uji aktivitas antibakteri ekstrak fungi endofit dan ...digilib.uinsby.ac.id/26157/2/khoirun...

UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK FUNGI

ENDOFIT DAN EKSTRAK DAUN DARI

Chromolaena odorata TERHADAP BAKTERI

Shigella dysenteriae

SKRIPSI

OLEH:

KHOIRUN NISA

H01214004

PROGRAM STUDI BIOLOGI

JURUSAN SAINS

FAKULTAS SAINS DAN TEKNOLOGI

UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SUNAN AMPEL

SURABAYA

2018

digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id digilib.uinsby.ac.id



v

UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK FUNGI ENDOFIT DAN

EKSTRAK DAUN DAI Chromolaena odorata TERHADAP BAKTERI


ABSTRAK

Kesehatan merupakan hal yang sangat penting bagi kehidupan manusia.

Masalah kesehatan yang sering terjadi di dunia terutama di negara berkembang

adalah penyakit infeksi yang disebabkan oleh bakteri Shigella dysenteriae.

Tumbuhan Chromolaena odorata merupakan tumbuhan yang memiliki banyak

potensi, salah satunya sebagai antibiotik. Di dalam jaringan tanaman terdapat

fungi endofit yang memberi keuntungan bagi tanaman inangnya, salah satunya

adalah mensintesis senyawa baru yang berfungsi sebagai antimikroba. Penelitian

ini bertujuan untuk mengetahui kemampuan ekstrak fungi endofit dan ekstrak

daun dari C. odorata terhadap S. dysenteriae dengan berbagai variasi konsentrasi

ekstrak. Metode yang digunakan yaitu metode difusi kertas cakram, dengan

variasi konsentrasi 25mg/ml, 50mg/ml, 75mg/ml dan 100mg/ml. Dari hasil

penelitian yang dilakukan diperoleh lima jenis fungi endofit. Hasil uji aktivitas

antibakteri membuktikan bahwa semua ekstrak fungi endofit dan daun dapat

menghambat aktivitas bakteri S. dysenteriae. Pada uji fitokimia hampir semua

ekstrak fungi endofit memiliki senyawa flavonoid, terpenoid, tanin dan steroid.

Diameter zona hambat pada masing-masing konsentrasi di uji statistika

menggunakan uji Kruskall-Wallis. Data yang diperoleh dari hasil uji Kruskall-

Wallis memiliki nilai signifikansi (0,005) < 0,05, yang berarti ada perbedaan yang

nyata antara ekstrak daun dan fungi Endofit terhadap zona hambat yang dihasilkan

pada uji aktivitas antimikroba. Hasil ini membuktikan bahwa fungi endofit yang

berasal dari C. odorata memiliki kemampuan yang sama dengan ekstrak daun

sebagai antibakteri terhadap S. dysenteriae.

Kata kunci: Ekstrak fungi endofit, ekstrak daun C. odorata, S.dysenteriae




vi

ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF ENDOPHYTIC FUNGI AND LEAF

EXTRACT FROM Chromolaena odorata AGAINST Shigella dysenteriae

BACTERIA

ABSTRACT

Health is a very important thing for human life. Health problems that often

occur in the world, especially in developing countries is infectious diseases caused

by Shigella dysenteriae bacteria. C. odorata plant is a plant that has a lot of

potential, one of them as an antibiotic. Within the plant tissue there are many

endophytic fungi that benefit in the host plant, one of which is synthesizing new

compounds that act as antimicrobials. This research has purpose to know the

ability of extract of endophytic fungi and leaf extract from C. odorata to

S.dysenteriae with various concentration of extract. The method used is paper disc

diffusion, with variation of concentration 25mg / ml, 50mg / ml, 75mg / ml and

100mg / ml. From the results of research conducted to obtain five types of

endophytic fungi. The results of antibacterial activity test proved that all extracts

of endophytic fungi and leaves can inhibit the activity of S. dysenteriae. In

phytochemical tests almost all extracts of endophytic fungi present flavonoid

compounds, terpenoids, tannins and steroids. Inhibitory zone diameter at each

concentration in statistical test using Kruskall-Wallis test. Kruskall-Wallis test

results have significance value (0.005) <0.05, which means there is a marked

difference between leaf extract and endophytic fungi against the inhibit zone

produced in the antimicrobial activity test. This result proves that the endophytic

fungi derived from C. odorata have the same ability with the leaf extract as

antibacterial against S. dysenteriae.

Key words: Endophytic fungi extract, C. odorata leaf extract, S.dysenteriae




vii

DAFTAR ISI

PERNYATAAN KEASLIAN ................................................................................ i

LEMBAR PERSETUJUAN PEMBIMBING ......................................................... ii

LEMBAR PENGESAHAN .................................................................................... iii

LEMBAR PERSETUJUAN PUBLIKASI ............................................................. iv

ABSTRAK ............................................................................................................. v

ABSTRACT ........................................................................................................... vi

DAFTAR ISI .......................................................................................................... vii

DAFTAR TABEL .................................................................................................. ix

DAFTAR GAMBAR ............................................................................................. x

DAFTAR LAMPIRAN .......................................................................................... xi

BAB I PENDAHULUAN

A. Latar Belakang .................................................................................... 1

B. Rumusan Masalah .............................................................................. 8

C. Tujuan Penelitian ................................................................................. 8

D. Batasan Penelitian ............................................................................... 9

E. Manfaat Penelitian ............................................................................... 9

BAB II KAJIAN PUSTAKA

A. Chromolaena odorata .......................................................................... 10

1. Taksonomi ...................................................................................... 10

2. Deskripsi ......................................................................................... 10

3. Kandungan Kimia dan Khasiat ....................................................... 12

4. Distribusi ........................................................................................ 13

B. Fungi Endofit ....................................................................................... 14

1. Deskripsi Fungi Endofit .................................................................. 14

2. Fase Pertumbuhan Fungi ................................................................ 16

3. Mekanisme Kerja Fungi Endofit ..................................................... 17

4. Metabolit Sekunder Fungi endofit ................................................... 19

C. Isolasi Fungi Endofit ........................................................................... 21

D. Metode Ekstraksi .................................................................................. 23

E. Bakteri Uji ............................................................................................ 25

1. Shigella dysenteriae......................................................................... 25

F. Antimikroba ........................................................................................ 27

a. Metode Cakram Kirby-Bauer .......................................................... 29

b. Konsentrasi Hambatan Minimum (KHM)....................................... 31

c. Hubungan antara Mikroba Patogen dan Antibiotik ......................... 32

G. Kerangka Teori .................................................................................... 34




viii

BAB III KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN

A. Kerangka Konsep ................................................................................. 35

B. Hipotesis Penelitian .............................................................................. 36

BAB IV METODOLOGI PENELITIAN

A. Rancangan Penelitian ........................................................................... 37

B. Waktu dan Lokasi Penelitian................................................................ 37

C. Bahan dan Alat Penelitian ................................................................... 38

1. Bahan Penelitian ............................................................................. 38

2. Alat Penelitian ................................................................................. 39

D. Prosedur penelitian .............................................................................. 39

E. Analisis Data ....................................................................................... 49

BAB V HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil .................................................................................................... 50

1. Isolasi Fungi Endofit ...................................................................... 50

2. Fermentasi Fungi Endofit ............................................................... 53

3. Ektraksi Daun dan Fungi Endofit .................................................... 55

4. Uji Fitokimia ................................................................................... 57

5. Uji Aktivitas Antimikroba ............................................................... 58

B. Pembahasan ......................................................................................... 63

1. Isolasi Fungi Endofit ...................................................................... 63

2. Fermentasi Fungi Endofit ............................................................... 70

3. Ektraksi Daun dan Fungi Endofit .................................................... 72

4. Uji Aktivitas Antimikroba ............................................................... 73

5. Integrasi .......................................................................................... 78

BAB VI PENUTUP

1. Simpulan ......................................................................................... 85

2. Saran ............................................................................................... 86

DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 87

LAMPIRAN .......................................................................................................... 95




ix

DAFTAR TABEL

Tabel 3.1 Waktu Penelitian ............................................................................. 37

Tabel 5.1 Pengamatan Makroskopis Isolat Fungi Endofit .............................. 53

Tabel 5.2 Warna Medium PDY pada saat Fermentasi ................................... 54

Tabel 5.3 Hasil Pemanenan Fungi Endofit ..................................................... 55

Tabel 5.4 Hasil Ekstrak Metabolit Sekunder Fungi Endofit .......................... 56

Tabel 5.5 Uji Fitokimia .................................................................................. 57

Tabel 5.6 Diameter zona hambat ................................................................... 59

Tabel 5.7 Hasil Uji Mann-Whitney ................................................................ 62




x

DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Chromolaena odorata ................................................................. 11

Gambar 5.1 Hasil Isolasi Fungi Endofit.......................................................... 52

Gambar 5.2 Hasil Pemurnian Fungi Endofit ................................................... 52

Gambar 5.3 Hasil ekstraksi fungi endofit ....................................................... 56

Gambar 5.4 Hasil Uji aktivitas antimikroba ................................................... 58

Gambar 5.5 Diagram batang diameter zona hambat ....................................... 59

Gambar 5.6 Isolat NE1 ................................................................................... 65

Gambar 5.7 Isolat NE2 ................................................................................... 66

Gambar 5.8 Isolat NE3 ................................................................................... 67

Gambar 5.9 Isolat NE4 ................................................................................... 68

Gambar 5.10 Isolat NE5 ................................................................................... 69




xi

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1 Hasil uji antibakteri Fungi Endofit dan C. odorata ..................... 99

Lampiran 2 Hasil Uji Normalitas Data ........................................................... 102

Lampiran 3 Hasil Uji Homogenitas ................................................................ 103

Lampiran 4 Hasil Uji Kruskall-Wallis ............................................................ 104

Lampiran 5 Uji Mann-Whitney ...................................................................... 105

Lampiran 6 Data Uji Aktivitas Antimikroba .................................................. 107

Lampiran 7 Uji fitokimia ................................................................................ 108

Lampiran 8 Proses Isolasi dan Fermentasi Fungi Endofit .............................. 109




1

BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Kesehatan merupakan hal yang sangat penting bagi kehidupan

manusia. Kesehatan adalah kesejahteraan optimal yang berkontribusi

terhadap kualitas hidup. Kesehatan optimal mencakup kesehatan mental,

sosial, emosional, spiritual dan fisik (Greg Welk and Ron Hager, 2010).

Kondisi lingkungan yang kurang baik dapat mempengaruhi kesehatan

manusia, sehingga kesehatan menjadi hal yang sangat penting untuk

keberlangsungan hidup manusia. Masalah kesehatan yang terjadi di dunia

terutama di negara-negara berkembang termasuk Indonesia adalah penyakit

infeksi yang disebabkan oleh bakteri, salah satunya adalah penyakit diare

(Dewi dan Fauzana, 2017).

Diare disebabkan oleh organisme infeksi termasuk virus, bakteri

protozoa dan cacing, yang ditularkan dari tinja satu individu ke individu yang

lain, dapat disebut dengan transmisi fecal-oral. Beberapa mikroorganisme

memiliki kemampuan untuk bertahan hidup dalam keadaan asam, seperti

bakteri dari Genus Shigella yang tahan terhadap pH rendah dan mudah

ditularkan melalui kontak langsung dari individu ke individu yang lain

(Gerald et al., 1998). Bakteri Genus Shigella memiliki 4 spesies diantaranya

adalah Shigella dysenteriae, Shigella flexneri, Shigella boydii, dan Shigella

sonnei. Di negara berkembang seperti Indonesia, Shigella dysenteriae paling

banyak ditemukan. Bakteri ini menyebabkan gejala diare yang paling parah




2

dan berkepanjangan dibandingkan dengan ketiga spesies yang lain

(Dwidjoseputro, 2005).

Shigella dysenteriae adalah bakteri yang berbentuk basil, fakultatif

anaerob, tidak memiliki spora dan termasuk bakteri gram negatif. Habitat

alami bakteri Shigella dysenteriae terbatas pada saluran cerna manusia dan

hewan menyusui (Brooks, et al., 2005; Ervia 2012). Shigella dysenteriae

merupakan bakteri yang menyebabkan penyakit disentri dan mengakibatkan

diare berat disertai darah, lendir dan nanah pada feses (Brooks, et al., 2005).

Insiden diare ditandai dengan gangguan buang air besar (BAB) lebih dari tiga

kali sehari dengan konsistensi tinja cair, yang dapat disertai dengan keluarnya

darah dan lendir. Diare dapat ditularkan melalui makanan, air, dan penularan

lainnya (Kemenkes RI, 2013; WHO, 2013).

Diare merupakan salah satu penyakit yang menyebabkan kematian

utama bagi anak-anak yang berusia dibawah lima tahun sebanyak 31,4% di

Indonesia (Kemenkes RI, 2015). Kematian anak-anak balita yang disebabkan

oleh diare terhitung 8% diseluruh dunia pada tahun 2016, yang berarti lebih

dari 1300 anak-anak meninggal setiap hari atau sekitar 480.000 anak pertahun

(UNICEF, 2018). Berdasarkan pada Riset Kesehatan Dasar (Riskesdas) 2013,

balita di Indonesia menderita diare dengan persentase 6,7% yang rata-rata

terjadi pada kelompok umur 12-23 bulan dan tinggal di pedesaan.

Resistensi bakteri terhadap antibiotik yang semakin meningkat,

mendorong para peneliti untuk menemukan antibiotik-antibiotik baru melalui

sintesis senyawa murni dari bahan alam atau tanaman obat untuk mengobati




3

penyakit infeksi. Salah satu tumbuhan yang memiliki banyak manfaat

dibidang kesehatan dan telah diteliti oleh banyak peneliti sebagai antibiotik

adalah Chromolaena odorata.

Tumbuhan C. odorata, dalam bahasa Indonesia dikenal dengan

nama tekelan atau kirinyuh, merupakan tanaman liar atau gulma yang sangat

merugikan bagi tanaman yang hidup disekitarnya. Sifat merugikan ini

dikarenakan C. odorata adalah kompetitor dalam penyerapan air dan unsur

hara. C. odorata sudah lama tersebar di Indonesia sejak tahun 1910 (Sipayung

et al. 1991). Secara ekologi, C. odorata dianggap sebagai tumbuhan

pengganggu karena tumbuh seperti rumput, bahkan pada lingkungan yang

kritis sekalipun tumbuhan ini masih sangat subur untuk berkembang (Grainge

dan Ahmed, 2008).

C. odorata merupakan kompetitor agresif yang menempati

berbagai jenis lahan, dimana gulma ini membentuk jalinan padat yang

mencegah tumbuhnya flora lain. Hal ini merupakan salah satu ancaman bagi

perkebunan dan ekosistem lainnya, karena C. odorata memiliki potensi

allelopathic dan inhibitor bagi pertumbuhan tanaman lain yang ada

disekitarnya (Ambika dan Jayachandra, 1980). C. odorata beracun bagi

hewan ternak karena memiliki kadar nitrat yang sangat tinggi (5 sampai 6 kali

tingkat toksik) pada daun dan tunas muda sehingga akan menyebabkan

kematian bagi hewan ternak (Sajise et al., 1974).

Terlepas dari sisi negatifnya, C. odorata memiliki potensi dalam

bidang pengobatan tradisional seperti ramuan daun yang digunakan untuk




4

mengobati batuk, obat malaria jika diramu dengan daun serai dan jambu,

sebagai obat luka untuk menghentikan pendarahan dengan cara

menghaluskan daunnya, juga dapat digunakan pula sebagai obat lain seperti

diare, antiinflamasi, antispasmodic, antihipertensif, dan diuretik (Iwu, 1993).

Rebusan bunganya dapat digunakan sebagai tonik antipiuretik dan tonik

jantung (Bunyapraphatsara dan Chokechaijaroenporn, 2000).

Penyebab C. odorata dapat tumbuh subur pada berbagai kondisi

lingkungan yang ekstrim dipengaruhi faktor biotik dan abiotik. Faktor biotik

yang menjadi salah satu alasan adalah adanya keberadaan agens hayati pada

ekosistem tanaman tersebut (Mirsam et al., 2015). Agens hayati memiliki

berbagai macam manfaat, salah satunya dapat mengendalikan aktifitas

mikroba patogen yang merugikan bagi makhluk hidup lain (Arwiyanto,

2003). Agen hayati meliputi organisme dan substansi yang dihasilkan untuk

digunakan sebagai pengendali organisme penggangu yang merugikan

(Marwoto, 2001).

Salah satu agen hayati yang sangat dikembangkan saat ini adalah

mikroba endofit. Mikroba endofit merupakan mikroba yang hidup didalam

jaringan tanaman tanpa merugikan dan tidak menunjukkan gejala apapun

pada tanaman inangnya (Durham, 2004). Potensi mikroba endofit cukup besar

karena mikroba hidup langsung didalam jaringan tanaman sehingga secara

tidak langsung dapat berperan dalam menghambat perkembangan patogen

dan meningkatkan pertumbuhan tanaman (Niere, 2002 dan Weni et al., 2011).




