4.uji sterilitas

Validasi dan kontrol proses sterilisasi

1

Tehnologi Sediaan Steril

pram.steril.2012

1. KONTROL PROSES STERILISASI

2. UJI STERILITAS

2 pram.steril.2012

Validasi dan kontrol proses sterilisasi

Alat – alat yang akan digunakan untuk proses seteriolisasi harus divalidasi terlebih dahulu dengan menggunakan indikator yang telah distandardisasi sehingga alat layak dipakai.

Dalam proses validasi dan monitoring harus dapat menjamin bahwa alat berjalan dengan baik.

Ada 3 macam indikator yang dipakai pada proses sterilisasi yaitu :

1. Indikator Biologi ( Biological Indicator ) 2. Indikator Kimia ( Chemical Indicator ) 3. Indikator Fisik ( Physical Indicator )

3 pram.steril.2012

Validasi dan kontrol proses sterilisasi

INDIKATOR BIOLOGI

Indikator biologi adalah sediaan berisi populasi miokroorganisme spesifik dalam bentuk spora.

Spora bersifat resisten terhadap beberapa parameter yang terkontrol dan terukur dalam suatu proses tertentu.

Prinsip kerja indikator biologi adalah mensterilkan spora hidup mikroorganisme yang non-patogenik dan sangat resisten dalam jumlah tertentu.

4 pram.steril.2012

Apabila dalam proses sterilisasi spora-spora terbunuh, diasumsikan bahwa mikroorganisme lainnya ikut terbunuh pula dan benda yang kita sterilkan bisa disebut steril.

Indikator biologi tersedia untuk metode sterilisasi uap, panas kering, dan gas etilen oksida.

Jenis yang digunakan adalah:

Bacillus subtilis (sterilisasi gas ETO dan panas kering),

Bacillus pumilus (radiasi ionisasi) dan

Bacillus stearothermophyllus (sterilisasi uap).

5 pram.steril.2012

Beberapa jenis indikator biologi 1. Indikator biologi berupa strip kertas yang

mengandung spora kering dan di kemas dalam kantong bersegel.

Setelah proses sterilisasi selasai, spora kering dipindahkan secara aseptik kedalam media pertumbuhan untuk dilihat apakah terjadi pertumbuhan koloni.

2. Indikator biologi dikemas tersendiri , strip berisi spora dikemas dlm vial bersama dg media pertumbuhan spora .

Setelah sterilisasi selasai indikator biologi diaktifkan dengan memecah ampul yg berisi media dan kemudian diinkubasi untuk melihat adanya pertumbuhan koloni.

6 pram.steril.2012

Beberapa jenis indikator biologi

3. Perkembangan selanjutnya dipakai Indikator biologi yang mengandung sistem deteksi cepat ( rapid ).

Sistem ini bekerja berdasarkan adanya interaksi enzim dalam spora dengan bahan yg ada dlm media pertumbuhan .

Hasil positif (terjadi peertumbuhan koloni ) jika memberikan fluoresensi dibawah sinar UV.

Hasil ini dapat diketahui setalah 3 jam.

7 pram.steril.2012

Beberapa jenis indikator biologi

4. Indikator biologi yang berbentuk vial tertutup yg mengandung strip spora dan ampul berisi media pertumbuhan yg mengandung zat warna.

Sistem ini bekerja berdasarkan adanya interaksi enzim dalam spora dengan bahan yg ada dlm media pertumbuhan .

Indikator diaktifkan dg cara memecah ampul kemudian diinkubasi pada 57oC selama 24 – 48 jam.

Produk dikatakan steril jika tidak terjadi perubahan warna.

8 pram.steril.2012

Interpretasi hasil indikator biologi

Hasil positif jika terjadi :

Kekeruhan dan pertumbuhan koloni (1 dan 2 )

Fluoresensi (3)

Perubahan warna (4)

Hasil positif produk tidak steril atau proses sterilisasi gagal.

9 pram.steril.2012

INDIKATOR KIMIA Indikator kimia adalah indikator yang menandai

terjadinya paparan sterilitas (uap panas atau gas ETO) pada objek yang disterilkan dengan adanya perubahan warna.

Indikator kimia diproduksi dalam bentuk strip, kartu, dan vial.

