
3. Tikus yang tampak sakit dan tidak aktif .
4. Tikus yang keluar dan hidup di luar kandang pemeliharaan.
5. Terdapat luka atau tanda radang pada tubuh tikus.
4.2.3 Pembagian Kelompok Replikasi
Replikasi dikelompokkan dengan menggunakan teknik randomisasi
sederhana pada tikus yang memenuhi kriteria inklusi dan tidak memenuhi kriteria
eksklusi penelitian. Masing masing tikus diberi nomor identitas. Lalu nomor-nomor
tersebut ditulis ulang di beberapa kertas. Kemudian kertas dikocok dan lima kertas
yang dijatuhkan dicocokkan dengan nomor tikus untuk menentukan pembagian
perlakuan pada sampel per kelompok.
4.2.4 Penentuan Besar Replikasi
Penentuan besar sampel untuk penelitian eksperimental dengan rancangan
randomisasi kompleks menggunakan rumus Federer:
(t-1)(r-1) ≥ 15
t = banyaknya kelompok perlakuan
r = jumlah ulangan
Penelitian ini menggunakan lima kelompok perlakuan (p=5), sehingga jumlah
pengulangan (jumlah sampel) yang dibutuhkan adalah :
(t-1)(r-1) ≥ 15
(5-1) (r-1) ≥ 15;
r-1 ≥ 15:4;
r = 3.75 + 1 = 4.75
Dari perhitungan tersebut maka dibutuhkan jumlah ulangan (sample size)
sebanyak kurang lebih 5 ekor tikus untuk tiap kelompok perlakuan, sehingga jumlah
tikus yang dibutuhkan untuk 5 perlakuan pada penelitian ini adalah 25 ekor tikus.
4.3 Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian dilakukan di Laboratorium Biokimia Fakultas Kedokteran
Universitas Brawijaya, Malang. Penelitian dilakukan selama 58 hari, mulai bulan
April - Juni 2017.
4.4 Variabel Penelitian
4.4.1 Variabel Bebas
Variabel bebas dalam penelitian ini adalah:
1. Nikotin dengan dosis 0,25 mg/kgBB
2. Nikotin dengan dosis 0,5 mg/kgBB
3. Nikotin dengan dosis 0,75 mg/kgBB
4.4.2 Variabel Terikat
Variabel terikat dalam penelitian ini adalah kadar deoxypiridinoline serum.
4.5 Definisi Operasional
1. Bilateral oovorektomi adalah prosedur operasi pembedahan yang
dilakukan untuk mengambil 2 buah ovarium.
2. Nikotin yang digunakan dalam penelitian ini adalah nikotin murni dari
Sigma Aldrich.
3. Kelompok kontrol negatif adalah kelompok yang tidak mendapatkan
perlakuan bilateral oovorektomi dan terapi.
4. Kelompok kontrol positif (Ovx)/bilateral oovorektomi adalah kelompok
yang mendapatkan perlakuan bilateral oovorektomi dan dirawat tanpa
perlakuan selama 6 minggu.
5. Kelompok larutan nikotin dosis 1 (D1) adalah kelompok yang mendapat
perlakuan bilateral oovorektomi, kemudian diikuti dengan pemberian
nikotin 0,25 mg/kgBB.
6. Kelompok larutan nikotin dosis 2 (D2) adalah kelompok yang mendapat
perlakuan bilateral oovorektomi, kemudian diikuti dengan pemberian
nikotin 0,5 mg/kgBB.
7. Kelompok larutan nikotin dosis 3 (D3) adalah kelompok yang mendapat
perlakuan bilateral oovorektomi, kemudian diikuti dengan pemberian
nikotin 0,75 mg/kgBB.
8. Analisa kadar deoxypiridinoline serum adalah pemeriksaan kadar
deoxypiridinoline dengan menggunakan ELISA KIT pada serum.
4.6 Bahan dan Alat/Instrumen Penelitian
4.6.1 Alat dan Bahan untuk Perawatan Hewan Coba
Alat-alat yang dibutuhkan yaitu kandang pemeliharaan hewan coba berupa
baskom dengan penutup kandang berupa jaring-jaring kawat sebanyak 25 buah,
tempat minum tikus 25 buah, tempat makan, timbangan analitik, dan tempat
sampah. Bahan-bahan yang dibutuhkan anatara lain makanan tikus, sekam, air
minum tikus.
4.6.2 Pengenceran dan Pemberian Larutan nikotin
Larutan nikotin murni, normal saline, kertas saring, kain flanel 1x1 meter,
pipet tetes, objek glass, pendingin.
4.6.3 Alat dan Bahan untuk Perlakuan Bilateral Oovorektomi
Alat: meja operasi, baki plastik, handscoen, spuit, alat cukur, duk steril,
benang catgut, pisau tajam, jarum jahit, kasa steril, plester, kapas. Bahan: ketamin,
betadine solution dan alkohol 70%, basitrasin serbuk, gentamisin injeksi dan
novalgin injeksi.