5

Mikroba endofit ada pada berbagai jenis jaringan tanaman, berada

secara tersembunyi diruang interselular, di dalam jaringan vaskular atau di

dalam sel (Ulrich et al., 2008). Menurut penelitian, isolat mikroba endofit

diketahui memberi efek menguntungkan bagi tanaman inangnya seperti

mencegah perkembangan penyakit dengan mensistesis senyawa baru dan

metabolit antijamur (Strobel et al., 2004). Senyawa baru itu adalah metabolit

sekunder yang dihasilkan oleh mikroba endofit. Metabolit sekunder yang

dihasilkan oleh mikroba endofit diduga sebagai akibat adanya transfer genetik

dari tanaman inang kedalam mikroba endofit (Tan RX, et al., 2001). Senyawa

metabolit yang dihasilkan oleh mikroba endofit memiliki banyak fungsi yang

menguntungkan terutama bagi kesehatan manusia diantaranya, berfungsi

sebagai antibiotik, antivirus, antikanker, antidiabetes, antimalaria,

antioksidan, antiimunisupressif (Strobel dan Daisy, 2003), antiserangga

(Azevedo et al., 2000), zat pengatur tumbuh (Tan dan Zou, 2001), dan

penghasil enzim-enzim hidrolitik seperti amilase, selulase, xilanase, liginase

(Choi et al., 2005), kitinase (Zinniel et al., 2002).

Telah banyak penelitian yang dilakukan sebelumnya untuk

mengetahui kandungan dan manfaat metabolit sekunder yang dihasilkan oleh

fungi endofit. Jenis senyawa yang dihasilkan oleh berbagai spesies mikroba

endofit meliputi alkaloid, flavonoid, fenol, peptid, quinines, steroid, dan

terpenoid (Yu et al., 2010). Menurut penelitian yang dilakukan oleh Apori, et

al., (2000) menyatakan bahwa C. odorata mengandung beberapa komposisi




6

senyawa kimia meliputi asam aspartat, treonin, serin, asam glutamat, glisin,

alanin, valin, isoleusin, tirosin, histidin, arginin, prolin, sistein, dan metionin.

C. odorata memiliki banyak keunggulan dibalik sifatnya yang

sangat antagonis terhadap tanaman lain. Mengandung berbagai macam

senyawa kimia yang dapat dimanfaatkan oleh manusia dalam bidang

kesehatan. Namun faktanya, penelitian tentang adanya agen hayati pada C.

odorata belum banyak diketahui sampai saat ini, oleh karena itu penting

sekali dilakukan kajian tentang adanya mikroba endofit yang berperan dalam

meningkatkan kemampuan C. odorata dalam pertumbuhan dan

berkembangbiak pada berbagai kondisi lahan (Mirsam, et al., 2015).

Pada penelitian-penelitian sebelumnya, seperti yang dilakukan oleh

Naido et al., (2011), bahwa ekstrak methanol daun C. odorata dapat

menghambat aktivitas beberapa bakteri diantaranya adalah Bacillus subtilis,

Bacillus cereus, Staphylococcus aereus, Staphylococcus. Epidermis dan

Escherichia coli. Dalam peneliatian Hasnawati dan Erna Parwita (2010) juga

menjelaskan bahwa ekstrak daun C. odorata dapat menghambat aktivitas

bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923 dan Escherichia coli ATCC

25922. Sehingga dapat dipastikan bahwa C. odorata memiliki potensi sebagai

antibiotik, namun penelitian mengenai fungi endofit yang ada pada gulma ini

masih belum banyak diketahui.

Pada penelitian yang dilakukan oleh Mirsam, et al. (2015)

mengenai cendawan endofit adalah untuk menguji kemampuan aktivitas

antagonis fungi endofit terhadap fungi patogen dan kemampuannya dalam




7

memacu pertumbuhan tanaman bawang merah. Berdasarkan pada penelitian

sebelumnya dan latar belakang tersebut, penting bagi penulis untuk

mengetahui adanya senyawa metabolit sekunder dan aktivitas antibiotik yang

dihasilkan oleh fungi endofit yang diisolasi dari daun C. odorata terhadap

bakteri patogen.

Saat ini, senyawa antimikroba baru sangat dibutuhkan karena

adanya kasus resistensi pada berbagai bakteri patogen terhadap antibiotik

(Strobel et al., 2005). Pada dekade terakhir ini telah dikembangkan

pemanfaatan mikroba endofit sebagai sumber obat, sebagaimana perannya

dalam menghasilkan senyawa metabolit sekunder dengan berbagai aktivitas

biologis salah satunya sebagai antibiotik (Rusman, 2006; Iwu, 1993). Endofit

merupakan sumber produk yang bernilai ekonomis tinggi dari mikroba yang

dapat diproduksi secara lebih mudah dan ekonomis (Strobel dan Daisy,

2003).

Dari latar belakang tersebut penulis ingin melakukan penelitian

tentang uji aktivitas antimikroba ekstrak fungi endofit dan ekstrak daun C.

odorata terhadap bakteri Shigella dysentriae. Dengan melihat fakta bahwa

gulma C. odorata memiliki banyak manfaat dibidang pengobatan, maka

penulis ingin mengetahui peranan fungi endofit yang diisolasi dari C. odorata

terhadap bakteri patogen pada manusia yaitu Shigella dysentriae. Selain itu,

identifikasi fungi endofit secara konvensional dilakukan dengan pengamatan

morfologi yang selanjutnya dibandingkan dengan deskripsi literatur.




8

Pengamatan dilakukan secara makroskopik dan mikroskopik (Gandjar, et al.,

1999).

B. Rumusan Masalah

Dari latar belakang yang diuraikan diatas, permasalahan yang

muncul dalam penelitian ini adalah:

1. Apakah ada perbedaan zona hambat antara ekstrak fungi endofit dan

ekstrak daun dari Chromolaena odorata pada masing-masing konsentrasi

ekstrak terhadap aktivitas mikroba dari bakteri Shigella dysenteriae?

C. Tujuan Penelitian

1. Tujuan Umum

Tujuan umum dari penelitian ini adalah untuk mengetahui

kemampuan ekstrak fungi endofit dan ekstrak daun dari C. odorata

terhadap Shigella dysenteriae.

2. Tujuan Khusus

a. Mengetahui kemampuan metabolit sekunder yang dihasilkan fungi

endofit terhadap aktivitas bakteri S. dysenteriae.

b. Mengetahui perbedaan kemampuan variasi konsentrasi ekstrak daun

dan ekstrak fungi endofit dari daun C. odorata.




9

D. Batasan Penelitian

Dalam penelitian ini peneliti melakukan batasan panelitian agar

penelitian dapat dilakukan lebih fokus dan tidak menyimpang dari tujuan

yang telah direncanakan sebelumnya. Batasan-batasan penelitian sebagai

berikut:

1. Sampel yang dijadikan objek penelitian adalah daun C. odorata

2. Fungi endofit yang digunakan dalam penelitian adalah fungi yang diisolasi

dari C. odorata.

3. Daun C. odorata dan hasil metabolit sekunder fungi endofit di ekstrak

dengan menggunakan methanol sebagai pelarutnya.

4. Mengidentifikasi fungi endofit yang diperoleh dari isolasi fungi

5. Uji aktivitas antibakteri ekstrak daun C. odorata dan fungi endofit

terhadap Shigella dysentriae.

E. Manfaat Penelitian

Manfaat dari penelitian ini dapat digunakan untuk:

1. Memberikan informasi tentang ekstrak daun C. odorata dan keberadaan

fungi endofit pada daun C. odorata serta kemampuannya sebagai

antibiotik.

2. Menambah pengetahuan di bidang mikrobiologi dan lainnya.

3. Senyawa antibiotik yang diperoleh diharapkan dapat dikembangkan untuk

menanggulangi penyakit yang disebabkan oleh Shigella dysentriae.




10

BAB II

KAJIAN PUSTAKA

A. Chromolaena odorata

1. Taksonomi

Klasifikasi C. odorata menurut Gauttier (1992) sebagai berikut:

Kingdom : Plantae

Subkingdom : Tracheobionta

Superdivisi : Spermatophyta

Divisi : Magnoliophyta

Kelas : Magnoliopsida

Subkelas : Asteridae

Ordo : Asterales

Famili : Asteraceae

Genus : Chromolaena

Spesies : Chromolaena odorata (L.) King & H.E. Robins

2. Deskripsi

C. odorata dalam bahasa inggris disebut gulma siam, di Indonesia

dikenal dengan nama tekelan atau kirinyuh, yang merupakan semak abadi

dari famili Asteraceae (Marutani dan Muniappan,1991). Sebelumnya

dikenal sebagai Eupatorium odoratum yang digolongkan sebagai gulma

yang berbahaya. Hal ini dikarenakan C. odorata sulit dikendalikan dengan

tindakan pencegahan (Baxter, 1995). Spesies ini berasal dari Amerika

http://www.plantamor.com/database/database-tumbuhan/daftar-tumbuhan_i618?genus-page=all&src=1&skw=Asteraceae

http://www.plantamor.com/database/database-tumbuhan/daftar-tumbuhan_i618?genus-page=all&src=1&skw=Chromolaena

http://www.plantamor.com/database/database-tumbuhan/daftar-tumbuhan_i618?genus-page=all&src=1&skw=Chromolaena%20odorata




11

Tengah dan Selatan, dan sekarang sudah tersebar ke seluruh Afrika dan

Asia (Marutani dan Muniappan, 1991).

Gambar 1. Chromolaena odorata

(Sumber: http://publish.plantnetproject.org)

C. odorata merupakan semak abadi yang bisa tumbuh sampai

ketinggian 1.5-2,0 m dan terkadang mencapai 5-6 m. Batangnya

bercampur baur saat pertumbuhannya dan akhirnya terkulai ke tanah

menutupi vegetasi lainnya (Mc Fayden dan Bryce Skarrat, 1996; Apori,

et al., 2000). Pertumbuhan optimalnya ditempat terbuka atau tempat yang

teduh.

Ciri-ciri morfologi C. odorata menurut Mc Fayden dan Bryce

Skarrat (1996) dan Oyen (1995) meliputi cabang batang bebas, dengan

cabang lateral berkembang berpasangan dengan tunas aksilaris. Batang

yang lebih tua berwarna hijau dan berkayu, pada ujung dan tangkai muda

berwarna hijau dan banyak mengandung air. Memiliki daun menyirip

yang sederhana, bunganya berwarna kebiru-biruan atau putih, terbentuk




12

diujung setiap cabang dan mencolok saat mekar. Berbunga dimusim

dingin pada awal musim kemarau. Produksi benih sangat produktif dan

persebaran benihnya dibantu oleh angin.

3. Kandungan Kimia dan Khasiat

Penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Apori et al., (2000)

mengungkapkan bahwa daun C. odorata memiliki komposisi kimia

diantaranya adalah protein kasar, ash, lemak, neutral-detergent fibre,

acid-detergen lignin, fenolat, tanin, nitrogen, asam aspartat, threonin,

serine, asam glutamat, glisin, valine, isoleusin, leusin, tirosin, fenilalanin,

lisin, histidin, arginin, prolin, sistein, dan metionin.

Pada penelitian yang dilakukan oleh Akinmoladun et al., (2007),

mengenai kandungan fitokimia yang ada pada ekstrak daun C. Odorata.

Hasil uji fitokimian membuktikan bahwa C. Odorata mengandung

alkaloid, saponin, tanin, phlobatannins, anthraquinones, steroid,

terpenoid, flavonoid dan cardiac glycosides (with steroidal ring dan with

deoxy - sugar).

Dalam pengobatan tradisonal, ramuan daun C. odorata digunakan

sebagai obat batuk, dan sebagai obat malaria jika diramu dengan serai

dan daun jambu, digunakan sebagai obat luka untuk menghentikan

pendarahan dengan cara menghaluskan daun C. odorata, dan berkhasiat

sebagai obat lain seperti anti diare, astringent, antispasmodic,

antihypertensive, antiinflamasi, dan diuretic (Iwu, 1993). Rebusan bunga




13

digunakan sebagai tonik, antypiretic dan tonik jantung

(Bunyapraphastara dan Chokechaijaroenporn, 2000), daun dan batang C.

odorata mengandung minyak atsiri (Chowdhury, 2002).

C. odorata juga digunakan sebagai pupuk hijau untuk

meningkatkan kesuburan tanah karena memiliki produksi biomassa yang

tinggi (15 ton DM ha−1) (Oyen, 1995). Dalam keadaan alami hewan

cenderung tidak mau memakan daun C. odorata, karena kemungkinan

disebabkan oleh baunya yang sangat kuat dan bersifat racun karena

memiliki kadar nitrat yang sangat tinggi (Sajise et al., 1974; Apori et al.,

2000).

4. Distribusi

Menurut Mc Fadyen (1989) C. odorata merupakan spesies yang

berasal dari Amerika Tengah dan Selatan, dan mulai tersebar ke Asia

sebelum tahun 1870. Penyebarannya melalui Kebun Raya Serampore di

Calcutta. Dari Calcutta gulma tersebut tersebar ke timur, ke Assam dan

Myanmar (Burma), dan kemudian semakin ke timur dan Tenggara melalui

Indonesia dan Indochina.

C. odorata diidentifikasi sebagai ancaman gulma terbesar bagi

Australia Utara, karena persebarannya yang cepat dan memiliki potensi

untuk merusak pertanian dan lingkungan (Michael, 1989). Dalam beberapa

dekade terakhir, telah menjadi hama yang serius didaerah tropis yang

lembab di Asia Tenggara, Afrika, dan kepulauan Pasifik. C. odorata




14

menyebar sangat cepat di lahan-lahan yang digunakan untuk perkebunan

seperti karet, kopi, kelapa, kakao dan jambu mete; kehutanan; dan padang

rumput (Sajise et al., 1974).

Mc Fayden (1989) menyatakan bahwa perbandingan iklim

menunjukkan sebagian besar wilayah pesisir tropis dan subtropis di

australia Barat sangat cocok untuk invasi gulma ini. Di Asia Tenggara

gulma ini berinvasif pada daerah dengan musim kering yang sangat luar

biasa, seperti khas Australia Utara, dan disebagian padang rumput basah

atau kering menunjukkan pertumbuhan dari C. Odorata yang dominan

(Mc Fadyen et al., 1996).

B. Fungi Endofit

1. Deskripsi Fungi Endofit

Fungi endofit merupakan fungi yang hidup didalam jaringan

tumbuhan tanpa menyebabkan gejala penyakit pada tumbuhan inangnya.

Fungi endofit mampu menghasilkan senyawa-senyawa bioaktif seperti

antibakteri, antifungi, antivirus, antikanker, antimalaria, dan sebagainya

(Strobel, 2003). Fungi endofit mampu menghasilkan senyawa-senyawa

yang sama dengan senyawa yang dihasilkan tanaman inangnya, namun

hal ini jarang terjadi. Senyawa yang dihasilkan fungi endofit umumnya

berbeda dengan senyawa yang dihasilkan oleh tumbuhan inangnya

(Strobel, 2004).




15

Fungi endofit menghasilkan berbagai senyawa yang memiliki

aktivitas biologi, diantaranya alkaloid, terpenoid, fenolik, dan sebagainya

(Tan dan Zou, 2001). Senyawa yang dihasilkan oleh fungi endofit

seringkali memiliki aktivitas yang lebih besar dibandingkan aktivitas

senyawa dari tumbuhan inangnya (Prihatiningtias, 2005). Fungi endofit

mendapatkan nutrisi dari hasil metabolisme tumbuhan dan memproteksi

tanaman melawan herbivora, serangga, atau jaringan yang patogen

sedangkan tanaman mendapatkan derivat nutrisi dan senyawa aktif yang

diperlukan selama hidupnya (Tanaka, et.al., 1999).

Fungi endofit yang hidup didalam jaringan tumbuhan membentuk

koloni tanpa membahayakan inangnya. Fungi endofit yang terdapat

dalam tumbuhan memacu perkecambahan, untuk bertahan dalam kondisi

yang kurang menguntungkan, mempercepat pertumbuhan, ketahanan

terhadap patogen lemah, dan beberapa kasus yang dapat menigkatkan

ketahanan tanaman terhadap tekanan lingkungan. Kemampuan fungi

endofit memproduksi senyawa metabolit sekunder sesuai dengan

tanaman inangnya yang merupakan peluang sangat besar dan dapat

diandalkan untuk memproduksi metabolit sekunder dari mikroba endofit

yang diisolasi dari tanaman inangnya (Radji, 2005; Syarmalina, 2008;

Nugroho, 2004).

Penggunaan mikroba antagonis seperti fungi endofit dapat

dilakukan untuk pengendalian penyakit yang efektif dan ramah

lingkungan. Peranan endofit sebagai agensia hayati mulai banyak diteliti




16

sejak diketahui adanya fenomena mengenai kemampuan tanaman dalam

menghadapi stres biotiok maupun abiotik terkait dengan keberadaan

endofit di dalam jaringannya (Liani, 2015).

Ditinjau dari sisi taksonomi dan ekologi, fungi endofit merupakan

organisme yang sangat heterogen. Petrini et al., (1992) menggolongkan

fungi endofit dalam kelompok Ascomycota dan Deuteromycota. Fungi

endofit yang hidup didalam jaringan inang mampu melindungi inang dari

beberapa patogen virulen diantaranya Acremonium coenophialum.

Berbagai senyawa antibiotik yang sangat bermanfaat dapat dihasilkan

oleh fungi endofit, seperti siklosporin oleh Acremonium luzulae, dan

senyawa taxol oleh Taxomyces andreanae.

