validasi metode penetapan kadar …eprints.unwahas.ac.id/1512/1/file 1.pdf0,1%. tujuan penelitian...
TRANSCRIPT
VALIDASI METODE PENETAPAN KADAR PENGAWET
BENZALKONIUM KLORIDA MENGGUNAKAN KROMATOGRAFI
CAIR KINERJA TINGGI DAN APLIKASINYA PADA
SEDIAAN TETES MATA
SKRIPSI
Oleh :
Kamallita Wahyu Sukmawati
145010145
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS WAHID HASYIM
SEMARANG
2018
ii
HALAMAN JUDUL
VALIDASI METODE PENETAPAN KADAR PENGAWET
BENZALKONIUM KLORIDA MENGGUNAKAN KROMATOGRAFI
CAIR KINERJA TINGGI DAN APLIKASINYA PADA
SEDIAAN TETES MATA
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi salah satu syarat
dalam mencapai derajat Sarjana Farmasi
Program Studi Ilmu Farmasi pada Fakultas Farmasi
Universitas Wahid Hasyim
Semarang
Oleh :
Kamallita Wahyu Sukmawati
145010145
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS WAHID HASYIM
SEMARANG
2018
iii
iv
SURAT PERNYATAAN
Yang bertandatangan di bawah ini :
Nama : Kamallita Wahyu Sukmawati
NIM : 145010145
Judul Skripsi :Validasi Metode Penetapan Kadar Pengawet Benzalkonium
Klorida Menggunakan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi dan
Aplikasinya pada Sediaan Tetes Mata
Menyatakan bahwa dalam skripsi ini tidak terdapat karya yang pernah diajukan
untuk memperoleh gelar kesarjanaan di suatu perguruan tinggi dan sepanjang
pengetahuan saya juga tidak terdapat karya atau pendapat yang pernah ditulis atau
diterbitkan oleh orang lain kecuali yang secara tertulis digunakan sebagai acuan
dalam naskah dan disebutkan dalam pustaka.
Demikian surat pernyataan ini saya buat dengan sebenar-benarnya dan dapat
digunakan sebagaimana mestinya.
Semarang, 29 Agustus 2018
Kamallita Wahyu Sukmawati
v
MOTTO DAN PERSEMBAHAN
Jawaban sebuah keberhasilan adalah
terus belajar dan tak kenal putus asa
Semakin keras usaha maka akan semakin kuat pendirian
Karya ilmiah ini ku persembahkan kepada:
Bapak dan ibuku tercinta atas kasih sayang, doa dan semangatnya yang tiada henti
untukku serta almamaterku sebagai wujud terima kasih
vi
KATA PENGANTAR
Assalamualaikum Wr. Wb.
Puji syukur penulis panjatkan ke hadirat Allah SWT, yang telah
melimpahkan rahmat dan karunia-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan
penelitian dan penulisan skripsi yang berjudul “Validasi Metode Penetapan
Kadar Pengawet Benzalkonium Klorida Menggunakan Kromatografi Cair
Kinerja Tinggi dan Aplikasinya pada Sediaan Tetes Mata”. Skripsi ini disusun
untuk memenuhi salah satu syarat dalam memperoleh derajat Sarjana Farmasi
Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang.
Dalam penulisan skripsi ini tidak terlepas dari bantuan dan dukungan
berbagai pihak. Untuk itu penulis ingin mengucapkan terimakasih sebesar-
besarnya kepada :
1. Ibu Aqnes Budiarti, S.F., M.Sc., Apt selaku Dekan Fakultas Farmasi
Universitas Wahid Hasyim Semarang sekaligus sebagai pembimbing yang
telah bersedia meluangkan waktu, tenaga, dan pikiran untuk memberikan
bimbingan dan pengarahan dalam penyusunan skripsi ini.
2. Bapak Drs. Ibrahim Arifin, M.Sc., Apt dan Ibu Anita Dwi Puspitasari,
S.Si., M.Pd selaku penguji skripsi atas saran, masukan dan koreksi
terhadap skripsi ini.
vii
3. Pimpinan dan staf Laboratorium Kimia Farmasi Fakultas Farmasi
Universitas Wahid Hasyim Semarang yang telah membantu pelaksanaan
penelitian ini.
4. PT. Erela yang telah memberikan bantuan bahan untuk penelitian ini.
Khususnya kepada Bapak Edwin, Ibu Sisca serta Mbak Dian Ariesta.
5. Sugito Chandra, dan Mega Apriliani serta semua pihak yang telah
membantu penelitian dan penyusunan skripsi ini.