4.6.4 Alat dan Bahan untuk Pembedahan Hewan Coba
Alat: vacutainer, gunting bedah 4, pinset 2, jarum pentul 2 set, kertas label,
kapas. Bahan : alkohol 70%, kloroform 20 ml.
4.6.5 Penghitungan Kadar Deoxypiridinoline Serum dengan ELISA Kit
Deoxypiridinoline Serum ELISA Kit, reagen.
4.7 Prosedur Penelitian
4.7.1 Perawatan Tikus
Dilakukan persiapan pemeliharaan hewan coba mulai dari kandang
pemeliharaan hewan coba, penutup kandang dengan jaring-jaring kawat, sekam,
botol minum, alat semprot, tempat makan, pakan, dan seleksi tikus (usia, berat
badan, jenis kelamin, kesehatan). Tikus diadaptasikan di dalam laboratorium
biokimia selama tujuh hari dan dibagi menjadi 5 (lima) kelompok.
4.7.2 Prosedur Bilateral Oovorektomi
Seluruh tikus, kecuali kelompok kontrol negatif diberi perlakuan bilateral
oovorektomi. Tikus betina umur 3 bulan dianastesi dengan menggunakan ketamin
IM dengan dosis 40mg/kg BB. Bulu abdomen dicukur kira-kira 1 cm garisan di atas
ovarium, lalu dilakukan sterilisasi menggunakan alkohol 70% dan betadine solution.
Kemudian dilakukan insisi transabdominal di atas uterus sepanjang 1,5-2 cm.
Oviduk bagian distal dan ovarium diligasi kemudian diangkat. Luka potongan diberi
Basitrasin serbuk (Nebacetin). Prosedur yang sama dilakukan untuk ovarium kanan.
Luka insisi dijahit dengan catgut kemudian diolesi Betadine dan Nebacetin, lalu
ditutup dengan kasa steril. Kemudian diberikan Gentamisin i.m dengan dosis 60-80
mg/kgBB 1 kali perhari selama 3 hari dan Novalgin i.m dengan dosis 0,3 ml selama
1 hari (Raden,2011).
4.7.3 Pemberian Larutan Nikotin
Pada penelitian ini digunakan dosis nikotin yang menggunakan dasar dari
penelitian Park, J., Kang, J. W., dan Lee, S. M. (2013), yang menemukan bahwa
dosis nikotin 1 mg/KgBB pada mencit dapat menurunkan ROS. Maka pada
penelitian ini digunakan dosis setengahnya karena ekstrapolasi dari dosis mencit ke
dosis tikus (Freireich, 1966). Kelompok yang diberikan larutan nikotin mulai diterapi
dengan larutan nikotin setelah proses penyembuhan luka pasca bilateral
oovorektomi (3 minggu). Pemberian nikotin dilakukan secara per oral menggunakan
sonde. Perlakuan dilakukan selama 25 hari dengan kelompok kontrol negatif dan
kelompok kontrol positif tidak diberi nikotin. Lalu kelompok D1 diberi nikotin 0,25
mg/kgBB, kelompok D2 diberi nikotin 0,5 mg/kgBB dan kelompok D3 diberi nikotin
0,75 mg/kgBB setiap hari selama 25 hari.
4.7.4 Pembedahan Tikus
Pembedahan dilakukan dengan inhalasi menggunakan kloroform dalam
suatu wadah tertutup. Darah diambil terlebih dahulu dengan spuit 3 ml melalui
jantung sebagai sampel untuk pengukuran kadar deoxypiridinoline serum.
4.7.5 Pengukuran Kadar Deoxypiridinoline pada Serum
Serum yang sudah di kumpulkan pada tikus dilakukan pengukuran kadar
deoxypiridinoline pada serum dengan menggunakan ELISA KIT yang spesifik untuk
deoxypiridinoline serum pada tikus yaitu Rat DPD (Deoxypiridinoline) ELISA Kit
dengan nomor katalog E-El-R0327.
4.8 Prosedur Pengumpulan dan Analisis Data
Pengambilan data dilakukan setelah pembedahan. Data yang diperoleh akan
dilakukan uji normalitas untuk mengetahui persebaran data normal atau tidak.
Kemudian uji varian dilakukan untuk menentukan varian data sama (homogen) atau
tidak. Lalu dilakukan uji One-way ANOVA dan Post hoc test (uji Tukey HSD) yang
kemudian dilanjutkan dengan uji regresi linier. Seluruh uji statitistik memiliki tingkat
signifikansi 0,05 (p = 0,05) dan taraf kepercayaan 95% (α = 0,05). Semua analisis
statistik menggunakan SPSS versi 11.