2. Fase Pertumbuhan Fungi

Menurut Gandjar (2006), pertumbuhan fungi adalah pertambahan

volume sel, karena adanya penambahan protoplasma dan senyawa asam

nukleat yang melibatkan sintesis DNA dan pembelahan mitosis. Untuk

dapat mengetahui fase pertumbuhan mikroorganisme dapat dijadikan

suatu kurva pertumbuhan. Diantara lain fase kurva pertumbuhan:

a. Fase lag, merupakan fase penyesuaian sel-sel dengan lingkungan,

pembentukan enzim-enzim untuk mengurangi substrat.

b. Fase akselerasi, merupakan fase mulainya sel-sel membelah dan fase

lag menjadi fase aktif.




17

c. Fase eksponensial, merupakan fase perbanyakan jumlah sel yang

sangat banyak, aktivitas sel meningkat, dan merupakan fase yang

terpenting dalam siklus hidup fungi.

d. Fase deselari, merupakan fase dimana sel-sel mengalami penurunan

pembelahan.

e. Fase stasioner, yaitu fase dimana jumlah yang bertambah seimbang

dengan jumlah sel yang mati. Kurva pada fase ini berbentuk garis

horizontal yang lurus.

f. Fase kematian dipercepat, merupakan jumlah sel-sel yang mati atau

sel-sel yang tidak aktif bergerak lebih banyak daripada sel yang masih

hidup.

3. Mekanisme Kerja Fungi Endofit

Asosiasi fungi endofit dengan tumbuhan inangnya, oleh Carrol

(1988) digolongkan dalam dua kelompok, yaitu mutualisme konstitutif

dan induktif. Mutualisme konstitutif merupakan asosiasi yang erat antara

fungi dengan tumbuhan terutama rumput-rumputan. Pada kelompok ini

fungi endofit menginfeksi ovula (benih) inang, dan penyebarannya

melalui benih serta organ penyerbukan inang. Mutualisme induktif adalah

asosiasi antara fungi dengan tumbuhan inang, yang penyebarannya terjadi

secara bebas melalui air dan udara. Jenis ini hanya menginfeksi bagian

vegetatif inang dan seringkali berada dalam keadaan metabolisme inaktif

pada periode yang cukup lama.




18

Salah satu sifat mikroba antagonis adalah pertumbuhannya lebih

cepat dibanding dengan patogen dan menghasilkan senyawa antibiotik

yang dapat menghambat pertumbuhan patogen. Fungi endofit

menghasilkan alkaloid dan mikotoksin sehingga memungkinkan

digunakan untuk meningkatkan ketahanan tanaman terhadap penyakit.

Fungi endofit membentuk kait di sekitar hifa patogen sebelum penetrasi,

atau kadang-kadang masuk langsung (Kloepper dan Ryu 2006). Menurut

Hajek, (2004) mekanisme kerja senyawa antimikroba dalam melawan

mikroorganisme patogen dengan cara merusak dinding sel, mengganggu

metabolisme sel mikroba, menghambat sintesis sel mikoba, mengganggu

permeabilitas membran sel mikroba, menghambat sintesis protein dan

asam nukleat sel mikroba.

Simbiosis endofit dengan tanaman mampu memicu inang

mengaktifkan sistem pertahanannya dengan menghasilkan senyawa

oksigen reaktif untuk mengoksidasi atau denaturasi membran sel inang,

sehingga akan meningkatkan ketahanannya terhadap tekanan lingkungan.

Endofit juga merupakan mikroorganisme yang banyak menghasilkan

berbagai macam antioksidan, asam fenol, dan derivatnya, simbiosis

tanaman dengan endofit meningkatkan adaptasi terhadap lingkungan yang

kurang menguntungkan (Yulianti, 2012; Petrini, et al., 1992).

Mekanisme endofit dalam melindungi tanaman terhadap serangan

patogen atau serangga yaitu dengan penghambatan pertumbuhan patogen

secara langsung melalui senyawa antibiotik dan enzim litik yang




19

dihasilkan. Penghambatan secara tidak langsung melalui perangsangan

endofit terhadap tanaman dalam pembentukan metabolit sekunder seperti

asam salisilat dan etilen yang berfungsi dalam pertahanan tanaman

terhadap serangan patogen. Perangsangan pertumbuhan tanaman sehingga

lebih kebal dan tahan terhadap serangan patogen. Dan kolonisasi jaringan

tanaman sehingga patogen sulit penetrasi (Yulianti, 2012). Menurut

Kloepper dan Ryu (2006) fenomena ini disebut sebagai pengendali hayati.

Mekanisme yang mempengaruhi fungi endofit sebagai pengendali

hayati dikarenakan metabolit organisme yang mempengaruhi tanaman

inang dalam meningkatkan ketahanan tanaman terhadap patogen, yang

disebut induce system resistance (ISR). Selain itu, ketahanan juga bisa

didapatkan dari tanaman itu sendiri karena adanya serangan dari patogen

yang disebut systemicacquired resistance (SAR). Maka dari itu, ISR

dipicu oleh organisme nonpatogen, sedangkan SAR dipicu oleh patogen

atau kandungan kimia yang dihasilkan dari patogen (Kloepper dan Ryu,

2006).

4. Metabolit Sekunder Fungi Endofit

Pentingnya fungi sebagai sumber senyawa bioaktif, pertama kali

ditemukan penisilin dari Penicilium notatum oleh Alexander Fleming

tahun. Sejak saat itu penemuan produk alami dari fungi mendapat banyak

perhatian setelah diketahui bahwa fungi dapat menghasilkan produk

dengan skala besar (Waites, et al., 2001). Dan fungi endofit yang




20

berasosiasi dengan tumbuhan adalah salah satu mikroorganisme yang

menghasilkan metabolit sekunder biologis aktif yang baru (Aly, et al.,

2010; Debbabetal, 2010).

Mikroorganisme endofit mampu mengeluarkan suatu metabolit

sekunder yang merupakan senyawa yang disintesis oleh suatu mikroba,

tidak untuk memenuhi kebutuhan primernya melainkan untuk

mempertahankan eksistensinya dalam berinteraksi dengan lingkungannya

(Purwanto, 2000). Fungi endofit merupakan mikroorganisme yang kaya

akan metabolit sekunder bioaktif. Fungi endofit yang hidup pada

jaringan tanaman yang sehat akan menghasilkan enzim dan metabolit

sekunder yang sangat bermanfaat bagi fisiologi dan ekologi tumbuhan

inang (Tan dan Zou, 2001 dan Zhang et al., 2006).

Senyawa metabolit sekunder yang dihasilkan oleh fungi endofit

sangat bervariasi baik dari struktur dan fungsinya, diantaranya alkaloid,

flavonoid, kuinon, terpenoid, antrakuinon, fenil propanoid, turunan

isokumarin, peptida, dan senyawa lafatik (Agusta, 2009). Selain

menghasilkan senyawa-senyawa metabolit, fungi endofit juga mampu

menghasilkan senyawa bioaktif yang berpotensi sebagai antimikroba

(Strobel dan Daisy, 2003; Agusta et al., 2006; Castillo Iet alI., 2007),

antikanker (Kumala, 2005), antiserangga (Azevedo et al., 2000), zat

pengatur tumbuh (Tan dan Zou 2001), dan penghasil enzim hidrolitik

(Choi et al., 2005). Potensi biologis dari jamur endofit lainnya ialah

sebagai antiimunosupresif (Lee et al. 1995), anti-HIV, antioksidan




21

(Strobel et al. 2002), antivirus (Guo et al. 2000), antidiabetes (Zhang et

al. 1999, Strobel & Daisy 2003), anti-HS V-1, antituberkular (Agusta

2009), dan antimalaria (Lu et al. 2000; Simanjuntak et al. 2002; Castillo

et al., 2003).

C. Isolasi Fungi Endofit

Isolasi adalah cara untuk memisahkan suatu mikroorganisme dari

lingkungannya, sehingga diperoleh biakan yang sudah tidak tercampur

biakan lain atau disebut sebagai biakan murni (Gandjar et al., 1992). Sebelum

dilakukan isolasi, ada beberapa perlakuan yang dilakukan untuk menghindari

kontaminasi dari mikroorganisme yang tidak diinginkan. Hal yang pertama

kali dilakukan adalah sterilisasi permukaan bahan yang berasal dari organ

tumbuhan yang masih dalam keadaan segar atau yang disebut dengan metode

surface sterilization (Ando et al., 2003; Agusta, 2009). Tujuan dari metode

ini adalah untuk menghilangkan mikroorganisme epifit yang ada

dipermukaan tumbuhan, sehingga pada saat isolasi fungi endofit koloni yang

diperoleh hanya berasal dari dalam jaringan tumbuhan (Larran, et al., 2001).

Sterilisasi permukaan bahan tumbuhan dilakukan dengan

menggunakan alkohol dan hipoklorit sebagai desinfektan (Ando et al., 2003).

Desinfektan merupakan senyawa kimia yang digunakan untuk mengurangi

mikroorganisme patogen termasuk spora bakteri pada permukaan suatu objek

(Rao, 2008). Namun, dalam metode ini desinfektan digunakan untuk

menghilangkan mikroorganisme yang ada dipermukaan bahan pada




22

tumbuhan (Larran et al., 2001). Bahan yang digunakan untuk sterilisasi

permukaan adalah alkohol dan hipoklorit yang memiliki fungsi yang berbeda

dalam mekanismenya. Alkohol bekerja dengan merusak lapisan membran sel

mikroorganisme (Rao, 2008), alkohol juga dapat melarutkan lipid dan

mendenaturasi protein yang didalam membran sel, sehingga fungsi membran

sel terganggu dalam mengatur transportasi cairan kedalam dan keluar sel dan

menyebabkan mikroorganisme menjadi lisis (McDonnel dan Russell, 2999).

Natrium hipoklorit merupakan senyawa klorin (Rao, 2008) yang

diketahui berfungsi menghambat pertumbuhan sel mikroorganisme dengan

mekanisme kerja yang berbeda dengan alkohol (Valera et al., 2009).

Dikarenakan alkohol memiliki spektrum kerja yang relatif sempit sehingga

dikombinasikan dengan natrium hipoklorit (Agusta, 2009). Senyawa klorin

dapat mengganggu proses oksidasi dari enzim-enzim penting didalam sel

sehingga metabolisme sel mikroorganisme terganggu dan tidak dapat tumbuh

(Valera et al., 2009).

Untuk mendapatkan fungi endofit yang murni, maka proses isolasi

disertai dengan purifikasi (Cappucino dan Sherman, 1996). Dengan

menggunakan teknik quadrant streak menggunakan jarum inokulasi untuk

membantu persebaran sel-sel mikroorganisme. Cara untuk melakukan

purifikasi ini adalah dengan menggoreskan ujung jarum inokulasi pada

medium, dan proses ini kemudian diikuti dengan inkubasi pada kondisi yang

sesuai hingga diperoleh koloni yang presentatif. (Hogg, 2005).




23

D. Metode Ekstraksi

Ekstraksi adalah penyarian zat-zat berkhasiat atau zat-zat aktif dari

bagian tanaman obat hewan dan beberapa jenis ikan termasuk biota laut.

Tujuan ekstraksi bahan alam adalah untuk menarik komponen kimia yang

terdapat pada bahan alam. Ekstraksi didasarkan pada prinsip perpindahan

massa komponen zat ke dalam pelarut, dimana perpindahan mulai terjadi

pada lapisan kemudian berdifusi masuk ke dalam pelarut (Ditjen POM,

2000).

Ekstraksi adalah peristiwa pemindahan zat terlarut (solute) antara

dua pelarut yang tidak saling bercampur dengan tujuan untuk memperoleh

ekstrak murni (Achmadi, 1992). Menurut Harborne (1987), ekstraksi

merupakan proses penarikan komponen atau zat aktif suatu simplisia

dengan menggunakan pelarut tertentu. Proses ekstraksi bertujuan untuk

mendapatkan bagian-bagian tertentu dari bahan yang mengandung

komponen-komponen aktif.

Terdapat dua jenis ekstraksi yang dikenal yaitu dengan

menggunakan panas dan tanpa pemanasan. Pembagian jenis ekstraksi

dapat juga dilakukan menurut pelarut yang digunakan. Pada pembagian

ini, ekstraksi dibagi menjadi ekstraksi tunggal dan ekstraksi bertingkat.

Ekstraksi tunggal adalah teknik ekstraksi pada bahan secara langsung

menggunakan satu jenis pelarut, sedangkan ekstraksi bertingkat adalah

ekstraksi dengan beberapa pelarut organik yang tingkat kepolarannya

berbeda-beda (Malthaputri, 2007).




24

Prinsip ekstraksi menggunakan pelarut organik adalah bahan yang

akan diekstrak dikontakkan dengan pelarut selama selang waktu tertentu,

sehingga komponen yang akan diekstrak akan terlarut dalam pelarut.

Kelebihan dari ekstraksi menggunakan pelarut organik adalah

mendapatkan senyawa yang lebih terkonsentrasi dan memiliki aroma yang

hampir sama dengan bahan alami awal (Malthaputri, 2007).

Jenis dan mutu pelarut yang digunakan menentukan keberhasilan

proses ekstraksi. Pelarut yang digunakan harus dapat melarutkan zat yang

diinginkannya, mempunyai titik didih yang rendah, murah, tidak toksik

dan tidak mudah terbakar (Ketaren, 1986). Beberapa metode ekstraksi

dengan menggunakan pelarut dibagi menjadi dua cara, yaitu cara dingin

dan cara panas. Ekstraksi cara dingin dapat dibedakan sebagai berikut:

1. Maserasi

Maserasi adalah proses penyarian simplisia menggunakan pelarut

dengan beberapa kali pengocokan atau pengadukan pada temperatur

kamar (Ditjen POM, 2000). Keuntungan ekstrasi dengan cara maserasi

adalah pengerjaan dan peralatan yang digunakan sederhana, sedangkan

kerugiannya yakni cara pengerjaannya lama. Dalam maserasi (untuk

ekstrak cairan), serbuk halus atau kasar dari tumbuhan obat yang

kontak dengan pelarut disimpan dalam wadah tertutup untuk periode

tertentu dengan pengadukan yang sering, sampai zat tertentu dapat

terlarut. Metode ini cocok digunakan untuk senyawa yang termolabil

(Tiwari et al., 2011).




25

Proses maserasi sangat menguntungkan dalam isolasi senyawa

bahan alam karena dengan perendaman sampel tumbuhan akan terjadi

pemecahan dinding dan membran sel akibat perbedaan tekanan di

dalam dan di luar sel, sehingga metabolit sekunder yang ada dalam

sitoplasma akan terlarut dalam pelarut organik dan ekstraksi senyawa

akan sempurna karena dapat diatur lama perendaman yang digunakan

(Darwis, 2000).

E. Bakteri Uji

1. Shigella dysenteriae

Klasifikasi bakteri Shigella dysenteriae menurut Kannet Todar

(2012):

Kingdom : Bacteria

Filum : Protoeibacteria

Kelas : Gammaproteobacteria

Ordo : Enterobacteriales

Famili : Enterobactericeae

Genus : Shigella

Spesies : Shigella dysenteriae

Shigella merupakan bakteri Gram negatif, selnya berbentuk batang,

dan tidak bergerak. Suhu pertumbuhan optimum 37˚C dalam keadaan

aerobik (Pelczar dan Chan, 1988). Shigella species merupakan kuman

patogen usus yang telah lama dikenal sebagai agen penyebab penyakit




26

disentri basiler. Terdapat 4 spesies Shigella yaitu Shigella dysenteriae,

Shigella flexneri, Shigella boydii, dan Shigella sonnei (Karsinah dkk.,

1994).

Sifat koloni S. dysentriae kecil dan halus. Semua spesies Shigella

tidak memfermentasi laktosa, dengan pengecualian S. sonnei, yang

memfermentasi laktosa secara lambat, pada media agar Mac Conkey

koloni akan berubah menjadi berwarna merah muda sesudah lebih dari

18 jam (Gibson, 1996). S. dysenteriae membentuk asam dari karbohidrat

tetapi jarang memproduksi gas (Jawetz et al., 2005).

Daya invasi kuman menembus masuk ke dalam lapisan epitel

permukaan mukosa usus di daerah ileum terminal dan kolon, pada

lapisan epitel tersebut kuman memperbanyak diri. Sebagai reaksi tubuh

terjadi reaksi peradangan diikuti dengan kematian sel dan mengelupasnya

lapisan tersebut, terjadilah tukak (Karsinah dkk., 1994). Gejala klinik

yang menyertainya adalah disentri basiler atau Shigellosis yaitu suatu

infeksi peradangan akut saluran pencernaan, dengan kondisi klinis

meliputi diare, buang air besar berair yang disertai darah, lendir, dan

nanah (Pelczar dan Chan, 1988). S. dysenteriae dapat menyebabkan 3

bentuk diare: 1). Disentri klasik dengan tinja yang konsisten lembek

disertai darah, mucus, dan pus 2). Watery diarrhea 3). Kombinasi

keduanya (Karsinah dkk., 1994).

Menurut Sack et al (2005) bakteri S. dysenteriae merupakan

bakteri yang mampu menghasilkan suatu toksin protein poten yang




27

dikenal dengan protein shiga yang terdiri dari dua struktur subunit, yaitu

subunit fungsional (pada sitoplasma subunit fungsional akan

mengkatalisasi dan menghidrolisis RNA 28S dari subunit 60S ribosom,

sehingga menyebabkan hambatan pada sintesis protein yang bersifat

permanen sehingga mengakibatkan kematian sel) dan subunit pengikat

(bagian subunit pengikat merupakan suatu glikolipid globotriaosilseramid

(Gb3) yang berfungsi untuk mengikat reseptor seluler spesifik, pengikatan

ini akan diikuti oleh pengaktifan mediator reseptor endositosis dari toksin

yang dihasilkan).