Indikator sensitif terhadap satu atau lebih parameter sterilisasi.

Indikator memberikan informasi tercapainya kondisi steril pada tiap kemasan.

Maka, selain digunakan di luar ada pula yang digunakannya di dalam, sehingga dikenal dengan internal indikator dan eksternal indikator.

10 pram.steril.2012

1. Browne’s sterilizer control tubes - Tabung kecil tertutup yang mengandung

campuran zat dan indikator. - Terjadi perubahan warna hijau, jika

suhu dan waktu sterilisasi telah tercapai. 2. Filter paper strip 3. Royce sachet (gas Et-O, etilen klorhidrin

yang terbentuk kuning mjd ungu) 4. Dosimeter radiasi ( terjadi perubahan

densitas optik karena radiasi, diukur dengan spektro.UV)

11 pram.steril.2012

BEBERAPA JENIS INDIKATOR KIMIA

Jenis Warna hijau setelah

Black Spot Otoklaf ad 126 ºC 25’, 115C

16’, 120C

11’, 125C Yellow spot High vacuum otoclave

pada > 130 ºC 4’, 130C

3’, 125C

Green spot Oven pada 160 º C 60’, 160C

Blue Spot Oven infra red pada 180 º C

12’, 180C

12 pram.steril.2012

INDIKATOR FISIK /MEKANIK

Indikator mekanik adalah bagian instrumen mesin sterilisasi seperti tabel, dan indikator suhu maupun tekanan yang menunjukkan apakah alat sterilisasi bekerja dengan baik.

Contohnya adalah indikator tes Boudewick. Indikator ini digunakan untuk menilai efesiensi pompa vakum pada alat sterilisasi serta untuk mengetahui adanya kebocoran udara dalam ruang sterilisasi.

13 pram.steril.2012

Kegunaan INDIKATOR FISIK / MEKANIK

Pengukuran temperatur dan tekanan merupakan fungsi penting sistem monitoring sterilisasi. Apabila indikator mekanik berfungsi dengan baik, maka akan memberikan informasi segera mengenai temperatur, tekanan, waktu, dan fungsi mekanik lainnya dari alat.

Memberikan indikasi adanya masalah apabila alat rusak dan memerlukan perbaikan.

14 pram.steril.2012

Keterbatasannya

Indikator mekanik tidak menunjukkan bahwa keadaan steril sudah tercapai, melainkan hanya memberikan informasi tentang fungsi alat sterilisasi.

Karena bersifat mekanis, maka bila tidak dilakukan kaliberasi alat dengan tepat atau pemakaian yang terlalu sering indikator dapat memberikan informasi yang tidak tepat.

15 pram.steril.2012

UJI STERILITAS

Larutan Uji + Media Perbenihan

Inkubasi 30 – 35 ºC

20 – 25 ºC

Kekeruhan / pertumbuhan-Tidak Steril

Tidak keruh -- Steril

16 pram.steril.2012

MEDIA JASAD RENIK

MIKROBA UJI SUHU INKUBASI

Tioglikolat Cair Aerob B. Subtilis C. Albicans Bacteroides vulgatus

30 – 35 ºC

Tioglikolat alternatif

Anaerob Bacteroides vulgatus 30 – 35 º C

Soybean-casein digest

Aerob Bacillus subtilis Candida albicans

20 – 25 º C

17 pram.steril.2012

Prosedur umum uji sterilitas

1. Inokulasi langsung ke dalam media uji Spesimen uji + media uji inkubasi tidak kurang

dari 14 hari amati pertumbuhan pada media secara visual sesering mungkin sekurangnya pada hari ke-3 atau ke-4 atau ke-5, pada hari ke-7 atau ke-8 dan pada hari terakhir dari masa uji.

Jika zat uji menyebabkan media menjadi keruh sehingga ada atau tidaknya pertumbuhan mikroba tidak dapat ditentukan secara visual pindahkan sejumlah memadai media ke dalam tabung baru berisi media yang sama, sekurangnya 1 kali antara hari ke-3 dan ke-7 sejak pengujian dimulai lanjutkan inkubasi media awal dan media baru selama total waktu tidak kurang dari 14 hari sejak inokulasi awal.