4.9 Bagan Alur Penelitian
Gambar 4.1 Bagan alur penelitian
28
BAB 5
HASIL PENELITIAN DAN ANALISIS DATA
5.1 Hasil Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan post test-only
control design pada kelompok perlakuan dan kontrol. Hewan coba yang digunakan
adalah tikus galur wistar (Rattus novergicus) yang kemudian dilakukan bilateral
oovorektomi untuk mendapatkan model hewan coba dengan hipoestrogen (model
osteoporosis). Hewan coba dibagi menjadi 5 kelompok dan dilakukan bilateral
oovorektomi kecuali pada kelompok kontrol negatif yaitu kelompok yang tidak
mendapatkan perlakuan bilateral oovorektomi, sedangkan kelompok kontrol positif
adalah kelompok yang mendapatkan perlakuan bilateral oovorektomi dan diinkubasi
selama 2 bulan serta diberi normal saline. Kelompok larutan nikotin dosis 1 (D1)
adalah kelompok yang mendapat perlakuan bilateral oovorektomi, kemudian diikuti
dengan pemberian larutan nikotin 0,25 mg/kgBB. Kelompok larutan nikotin dosis 2
(D2) adalah kelompok yang mendapat perlakuan bilateral oovorektomi, kemudian
diikuti dengan pemberian larutan nikotin 0,5 mg/kgBB. Kelompok larutan nikotin
dosis 3 adalah kelompok yang mendapat perlakuan bilateral oovorektomi, kemudian
diikuti dengan pemberian larutan nikotin 0,75 mg/kgBB.
Perlakuan pada hewan coba dilakukan selama 25 hari setelah diaklimatisasi,
lalu dilakukan pembedahan dan diambil serumnya. Pengukuran kadar
deoxypridinoline pada serum tikus menggunakan ELISA kit deoxypiridinoline serum.
Setelah dilakukan pengukuran kadar deoxypiridinoline serum kemudian dapat
29
dihitung rata-ratanya. Hasil penghitungan rata-rata kadar deoxypiridinoline serum
pada tiap kelompok dapat dijelaskan melalui tabel 5.1 dan digambarkan pada grafik
5.2.
Tabel 5.1 Rerata dan standar deviasi kadar deoxypiridinoline serum
Kelompok Sampel Rerata Kadar
Deoxypiridinoline serum
(ng/mL)
Standar
Deviasi
Kontrol Negatif 5 0.40680 ±0.133048
Kontrol Positif 5 0.29560 ±0.113240
Larutan nikotin dosis 1
(D1)
5 0.31400 ±0.056515
Larutan nikotin dosis 2
(D2)
5 0.27740 ±0.149808
Larutan nikotin dosis (D3) 5 0.45700 ±0.109204
Rerata Kadar Deoxypiridinoline Serum tiap Kelompok
Gambar 5.1 Rerata Kadar Deoxypiridinoline tikus model osteoporosis
Kelompok
D3D2D1K PosK Neg
Me
an
of K
ad
ar
De
oxy
pir
idin
olin
e
.5
.4
.3
.2
30
5.2 Analisis Data
Hasil uji data pengaruh pemberian larutan nikotin terhadap kadar
deoxypiridinoline tikus galus wistar dianalisa menggunakan software SPSS versi 11
dengan taraf kepercayaan 95% ( dan tingkat signifikansi 0,05 (p=0,05).
5.2.1 Uji Normalitas Data
Pada penelitian ini jumlah sampel yang digunakan sebanyak 25 sehingga
untuk uji normalitas digunakan metode Shapiro-Wilk. Kemudian dari hasilnya
didapatkan nilai signifikansi sebesar 0,643, hal ini menunjukkan bahwa data yang
diperoleh terdistribusi normal.
5.2.2 Uji Homogenitas Data
Uji homogenitas data pada penelitian ini menggunakan metode Levene
Statistic dan diperoleh variasi data yang homogen dengan nilai signifikansi 0,750.
5.2.3 Uji One Way Anova
Sebelum melakukan analisis data pada uji one way anova harus diperhatikan
terlebih dahulu beberapa kriteria yang harus dipenuhi yaitu :
1. Data terdistribusi normal
2. Data harus homogen dan memiliki variasi yang sama
Berdasarkan semua kriteria tersebut maka data yang dipakai untuk penelitian
ini sudah memenuhi kriteria untuk dilakukan uji one way anova.
31
Pengujian dengan one way anova dilakukan untuk menentukan pengaruh
pemberian larutan nikotin terhadap kadar deoxypiridinoline serum secara simultan.
Untuk kriteria kesimpulan dari hasil uji anova berdasarkan hipotesis adalah jika nilai
signifikansi p>0,05, ini berarti H0 diterima dan sebaliknya jika nilai signifikansi p<0,05
maka dapat disimpulkan H0 ditolak. Oleh karena itu hipotesis pada penelitian ini
adalah :
H0 : Pemberian larutan nikotin tidak berpengaruh secara signifikan terhadap
penurunan kadar deoxypiridinoline pada tikus model osteoporosis.