F. Antimikroba

Dewasa ini, berbagai jenis antimikroba telah tersedia untuk mengobati

penyakit yang disebabkan oleh mikroorganisme. Zat antimikroba yang

digunakan dalam pengobatan bertujuan untuk mengeliminasi mikroorganisme

infektif atau mencegah terjadinya infeksi. Zat antimikroba juga harus mampu

menunjukkan toksisitas selektif. Zat antimikroba harus mampu menghambat

mikroorganisme infektif dan bersifat toksik hanya terhadap patogen infektif,

tetapi tidak terhadap inangnya (Harmita et al., 2006).

Antibiotik merupakan salah satu kelompok terbesar dari zat

antimikroba. Antibiotik adalah zat biokimia yang diproduksi oleh

mikroorganisme, yang dalam jumlah kecil dapat menghambat pertumbuhan

atau membunuh organisme lain. Sesuai sifatnya, antibiotik harus memiliki

toksisitas selektif karena kelompok obat ini diproduksi oleh mikroorganisme




28

dan mempunyai derajat toksisitas yang berbeda-beda terhadap

mikroorganisme lain (Darmadi, 2008).

Seleksi antimikroba menurut Darmadi (2008), yang tepat untuk

mengobati suatu penyakit tergantung pada beberapa faktor, antara lain:

1. Sensitivitas mikroorganisme infektif terhadap zat antimikroba tertentu.

2. Efek samping zat antimikroba, bergantung pada toksisitas langsung

terhadap sel mamalia dan normal mikrobiota (flora normal) yang terdapat

pada jaringan tubuh manusia.

3. Biotransformasi zat antimikroba secara in vivo, bergantung pada apakah

zat antimikroba akan tetap dalam bentuk aktofnya pada jangka waktu

yang cukup untuk mempunyai efek toksik pada patogen infektif atau

tidak.

4. Bahan kimia pada zat antimikroba yang menentukan distribusinya dalam

tubuh, begantung pada konsentrasi bahan kimia aktif antimikroba, yang

dapat mencapai tempat infeksi untuk menghambat atau membunuh

mikroorganisme patogen penyebab infeksi.

Penetapan kerentanan patogen terhadap antimikroba penting untuk

menyelidiki antibiotik yang sesuai untuk mengobati penyakit. Tidak ada

gunanya menggunakan antibiotik yang tidak efektif melawan

mikroorganisme penyebab penyakit. Ada beberapa prosedur berbeda yang

digunakan oleh ahli mikrobiologiuntuk menentukan sensitivitas

mikroorganisme terhadap antibiotik, antara lain Metode Cakram Kirby-Bauer




29

dan Metode Konsentrasi Hambatan Minimum (KHM) atau Minimum

Inhibitory Concentration (MIC) (Harmita et al., 2006).

a. Metode Cakram Kirby-Bauer

Uji Kirby-Bauer bertujuan untuk menguji kerentanan antibiotik

terhadap mikroba pathogen, yang disebut dengan uji difusi cakaram.

Pertama kali dikembangkan pada tahun 1950an, disempurnakan oleh W.

Kirby dan A. Bauer, dan distandarisasi oleh Organisasi Kesehatan Dunia

(World Health Organization) (Reynolds and Richland, 2011).

Menurut Harmita et al., (2006), cara mudah untuk menentukan

kerentanan organisme terhadap antibiotik yaitu dengan menginokulasi

pelat agar dengan biakan dan membiarkan antibiotik berdifusi ke media

agar. Metode ini menggunakan cakram yang sebelumnya sudah diberi

antibiotik dan diletakkan dipermukaan pelat agar yang mengandung

organisme uji. Agen antimikroba kemudian berdifusi ke dalam pelat agar

yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri disona yang mengelilingi

cakram. Antibiotik yang berhasil menekan pertumbuhan mikroba

ditunjukkan dengan zona hambat (Vineetha et al., 2015). Zona hambat

merupakan zona jernih atau bersih yang terdapat disekitar cakram sebagai

hasil aktivitas antibiotik yang mampu menekan dan menghambat

pertumbuhan mikroba. Diameter zona hambat dapat diukur dengan

penggaris atau alat ukur lainnya dan hasil eksperimen ini merupakan satu

antibiogram (Harmita et al., 2006).




30

Menurut Biemer (1973) tingkat difusi zat antimikroba kedalam

pelat agar dipengaruhi oleh banyak sifat fisiokimia zat, pH, dan suhu.

Sedangkan menurut Harmita et al., (2006) ukuran zona hambatan dapat

dipengaruhi oleh kepadatan atau viskositas media biakan, kecepatan

difusi antibiotik, dan interaksi antibiotik dengan media.

Setelah inokulasi, mikroba akan mengalami proses proliferasi,

selama periode ini diameter zona akan terbentuk dan ukurannya

ditentukan oleh konsentrasi agen antimikroba yang efektif pada jarak

tertentu ditepi cakram. Diluar dari jarak spesifik ini, konsentrasi

antimikroba yang lebih rendah memungkinkan mikroba akan berkembnag

biak (Biemer, 1973). Ada atau tidak adanya pertumbuhan sekitar cakram

antimikroba adalah ukuran tidak langsung dari kemampuan antibiotik

untuk menghambat suatu organisme. Kecepatan difusi melalui agar tidak

secepat laju ekstraksi antimikroba keluar dari cakram. Laju difusi

antimikroba melalui pelat agar tergantung pada sifat difusi dan kelarutan

antibiotik dalam agar dan berat molekul senyawa antibiotik (Vineetha et

al., 2015)

Metode difusi agar telah digunakan secara luas dengan

menggunakan cakram kertas saring yang tersedia secara komersial.

Efektivitas relatif antibiotik yang berbeda menjadi dasar bagi spektrum

sensivitas suatu organisme. Selain itu, suatu zat yang ditemukan memiliki

efek samping signifikan tidak boleh digunakan untuk antibiotik (Harmita

et al., 2006).




31

b. Konsentrasi Hambatan Minimum (KHM)

Konsentrasi hambatan minimum atau dalam bahasa inggris disebut

dengan Minimum Inhibitory concentration (MIC) merupakan konsentrasi

antibiotik terendah yang masih dapat menghambat pertumbuhan

organisme yang terlihat. Metode ini banyak digunakan dalam pengujian

komparatif baru untuk mendapatkan hasil akurat dalam pengelolaan

klinis. Prosedur KHM dilakukan dengan prinsip tabung enceran atau

dilusi, yang digunakan untuk menentukan konsentrasi antibiotik yang

masih efektif untuk mencegah pertumbuhan mikroba patogen dan

mengindikasikan dosis antibiotik yang efektif untuk mengontrol

pertumbuhan mikroba-mikroba pathogen (Harmita et al., 2006;

EUCAST: 2000).

Inokulum mikroorganisme yang telah distandardisasi ditambahkan

kedalam tabung yang mengandung seri enceran suatu antibiotik, dan

pertumbuhan mikroorganisme akan termonitor dengan perubahan

kekeruhan. Dengan cara ini, KHM antibiotik yang dapat mencegah

pertumbuhan mikroorganisme in vitro dapat ditentukan.

KHM juga dapat ditentukan menggunakan konsentrasi tunggal

suatu antibiotik yang harus dicapai pada tempat infeksi untuk

menghambat pertumbuhan mikroorganisme yang sedang diperiksa.

Dengan mengetahui KHM dan teori kadar antibiotik yang dapat dicapai

pada cairan tubuh (darah dan urin), kita dapat memilih antibiotik yang




32

sesuai. Secara umum batas keamanan 10 kali KHM digunakan untuk

memastikan keberhasilan pengobatan suatu penyakit.

c. Hubungan antara Mikroba Patogen dan Antibiotik

Menurut (Darmadi, 2008) Mikroba patogen dapat melakukan

invasi secara secara cepat ke tubuh penderita, melalui jaringan kulit yang

terbuka, hidung dan mulut, dan lain-lain. Mikroba patogen harus

dihambat pertumbuhannya atau dibunuh agar tidak berkembang dan

menyebar dalam tubuh penderita, sehingga diperlukan adanya antibiotik

untuk menghambat dan membunuh mikroba patogen.

Tidak selamanya antibiotik secara efektif dapat menghambat

pertumbuhan dan membunuh mikroba patogen. Daya tahan mikroba

patogen ini disebut dengan perlawanan atau resistensi terhadap antibiotik.

Bentuk resistensi yang dimilliki mikroba patogen terhadap antibiotik ada

dua yaitu bentuk resistensi bawaan dan bentuk resisensi didapat. Pada

kasus reistensi bawaan, semua mikroba patogen bisa resisten terhadap

suatu obat sebelum mikroba tersebut kontak dengan antibiotik. Sebagai

contoh Pseudomonas aeuruginosa yang selalu resisten terhadap

fluksosasilin. Mekanisme terjadinya resistensi ini dikarenakan:

1) Terbentuknya enzim seperti betalaktamase yang dihasilkan oleh

mikroba patogen, yang bersifat merusak antibiotik agar tidak efektif

2) Terjadinya perubahan permeabillitas dinding sel mikroba patogen

sehingga tidak dapat ditembus oleh antibiotik




33

3) Terjadinya perubahan struktur inherent didalam sel mikroba patogen

sebagai target antibiotik

4) Terjadinya perubahan jalur metabolisme didalam sel mikroba patogen

dengan tujuan menghindari jalur yang biasa dihambat oleh antibiotik

5) Terbentuknya produk enzim baru yang bersifat membantu dan

mengamankan proses metabolisme mikroba patogen terhadap

pengaruh antibiotik.

Sehingga diperlukan pengembangan antibiotik-antibiotik terbaru

dalam mengatasi masalah mikroba patogen yang telah resisten terhadap

antibiotik yang diberikan.




34

G. Kerangka Teori

Chromolaena odorata

Fungi Endofit

Isolasi Fungi Endofit

Ekstraksi


Taksonomi dan Deskripsi

Kandungan Kimia

Metabolit Sekunder

Ekstraksi

Metabolit Sekunder

Uji Aktivitas antibakteri




35

BAB III

KERANGKA KONSEP DAN HIPOTESIS PENELITIAN

A. Kerangka Konsep

Keterangan :

: Variabel bebas

: Variabel terikat

: Variabel Kontrol

Ekstrak metabolit sekunder fungi endofit dan ekstrak

daun Chromolaena odorata

25mg/ml, 50mg/ml, 75mg/ml, 100mg/ml

Antibiotik

Kloramfenikol

DMSO

5%

Daun Chromolaena odorata

Isolasi Fungi Endofit

Fermentasi Metabolit

Sekunder Ekstraksi filtrate dan miselium

Ekstraksi daun

Zona hambat pertumbuhan bakteri Shigella dysenteriae


1.Jumlah koloni 1,5 x

108 CFU/ml

2. Dibiakkan pada

media NA

3. diinkubasi selama 24

jam pada suhu 37oC.




36

B. Hipotesis Penelitian

Ada perbedaan zona hambat antara ekstrak fungi endofit dan ekstrak daun dari

Chromolaena odorata pada masing-masing konsentrasi ekstrak terhadap

aktivitas mikroba dari bakteri Shigella dysenteriae.




37

BAB IV

METODOLOGI PENELITIAN

A. Rancangan Penelitian

Penelitian yang dilakukan merupakan penelitian eksperimental.

Dengan melakukan eksperimen dan uji coba dari hasil produk yang

diperoleh untuk diketahui pengaruhnya terhadap objek peneitian.

Rancangan pada penelitian ini menggunakan rancangan acak kelompok

(RAK). Menguji beberapa ekstrak metabolit sekunder yang dihasilkan oleh

fungi endofit dan ekstrak daun pada bakteri uji.

B. Waktu dan Lokasi Penelitian

Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Terintegrasi, Fakultas

Sains dan Teknologi, Universitas Islam Negeri Sunan Ampel Surabaya.

Waktu pelaksanaan penelitian dimulai pada bulan Agustus 2017 sampai

dengan Juni 2018.

No Kegiatan Bulan

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

1

Persiapan (Pengajuan

judul)

2

Pembuatan Proposal

Skripsi

3 Seminar Proposal

4 Penelitian

5 Analisis Data

6 Pembuatan draft skripsi

7 Seminar hasil Penelitian

Tabel 4.1 Waktu Penelitian




38

C. Bahan dan Alat Penelitian

1. Bahan Penelitian

a. Sampel Tumbuhan

Sampel yang digunakan adalah daun tumbuhan

Chromolaena odorata yang di ambil dari Kecamatan

Ujungpangkah Kabupaten Gresik.

b. Mikroorganisme

Mikroorganisme yang digunakan adalah isolat-isolat dari

kapang endofit Chromolaena odorata. Bakteri uji yang digunakan

adalah Shigella dysentriae.

c. Medium

Medium yang digunakan adalah Potato Dextrose Agar

(PDA) yang digunakan untuk pertumbuhan dan pemeliharaan

kapang endofit. Medium Nutrient Agar (NA) digunakan untuk

pertumbuhan dan medium uji bakteri. Medium Potato Dextrose

Yeast (PDB), dan medium Mueller Hinton (MH) yang digunakan

untuk medium pengujian.

d. Bahan Kimia

Bahan kimia yang digunakan adalah alkohol 70%, sodium

hypochlorite (NaOCl) 5,3%, kloramfenikol, methylene blue,

pelarut metanol dan tetracycline.




39

e. Bahan Habis Pakai

Bahan habis pakai yang digunakan meliputi masker, sarung tangan,

plastik tahan panas, tissue, karet, kertas saring, dan cakram kertas

(paper disk) 6 mm.

f. Bahan lain

Bahan lain yang diperlukan adalah air destilasi untuk

pembuatan media dan air kran untuk mencuci sampel dari debris

yang menempel.

2. Alat Penelitian

Alat yang digunakan dalam penelitian meliputi autoclave,

inkubaator, Laminar Air Flow (LAF), Spektrofotometri, inkubator,

rotary shaker, mikroskop, hot plate, pinset, jarum ose, cawan petri,

tabung reaksi, neraca analitik, spatula, bunsen, kaca preparat, kaca

penutup.

D. Prosedur Penelitian

1. Pembuatan Medium

a. Media PDA

Pembuatan medium PDA dilakukan berdasarkan resep pada

kemasan. Medium PDA dibuat dengan menimbang PDA sebanyak

39 gram dan dilarutkan dalam 1 liter air destilasi dalam

erlenmeyer. Kemudian medium dipanaskan dengan hot plate

hingga mendidih dan bening. Ditutup dengan kapas dan disterilkan




40

menggunakan autoklaf selama 15 menit dengan suhu 121⁰C

dengan tekanan 2 atm. Medium yang telah steril siap digunakan.

b. Media NA

Pembuatan medium NA dilakukan berdasarkan resep pada

kemasan. Medium NA dibuat dengan menimbang NA sebanyak 30

gram dan dilarutkan dalam 1 liter air destilasi dalam erlenmeyer.

Kemudian medium dipanaskan dengan hot plate hingga mendidih

dan bening. Ditutup dengan kapas dan disterilkan menggunakan

autoklaf selama 15 menit dengan suhu 121⁰C dengan tekanan 2

atm. Medium yang telah steril siap digunakan.

c. Media PDB

Pembuatan medium PDB dilakukan berdasarkan resep

pada kemasan. Medium PDB dibuat dengan menimbang PDB

sebanyak 24 gram dan dilarutkan dalam 1 liter air destilasi dalam

erlenmeyer. Kemudian medium dipanaskan dengan hot plate

hingga mendidih dan bening. Ditutup dengan kapas dan disterilkan

menggunakan autoklaf selama 15 menit dengan suhu 121⁰C

dengan tekanan 2 atm. Medium yang telah steril siap digunakan.

d. Media MH

Pembuatan medium MH dilakukan berdasarkan resep pada

kemasan. Medium MH dibuat dengan menimbang bubuk MH

sebanyak 37 gram dan dilarutkan dalam 1 liter air destilasi dalam

erlenmeyer. Kemudian medium dihomogenkan dengan magnetic




41

stirer dan dipanaskan hingga mendidih diatas hot plate. Ditutup

dengan kapas dan disterilkan menggunakan autoklaf selama 15

menit dengan suhu 121⁰C dengan tekanan 2 atm. Medium yang

telah steril siap digunakan.

2. Sterilisasi Permukaan

Sampel daun sehat yang berukuran 10 mm x 5 mm dicuci

dengan menggunakan air destilasi untuk menghilangkan debris yang

menempel pada daun. Kemudian bahan dipotong menjadi 10

subsampel dengan ukuran 2 x 2,5 mm. (Cannon and Simon, 2002).

Sterilisasi permukaan dilakukan berdasarkan metode Nakagiri et

al. (2005). Sampel daun disterilisasi menggunakan alkohol 70%

selama 1 menit dan sodium hypochlorite (NaOCl) 5.3% selama 2

menit, kemudian dibilas dengan air destilasi 3 kali, dan dikeringkan 3-

4 jam diatas kertas saring steril.