18 pram.steril.2012

Cara ini dapat digunakan untuk uji sterilitas Cairan

Salep dan minyak yang tidak larut dalam isopropyl miristat

Zat padat

Kapas murni, perban, pembalut, benang bedah, dan bahan sejenisnya

Alat kesehatan steril

Alat suntik kosong atau terisi steril

19 pram.steril.2012

2. Teknik penyaringan membran

Penyaringan dengan filter membran porositas 0,22 m, diameter 47 mm, kecepatan aliran 55 – 75 ml/menit, tek.70 cmHg.

Membran di potong menjadi 2 bagian (jika hanya mungkin membran), lalu dimasukkan ke dalam:

• Media tioglikolat cair, inkubasi 30 - 35C, 7 hari

• Media soybean digest, inkubasi 20 - 25C, 7 hari

20 pram.steril.2012

Cara ini dapat digunakan untuk uji sterilitas 1. Cairan yang dapat bercampur dengan

pembawa air 2. Cairan yang tidak bercampur dengan

pembawa air (> 100 ml/wadah) 3. Zat padat yang dapat di saring 4. Salep dan minyak yang larut dalam

isopropyl miristat 5. Alat kesehatan 6. Zat padat yang tidak dapat di saring

21 pram.steril.2012

Keuntungan cara filtrasi

• Lebih sensitive dari pada cara inokulasi

• Zat penghambat dapat dipisahkan (antibiotik, pengawet, antioksidan)

• Volume besar tidak masalah • Kesalahan sampling dengan derajat

kontaminasi rendah/dikurangi

22 pram.steril.2012

Penafsiran hasil uji sterilitas Tahap pertama • Jika (-) steril • Jika (+), tapi peninjauan dalam pemantauan

fasilitas pengujian sterilitas, bahan yang digunakan, prosedur pengujian dan kontrol negatif menunjukkan tidak memadai atau teknik aseptic yang salah digunakan dalam pengujian tahap pertama di ulang

• Jika (+), tetapi tidak terbukti uji tahap pertama tidak absah tahap ke dua.

23 pram.steril.2012

Tahap kedua • Jumlah spesimen uji min.2 x jumlah

tahap pertama • Jika (-) steril • Jika (+) tidak steril • Jika uji pada tahap kedua dibuktikan

ada kesalahan atau teknik aseptik tidak memadai tahap kedua di ulang.

24 pram.steril.2012

Pengambilan sample untuk uji sterilitas

Pengertian batch menurut FI IV

• Sediaan yang disterilkan secara bersamaan c/ dalam otoklav; isi seluruhnya = 1 batch

• Sediaan yang disterilkan secara berkesinambungan (c/ radiasi berkas electron) = 1 batch semua sediaan yang disterilisasi menurut cara tersebut tidak lebih dari 24 jam

25 pram.steril.2012

Sampling menurut FI IV

• Sediaan dibuat secara aseptic, yang di isi dalam waktu tidak kurang dari 24 jam berurutan tanpa henti (berkesinambungan), diambil pada waktu tertentu, minimum 20 wadah dan maksimum 100 wadah.

• Untuk batch kecil,

Jika jumlah wadah 20 – 200 di ambil 10%

Jika jumlah wadah 20 min. 2 wadah di ambil.

26 pram.steril.2012

1. Definisi

2. Uji pirogen

27 pram.steril.2012

PIROGEN

Definisi Pirogen adalah senyawa dengan berat molekul tinggi

yg dinyatakan sebagai senyawa lipopolisakarida-protein-lipoid-kompleks yg diproduksi kira-kira 5-10% dari masa total bakteri.

Bahan pirogen yg berukuran antara 0.05µ – 1.0µ dapat tersaring , bahan pirogen tahan terhadap panas pengeringan hingga suhu 180oC. Oleh karena itu pembebasan pirogen bukan hal yg mudah karena progen dapat berada di air suling, bahan obat, bahan pembantu, wadah atau selang infus.

28 pram.steril.2012

PIROGEN

Definisi Adanya pirogen pada tubuh akan menyebabkan

hipertermi yaitu naiknya suhu tubuh shg kita akan menggigil kedinginan.

Pada awalnya akan terjadi leukopenia, selanjutnya leukositosis yg dapat mengakibatkan kematian.