H1 : Pemberian larutan nikotin dapat menurunkan kadar deoxypiridinoline
pada tikus model osteoporosis.
Hasil uji one way anova menunjukkan nilai signifikansi sebesar 0,103,
sehingga pada penelitian ini hipotesis H0 diterima. Hal ini menunjukkan bahwa
pemberian beberapa dosis larutan nikotin menurunkan kadar deoxypiridinoline
serum namun secara tidak signifikan atau tidak ada perbedaan yang bermakna antar
variabel. Oleh karena itu analisis data dilanjutkan dengan Uji Post Hoc untuk melihat
perbedaaan pada tiap kelompok.
5.2.4 Uji Post Hoc Tukey HSD
Uji Post Hoc dilakukan untuk melihat pengaruh pemberian larutan nikotin
terhadap kadar deoxypiridinoline antar kelompok perlakuan. Jika suatu data
mempunyai nilai signifikansi <0,05 atau taraf kepercayaan 95% maka dapat
dikatakan data tersebut berbeda secara signifikan. Dari hasil uji Post Hoc Tukey
32
HSD diperoleh nilai signifikansi pemberian larutan nikotin terhadap kadar
deoxypiridinoline serum antar kelompok dapat disimpulkan melalui tabel 5.2.
Tabel 5.2 Ringkasan nilai signifikansi Uji Post Hoc Tukey HSD
Kelompok K(-) K(+) D1 D2 D3
K(-) 0.570 0.719 0.426 0.958
K (+) 0.999 0.999 0.225
D1 0.987 0.331
D2 0.147
D3
Dari tabel 5.2 dapat disimpulkan bahwa antar kelompok perlakuan tidak
memiliki perbedaan yang bermakna karena nilai signifikansinya >0,05.
5.2.5 Uji Regresi Linier
Analisis data dengan menggunakan uji regresi linier bertujuan untuk menentukan
ada atau tidaknya pengaruh pemberian larutan nikotin terhadap kadar
deoxypiridinoline serum. Dari hasil analisis data ini diperoleh nilai R square sebesar
0,192 (P>0,05) yang artinya pemberian larutan nikotin dalam menurunkan kadar
deoxypiridinoline serum tidak memiliki pengaruh yang signifikan.
33
BAB 6
PEMBAHASAN
Penelitian ini bertujuan untuk menilai pengaruh pemberian larutan nikotin
terhadap kadar deoxypiridinoline (DPD) serum pada tikus model osteoporosis.
Metode bilateral oovorektomi digunakan untuk memperoleh tikus model osteoporosis
kemudian dilakukan pengukuran kadar DPD serum. Hewan coba dibagi menjadi 5
kelompok dan diberi perlakuan bilateral oovorektomi kecuali pada kelompok kontrol
negatif yaitu kelompok yang tidak mendapatkan perlakuan bilateral oovorektomi,
sedangkan kelompok kontrol positif adalah kelompok yang mendapatkan perlakuan
bilateral oovorektomi dan diinkubasi selama 2 bulan serta diberi normal saline.
Kelompok larutan nikotin dosis 1 (D1) adalah kelompok yang mendapat perlakuan
bilateral oovorektomi, kemudian diikuti dengan pemberian larutan nikotin 0,25
mg/kgBB. Kelompok larutan nikotin dosis 2 (D2) adalah kelompok yang mendapat
perlakuan bilateral oovorektomi, kemudian diikuti dengan pemberian larutan nikotin
0,5 mg/kgBB. Kelompok larutan nikotin dosis 3 adalah kelompok yang mendapat
perlakuan bilateral oovorektomi, kemudian diikuti dengan pemberian larutan nikotin
0,75 mg/kgBB.
Dari hasil analisis data dengan menggunakan uji ANOVA menunjukkan
bahwa pemberian larutan nikotin secara signifikan tidak berpengaruh (p=0,103)
terhadap kadar deoxypiridinoline serum pada semua kelompok perlakuan. Hal
serupa juga terjadi pada penelitian yang dilakukan oleh Norazlina dkk (2009)
mengenai efek nikotin terhadap marker biokemikal tulang yang dilakukan selama 4
bulan. Hasilnya menunjukkan bahwa nikotin dapat meningkatkan marker resorpsi
34
tulang pyridinoline (PYD) sekaligus menurunkan marker formasi tulang setelah 2
bulan pengobatan dengan menggunakan nikotin. Parameter gagal membaik setelah
nikotin berhenti selama 2 bulan berikutnya. Jadi dapat disimpulkan bahwa
metabolisme tulang yang terganggu oleh nikotin tidak dapat membaik secara
signifikan, sehingga harus dilakukan pemberian terapi lebih lama agar bisa melihat
perubahan yang mungkin lebih signifikan pada marker biokemikal tulang.