3. Isolasi Fungi Endofit

Sampel daun yang sudah kering diisolasi dalam media PDA

yang ditambahkan dengan 200 mg/l kloramfenikol yang berfungsi

untuk menghambat dan mencegah bakteri tumbuh didalam media.

Diinkubasi pada suhu ruang 26-28⁰C (Nakagiri et al., 2005).




42

4. Pemurnian Fungi Endofit

Pemurnian fungi endofit dilakukan dengan menggunakan

metode isolasi spora tunggal. Fungi endofit dimurnikan secara

bertahap satu-persatu dan terus menerus sampai diperoleh biakan

murni fungi endofit (Ahlich et al, 1995; Cao, L.X et al, 2001; Gandjar

et al, 1992; Kumar, et al, 2004). Spesimen fungi endofit yang

dimurnikan diinokulasi pada media PDA cawan petri. Pemurnian

fungi endofit berfungsi untuk memisahkan koloni endofit yang

berbeda agar diperoleh isolat murni. Kemudian diinkubasi selama 5-7

hari pada suhu kamar untuk dilakukan pengamatan morfologi, dan jika

masih ditemukan pertumbuhan koloni yang berbeda secara

makroskopis, maka dilakukan pemurnian kembali sampai diperoleh

isolat murni fungi endofit. (Noverita et al, 2009). Setiap isolat fungi

endofit dibuat duplo pada agar miring yang masing-masing digunakan

untuk kultur stok dan untuk penelitian.

5. Identifikasi Fungi Endofit

Spesimen tunggal dari fungi endofit diidentifikasi

mengggunakan buku dari Domsch et al. (1980), Ellis (1993) dan

Nakagiri et al. (2005). Identifikasi fungi endofit dilakukan secara

makroskopis dan mikroskopis.

Karakterisasi makroskopis dilakukan dengan mengamati

morfologi koloni meliputi warna koloni, warna sebalik koloni (reverse




43

color), tekstur (granular, seperti tepung, seperti beludru, seperti

kapas), zonasi, dan tetes eksudat (exudates drops) (Gandjar, 2000).

Karakterisasi mikroskopis dilakukan dengan mengamati fungi

endofit menggunakan mikroskop. Caranya meliputi, kaca preparat dan

kaca penutup disterilisasi menggunakan alkohol 70%, isolat dari

media PDA cawan petri dipotong dengan ukuran 1 x 1 cm2 yang

berisi bagian hifa dari fungi endofit dan diletakkan diatas kaca

preparat kemudian ditutup dengan kaca penutup. Disiapkan cawan

petri steril dan didalamnya diberi alas kertas tissue yang dibasahi

dengan air destilasi steril untuk digunakan sebagai alas kaca preparat.

Kaca preparat dimasukkan kedalam cawan lalu diinkubasi selama 7

hari dengan suhu 29⁰C. Setelahh diinkubasi, kaca penutup dibuka dan

ditetesi 1 tetes alcohol 70% dan 1 tetes methylene blue, ditutup dengan

kaca penutup lalu diamati pada mikroskop dari perbesaran terkecil

hingga terbesar. Pengamatan dilakukan dengan mengamati ada atau

tidaknya sekat pada hifa, pertumbuhan hifa, bentuk dan warna kondia

(Yulia, 2005; Sundari, 2012).

6. Persiapan Inokulasi dan Enumerasi Fungi Endofit

Sebanyak 2 mL air destilasi steril ditambahkan kedalam PDA

miring yang berisi isolat fungi endofit, digores lalu di homogenkan

dengan memnggoyangkan tabung PDA miring. Kemudian dihitung

menggunakan colony forming unit (CFU) (Gandjar et al, 1992).




44

7. Peremajaan Mikroba Uji

Masing-masing mikroba yang diuji diremajakan terlebih dahulu

ke media PDA untuk kapang dan NA untuk bakteri. Bakteri Shigella

dysentriae diinokulasikan kedalam media NA miring dengan cara

mengambil biakan menggunakan jarum ose secara aseptis, lalu

diinkubasi selama 5 hari pda suhu 37⁰C selama 24 jam. Peremajaan

mikroba uji dilakukan dalam kondisi steril didalam laminar air flow

(Jauhari, 2010).

8. Fermentasi dan Ekstraksi Fungi Endofit

Untuk memperoleh hasil dari fermentasi fungi endofit maka

dilakukan dengan fermentasi cair menggunakan media PDB (Potato

Dextrose Agar). Diambil 3 potongan biakan koloni fungi endofit yang

telah diinkubasi pada cawan petri selama 5-7 hari, menggunakan core

borer dengan ukuran 1 x 1 cm. potongan fungi endofit diinokulasi

kedalam media PDB sebanyak 20 mL didalam labu Erlenmeyer yang

berukuran 100 mL. fermentasi dilakukan didalam rotary shaker

selama 14 hari dengan kecepatan putar 140 rpm (rotary per minute)

pada suhu kamar. Media disaring menggunakan kertas saring untuk

memisahkan miselium dan biomassanya. Hasil fermentasi yang telah

dipisahkan antara filtrat dan biomassanya akan diproses kembali untuk

dijadikan ekstrak metabolit sekunder. Filtrat ditampung dalam labu

bulat dan dikering-bekukan kemudian bobotnya ditimbang sampai




45

diperoleh bobot kering, kemudian dihancurkan sampai halus.

Miselium dan filtrat direndam menggunaka pelarut metanol. Miselium

dan filtrat dimaserasi menggunakan metanol sebanyak 1:1 dan

didiamkan selama 72 jam sambil dilakukan pengadukan.

Ekstrak disaring menggunakan kertas saring, kemudian filtrat

hasil maserasi diuapkan untuk memisahkan pelarutnya menggunakan

Rotary evaporator 40O C sehingga didapatkan ekstrak kental daun C.

odorata (Manik et al., 2014).

9. Ekstraksi daun C. odorata

Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan, daun dibersihkan

terlebih dahulu, dikering anginkan, kemudian daun yang sudah kering

dihaluskan. Serbuk daun ditimbang sebanyak 250 g dengan neraca

analitik. Sampel di ekstraksi dengan cara maserasi yaitu merendam

sampel dalam pelarut metanol sebanyak 500 ml (1:2) dan diinkubasi

pada suhu kamar selama 72 jam dengan dilakukan pengadukan

sesering mungkin (Pathan et al., 2012).

Ekstrak disaring dengan kertas saring, kemudian filtrat hasil

maserasi diuapkan untuk memisahkan pelarutnya menggunakan Rotary

evaporator 40O C sehingga didapatkan ekstrak kental daun C. odorata

(Manik et al., 2014).




46

10. Skrining fitokimia metabolit sekunder ekstrak daun dan fungi

endofit

Skrining fitokimia dilakukan untuk menguji adanya senyawa

flavonoid, terpenoid, tanin dan steroid pada elstrak daun dan fungi

endofit.

a. Uji flavonoid

1 ml ekstrak ditambahkan dengan NaOH 20%. Warna

kuning yang muncul menjadi tidak berwarna saat ditetesi dengan

HCl encer. Hal ini menandakan adanya senyawa flavonoid.

b. Uji terpenoid

1 ml ekstrak ditambahkan dengan 2 ml kloroform dan 3 ml

asam sulfat dengan pelan-pelan. Endapan kemerahan akan muncul

dan membuktikan bahwa ekstrak mengandung terpenoid

c. Uji tanin

2 ml ekstrak ditambahkan dengan air destilasi dalam tabung

reaksi. Ditambahkan FeCl 5% 2 – 3 tetes kedalam tabung. Adanya

tanin dibuktikan dengan perubahan warna menjadi hijau

kehitaman atau biru.

d. Uji steroid

1 ml ekstrak ditambahkan dengan 3 tetes acetic anhydride,

dan satu tetes asam sulfat. Perubahan warna menjadi coklat

mengindikasikan adanya senywa steroid.




47

11. Preparasi inokulum dan enumerasi fungi endofit

Preparasi inokulum dilakukan dengan diambil air destilasi

sebanyak 2 mL dan ditambahkan kedalam kulturfungi endofit agar

miring yang berusia 7 hari, digores lalu di homogenkan. Jumlah dari

spora dihitung dengan menggunakan CFU (Gandjar, et al., 1992).

12. Preparasi inokulum dan enumerasi bakteri atau fungi

Bakteri Shigella dysentriae disubkultur dimedia NA dan

diinkubasi pada 37⁰C selama 24 jam. Sebanyak 5 mL NB ditambahkan

kedalam masing masing media bakteri yang sudah diinkubasi,

kemudian digores lalu dihomogenkan. Langkah selanjutnya dituang

kedalam 15 mL NB, dan kemudian diinkubasi didalam waterbath dan

dishaker 90 rpm pada suhu 37⁰C (Agusta et al, 2005). Jumlah sel

dihitung menggunakan CFU (Gandjar et al, 1992).

13. Uji Aktivitas Antimikrobial

Uji aktivitas antimikrobial dilakukan dengan berdasarkan

metode Kirby-Bauer atau yang disebut dengan cakram kertas (Harmita

and Radji, 2004). Cakram kertas yang akan dilakukan untuk uji

antimikrobial disterilisasi terlebih dahulu sebelum digunakan untuk

membunuh mikroba yang tidak diinginkan. Sebanyak 2 mL suspensi

spora dari fungi endofit (2.4-3.0) x 104 cfu/mL ditambahkan ke

erlenmeyer 100 mL yang berisi 20 mL media PDB, dan kemudian

diinkubasi didalam shaker inkubasi dengan ruang (26⁰-28⁰C).

Kemudian, suspensi dishaker pada kecepatan 90 rpm selama 5 hari




48

(Syarmalina et al. 2003; Agusta et al. 2005; Kumala, 2005). Setelah

diinkubasi, suspensi disentrifugasi dengan kecepatan 6000 rpm selama

10 menit. Supernatan yang diperoleh digunakan untuk uji antimikroba.

Disiapkan media MH dalam tabung reaksi sebanyak 17

mL,diinokulasi dengan 0.2 ml bakteri Shigella dysentriae (7.1-93) x

108 cfu/mL lalu dihomogenkan. Tabung yang sudah berisi sampel uji

masing-masing dituang kedalam cawan petri dan ditunggu hingga

memadat. 3 cakram kertas diletakkan diatas media, kemudian diambil

sebanyak 5 µl supernatan fungi endofit dan ekstrak daun diteteskan

diatas cakram kertas. Sebagai kontrol negatif diberi air destilasi steril,

sedangkan untuk kontrol positif digunakan tetracyclin (50 µg .m−1).

Masing-masing sampel uji aktivitas bakteri diinkubasi pada suhu 37⁰C

24 jam. Eksperimen ini dilakukan pengulangan sebanyak 3 kali.

Aktivitas antimikroba akan ditandai dengan terbentuknya zona hambat

yang mengindikasikan terhambatnya aktivitas mikroorganisme oleh

ekstrak fungi endofit. Diameter zona hambat dihitung menggunakan

jangka sorong. Diameter zona hambat dihitung dengan menghitung

indeks penghambatan menggunakan rumus berdasarkan Vilaseñor, et

al., (2004):

Indeks penghambatan =Diameter zona hambat − diameter 𝑝𝑎𝑝𝑒𝑟 𝑑𝑖𝑠𝑘

diameter 𝑝𝑎𝑝𝑒𝑟 𝑑𝑖𝑠𝑘




49

E. Analisis Data

Data yang diperoleh berupa data kualitatif dan kuantitatif. Data

kualitatif diperoleh dari hasil identifikasi fungi endofit pada Chromolaena

odorata yang dianalisa secara deskriptif. Data kuantitatif meliputi hasil

perhitungan diameter zona hambat pengujian antimikroba dengan metode

difusi agar cakram. Data kuantitatif dianalisis dengan standar deviasi. Uji

yang digunakan untuk penelitian ini yaitu uji Kruskall-Wallis dan Mann-

Whitney dengan menggunakan aplikasi SPSS 24.0.




50

BAB V

HASIL DAN PEMBAHASAN

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kemampuan aktivitas

antimikroba dari ekstrak fungi endofit terhadap bakteri uji (S. dysenteriae). Fungi

endofit diisolasi dari daun C. odorata dan kemudian di tanam pada media cair

untuk di ekstrak metabolit sekundernya. Hasil dari ektrak fungi endofit diuji

aktivitas antimikrobanya dengan berbagai macam konsentrasi. Efektivitas

antibakteri ekstrak fungi endofit dibandingkan dengan ekstrak daun C. odorata,

karena ekstrak daun C. odorata memiliki kemampuan dalam menghambat

aktivitas bakteri seperti E. coli, S. flexenerri, Proteus mirabilis, Pseudomonas

diminuta, Enterobacter cloacae, dan S. Aureus (Natheer et al, 2012). Uji aktivitas

antimikroba dilakukan menggunakan metode difusi dengan cakram kertas.

Pengamatan aktivitas mikroba dilakukan dengan mengukur diameter zona hambat

yang terbentuk pada setiap konsentrasi ekstrak, untuk dibandingkan apakah ada

perbedaan aktivitas antibakteri antara ekstrak fungi endofit dan ektrak daun

C.odorata.

A. Hasil


Isolasi fungi endofit dari daun C. odorata dilakukan dengan

menggunakan metode tanam langsung. Daun yang sudah dikumpulkan

langsung dari tanamannya, dicuci bersih dengan air mengalir dan




51

dilakukan sterilisasi permukaan daun. Sampel daun yang sudah dicuci

dengan air mengalir kemudian di sterilisasi dengan cara merendam daun

menggunakan alkohol 70% dan NaOCl 5,3%, agar tidak terkontaminasi

oleh mikroorganisme yang tidak diinginkan, sehingga fungi yang tumbuh

didalam media adalah murni fungi endofit. Daun yang sudah steril ditanam

langsung pada media PDA sebanyak 6 cawan. Setelah 14 hari, didapatkan

fungi endofit yang tumbuh pada media PDA. Hasil isolasi fungi endofit

dari daun C. odorata dapat dilihat pada gambar 5.1.

Gambar 5.1. Hasil isolasi fungi endofit dari daun C. odorata. Nampak

beberapa spesies yang tumbuh pada masing-masing

cawan petri. (Data primer, 2018)

Fungi endofit yang telah diisolasi dari daun C. odorata

kemudian dilakukan pemurnian kembali untuk diperoleh isolat murni

fungi endofit. Hasil pemurnian fungi endofit diperoleh 5 isolat murni




52

yang berbeda. Fungi endofit hasil pemurnian dapat dilihat pada gambar

5.2

Gambar 5.2.Hasil pemurnian fungi endofit dari daun C. odorta,

diperoleh 5 fungi endofit yang berbeda. (A) Fungi endofit

dengan kode isolat NE1, (B) Fungi endofit dengan kode

isolat NE2, (C) Fungi endofit dengan kode isolat NE3, (D)

Fungi endofit dengan kode isolat NE4, (E) Fungi endofit

dengan kode isolat NE5.

Fungi endofit yang telah murni diinkubasi selama 7 hari pada

suhu ruang. Identifikasi fungi endofit dilakukan dengan cara morfologi

fungi endofit. Pengamatan dilakukan dengan mengamati morfologi

koloni, warna permukaan dan balik koloni (reverse color), bentuk

koloni, elevasi dan tepi koloni. Hasil pengamatan berdasarkan karakter

makroskopis fungi endofit dapat dilihat pada tabel 5.1.

C

D E

(Data primer, 2018)

A B




53

Tabel 5.1. Pengamatan Makroskopis Isolat Fungi Endofit

Isolat Warna

Bentuk Elevasi Tepi Permukaan Sebalik Koloni

NE 1 Putih Putih

kecoklatan Bulat Cembung Rata

NE 2 Hitam Hitam Tidak

teratur

Memiliki

tonjolan Berombak

NE 3 Putih Putih kehitaman Berfilamen Rata Filiform

NE 4 Putih Putih kemerah

mudaan Berfilamen Rata Filiform

NE 5 Putih

Kehitaman Hitam Berfilamen Rata Filiform

(Data Primer, 2018)

2. Fermentasi Fungi Endofit

Fungi endofit difermentasi pada media cair untuk menghasilkan

metabolit sekunder. Fungi endofit yang berusia 7 hari pada media padat

diinokulasikan pada media cair, kemudian di rotary shaker selama 14

hari. Proses fermentasi fungi endofit dilakukan pada media PDA

dengan volume 250 ml. Hasil fermentasi fungi endofit pada media cair

dapat dilihat pada tabel 5.2.




54

Tabel 5.2. Warna Medium PDY pada saat Fermentasi Metabolit

Sekunder Fungi Endofit

NO. ISOLAT WARNA GAMBAR

1. NE1 Keruh Kecoklatan

2. NE2 Kuning Bening

3. NE3 Putih Keruh

4. NE4

Bening

Kemerahmudaan

5. NE5 Keruh Kehitaman

(Data Primer, 2018)




55

Kelima fungi endofit memiliki warna media yang berbeda

setelah proses fermentasi, selanjutnya dilakukan pemanenan terhadap

fungi endofit. Media cair disaring dengan menggunakan kertas saring

untuk memisahkan miselium fungi endofit. Hasil pemanenan fungi

endofit dapat dilihat pada tabel 5.3.