Pirogen merupakan endotoksin yaitu hasil metabiolisme bakteri gram positif seperti Salmonela, pseudomonas dan lainnya yang melekat kuat pada permukaan bakteri

Sifat pirogen ini juga ditemui pada beberapa virus, ragi dan jamur.

29 pram.steril.2012

PIROGEN

Definisi Hingga saat ini struktur kimia pirogen belum diketahui

secara pasti.

Hampir semua farmakope mencantumkan syarat bebas pirogen untuk semua sediaan parentral tetapi masih belum seragam .beberapa mensyaratkan injeksi takaran tunggal 10 ml harus bebas pirogen, tetapi ada yg mempersyaratkan 100 ml sekali pakai harus bebas pirogen.

Air yg sudah bebas pirogen bila didiamkan di udara terbuka selama 4 jan atau lebih pada temperatur 22oC akan dapat terkontaminasi pirogen.

30 pram.steril.2012

PIROGEN

Selain pirogen hipertermi dapat pula disebabkan oleh :

Senyawa seng yang berasal dari tutup karet

Logam berat seperti besi dan tembaga

Beberapa senyawa organik

Yang dipersyaratkan bebas pirogen :

1. Air atau larutan air

a. Dengan filter penyaring.

Prosesnya terjadi melalui absorbsi pirogen pada material penyaring dengan menggunakan lapisan asbes-selulosa yg berbeda jenis dan lebar porinya.

b. Kolom aluminium oksida atau penyaring karbon 0.1% dari volume total.

31 pram.steril.2012

PIROGEN

Yang dipersyaratkan bebas pirogen :

c. Sinar γ (Cobalt 60)

d. Ditambahkan H2O2 0.1% dan dimasak selama 1 jam.

e. Ditambahkan 10 ml larutan KMnO4 0.1 N dalam NaOH 1 N per liter larutan pada waktu aquades disuling

2. Bahan obat atau bahan pembantu.

a. Melalui pemanasan selama 30 menit pada suhu 250oC atau 1 jam pada 200oC

b. Dilarutkan kemudian dibebas pirogenkan.

32 pram.steril.2012

PIROGEN

Yang dipersyaratkan bebas pirogen :

3. Wadah, bahan tutup dan lainnya.

a. Gelas piala, corong,ampul,botol infus dll dibebas pirogenkan dg disterilisasi

b. Metode kimia menggunakan asam kromsulfat atau asam nitrat dan dibilas kembali dengan air suling bebas pirogen.

c. Material karet silikon dipanaskan 30 menit pada suhu 90oC dalam fenil merkuriborat 0.002%

d. Autoclav suhu 121 – 124oC selama 120 menit

e. Disterilkan dg cara dingin yaitu dg penyinaran sinar terionisasi atau dg etilen oksida.

33 pram.steril.2012

PIROGEN

UJI PIROGEN DILAKUKAN UNTUK MEMBATASI RESIKO REAKSI DEMAM SAMPAI PADA TINGKAT YANG DAPAT DITERIMA OLEH PASIEN PADA PEMBERIAN SEDIAAN PARENTERAL.

1. Test terhadap Kelinci

Prinsip kerja bahan uji diinjeksikan kedalam vena telinga kelinci kontrol kenaikan suhu diukur melalui rektal.

Hasil negatif pada kelinci (tidak terjadi kenaikan suhu) aman pada manusia.

Syarat hewan uji yg akan dipakai : sehat, lingkungan dan makanan terkontrol. Temperatur kelinci-kelinci yg digunakan tidak boleh berbeda lebih dari 1 derajat satu dg lainnya dan konstan.

Ringkasan prosedur : bebaskan alat suntik,jarum dan alat gelas dg pemanasan 250oC selama 30 menit atau cara lain yg sesuai, hangatkan produk yg akan diuji pada 37oC + 2 derajad Celsius.

34 pram.steril.2012

UJI PIROGEN

1. Test terhadap Kelinci.

Tes pirogen menurut FI Ed. III sebagai berikut :

Tes menggunakan sekelompok hewan percobaan, yaitu 3 ekor kelinci yg memenuhi syarat. Suhu bahan uji 38,5oC . Suntikkan bahan uji pada vena telinga setiap kelinci tidak kurang dari 0.5 ml dan tidak lebih dari 10 ml per kg berat badan . Catat temperatur badan pada 1,2,dan 3 jam sesudah penyuntikan.