Analisis data dilanjutkan dengan uji Post Hoc Tukey HSD dan diperoleh nilai
signifikansi pengaruh larutan nikotin terhadap kadar DPD serum tiap kelompok
sebagai berikut:
• Kelompok kontrol negatif dengan kelompok kontrol positif (OVX) tidak
memiliki pengaruh yang signifikan (p=0,570).
• Kelompok kontrol negatif dengan kelompok larutan nikotin dosis 1 (D1)
tidak memiliki pengaruh yang signifikan (p=0,719).
• Kelompok kontrol negatif dengan kelompok larutan nikotin dosis 2 (D2)
tidak memiliki pengaruh yang signifikan (0,426).
• Kelompok kontrol negatif dengan kelompok larutan nikotin dosis 3 (D3)
tidak memiliki pengaruh yang signifikan (0,958).
• Kelompok kontrol positif (OVX) dengan kelompok larutan nikotin dosis 1
(D1) tidak memiliki perbedaan yang signifikan (0,999).
• Kelompok kontrol positif (OVX) dengan kelompok larutan nikotin dosis 2
(D2) tidak memiliki perbedaan yang signifikan (0,999).
35
• Kelompok kontrol positif (OVX) dengan kelompok larutan nikotin dosis 3
(D3) tidak memiliki perbedaan yang signifikan (0,225).
Dari uraian hasil uji Post Hoc Tukey HSD diatas dapat disimpulkan bahwa
antar kelompok perlakuan tidak memiliki perbedaan yang bermakna karena nilai
signifikansinya tidak memenuhi p<0,05. Kemudian dari uji regresi linier diperoleh
nilai R square sebesar 0,192 yang menunjukkan bahwa pemberian larutan nikotin
tidak berpengaruh secara signifikan terhadap penurunan kadar DPD serum.
Hasil penelitian menunjukkan kadar deoxypiridinoline serum antara kelompok
negatif yang tidak diberikan perlakuan bilateral oovorektomi dengan kelompok positif
yang dilakukan bilateral oovorektomi terjadi penurunan kadar deoxypiridinoline
serum. Bilateral oovorektomi yang dilakukan pada tikus akan menyebabkan kadar
estrogen pada tikus menurun sehingga hal ini akan mengakibatkan terjadinya
ketidakseimbangan aktivitas osteoblas (pembentuk tulang) osteoklas (peresorpsi
tulang) dan kemudian akan menyebabkan osteoporosis. Peningkatan kadar
deoxypiridinoline sebagai marker resorpsi tulang dapat diamati 30 hari setelah
ovariektomi tikus (Ladizesky et al,2003). Pada penelitian ini terjadi hal sebaliknya,
yaitu terjadi penurunan kadar DPD serum pada kelompok kontrol positif (OVX). Hal
ini menunjukkan bahwa pada tikus yang sudah diovariektomi terjadi penurunan
proses resorpsi tulang namun proses ini juga diikuti dengan aktivitas osteoblas yang
meningkat.
Berdasarkan penelitian Blanque et al (1998) mengemukakan bahwa puncak
kenaikan osteocalcin sebagai marker formasi tulang terjadi 14 hari setelah
diovariektomi, menunjukkan bahwa efek estrogen kurang menginduksi perubahan
36
aktifitas osteoblas yang maksimal pada saat itu. Hal berbeda terjadi pada perubahan
marker resorpsi tulang yang tidak menunjukkkan puncak yang jelas pada hari ke
11,14,21 dan 28 pasca ovariektomi. Pada penelitian ini menunjukkan hal sebaliknya
bahwa pada kelompok kontrol positif mengalami penurunan kadar DPD serum.
Merujuk pada prosedur bilateral oovorektomi yang sudah dilakukan pada penelitian
sebelumnya bahwa prosedur yang dilakukan pada penelitian ini sudah sesuai
dengan prosedur yang baku. Namun mungkin ada beberapa faktor lain yang
mungkin mempengaruhi hasil penelitian.
DPD tidak digunakan sebagai penunjang diagnosis osteoporosis, tetapi
digunakan untuk memonitor status resorpsi tulang sehingga bisa digunakan sebagai
pengukur keberhasilan terapi. Oleh karena itu kadar DPD serum pada kelompok
kontrol positif ini tidak bisa digunakan sebagai penentu bahwa kelompok kontrol
positif sudah mengalami osteoporosis, namun bisa dinilai status resorpsi pada
kelompok kontrol positif mengalami penurunan. Namun bila dibandingkan dengan
kelompok kontrol negatif, pada kelompok larutan dosis 1 (D1) dan kelompok larutan
dosis 2 (D2) terjadi penurunan kadar DPD serum, yaitu masing-masing sebesar
22,5% dan 30%. Hal ini mengindikasikan bahwa pemberian nikotin pada kelompok
D1 dan D2 memiliki pengaruh terhadap penurunan kadar deoxypiridinoline serum
jika dibandingkan dengan kelompok kontrol negatif. Hal ini juga bisa menjelaskan
penurunan kadar DPD serum yang terjadi pada kelompok larutan nikotin dosis 2
(D2) dimana kadar DPD pada kelompok D2 lebih rendah daripada kelompok kontrol
negatif dan kelompok kontrol positif. Hal ini menunjukkan bahwa pada pemberian
37
larutan nikotin dengan dosis 0,5 mg/kgBB terjadi penurunan kadar DPD serum tetapi
belum dapat menurun secara signifikan.