Tabel 5.3 Hasil Pemanenan Fungi Endofit

No. Isolat Volume

Filtrat (ml)

Berat

Basah (g)

Berat

Kering (g)

1. NE1 189 28,05 1,79

2. NE2 190 38,12 1,97

3. NE3 126 75,27 1,36

4. NE4 130 88,38 2,02

5. NE5 185 38,80 2,05

(Data Primer, 2018)

3. Ekstraksi Daun dan Fungi Endofit C. odorata

Ekstraksi daun dan fungi endofit C. odorata diawali dengan

maserasi menggunakan pelarut methanol. Sampel yang digunakan

dalam tahap maserasi adalah daun dan miselium yang sudah

dikeringkan dan filtrat fungi endofit. Daun dan miselium dihaluskan

terlebih dahulu. Daun, miselium dan filtrate dicampur dengan methanol

selama 3 hari sambil dilakukan pengadukan. Ekstrak cair dari hasil

maserasi disaring dan diuapkan menggunakan rotary evaporator untuk




56

proses ekstraksi metabolit sekunder. Hasil dari ekstraksi dapat dilihat

pada tabel 5.4 dan gambar 5.3.

Tabel 5.4 Hasil Ekstrak Metabolit Sekunder Fungi Endofit

No. KODE ISOLAT

EKSTRAK

MISELIUM

(gr)

EKSTRAK

MEDIUM

(gr)

TOTAL

(gr)

1. NE1 0,4 1,4 1,8

2. NE2 0,1 1 1,1

3. NE3 0,3 1,1 1,4

4. NE4 0,4 1,6 2

5. NE5 0,3 1,7 2

(Data Primer, 2018)

Gambar 5.3 Hasil ekstraksi fungi endofit

(Data Primer, 2018)

NE1 NE2 NE3 NE4 NE5




57

Ekstrak daun dan fungi endofit diuji komponen fitokimianya dan

dilakukan pengenceran menggunakan DMSO 10% untuk mendapatkan

konsentrasi 25 mg/ml, 50 mg/ml, 75 mg/ml dan 100 mg/ml. Hasil

pengenceran diuji terhadao bakteri S. dysenteriae.

4. Uji Fitokimia Ekstrak Daun dan Fungi Endofit C. odorata

Skrining fitokimia ekstrak metabolit sekunder fungi endofit dan

ekstrak daun C. odorata dilakukan terhadap uji flavonoid, terpenoid,

tannin dan saponin. Hasil pengujian ekstrak metabolit sekunder fungi

endofit dan ekstrak daun C. odorata dapat dilihat dalam tabel .

Tabel 5.5 Uji Fitokimia Metabolit Sekunder Ekstrak Daun dan Ekstrak

Fungi Endofit C.odorata

No Ekstrak Flavonoid Terpenoid Tanin Steroid

1 C. odorata + + + +

2 NE 1 + + + -

3 NE 2 − + + +

4 NE 3 + + + -

5 NE 4 + + − −

6 NE 5 − + − +

Keterangan : + : Positif mengandung senyawa

- : Tidak Mengandung senyawa

(Data Primer, 2018)




58

5. Uji Aktivitas Antimikroba Ekstrak Daun dan Fungi Endofit

C.odorata

Uji aktivitas antimikroba ekstrak daun dan fungi endofit

dilakukan dengan menggunakan metode difusi kertas cakram. Kertas

cakram ditetesi dengan masing-masing ekstrak sebanyak 20 µl dan

diletakkan diatas media yang sudah ditanami bakteri S. dysenteriae.

Hasil pengamatan zona hambat yang terbentuk dapat dilihat pada

gambar 5.4.

Gambar 5.4 Hasil Uji aktivitas antimikroba pada konsentrasi 50 mg/ml.

K+ = Kontrol positif

K- = Kontrol negatif

(Data Primer, 2018)

Hasil uji kertas cakram ekstrak daun dan fungi endofit

menunjukkan bahwa masing-masing ekstrak memiliki kemampuan

dalam menghambat bakteri uji. Diameter zona hambat pertumbuhan

bakteri S. dysenteriae pada berbagai konsentrasi ekstrak dapat dilihat

pada tabel 5.6.

C. odorata NE1 NE2 NE3

NE4 NE5 K+ K-




59

Tabel 5.6 Diameter zona hambat pertumbuhan S. dysenteriae pada

berbagai konsentrasi ekstrak daun dan fungi endofit C.

odorata

Ekstrak

Sampel

Diameter zona hambat (mm)

25 50 75 100

C. odorata 31.67 ± 2.88 28.00 ± 10.58 28.00 ± 3.00 23.33 ± 5.68

NE1 38.33 ± 2.88 25.00 ± 5.00 40 ± 0.00 38 ± 3.40

NE2 28.00 ± 6.55 35.33 ± 2.51 29.33 ± 1.15 40 .00± 0.00

NE3 29.67 ± 2.08 31.67 ± 7.63 35 ± 5.00 37.33 ± 4.62

NE4 28.33 ± 10.4 36.67 ± 5.77 33.33 ± 2.88 33.33 ± 2.88

NE5 35.67 ± 5.13 40.00 ± 0.00 26.67 ± 2.88 40.00 ± 0.00

K+ 45 ± 0

K- 0 ± 0

K+ = Kontrol positif (kloramfeikol 200 mg/l)

K- = Kontrol negatif (DMSO5%)

(Diameter zona hambat termasuk kertas cakram)

(Data Primer, 2018)

Gambar 5.5. Diagram batang diameter zona hambat ekstrak daun dan fungi

endofit C. odorata.

(Data Primer, 2018)

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

C. odorata NE1 NE2 NE3 NE4 NE5

Dia

met

er Z

on

a H

am

bat

(mm

)

25 mg/ml 50 mg/ml 75mg/ml 100mg/ml

a.




60

Dari data hasil penelitian, ekstrak daun C. odorata dan ekstrak

metabolit sekunder fungi endofit menunjukkan aktivitasnya terhadap

bakteri uji. Hal ini dibuktikan dengan adanya zona hambat yang

terbentuk di sekeliling kertas cakram. Semua ekstrak metabolit

sekunder fungi endofit dan ekstrak daun C. odorata mampu

menghambat aktivitas bakteri S. dysenteriae. Pada ekstrak C. odorata,

zona hambat tertinggi berada pada konsentrasi 25 mg/ml dengan rerata

diameter zona hambat sebesar 31,67 ± 2.88. Pada ekstrak NE1 zona

hambat terbesar berada pada konsentrasi 75 mg/ml dengan diameter

sebesar 38,33 ± 2,88. Pada ekstrak NE2 zona hambat terbesar berada

pada konsentrasi 100 mg/ml dengan diameter sebessar 40,00 ± 0. Pada

ekstrak NE3 zona hambat terbesar berada pada konsentrasi 100 mg/ml

dengan diameter sebesar 33,33 ± 4,62. Pada ekstrak NE4 diameter zona

hambat terbesar berada pada konsentrasi 50 mg/ml dengan diameter

sebesar 36,67 terbesar 5,77. Pada ekstrak NE5 zona hambat terbesar

berada pada konsentrasi 50 mg/ml dan 100 mg/ml dengan dimeter

masing-masing 4,00 terbesar 0,00.

Menurut Greenwood (1995), zona hambat mikroba uji memiliki

4 kategori diantaranya adalah tidak menghambat jika diameter zona

hambat ≤10 mm; lemah jika diameter zona hambat 11-15 mm; sedang

jika diameter zona hambat 16-20mm; dan kuat jika diameter zona

hambat ≥20. Data hasil uji aktivitas antimikroba terbukti bahwa semua




61

ekstrak daun dan fungi endofit masuk dalam kategori kuat, karena

diameter zona hambat lebih dari 20mm.

Data yang telah diperoleh kemudian diuji dengan menggunakan

program SPSS versi 24. Langkah awal dalam mengolah data adalah

dengan mengetahui normalitas dan homogenitas suatu data untuk diuji

lebih lanjut pada SPSS. Uji normalitas suatu data digunakan uji

Kolmogorov-Smirnov dengan nilai signifikansi > 0,05. Hasil uji

normalitas menunjukkan bahwa data yang diperoleh tidak berdistribusi

normal dengan angka signifikansi hitung 0,000 < 0,05 (lampiran 2).

Selanjutnya dilakukan uji homogenitas dengan menggunakan Oneway

Anova dengan nilai signifikansi > 0,05. Dari hasil pengujian pengujian

homogenitas, diperoleh nilai signifikansi hitung 0,000 yang artinya data

uji diameter zona hambat tidak homogen (<0,05) (lampiran 3). Hasil

dari Kolmogorov-Smirnov dan Oneway Anova menunjukkan bahwa

data tidak berdistribusi normal dan variansi data tidak homogen,

sehingga dilakukan uji Kruskall-Wallis dengan nilai signifikansi < 0,05.

Hasil analisis Kruskall-Wallis data terhadap diameter zona

hambat diperoleh nilai signifikansi sebesar (0,005) < 0,05 (lampiran 4).

Hal ini dapat dikatakan bahwa Ho ditolak dan Ha diterima, artinya

terdapat perbedaan diameter zona hambat pada masing-masing ekstrak

terhadap aktivitas bakteri S. dysenteriae. Untuk mengetahui kelompok

perlakuan mana saja yang memiliki perbedaan, maka dilakukan uji




62

Mann-Whitney dengan nilai signifikansi < 0,05. Hasil dari uji Mann-

Whitney dapat dilihat pada tabel 5.7 dan pada lampiran 6.

Tabel 5.7 Hasil Uji Mann-Whitney

Keterangan: S :Signifikan

TS : Tidak Signifikan (Data Primer, 2018)

Berdasarkan hasil uji Mann-Whitney yang ditunjukkan pada

tabel 5.7, ekstrak C. odorata pada konsentrasi 100mg/ml menunjukkan

adanya perbedaan signifikan terhadap semua ekstrak fungi endofit

dalam menghambat bakteri uji. Tabel 5.5 menunjukkan bahwa zona

Konsentrasi C. odorata

(mg/ml)

Sampel 25 50 75 100

NE1

25 TS TS TS S

50 TS TS TS TS

75 S TS S S

100 TS TS S S

NE2

25 TS TS TS TS

50 TS TS TS TS

75 TS TS TS TS

100 S TS S S

NE3

25 TS TS TS TS

50 TS TS TS TS

75 TS TS TS TS

100 TS TS S S

NE4

25 TS TS TS TS

50 TS TS TS S

75 TS TS TS S

100 TS TS TS S

NE5

25 TS TS TS TS

50 S TS TS TS

75 TS TS TS TS

100 S TS TS S




63

hambat pada ekstrak C. odorata 100mg/ml merupakan konsentrasi yang

memiliki zona hambat paling kecil, dengan rerata 23,33 mm.

B. Pembahasan


Pada penelitian ini sampel yang digunakan untuk isolasi fungi

endofit adalah bagian daun dari tumbuhan C. odorata. Strobel dan

Daisy (2003) menyebutkan bahwa ada beberapa ketentuan dalam

penentuan tumbuhan untuk isolasi fungi endofit diantaranya adalah: (1)

tumbuhan berasal dari lingkungan yang unik, terutama tumbuhan yang

hidup dalam kondisi biologi yang tidak biasa dan memiliki kemampuan

untuk bertahan hidup dalam keadaan kritis, (2) tumbuhan yang

memiliki etnobotani (digunakan oleh masyarakat), (3) tumbuhan

endemik, (4) dan tumbuhan yang tumbuh di area yang memiliki

keanekaragaman hayati yang tinggi. C. odorata dipilih sebagai sampel

penelitian karena tumbuhan ini merupakan gulma yang agresif dan

memiliki ketahanan hidup lebih tinggi terhadap kekeringan, selain itu

tumbuhan ini tumbuh bebas dan tidak banyak di manfaatkan oleh

masyarakat secara etnobotani.

Penelitian ini membuktikan bahwa fungi endofit adalah

mikroorganisme yang hidup didalam jaringan tanaman meliputi daun,

batang, akar dan buah. Fungi endofit hidup didalam jaringan tanaman

pada periode tertentu dengan membentuk koloni didalam jaringan tanpa

membahayakan inangnya (Radji, 2005). Tanaman tingkat tinggi dapat




64

mengnadung beberapa fungi endofit yang mampu menghasilkan

metabolit sekunder sebagai akibat koevolusi atau transfer genetik dari

tanaman inang kedalam mikroba endofit.

Proses isolasi fungi endofit membutuhkan waktu yang cukup

lama. Wahyudi (2001) menyatakan bahwa pertumbuhan fungi endofit

bersifat sangat lambat (Slow grower) sehingga memerlukan waktu

inkubasi yang cukup panjang untuk isolasi dan pemurnian fungi

endofit. Isolat fungi endofit dari daun C. odorata yang tumbuh

dimurnikan berdasarkan kriteria bentuk koloni dan morfologi yang

berbeda. Pemurnian dilakukan sebanyak 6 kali untuk mendapatkan

isolat tunggal fungi endofit. Hasil yang diperoleh dari isolasi fungi

endofit berdasarkan karakterisktik morfologinya maka didapatkan 5

isolat fungi endofit dengan kode isolat NE1, NE2, NE3, NE4 dan NE5.

Lima isolat fungi endofit kemudian diidentifikasi berdasarkan

karakteristik morfologi makroskopis dan mikroskopis, untuk diketahui

jenis dari fungi endofit tersebut.

a. Isolat NE1

Isolat NE1 memiliki warna permukaan putih tebal, warna

sebalik koloni putih kecoklatan, bentuk koloni bulat, elevasi

cembung dan tepi rata. Hasil pengamatan makroskopis dan

mikroskopis isolat fungi endofit dapat dilihat pada gambar 5.6.

Isolat NE1 diduga sebagai Mucor sp.




65

Gambar 5.6 Isolat NE1. (A) Pengamatan makroskopik isolate NE1,

(B) Pengamatan makroskopis perbesara 400x pada mikroskop

binokuler.

(Data primer, 2018)

Mucor sp. memiliki warna koloni putih dan menjadi coklat

keabuan pada saat umur isolate lebih dari 7 hari. Warna sebalik

koloni putih kekuningan. Sporangiosfor bercabang (simpodial dan

monopodial), ukuran sporangia beragam, hifa putih atau berwarna,

sporangium hyaline, dan hifa tidak bersepta (Domschet et al,1980;

Barnett 1972; Ellis, et al, 2007). Barnett (1972) menyatakan bahwa

Mucor sp. memiliki sifat saprofit. Secara makroskopis pada awal

pertumbuhannya berwarna putih lalu menjadi keabu-abuan atau

coklat keabu-abuan pada saat umur isolate mulai tua dengan adanya

perkembanga sporangia (Ellis, Iet alI, 2007). Pernyataan tersebut

mendukung bahwa isolate NE1 termasuk dari genus Mucor sp.

(A) (B)




66

b. Isolat NE2

Isolate NE2 memiliki warna permukaan hitam dan sebalik

koloni berwarna hitam. Bentuk koloni tidak teratur dan tebal, elevasi

memiliki tonjolan dan tepi berombak. Hasil pengamatan

mikroskopik isolate fungi endofit memiliki hifa septate dan hialin.

Isolate NE2 diduga sebagai Phoma sp. Hasil pengamatan

makroskopis dan mikroskopis dapat dilihat pada gambar 5.7.

Gambar 5.7 Isolat NE2. (A) Pengamatan makroskopik isolate NE2,

(B) Pengamatan makroskopis NE2 perbesara 400x pada

mikroskop binokuler. (Data Primer, 2018)

Berdasarkan pengamatan makroskopik dan mikroskopik,

isolar NE2 menunjukkan sebagian cirri yang sama dengan Phoma

sp. Barnett dan Hunter (2000) bahwa ciri-ciri Phoma sp. merupakan

fungi yang habitatnya berada ditanah dan didalam tanaman, dengan

tekstur miselia beludruwarna koloni hitam dan sebalik hitam,

kadang ditemukan pula dengan warna koloni abu-abu zaitun, merah

muda dan putih. Hifa bersepta.

(A) (B)




67

c. Isolat NE3

Isolate NE3 memiliki warna permukaan putih seperti kapas,

warna sebalik putih dan jika umur fungi mulai tua menjadi

kehitaman. Bentuk bulat berfilamen, elevasi rata, tidak terdapat

lingkaran konsentris dan tepi filiform. Isolate NE3 diduga sebagai

Fusarium sp. Hasil pengamatan dapat dilihat pada gambar 5.8.

Gambar 5.8 Isolat NE3. (A) Pengamatan makroskopik isolate

NE3, (B) Pengamatan makroskopis NE3 pada

perbesaran 400x pada mikroskop binokuler (Data Primer, 2018)

Berdasarkan Barnett (1972) Fusarium sp. memiliki penyebaran

miselium yang luas, seperti yang terlihat pada gambar 5.8 (A), dan

pada bagian permukaan tampak seperti kapas. Miselium memiliki

bagian seperti konidiosfor yang berbentuk ramping, sederhana,

pendek, bercabang tidak teratur, tunggal. Fusarium sp. merupakan

genus yang sangat besar karena memiliki beberapa spesies, genus ini

ditempatkan pada family Tuberculasiaceae karena beberapa spesies

menghasilkan sporodoshia. Ellis, et al (2007) menyatakan bahwa

Fusarium sp. memiliki koloni yang berkembang pesat. Konidiosfor

A B




68

berbentuk pendek, tunggal, monopodial lateral dan miselium

bercabang seperti yang terlihat pada gambar 5.5 (B).

d. Isolate NE4

Isolate NE4 memiliki warna permukaan putih tebal seperti

kapas, warna sebalik koloni kemerahmudaan ketika usia koloni

mulai tua, bentuk berfilamen, elevasi rata, tepi filiform. Isolate

NE4 diduga sebagai Fusarium sp. Hasil pengamatan makroskopis

dan mikroskopis dapat dilihat pada gambar 5.9.