Tabel hasil uji pirogen

35 pram.steril.2012

UJI PIROGEN

Jumlah kelinci Bahan uji memenuhi syarat bila jumlah respon tidak melebihi (oC)

Bahan uji tidak memenuhi syarat bila jumlah respon tidak

melebihi (oC)

3 1.20 2.7

6 2.80 4.3

9 4.50 6.0

12 6.60 6.6

2. Test Limulus.

Lisat yg diperoleh dari butir darah kepiting , Limulus polyphemus mengandung sistem enzim dan protein.

Apabila ada liposakarida dalam jumlah kecil dari pirogen bakteri maka akan terjadi penggumpalan. Test hanya memerlukan waktu 90 menit . Hasil poitif menjadi bukti adanya pirogen..

Adanya penggumpalan/koagulasi dikembangkan menjadi reaksi warna yg oleh FDA metode LAL ( Limulus Amebocyte Lysate ).

36 pram.steril.2012

UJI PIROGEN

PENGUJIAN OBAT SUNTIK ( In Process Control )

pram.steril.2012 37

Menurut USA-FDA, ada 6 sistem kontrol kualitas dalam pembuatan obat suntik untuk mendapatkan kualitas obat suntik yang baik sebagai berikut:

1. Sistem dan dokumen yang berkualitas serta petugas yang pandai dan memiliki kemampuan

2. Fasilitas dan perlengkapan yang terkontrol baik 3. Material yang bermutu 4. Sistem packaging yang baik 5. Laboratorium QC yang baik 6. Sistem produksi yang baik

pram.steril.2012 38

Jumlah sampel obat suntik yang di uji atau di evaluasi dari total produksi dan

hasil yang diperbolehkan rusak

JUMLAH PRODUKSI JUMLAH SAMPEL

JML SAMPEL YANG DIPERBOLEHKAN

RUSAK

151 – 280 32 1

281 – 500 50 2

501 – 1200 80 3

1201 – 3200 125 5

3201 – 10000 200 7

10001- 35000 315 10

35001 - 150000 500 14 pram.steril.2012 39

OBAT SUNTIK YANG TELAH DIPRODUKSI MEMERLUKAN

PENGUJIAN KUALITAS OBAT SUNTIK MELIPUTI:

1. Kekedapan Ampul dikumpulkan dalam bak 3 liter dan di masukkan larutan metilen blue (0,08 – 0,09%), yang dicampur dengan 0,9% benzyl alkohol dan 3 ppm sodium hypoclorite. Kemudian, bak ditutup dan divakumkan dengan tekanan 70 mmHg selama beberapa menit (tidak lebih dari 15 menit). Kemudian bak dinormalkan kembali, lalu dibuka. Perhatikan apakah ampul diwarnai oleh larutan bahan pewarna atau setelah pencucian ampul diwarnai oleh bahan pewarna.

pram.steril.2012 40

2. Kejernihan

Wadah diputar secara vertikal berulang-ulang di depan suatu latar belakang yang gelap dan sisinya diberi cahaya (1000 lux – 1500 lux, dengan jarak 25 cm).

3. Zat aktif

4. Sterilitas

5. Pirogenitas

6. Volume

pram.steril.2012 41

6. Volume

Pemeriksaan keseragaman volume dapat dilakukan dengan cara sbb:

Lakukan pemeriksaan bobot jenis/density dari larutan produk.

Berdasarkan hasil perhitungan density buat korelasi antara bobot dan volume.

Timbang ampul/vial kosong yg telah diberi tanda/no urut.

Lakukan pengisian produk.

Timbang ampul/vial yg telah diisi dengan produk.

Catat hasil penimbangan , korelasikan ke volume.

pram.steril.2012 42

7. Keseragaman bobot Hilangkan etiket 10 wadah, cuci wadah, keringkan Kemudian timbang satu persatu dalam keadaan terbuka keluarkan isi wadah cuci dengan air cuci dengan etanol 95% keringkan pada 105C ad.bobot tetap dinginkan timbang satu persatu 8. pH 9. Homogenitas 10. Toksisitas

pram.steril.2012 43