6. Agus Suharyono yang banyak turut membantu dan menemani dalam
menyelesaikan penelitian serta penyusunan skripsi ini
7. Serta kedua orang tuaku tersayang Bapak Suwito dan Ibu Tutik Yulianti
serta adikku tercinta Rachmad Yoga yang selalu mendoakan, memberikan
semangat dan dukungan serta memberikan bimbingan selama proses
penyusunan skripsi ini.
Penulis menyadari bahwa penulisan skripsi ini terdapat banyak kekurangan dan
masih jauh dari sempurna. Semoga skripsi ini dapat memberikan manfaat bagi
masyarakat, bagi perkembangan ilmu kefarmasian pada khususnya dan ilmu
pengetahuan pada umumnya. Amin.
Wassalamu’alaikum Wr.Wb
Semarang, 29 Agustus 2018
Kamallita Wahyu Sukmawati
viii
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ............................................................................................... ii
PENGESAHAN SKRIPSI ..................................... Error! Bookmark not defined.
SURAT PERNYATAAN....................................................................................... iv
MOTTO DAN PERSEMBAHAN .......................................................................... v
KATA PENGANTAR ........................................................................................... vi
DAFTAR ISI ........................................................................................................ viii
DAFTAR TABEL .................................................................................................. xi
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................ xii
DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................ xiii
INTISARI ........................................................................................................ xiv
ABSTRACT ......................................................................................................... xv
BAB I. PENDAHULUAN ...................................................................................... 1
A. Latar Belakang ......................................................................................... 1
B. Perumusan Masalah ................................................................................. 3
C. Tujuan Penelitian ..................................................................................... 3
D. Manfaat Penelitian ................................................................................... 4
E. Tinjauan Pustaka ...................................................................................... 4
1. Benzalkonium Klorida ...................................................................... 4
2. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) ....................................... 5
3. Validasi .............................................................................................. 8
a. Presisi............................................................................................. 8
b. Akurasi........................................................................................... 9
ix
c. Selektivitas..................................................................................... 9
d. Linieritas ...................................................................................... 10
e. Sensivitas ..................................................................................... 10
4. Sediaan Tetes Mata .......................................................................... 11
F. Landasan Teori ....................................................................................... 11
G. Hipotesis ................................................................................................. 12
BAB II METODE PENELITIAN ......................................................................... 14
A. Bahan dan Alat ....................................................................................... 14
1. Bahan................................................................................................ 14
2. Alat ................................................................................................... 14
B. Jalannya Penelitian ................................................................................. 14
1. Pembuatan larutan stok benzalkonium klorida ................................ 14
2. Pembuatan Natrium Asetat 0,1 M ................................................... 15
3. Penentuan panjang gelombang maksimum ...................................... 15
4. Optimasi Instrumen KCKT dan Optimasi fase gerak ...................... 15
5. Pembuatan kurva baku. .................................................................... 16
6. Validasi ............................................................................................ 16
a. Uji Presisi .................................................................................... 16
b. Uji Akurasi .................................................................................. 17
c. Uji Selektivitas ............................................................................ 18
d. Uji Linieritas ................................................................................ 18
e. Uji Sensitivitas ............................................................................. 19
7. Penetapan Kadar Benzalkonium Klorida ........................................ 19
x
C. Skema Jalannya Penelitian ..................................................................... 20
BAB III HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN .................................. 21
A. Optimasi Panjang Gelombang Maksimum Benzalkonium Klorida ....... 21
B. Optimasi Fase Gerak .............................................................................. 22
C. Pembuatan Kurva Baku Benzalkonium Klorida .................................... 24
D. Validasi Metode Analisis ....................................................................... 26
1. Presisi ............................................................................................... 26
2. Akurasi ............................................................................................. 27