NE4, (B) Pengamatan makroskopis NE4 perbesaran

400x pada mikroskop binokuler (Data Primer, 2018)

Isolate NE3 dan NE4 merupakan isolate yang diduga

termasuk dalam genus Fusarium sp. seperti yang sudah dijelaskan

pada NE3 bahwa Fusarium sp. memiliki penyebaran miselium

yang luas seperti yang terlihat pada gambar 5.9 (A) yang tampak




69

seperti kapas, dengan beberapa semburat merahmuda pada sebalik

koloni.

e. Isolate NE5

Isolate NE5 memiliki warna permukaan hitam, warna

sebalik koloni kehitaman, bentuk berfilamen, elevasi rata dan tepi

filiform. Isolate NE5 diduga termasuk dalam genus Colletotrichum

sp. Hasil pengamatan makroskopis dan mikroskopis dapat dilihat

pada gambar 5.10.


NE5, (B) Pengamatan mikroskopis NE5 perbesaran

400x pada mikroskop binokuler (Data Primer, 2018)

Isolate NE5 memiliki cirri-ciri warna permukaan koloni

hitam, tipe pertumbuhan koloni konsentris, tekstur permukaan

kasar, hifa berseptat. Mizhu et al (2005) dan Domsch et al (1980),

menyatakan bahwa Colletrichum sp. memiliki cirri warna koloni

krem, oranye, coklat dan hitam. Pertumbuhan koloni konsentris,

hifa berseptat. Menurut Pawle dan Singh (2014), fungi ini

A B




70

ditemukan sebagai endofit dari beberapa tanaman herba Polygala

elongate yang dikumpulkan dari Western Ghats yang berperan

sebagai sumber antioksidan alami.

2. Fermentasi Fungi Endofit

Proses fermentasi fungi endofit pada medium PDY dilakukan

selama 14 hari didalam rotary shaker dengan kecepatan 140 rpm pada

suhu ruang. Proses fermentasi dilakukan selama 14 hari karena fungi

endofit dapat memproduksi metabolit sekunder secara maksimum

setelah mencapai fase stasioner. Pada akhir tahap stasioner (setelah hari

ke 15) proses produksi fermentasi metabolit sekunder oleh fungi endofit

akan menurun secara signifikan (Pokhrel & Ohga, 2007; Merlin et al,

2013). Pemilihan medium cair sebagai media dalam proses fermentasi

metabolit sekunder karena lebih efektif dalam memproduksi biomassa

dan senyawa bioaktif dibandingkan dengan medium padat (Pokhrel &

Ohga, 2007).

Warna medium PDY akan mengalami proses perubahan menjadi

berbagai warna tergantung dari jenis spesies fungi endofit. Berdasarkan

hasil pengamatan selama proses fermentasi metabolit sekunder fungi

endofit, terlihat perbedaan warna medium pada masing-masing isolat.

Sebagaimana yang terlihat pada tabel 5.2.

Perubahan warna medium disebabkan oleh adanya pertumbuhan

fungi didalam media, dimana terjadi penambahan massa sel dan proses




71

metabolisme fungi pada media, sehingga mengakibatkan terjadinya

perubahan warna medium PDY yang semula bening menjadi

kekeruhan. Adanya aktivitas fungi didalam medium fermentasi PDY

merupakan proses produksi metabolit sekunder oleh fungi endofit

(Gandjar, 2006).

Suwandi (1989) menyatakan bahwa metabolit sekunder yang

dihasilkan oleh fungi endofit disekresikan kedalam medium

pertumbuhan dalam jumlah yang besar. Tujuan dari penggunaan rotary

shaker pada saat fermentasi adalah untuk menjaga agitasi, aerasi dan

agar pertumbuhan fungi endofit dalam media lebih homogen. Aerasi

dibutuhkan untuk mensuplai oksigen fungi endofit, sedangkan agitasi

bertujuan untuk meningkatkan suplai oksigen didalam medium,

meningkatkan homogenitas suhu, dan mempertahankan homogenitas

konsentrasi nutrisi (Kumala et al, 2014; Wahyono et al, 2010; Basha et

al, 2012).

Pada pemanenan fungi endofit, didapatkan volume filtrate yang

berbeda pada masing-masing isolat. Volume filtrate yang diperoleh dari

isolat NE1 sebesar 189 ml, NE2 sebesar 190 ml, NE3 sebesar 126 ml,

NE4 sebesar 130 ml dan NE5 sebesar 185 ml. Fungi endofit memiliki

kecepatan tumbuh yang berbeda pada msing-masing spesies. Kecepatan

tumbuh diamati dari pertumbuhan dan pertambahan ukuaran diameter

koloni pada rentang waktu tertentu (Sinaga et al. 2009). Isolat NE2

memiliki pertumbuhan yang sangat lambat dari semua isolat, sehingga




72

filtrate yang dihasilkan banyak namun miselium fungi yang didapat

sedikit dibandingkan dengan isolat yang lain.

3. Ekstraksi Fungi Endofit dan Daun C. odorata

Hasil filtrat medium PDY kemudian di ekstraksi menggunakan

metode cair-cair (partisi). Ekstraksi cair-cair atau ekstraksi solvent

adalah proses pemisahan fasa cair berdasarkan kelarutan zat terlarut

yang akan dipisahkan antara larutan asal dan pelarut pengestrak

(solvent) (Mirwan, 2013). Pelarut yang digunakan untuk ekstraksi

metabolit sekunder fungi endofit adalah methanol. Menurut hasil

penelitian Asmaliyah et al. (2010) menunjukkan bahwa methanol

merupakan pelarut universal yang mampu melarutkan senyawa polar,

semi polar, dan non polar. Pelarut methanol juga paling banyak

digunakan untuk ekstraksi dan proses isolasi senyawa organik bahan

alami, karena dapat melarutkan seluruh golongan metabolit sekunder

dan dapat menarik zat aktif yang terkandung didalamnya (Lenny, 2006;

Noor et al. 2006).

Media cair dan miselium disaring menggunakan kertas saring

untuk memisahkan media dan miseliumnya. Miselium ditimbang untuk

mengetahui berat basah dan kemudian di oven pada suhu 60°C sampai

diperoleh berat keringnya. Maserasi dilakukan terhadap miselium fungi

endofit. Miselium yang sudah kering dihaluskan lalu direndam dalam

methanol (1:3) selama 48 jam dengan mengaduk sesering mungkin.




73

Kemudian dilakukan penyaringan untuk memperoleh filtrate metanol.

Filtrat hasil ekstraksi methanol diuapkan sehingga diperoleh ekstrak

pekat. Ekstrak pekat diuji kandungan metabolit sekunder dan diuji

aktivitasnya terhadap bakteri S. dysenteriae.

4. Uji Aktivitas Antimikroba Ekstrak Daun C. odorata dan Ekstrak

Metabolit Sekunder Fungi Endofit

Uji aktivitas antimikroba dilakukan untuk mengetahui

kemampuan ekstrak dalam menghambat bakteri uji, dengan

menggunakan metode Kirby-Bauer (kertas cakram). Kertas cakram

yang digunakan pada penelitian ini berdiameter 6 mm. Media yang

digunakan untuk bakteri S. dysenteriae adalah media Nutrient agar

(NA). Medium NA mengandung pepton, yeast, dan beef extract yang

berfungsi sebagai sumber nitrogen, sumber karbon, vitamin, dan

sebagai penyokong pertumbuhan bakteri. Sebelum dilakukan uji

aktivitas antibakteri, terlebih dahulu dilakukan peremajaan bakteri

selama 24 jam karena diperlukan bakteri dalam keadaan aktif dan

sedang mengalami masa pertumbuhan yang optimal.

Pada kontrol positif digunakan kloramfenikol, DMSO 5%

sebagai kontrol negatif. Kloramfenikol digunakan untuk melihat

sensitifitas dan resistensi bakteri uji terhadap antibiotik. Bakteri yang

sudah resisten memiliki diameter zona hambat sebesar 12 mm atau

kurang, sedangkan bakteri yang masih sensitif memiliki diameter zona




74

hambat sebesar 18 mm atau lebih (Rianto et al, 2015). Kloramfenikol

memiliki spectrum luas dalam menghambat aktivitas bakteri gram

negatif dan bakteri gram positif yang berpenetrasi kedalam jaringan

dengan sangat baik (Fayyaz et al, 2013). Diameter yang terbentuk

kemudian diukur dengan menggunakan jangka sorong termasuk kertas

cakram.

Konsentrasi ekstrak yang digunakan dalam uji aktivitas

antibakteri adalah 25mg/ml, 50mg/ml, 75mg/ml dan 100mg/ml.

Masing-masing ekstrak diinokulasikan pada kertas cakram sebanyak

20µl. Penentuan konsentrasi berdasarkan pada penelitian sebelumnya

yang dilakukan oleh Natheer et al. (2012) yang menggunakan ekstrak

daun C. odorata terhadap bakteri Shigella dengan konsentrasi

12.5mg/ml, 25mg/ml, 50mg/ml dan 100mg/ml. Pada penelitian Natheer

et al. (2012), konsentrasi hambat minimal (MIC) ekstrak daun C.

odorata terhadap Shigella berada di range antara konsentrasi 50-

100mg/ml. Sehingga pada penelitian ini digunakan konsentrasi mulai

dari 25mg/ml sampai dengan 100mg/ml.

Pada penelitian ini, dihasilkan ekstrak fungi endofit yang

memiliki kemampuan dalam menghambat mikroba uji sangat kuat,

dengan dibuktikan besarnya zona hambat yang melebihi 20 mm. pada

uji statistika yang telah dilakukan, maka dapat disimpulkan bahwa

perbedaan konsentrasi mempengaruhi besarnya zona hambat, hal ini

dibuktikan dengan uji Krukall-Wallis pada nilai signifikansi (0,005) <




75

0,05 dan dibuktikan pada hasil data zona hambat yang diperoleh pada

setiap ekstrak isolat. Kekuatan zona hambat pada masing-masing

ekstrak dapat dipengaruhi oleh tinggi rendahnya konsentrasi ekstrak.

Sedangkan pada uji Mann-Whitney dengan nilai signifikansi 0,05

diperoleh hasil data yang dapat dilihat pada lampiran 6. Ektrak C.

odorata pada konsentrasi 100mg/ml berbeda nyata dengan semua

konsentrasi ekstrak fungi endofit. Hal ini dikarenakan ekstrak C.

odorata pada konsentrasi 100 mg/ml memiliki rata – rata zona hambat

paling kecil diantara konsentrasi yang lain yaitu sebesar 23,33 mm.

Zona hambat ekstrak daun C. odorata lebih bening daripada

zona hambat ekstrak metabolit sekunder fungi endofit. Sehingga jika

dibandingkan dengan esktrak fungi endofit, maka ekstrak daun C.

odorata lebih baik daripada ekstrak metabolit sekunder fungi endofit.

Hal ini disebabkan karena metabolit sekunder yang ada didalam daun

lebih banyak. Terbukti pada uji skrining metabolit sekunder bahwa

ekstrak C. odorata mengandung flavonoid, terpenoid, tannin, dan

saponin. Gambar hasil uji aktivitas antimikroba ekstrak fungi endofit

dan daun C. odorata dapat dilihat pada lampiran 1.

Antibiotik yang dihasilkan oleh fungi endofit memiliki

kemampuan menghambat mikroorganisme melalui 4 jalur, yaitu:

menghambat sintesis dinding sel, menghambat fungsi selaput sel,

menghambat sintesa protein dan menghambat sintesis asam nukleat

(Suwandi, 1992). Yutika et al (2015) menyatakan bahwa aktivitas zona




76

hambat pada setiap perlakuan tidak harus memiliki peningkatan yang

sama. Hal ini terjadi karena adaya perbedaan kecepatan difusi senyawa

antibakteri pada media.

Para ilmuwan telah banyak melakukan penelitian mengenai

fungi endofit yang memiliki potensi sebagai produsen potensial

penghasil senyawa aktif baru dan biologis. Dalam dua decade terakhir,

banyak senyawa bioaktif yang ditemukan dari fungi endofit seperti

antimikroba, insektisida, sitotoksik dan antikanker. Seperti penelitian

yang dilakukan oleh Stierle et al (1993) yang menemukan senyawa

bioaktif paclitaxel (taxol) dari fungi endofit Taxomyces andreanae.

Fungi endofit sebagai sumber daya mikroorganisme baru dan berlimpah

yang memiliki kemampuan khusus untuk menghasilkan senyawa yang

sama atau serupa yang berasal dari tanaman inangnya dan senyawa

bioaktif lainnya ( Zao et al, 2010). Hal ini mendukung penelitian bahwa

fungi endofit yang diisolasi dari daun C. odorata merupakan

mikroorgnisme sebagai penghasil senyawa antibakteri. Senyawa

metabolit sekunder yang dimiliki fungi endofit ini sama dengan

senyawa yang terkandung didalam ekstrak daun C. odorata. Metabolit

sekunder pada ekstrak fungi endofit memilikitabel

kemampuan dalam menghambat bakteri uji. Tabel 5.4

menunjukkan bahwa masing-masing ekstrak memiliki senyawa kimia

diantaranya, flavonoid, terpenoid, tanin dan steroid.




77

Berdasarkan literatur dan penelitian yang sudah dilakukan

sebelumnnya, senyawa terpenoid mampu menghambat pertumbuhan

atau mematikan bakteri dengan mengganggu terbentuknya membran

dan dinding sel (Ajizah, 2004). Senyawa tannin merupakan senyawa

antibakteri dengan mekanisme kerja menghambat enzim reverse

transcriptase dan DNA topoisomerase sehingga sel bakteri tidak dapat

terbentuk (Nuria, 2009). Mekanisme kerja steroid sebagai antibakteri

adalah menyebabkan naiknya permeabilitas atau kebocoran sel dan

senyawa intraselular berdifusi melalui membran luar dan dinding sel

sehingga menyebabkan kematian sel (Nuria, et al, 2009). Flavonoid

berperan dalam inhibisi pada sintesis DNA-RNA dengan ikatan

hydrogen yang mengakibatkan penumpukan basa asam nukleat,

flavonoid juga memiliki kemampuan dalam menghambat metabolisme

energi, karena dapat menyerap aktif berbagai metabolit dan biosintesis

makromolekul yang ada didalam sel mikroba (Cushnie dan Lamb,

2005). Flavonoid juga mampu mengganggu fungsi dinding sel dan

menyebabkan lisis pada sel (Dewi 2010). Rijayanti (2014) menyatakan

bahwa mekanisme penghambatan bakteri pada senyawa tanin adalah

dengan memprepitasi protein, yaitu melalui reaksi dengan membran sel,

inaktivasi enzim dan inaktivasi fungsi materi genetik, selain itu dengan

menghambat enzim reverse transkriptase dan DNA topoisomerase

sehingga sel bakteri tidak dapat terbentuk.




78

Aktivitas pertumbuhan bakteri dapat ditentukan oleh adanya

senyawa yang terkandung didalam ekstrak. Sehingga pada penelitian ini

semua ekstrak dapat menghambat aktivitas bakteri S. dysenteriae.

5. Integrasi

Hasil penelitian diatas, diketahui bahwa telah ditemukan

beberapa spesies fungi endofit dalam daun C. odorata. Sebagaimana

dalam surat Ar-Ra’ad ayat 4:

وجنات من أعناب وزرع ونخيل صنوان وغير صنوان يسقى وفي األرض قطع متجاورات

ل بعضها على بعض في األكل إن في ذلك آليات لقوم يعقلون ) (4بماء واحد ونفض

Artinya: “Dan di bumi ini terdapat bagian-bagian yang berdampingan,

dan kebun-kebun anggur, tanaman-tanaman dan pohon korma yang

bercabang dan yang tidak bercabang, disirami dengan air yang sama.

Kami melebihkan sebahagian tanam-tanaman itu atas sebahagian yang

lain tentang rasanya. Sesungguhnya pada yang demikian itu terdapat

tanda-tanda (kebesaran Allah) bagi kaum yang berfikir.”

Menurut tafsir Ibnu Katsir, Allah SWT telah menciptakan

bermacam-macam tumbuhan dan buah-buahan, yang dari segi bentuk,

warna, rasa, bau daun dan bunganya memiliki macam-macam variasi.

Kemudian ada yang berubah rasa atas izin Allah SWT. Perbedaan

tersebut merupakan tanda-tanda kebesaran Allah. seperti yang

disebutkan di dalam hadis sahih, bahwa Rasulullah Saw. pernah

bersabda kepada Umar:




79

جل صنو أ ا شعرت أن عم الر بيه؟ ""أم

“Tidakkah engkau ketahui bahwa paman seseorang itu setara dengan

ayahnya”.