Pada kelompok D3 terjadi peningkatan kadar deoxypiridinoline serum pada
jika dibandingkan dengan kelompok perlakuan lainnya termasuk kelompok kontrol
negatif. Hal ini mungkin terjadi karena pada dosis 0,75 mg/kgBB merupakan dosis
yang sangat tinggi dimana tidak didapatkan hasil terapi namun yang terjadi adalah
efek yang sebaliknya. Dari penelitian sebelumnya disebutkan bahwa pengaruh
nikotin pada tulang tergantung pada dosis yang diberikan. Pada dosis yang rendah
dapat menimbulkan efek stimulator, sedangkan pada dosis yang tinggi dapat
menimbulkan efek negatif terhadap stimulasi sel osteoprogenitor. Beberapa studi
mengatakan bahwa nikotin dengan konsentrasi rendah dapat meningkatkan
proliferasi sel dan pada konsentrasi yang tinggi nikotin dapat menghambat proliferasi
sel (Rocha, 2011).
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa
tidak terdapat perbedaan yang signifikan pada pemberian larutan nikotin terhadap
kadar DPD serum. Namun dari hasil analisis data tetap didapatkan penurunan kadar
DPD serum sebesar 22,5% pada kelompok D1 dan 30% pada kelompok D2 yang
diberikan larutan nikotin jika dibandingkan dengan kelompok kontrol negatif.
Penelitian ini masih harus dilakukan banyak perbaikan diantaranya evaluasi
prosedur bilateral oovorektomi untuk mendapatkan tikus model osteoporosis,
terutama waktu untuk memberikan perlakuan, karena kemungkinan kondisi model
hewan osteoporosis belum tercapai, atau umur tikus yang belum sesuai dimana
38
kemungkinan tikus sedang berada di masa puncak tulang, sehingga mempengaruhi
model tikus yang dilakukan bilateral oovorektomi maupun variabel yang dihitung.
Kemudian belum bisa dipastikan dosis yang efektif untuk terapi osteoporosis dengan
menggunakan larutan nikotin karena berdasarkan variabel yang diukur belum
didapatkan hasil yang signifikan. Hal ini mungkin dipengaruhi oleh banyak faktor
antara lain waktu terapi yang kurang. Analisis Bone Mineral Density (BMD) dilakukan
16 minggu setelah dilakukan ovariektomi untuk menilai bone density dan komposisi
didalam tubuh (Sun, et al., 2003). Marker resorpsi tulang akan menurun sebesar
40% dalam waktu 3 bulan setelah dimulai terapi dan akan diikuti dengan penurunan
marker formasi tulang selama 6-12 bulan berikutnya. Selain itu, perubahan
biomarker tulang pada terapi antiresoptif berhubungan dengan pengurangan resiko
fraktur. Jika biomarker resorpsi tulang tidak turun selama terapi antiresorptif bisa
terjadi karena ketidaksesuaian terapi, malabsorbsi, penyerapan yang buruk atau
mungkin ada penyebab sekunder dari osteoporosis yang membutuhkan pencarian
lainnya (Coates,2013). Selain itu sebelum memberi perlakuan perlu dilakukan
pengukuran kadar deoxypiridinoline serum terlebih dahulu agar bisa
membandingkan hasilnya dengan setelah diberi perlakuan.
Prosedur bilateral oovorektomi yang dilakukan sudah mengikuti prosedur
yang baku, dimana sudah banyak dilakukan prosedur yang serupa pada penelitian-
penelitian sebelumnya seperti pada penelitian Lasota dkk (2004), Khajuria dkk
(2013), dan Raden (2011). Namun pada penelitian ini terdapat beberapa kekurangan
pada prosedur bilateral oovorektomi, dimana prosedurnya dilakukan oleh orang yang
kurang kompeten dalam hal pembedahan, sulitnya prosedur bilateral oovorektomi
39
jika dilakukan pada tikus karena ovarium yang akan dibedah sulit untuk dibedakan
dengan organ reproduksi lainnya pada tikus. Kemudian saat perawatan pasca
bilateral oovorektomi tikus mengalami infeksi dan mati, sehingga hal ini bisa
berpengaruh ke tikus lainnya dan mempengaruhi variabel yang diukur.
40
BAB 7
KESIMPULAN DAN SARAN
7.1 Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian dan uji analisis statistik, pada penelitian ini
dapat disimpulkan sebagai berikut :
1. Pemberian larutan nikotin tidak berpengaruh secara signifikan terhadap
penurunan kadar deoxypiridinoline serum pada tikus model osteoporosis.
