ALT (Angka Lempeng Total)TPC (Total Plate Count)

TujuanMenghitung jumlah koloni bakteri pada suatu bahan panganMengetahui mutu mikrobiologis suatu bahan pangan

PrinsipJika mikroorganisme ditumbuhkan pada suatu media agar, maka mikroorganisme tersebut akan tumbuh dan berkembang biak dengan membentuk koloni yang dapat dilihat langsung dengan mata serta dapat dihitung jumlahnya.

Metode agar cawan merupakan cara yang paling sensitif untuk menentukan jumlah mikroorganisme karena beberapa hal: 1. Hanya sel yang masih hidup yang dihitung2. Beberapa jenis mikroorganisme dapat dihitung sekaligus3. Dapat digunakan untuk mengisolasi dan mengidentifikasi mikroorganisme karena koloni yang terbentuk mungkin berasal dari mikroorganisme yang mempunyai kenampakan pertumbuhan spesifik

1Beberapa kelemahan metode agar cawanHasil perhitungan mungkin tidak menunjukkan hasil yang sebenarnyaMedia dan kondisi inkubasi yang berbeda mungkin menghasilkan nilai yang berbedaMikroorganisme yang ditumbuhkan harus dapat tumbuh pada media padat dan membentuk koloni yang kompak, jelas dan tidak menyebarMembutuhkan persiapan dan waktu inkubasi yang relatif lama

Penentuan ALT dapat dilakukan dengan 2 cara :Metode agar cawan tuang (pour plate) yaitu memasukkan contoh terlebih dulu, kemudian menambahkan media agarMetode agar cawan sebar (spread plate) yaitu memasukkan terlebih dulu media agar ke dalam cawan petri, setelah agar membeku contoh diratakan pada permukaan agar dengan menggunakan batang gelas bengkok

PeralatanTimbangan dengan ketelitian 0.0001 gramAutoclaveInkubatorCawan petriBotol pengencer / tabung reaksiBlender yang dapat disterilkan / stomacherPipetBatang gelas bengkokAlat penghitung koloni

Media dan pengencerMedia : Plate Count AgarPengencer : - Larutan Butterfields Phosphate atau - Larutan NaCl 0,85% atau - Larutan Pepton 0,1%

Preparasi contohBerat contoh yang akan diuji diambil dengan ketentuan sebagai berikut : Contoh dengan berat 1 kg : contoh diambil secara acak dan dipotong kecil-kecil hingga beratnya mencapai 100 gram Contoh dengan berat 1 4,5 kg : contoh diambil secara acak dan dipotong kecil-kecil hingga beratnya mencapai 300 gram. Contoh dengan berat 4,5 kg : contoh diambil dan dipotong kecil-kecil hingga beratnya mencapai 500 gram

ProsedurTimbang 25 g contoh, tambahkan 225 ml pengencer, hancurkan dengan blender atau stomacher ----- pengenceran 10 -1Ambil 1 ml larutan dengan pengenceran 10 -1, masukkan ke dalam 9 ml pengencer ------ pengenceran 10 -2 Pipet 1 ml dari setiap pengenceran yang dikehendaki, masukkan ke dalam cawan petri steril, tuangi dengan 12 15 ml PCA, putar-putar supaya rataSetelah beku, balik, inkubasikan pada suhu 351oC selama 48 2 jam

Pembacaan dan perhitungan koloni pada cawan petri.

Cawan dengan jumlah koloni 25 250 dan bebas spreader : catat pengenceran yang digunakan dan hitung jumlah koloni. Untuk perhitungan koloni yang menggunakan metode agar cawan sebar, jumlah koloni yang dihitung dikalikan 10, kemudian dikalikan pengenceran yang digunakan.Cawan dengan jumlah koloni 250 : bila jumlah koloni pada setiap cawan 250 pada seluruh pengenceran maka laporkan hasilnya sebagai jumlah tak terhingga atau TBUD (tak bisa untuk dihitung).Cawan tanpa koloni atau 25 : bila cawan dari semua pengenceran tidak menghasilkan koloni atau 25, lapor kan jumlah nya 25 dikalikan pengenceran terendah yang digunakan.

PelaporanUntuk menghasilkan perhitungan yang akurat dan teliti, maka laporkan hasilnya dengan dua angka (digit) pertama sebagai hasil pembulatan.Bulatkan keatas dengan cara menaikkan angka kedua menjadi angka yang lebih tinggi bila angka ketiga adalah 6, 7, 8 dan 9 dan gunakan angka 0 untuk masing-masing angka berikutnya.Bulatkan ke bawah bila angka ketiga adalah 1, 2, 3 dan 4. Bila angka ketiga 5, bulatkan keatas. Bila angka kedua ganjil bulatkan keatas dan bulatkan kebawah bila angka kedua genap. Contoh : Hasil perhitungan ALT 10. 600 11.000 10. 400 10.000 13. 500 14.000 12. 500 12.000

Contoh perhitunganPengenceran 1 : 100 1 : 1000Jumlah koloni 246 dan 238 34 dan 29

Rumus :

c N = ----------------------------------- [(1 x n1) + (0,1 x n2)] x (d) N = jumlah koloni, dinyatakan dalam koloni / gram atau ml = jumlah koloni pada seluruh cawann1= jumlah cawan pada pengenceran pertaman2= jumlah cawan pada pengenceran keduad = pengenceran pertama yang dihitung

Contoh PerhitunganPengenceran 1 : 100 1 : 1000Jumlah koloni 246 dan 238 34 dan 29 N = (246+238+34+29) [(1x2) + (0,1x2)] x 10 -2 = 547 : 0,022 = 24.863 = 25.000