3. Selektivitas ....................................................................................... 29
4. Linieritas .......................................................................................... 29
5. Sensitivitas ....................................................................................... 31
E. Penetapan Kadar Benzalkonium Klorida dalam sediaan Tetes Mata .... 32
BAB IV KESIMPULAN DAN SARAN............................................................. 33
A. Kesimpulan ............................................................................................ 33
B. Saran ....................................................................................................... 33
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 34
LAMPIRAN ......................................................................................................... 36
xi
DAFTAR TABEL
Tabel I. Hasil optimasi komposisi fase gerak ....................................................... 24
Tabel II. Hasil kurva baku benzalkonium klorida ................................................. 25
Tabel III. Hasil uji presisi kadar benzalkonium klorida ........................................ 26
Tabel IV. Hasil uji akurasi kadar benzalkonium klorida ...................................... 28
Tabel V. Hasil uji linieritas benzalkonium klorida ............................................... 30
Tabel VI. Hasil uji sensitivitas (LOD dan LOQ) benzalkonium klorida .............. 31
Tabel VII. Hasil uji penetapan kadar benzalkonium klorida ............................... 32
xii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Struktur Kimia Benzalkonium Klorida . ............................................... 4
Gambar 2. Skema komponen KCKT ...................................................................... 5
Gambar 3. Skema jalannya penelitian ................................................................... 20
Gambar 4. Hasil scanning optimasi panjang gelombang ...................................... 22
Gambar 5. Hasil kromatogram optimasi komposisi fase gerak ............................ 23
Gambar 6. Hasil grafik kurva baku benzalkonium klorida ................................... 25
Gambar 7. Hasil kromatogram benzalkonium klorida .......................................... 29
Gambar 8. Hasil grafik linieritas benzalkonium klorida secara KCKT ................ 31
xiii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Contoh Kromatogram Kurva Baku Benzalkonium Klorida ............ 37
Lampiran 2. Contoh Kromatogram Sampel Benzalkonium Klorida .................... 39
Lampiran 3. Contoh Perhitungan Perolehan Kembali Benzalkonium Klorida ..... 41
Lampiran 4. Perhitungan LOD dan LOQ .............................................................. 43
Lampiran 5. Contoh Perhitungan Kadar Benzalkonium Klorida .......................... 46
Lampiran 6. Contoh Perhitungan Presisi Benzalkonium Klorida ......................... 47
Lampiran 7. Dokumentasi Penelitian .................................................................... 48
Lampiran 8. Certificate Of Analysis Benzalkonium Klorida................................ 49
Lampiran 9. Surat Keterangan Telah Menyelesaikan Penelitian...........................50
xiv
INTISARI
Benzalkonium klorida digunakan sebagai bahan pengawet pada sediaan
tetes mata dan dilaporkan adanya toksisitas, sehingga perlu monitor yang ketat
pada pasien dry eye. BPOM menjelaskan batas maksimum penggunaan
benzalkonium klorida sebagai bahan pengawet pada sediaan tetes mata adalah
0,1%. Tujuan penelitian ini adalah melakukan validasi metode penetapan kadar
pengawet benzalkonium klorida menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi
dan aplikasinya pada sediaan tetes mata. Penetapan kadar benzalkonium klorida
dengan metode KCKT menggunakan fase gerak campuran natrium asetat 0,1 M
dan asam asetat glasial P pH 5,0 dan asetonitril P (55:45). Fase diam berupa
kolom C18 dengan laju alir fase gerak lebih kurang 1 mL/menit dan deteksi pada
panjang gelombang 209 nm. Hasil penelitian menunjukkan bahwa uji validasi
telah memenuhi parameter validasi. Nilai parameter validasi yang diperoleh
benzalkonium klorida untuk uji presisi menghasilkan %RSD 0,314%, uji akurasi
sebesar 100,457% - 100,974%, selektivitas yang baik, linieritas dengan nilai
korelasinya (r)= 0,999877, sedangkan LOD sebesar 2,982 μg/mL dan LOQ
sebesar 9,940 µg/mL. Kadar rata-rata benzalkonium klorida dalam sediaan obat
tetes mata adalah 100,507%. Hasil ini menunjukkan bahwa penetapan kadar
benzalkonium klorida dalam sediaan obat tetes mata dapat diaplikasikan dengan
baik.
Kata Kunci : Validasi, Benzalkonium Klorida, Sediaan Tetes Mata, Kromatografi
Cair Kinerja Tinggi.
xv
ABSTRACT
Benzalkonium chloride is used as a preservative in eye drops and there is
reported toxicity, so a tight monitor on dry eye patients is required. BPOM
explained that the maximum use of benzalkonium chloride as a preservative in
eye drops is 0.1%. The purpose of this research is to validate the method of
determining the preservative level of benzalkonium chloride using high
performance liquid chromatography and its application on eye drop preparation.
Determination of benzalkonium chloride was performed using HPLC method
equiped with UV-Vis detector at wavelength 209 nm. the stationary pashe used
was C18 and the mobile phase was a miture of 0.1 M sodium acetate and glacial
acetic acid of P pH 5,0 and acetonitrile P (55:45) with a flow plate of 1
mL/minute. Results showed that the validation test has fulfilled the validation
parameter. Validation parameter values obtained by benzalkonium chloride for
precision test yielded% RSD 0.314%, accuracy test of 100,457% - 100,974%,
good selectivity, linearity with correlation value (r) = 0,999877, while LOD equal
to 2,982 μg/mL and LOQ of 9.940 μg/mL. The average content of benzalkonium
chloride in the preparation of eye drops is 100,507%. These results indicate that
the determination of benzalkonium chloride levels in an eyedrops preparation can
be applied well.
Keywords: Validation, Benzalkonium Chloride, Eye Drop Form, High
Performance Liquid Chromatography.