2. Pada pemberian larutan nikotin dengan dosis 0,25 mg/kgBB dan 0,75
mg/kgBB tidak terjadi penurunan kadar deoxypiridinoline serum, tetapi
pada pemberian larutan nikotin dengan dosis 0,5 mg/kgBB menunjukkan
adanya penurunan kadar deoxypiridinoline serum pada tikus model
osteoporosis.
7.2 Saran
1. Perlu evaluasi lebih lanjut mengenai prosedur penelitian dan evaluasi
terhadap faktor-faktor luar (confounding factor) yang mungkin
mempengaruhi variabel yang diukur.
2. Perlu penghitungan kadar deoxypiridinoline dengan sampel urin.
Kemudian dilakukan penghitungan kadar deoxypiridinoline sebelum dan
setelah diberi perlakuan.
3. Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut dengan lebih memperhatikan
penghitungan pemberian dosis larutan nikotin dan waktu pemberian
41
terapi lebih diperpanjang dan disesuaikan dengan literatur yang lebih
mendukung sehingga bisa didapatkan dosis yang lebih efektif untuk
menurunkan kadar deoxypiridinoline serum.
42
DAFTAR PUSTAKA
Adietomo SM., et al. Asistensi sosial untuk usia lanjut di Indonesia: kajian empiris
program aslut. 2013 Mar.
Andreollo NA., Santos EF., Araujo MR., Lopes LR. Rat’s Age Versus Human’s Age:
What is the Relationship?. ABCD Arq Cir Dig, 2012; 25(1): 49-51.
Assunta M., Espino R., Kin F.2013. Status of tobacco farming in the ASEAN region.
Southeast Asia Tobacco Control Alliance.
Burge R., Dawson-Hughes B., Solomon DH., et al. Incidence and economic burden
of osteoporosis-related fractures in the United States, 2005-2025. J Bone Min
Res, 2007; 22(3):465–75.
Clarke B. Normal Bone Anatomy and Physiology. Clinical Journal of the American
Society of Nephrology, 2008; 3:133-139
Coates P. Bone Turnover Markers. Autralian Family Physician, 2013; 42(5): 285-
287.
Daffner SD., Waugh S., Norman TL., Mukherjee N., France JC. Nicotine increases
osteoblast activity of induced bone marrow stromal cells in a dose-dependent
manner: an in vitro cell culture experiment. Global Spine J, 2012 Sep; 2(3):
153–8.
David, Reid M. 2011. Handbook of Osteoporosis. London : Springer Health Care Ltd. C. 2 & 7.
Depkes. R.I. 2007. Berdiri Tegak, Bicara Lantang, Kalahkan Osteoporosis.
Jakarta:Litbangkes.
43
Dussor GO., Leong AS., Gracia NB., et al. Potentiation of evoked calcitonin gene-
related peptide release from oral mucosa: a potential basis for the pro-
inflammatory effects of nicotine. Eur J Neurosci, 2003 Nov; 18(9): 2515–26.
Fassbender WJ., Godde M., Brandenburg VM., Osadel KH., Stumpff UC. Urinary
Bone Resorption Markers (Deoxypiridinoline and C-Terminal Telopeptide of
Type I Collagen) in Healthy Persons, Postmenopausal Osteoporosis and
Patients with Type I Diabetes. Advances in Medical Sciences, 2009; 54(1): 1-6.
Freireich EJ., Gehan EA., Rall DP, Schmidt LH., Skipper HE. Quantitave of
comparison of toxicity of anticancer agents in mouse, rat, hamster, dog,
monkey, and man. Cancer chemother Rep,1966 May; 50(4): 2019-44.
Geusens., Piet., Sambrook PN. 2004. Chapter 1 : Normal Skeletal Structure and
Function. Dalam : P. Geusens penyunt. Osteoporosis in Clinical Practice : a
Practical Guide for Diagnosis and Treatment. 2nd ed. Australia : Springer-
Verlag London Ltd.
Gibney,MJ.2009. Gizi Kesehatan Masyarakat. Jakarta:ECG.
Guyton AC, Hall JE. Textbook of medical physiology. 11th ed. Philadelphia: Elsevier
Inc, 2006.
Hesley RP., Shepard KA., Jenkins DK., Riggs BL. Monitoring Estrogen Replacement
Therapy and Identifying Rapid Bone Losers with an Immunoassay for
Deoxypiridinoline. Osteoporosis Int, 1998; 8:159-164.
Infodatin.2015.Data dan Kondisi Penyakit Osteoporosis di Indonesia, Kementrian
Kesehatan RI Pusat Data dan Informasi,Jakarta Selatan, hal 1.
44
International Osteoporosis Foundation. 2017. Introduction to Bone Biology: All About
Your Bone, (online). (www.iofbonehealth.org, diakses 10 Oktober 2017).
Ichramsyah AR., Setyohadi B., Kusumawijaya K., Suharti, et al. Penggunaan Bone
Densitometry pada Osteoporosis. HTA Indonesia, 2005, hal 1-27.
Lasota A., Danowska KD. Experimental osteoporosis different methods of
ovariectomy in female white rats. Roczhiki Akademi Medycznej w Bialymstoku,
2004, 49(1): 129-131.
Lee WL., Cheng MH., Tarng DC., et al., The benefits of estrogen or selective
estrogen receptor modulator on kidney and its related disease-chronic kidney
disease-mineral and bone disorder: osteoporosis. J chin Med Assoc, 2013;
76:365-71.
Khajuria DK., Razdan R., Mahapatra. Description of new method of ovariectomy in
female rats. Rev Bras Reumatol, 2012, 52(3): 462-470
Norazlina M., Hermizi H., Faizah O., et al. Vitamin E reversed nicotine-induced toxic
effects on bone biochemical markers in male rats. Arch Med Sci, 2010;6(4)
:505-512.
O’Connell, M.Beth & Vondracek, S. 2008. Chapter 93 : Osteoporosis and Other
Metabolic Disease. Dalam : J.T. Dipiro penyunt. Pharmacotherapy : A
Pathophysiologic Approach. 7th ed. US : The McGraw-Hill Companies, Inc. P.
1483-1496.
Park J., Jung-Woo K., Sun-Mee L.. Activation of the cholinergic antiinflammatory
pathway by nicotine attenuates hepatic ischemia/reperfusion injury via heme
oxygenase-1 induction. European Journal of Pharmacology, 2013 May; 707(1–
45
3): 61–70.
Raden A. Efek Ekstrak Pegagan (Centella Asiatica) pada Rattus Novergicus Wistar
yang dilakukan Ovariektomi Terhadap Proliferasi Epitel pada Dinding Vagina.
Jurnal Ilmiah Kedokteran Hewan, 2011 Feb; 4(1): 71-76.
Raisz LG. Pathogenesis of osteoporosis: concepts, conflicts, and prospects. J
Clinical Investigation, 2005 Dec; 115(12): 3318–22.
Rocha M. Nicotine effect on Bone metabolism: in vitro studies with human osteoclast
and co-culture of osteoclast in an hydroxyapatite surface. 2011 September;
hal.1-91.
Rogers K. 2011. Bone and Muscle: Structure, Force and Motion. New York:
Britannica Educatinal Publishing. P.44-45
Rothem DE., Rothem L., Dahan AER., Soundry M. Nicotinic modulation of gene
expression in osteoblast cells. MG-63 Bone, 2011 Apr 1; 48(4):903–9.
Sample SJ., Hao Z., Wilson AP., Muir P. Role of calcitonin gene-related peptide in
bone repair after cyclic fatigue loading. J List Plos One, 2011; 6(6): e20386.
Sengupta P. The Laboratory Rat: Relating Its Age with Human’s. Int J Prev Med,
2013 Jun; 4(6): 624-630.
Sihombing M., Tuminah S. Perubahan Nilai Hematologi, Biokimia Darah, Bobot
Organ dan Bobot Badan Tikus Putih pada Umur Berbeda. Jurnal Veteriner,
2011 Maret; 12(1): 58-64.
Singer FR., Eyre DR. Using Biochemical Markers of Bone Turnover in Clinical
Practice. Cleveland Clinic Journal. 2008; 75(10): 739-750.
46
Skugor M, 2010. Cleveland Clinic Center for Continuing Education.Osteoporosis,
(online),(http://www.clevelandclinicmeded.com/medicalpubs/diseasemanagem
ent/endocrinology/osteoporosis-disease/#bib5 , diakses 8 Oktober 2017).
Sun D., Krishman A., Zaman K., et al. Dietary n-3 Fatty Acids Decrease
Osteoclastogenesis and Loss of Bone Mass in Ovariectomized Mice. Journal
of Bone and Mineral Research, 2003, 18(7): 1206-1216
Tanaka H, Tanabe N, Kawato T, et al. Nicotine affects bone resorption and
suppresses the expression of cathepsin K, MMP-9 and vacuolar-type H+-
ATPase d2 and action organization in osteoclasts. 2013 Mar.
Thomas SDC. Bone turnover markers. Aust Prescr, 2012; 35: 156-158.
Walsh J. 2014. Normal Bone Physiology, Remodelling and Its Hormonal Regulation.
Basic Science: Elsevier Ltd. P.1
Yamazaki I., Yamaguchi H. Characteristic of an ovariectomized osteopenic rat mode.
Journal of Bone Research, 1989; 13-22.
Yan H, Lau Y. Nicotine, an anti-inflammation molecule. Department of Paediatrics
and Adolescent Medicine, Li Ka Shing Faculty of Medicine, University of Hong
Kong, Hong Kong. Special Administrative Region, People’s Republic of China.
2014: 1.
top related