Sufyan As-Sauri dan Syu'bah telah meriwayatkan dari Abu

Ishaq, dari Al-Barra r.a. yang mengatakan bahwa As-sinwan artinya

beberapa pohon kurma yang tumbuh dari satu batang pohon. Dan gairu

sinwan artinya yang terpisah-pisah (yakni berbeda batangnya). Itulah

yang dikatakan oleh Ibnu Abbas, Mujahid, Ad-Dahhak, Qatadah, dan

Abdur Rahman ibnu Zaid ibnu Aslam serta lain-lainnya. Dengan

perbedaan itu dapat disimpulkan bahwa Allah telah menjadikan tumbuh

– tumbuhan yang berasal dari tanah yang sama menghasilkan rasa,

bentuk, warna yang berbeda.

Setiap tumbuhan memiliki kelebihan dari tumbuhan lain, begitu

pula C. odorata yang dianggap sebagai gulma yang agresif, namun

memiliki banyak kelebihan dan manfaat salah satunya sebagai

antibakteri. Kelebihan yang sangat bermanfaat itu merupakan ciptaan

dan atas izin Allah SWT.

Potensi fungi endofit yang ditemukan pada C. odorata mampu

menghasilkan metabolit sekunder berupa flavonoid, terpenoid, tanin

dan steroid yang mampu menghambat bakteri patogen dengan beberapa

mekanisme sehingga metabolisme didalam sel mikroba dapat terganggu

dan lisis. Sebagaimana dalam surat Al-Furqon ayat 2:




80

يء الذي له ملك السموات واألرض ولم يتخذ ولدا ولم يكن له شريك في الملك وخلق كل ش

ره تقديرا ) ( 2فقد

Artinya: “Yang kepunyaan-Nya-lah kerajaan langit dan bumi, dan Dia

tidak mempunyai anak, dan tidak ada sekutu bagi-Nya dalam

kekuasaan(Nya), dan dia telah menciptakan segala sesuatu, dan Dia

menetapkan ukuran-ukurannya dengan serapi-rapinya.”

Ibnu Katsir menafsirkan Surat Al-Furqan ayat 2 bahwa, Allah

SWT membersihkan diri-Nya dari beranak dan sekutu, kemudian Allah

SWT adalah Tuhan yang menciptakan segala sesuatu, Yang Menguasai,

dan Yang Memiliki. Segala sesuatu berada di bawah kekuasaan-Nya,

oleh-Nya dan tunduk kepada-Nya dan takdir-Nya.

Tafsir Ibnu Katsir menjelaskan bahwa Allah adalah satu –

satunya Pencipta semesta alam, dengan segala kehendak-Nya sesuatu

yang tidak mungkin menjadi mungkin. Semua yang ada di bumi tunduk

pada Allah SWT. Ayat diatas juga menjelaskan bahwa segala sesuatu

yang dijadikan Allah diberi-Nya perlengkapan dan persiapan-persiapan

sesuai dengan naluri, sifat dan fungsinya masing-masing dalam hidup.

Begitu pula dengan fungi endofit yang tumbuh didalam jaringan daun

C. odorata yang memiliki kandungan senyawa-senyawa antibakteri

yang dapat menghambat pertumbuhan S.dysenteriae. Mikroorganisme

yang tidak terlihat memiliki kemampuan dan manfaat yang luar biasa

bagi kehidupan manusia khususnya. Manusia hanya perlu untuk

mengingat Allah SWT dan mempelajari semua ciptaan Allah SWT,




81

karena manusia merupakan Khalifah dibumi. Dengan mempelajari

ciptaan-Nya maka kita akan senantiasa mengingat kebesaran Allah

SWT yang ada di muka bumi ini.

Berdasarkan hasil penelitian mengenai isolasi, identifikasi, serta

uji senyawa metabolit sekunder fungi endofit sebagai antimikroba dari

daun C.odorata, maka banyak pelajaran yang dapat diambil. Kekuasaan

Allah dalam meciptakan segala sesuatu tidak ada yang sia-sia, termasuk

fungi endofit yang berukuran sangat kecil yang ternyata memiliki

manfaat yang luar biasa. Hal ini sebagaimana firman Allah SWT dalam

surat Ali Imran (3) ayat 190-191:

( الذين 190إن في خلق السماوات واألرض واختالف الليل والنهار آليات ألولي األلباب )

قياما وقعودا وعلى جنوبهم ويتفكرون في خلق السماوات واألرض ربنا ما خل قت يذكرون للا

( 191باطال سبحانك فقنا عذاب النار ) هذا

Artinya: “Sesungguhnya dalam penciptaan langit dan bumi dan silih

bergantinya malam dan siang terdapat tanda-tanda bagi orang-orang

yang berakal. Yaitu orang-orang yang mengingat Allah sambil

berdiri atau duduk atau dalam keadaan berbaring dan mereka

memikirkan tentang penciptaan lanjut dan bumi (seraya berkata),

“Ya Robb kami, tiadalah Engkau ciptakan ini dengan sia-sia, Maha

Suci Engkau, maka dipeliharalah kami dari siksa neraka.”

(QS.3:190-191)




82

Menurut tafsir dari Ibnu Katsir, tidak sekali-kali Engkau

ciptakan semuanya sia-sia melainkan dengan sebenarnya, agar

orang-orang yang berbuat buruk dalam per-buatannya Engkau

berikan balasan yang setimpal kepada mereka, dan Engkau berikan

pahala yang baik kepada orang-orang yang berbuat baik. Kemudian

orang-orang mukmin menyucikan Allah dari perbuatan sia-sia dan

penciptaan yang batil. Hiburan orang mukmin adalah bertafakkur,

kesenangan orang mukmin adalah mengambil pelajaran. Kami

memuji kepada Allah semata, kami semua berada dalam bahaya.

Banyak orang yang lalai (berzikir) umurnya telah habis, sedangkan

dia tidak menyadarinya. Banyak kehidupan terpenuhi semua yang

dicita-citakannya, bunga-bunga yang mekar dengan gemericik air

dari mata air, naungan pepohonan, tumbuh-tumbuhan yang segar,

dan buah-buahan yang masak, semuanya itu menjadi berubah oleh

lewatnya masa yang begitu cepat demikian pula pemilik-Nya.

Ayat tersebut menjelaskan bagaimana Allah SWT

menciptakan segala sesuatu dibumi dengan sebaik-baiknya, dan

disetiap penciptaan terdapat tanda-tanda bagi orang yang berakal

dengan mengingat, memikirkan, serta mempelajari apa yang telah

diciptakan Allah SWT. Sesuai dengan hadits yang diriwayatkan oleh

Abu Nu’aim dari Ibnu Abbas yang berbunyi:




83

” ، وال تفكروا في للا )رواه أبو نعيم عن ابن عباس(“ تفكروا في خلق للا

Artinya “Berfikirlah kamu tentang ciptaan Allah dan janganlah kamu

berfikir tentang Dzat Allah” (HR. Abu Nu’aim dari Ibnu Abbas).

Hadits ini dihasankan Syaikh Nashiruddin Al-Albani dalam Shahihul

Jami’sh Shaghir (2976) dan Silsilatu Ahadits Ash-Shahihah (1788).

Salah satu ciri khas manusia, yang membedakannya dari

makhluk lain adalah berpikir. Dengan berpikir manusia bisa meraih

berbagai kemajuan, kemanfaatan dan kebaikan. Dengan berpikir pula

manusia mengalami kesesatan dan kebinasaan. Oleh karena itu,

dalam hadits ini Rasulullah SAW. memerintahkan kita untuk

melakukan tafakur (Tafakur adalah suatu perenungan dengan

melihat, menganalisa, meyakini secara pasti untuk mendapatkan

keyakinan terhadap segala sesuatu yang berhubungan dengan Allah)

yang akan mengantarkan kita kepada kemanfaatan, kebaikan,

ketaatan, keimanan dan ketundukan kepada Allah Taala, yaitu

dengan tafakur mengenai makhluk ciptaan Allah. Sebaliknya, beliau

melarang kita berpikir tentang Dzat Allah karena kita tidak akan

menjangkaunya, dan dapat mengantarkan kita kepada kesesatan dan

kebinasaan.

Segala sesuatu yang ada di bumi diciptakan oleh Allah SWT

dengan segala pelajaran yang tidak pernah kita ketahui sebelumnya,

agar kita mempelajari ciptaan – ciptaan Allah SWT dan agar kita




84

berpikir atas kebesaran Allah SWT. Termasuk mempelajari

mikroorganisme yang memiliki banyak manfaat bagi manusia

sebagai antibakteri.

Berdasarkan hasil uji aktivitas antibakteri yang dihasilkan dari

metabolit sekunder fungi endofit, ekstrak fungi endofit dapat

digunakan sebagai salah satu trobosan pemanfaatan fungi dalam

bidang mikrobiologi kesehatan, khususnya sebagai pengganti

antibiotik yang telah resisten oleh bakteri. Penelitian hanya upaya

kecil dari tangan manusia, karena kebenaran mutlak hanyalah milik

Allah SWT.




85

BAB VI

PENUTUP

A. SIMPULAN

Berdasarkan analisis data yang diperoleh membuktikan bahwa ada

perbedaan nyata dalam variasi konsentrasi ekstrak fungi endofit dan elstrak daun

C. odorata terhadap aktivitas bakteri S.dysenteriae. Dibuktikan dengan data hasil

uji Kruskal-Wallis dengan nilai signifikansi (0,005) < 0,05. Hal ini berarti variasi

konsentrasi mempengaruhi tingkat zona hambat pada uji aktivitas antimikroba.

Data membuktikan bahwa semua konsentrasi memiliki daya hambat lebih dari 20

mm yang termasuk dalam kategori sangat kuat. Sehingga ekstrak metabolit

sekunder pada kelima fungi endofit berpotensi sebagai penghasil antimikroba.

Sebagaimana hasil penelitian yang telah diperoleh bahwa hal ini disebabkan

karena pada semua ekstrak mengandung beberapa senyawa yang mampu

menghambat dan membunuh mikroba seperti flavonoid, tannin, terpenoid,

saponin dan steroid.




86

B. Saran

Penulis menyarankan agar dilakukan penelitian lebih lanjut dalam

identifikasi spesies fungi endofit yang telah diisolasi. Dan agar dilakukan uji

aktivitas antimikroba ekstrak fungi endofit terhadap banyak bakteri patogen

untuk mengetahui kemampuan ekstrak fungi endofit yang diperoleh, sehingga

kita dapat mengembangkan penelitian-penelitian yang sudah ada supaya lebih

mengetahui manfaat dan kemampuan ekstrak fungi endofit sebagai

antimikroba.




87

DAFTAR PUSTAKA

Agusta, A. 2009. Biologi dan Kimia amur Endofit. ITB Press, Bandung.

Agusta, Andria. 2006. Biotransformation of Catechins and Bioreproduction of

Bisanthraaquinones by The Endophytic Fungus Diaporthe Sp. Isolated

From a Tea Plant. Thesis. Faculty of Pharmacy and Pharmaceutical

Science, Fakuyuma University, Japan.

Ahlich, Karin and Thomas, N. S. 1995. The Profusion Of Dark Septate

Endophytic Fungi In Non-Ectomycorrhizal Fine Roots of Forest Trees and

Shrubs. New Phytologist. 132: 259-270.

Ajizah, A., 2004. Sensitivitas Salmonella Typhimurium terhadap Ekstrak Daun

Psidium Guajava L. Bioscientiae .Vol.1 No.1. pp: 8-31

Akinmoladun, Afolabi C. , Ibukun E.O., dan Dan-Ologe, I.A.. 2007.

Phytochemical constituents and antioxidant properties of extracts from the

leaves of Chromolaena odorata. Scientific Research and Essay. 2 (6): 191-

194.

Aly, A. H., Debbab, A., Kjer, J., dan Proksch, P. 2010. Fungal Endophytes From

Higher Plants: A Prolific Source of Phytochemicals and Other Bioactive

Natural Products. Fungal Diversity. 41:1–16.

Ambika, S.R. & Jayachandra. 1980. Suppression of plantation crops by

Eupatorium weed. Current Science. 49: 874-875.

Ando, K., C, Nakashima, J. Y. Park, & . Otoguro. 2003. Workshop on Isolation

Methods of Microbes. Research and Development Center for

Biotechnology Indonesia Institute of Science. 44.

Apori, S. O., R. J. Long², F. B. Castro dan E. R. érskov. 2000. Chemical

composition and nutritive value of leaves and stems of tropical weed

Chromolaena odorata, Blackwell Science Ltd. Grass and Forage Science.

55: 77-81.

Asmaliyah, et al. 2010. Uji Toksisitas Ekstrak Daun Nicolaia atropurpurea Val.

Terhadap Serangan Hama Spodoptera litura Fabricus (Lepidoptera:

Noctuidae). Jurnal Penelitian Hutan Tanaman Vol.7 No.5, Desember 2010,

253-263.

Arwiyanto, Triwidodo. 2003. Pengendalian hayati penyakit layu bakteri

tembakau. Jurnal Perlindungan Tanaman Indonesia. 3(1): 54-60.




88

Azevedo JL, Maccheroni JR, Pereira JO, Araujo WL. 2000. Endophytic

Microorganism: A Review on Insect Control and Recent Advances on

Tropical Plants. Elect. Journal. Biotech. 3:1-4.

Baxter, J. 1995. Chromolaena odorata: Weed for killing or shrub for tilling.

Journal Article Agroforestry Today. 7(2): 6-8.

Basha NS, Ogbaghebriel A, Yemane K, Zenebe M. Isolation and screening of

endophytic fungi from Eritrean traditional medicinal plant Terminalia

brownie leaves for antimicrobial activity. Int J Green Pharm.

2012;6(1):40-4.

Biemer, J. J. 1973. Antrimicrobial Susceptibilitt Testing by the Kirby-Bauer Disc

Diffusion Method. Clinical Laboratory Scinence. 1(2): 135-140.

Bunyapraphatsara, N. and Chokechaijaroenporn, O. 2000. Thai Medicinal Plants.

Faculty of Pharmacy, Mahidol University and National Center for Genetic

Engineering and Biotechnology. Bangkok, pp. 4: 622-626.

Brooks, G.F., Janet, S.B., Stephen A.M. 2005. Jawetz, Melnick and Adelbergs,

Mikrobiologi Kedokteran (Medical Microbiology) Buku I, Alih Bahasa

oleh Mudihardi, E., Kuntaman, Wasito, E.B., Mertaniasih,

N.M.,Harsono, S., dan Alimsardjono, L. Jakarta : Salemba Medika.

Cannon, P. F., Lu, G., Simmons, C. F., and Alex R. 2002. Diversity and host

preference of leaf endophytic fungi in the Iwokrama Forest Reserve,

Guyana. Mycological Research. 94 (2): 210-220.

Cao, L.X., J.L. You and S.N. Zhou, 2002. Endophytic fungi from Musa acuminata

leaves and roots in South China. World Journal of Microbiology &

Biotechnology. 18: 169–171.

Cappuccino. J.G. and N. Sherman. 1996. Microbiology: A Laboratory Manual. 5th

Ed. The Benjamin Cummings Publishing Inc., California.

Carrol, G. C., 1988. Fungal Endophytes in Stems and Leaves from Latent

Pathogens to Mutualistic Symbions. Ecology. 69: 2-9.

Castillo A. G., Mellone B. G., Partridge J. F., Richardson W., Hamilton G. L.

2007. Plasticity of fission yeast CENP-A chromatin driven by relative

levels of histone H3 and H4. PLoS Genet. 3(7): e121.

Castillo, U. J., Harper, K., Strobel, GA., Sears, J., Alesi, K., Ford, E., Lin, J.,

Hunter, M., Maranta, M., Ge, H., Yaver, D., Jensen, JB., Porter, H.,

Robinson, R., Millar, D., Hess, WM., Condron, M., and David T. 2003.




89

Kakandumycins, Novel Antibiotica from Streptomyces sp. NRRL 30566,

An Endophyte of Grevillea pteridifolia. FEMS Microbiology Letters. 24:

183-190.

Choi, YW., Hodgkiss, JJ., Hyde, KD. 2005. Enzyme Production by Endophytes of

Brucea javanica. Journal of Agricultural Technology. 1: 55-65.

Chowdhury, A. R.. 2002. Essential Oils of The Leaves of Eupatorium odoratum

L. from Shillong (N. E.). J. Essen. Oil-Bearing Plants. 5: 14-18.

Cushnie, T.P dan Lamb. 2005. Antimrobial activity of Flavonoids. International

Journal Of Antimicrobial Agents. 26.

Darmadi. 2008. Infeksi Nosokomial: Problematika dan Pegendaliannya. Salemba

Medika, Jakarta.

Day, R.A., JR, dan A.L. Underwood. 2002. Analisis Kimia Kuantitatif. Edisi ke 6.

Erlangga, Jakarta.

Debbab, A., Aly, A. H., Lin, W.H., dan Proksch.,P. 2010. Bioactive Compounds

from Marine Bacteria and Fungi. Microbial Biotechnology. 3: 544–563.

Dewi, F. K. 2010. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Buah Mengkudu

(Morindacitrifolla, linnaeus) terhadap Bakteri Pembusuk Daging Segar.

Skripsi. Surakarta: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Universitas Sebelas Maret.

Dewi, Asiska Permata dan Fauzana, Annisa. 2017. Uji Aktivitas Antibakteri

Etanol Biji Mahoni (Swietenia mahagoni) Terhadap Shigella dysenteriae.

JOP, 01.

Domsch KH, Gams W, Anderson T. 1980. Compendium of Soil Fungi. Vol I.

Academic Press, London.

Durham, N. C. 2004. Armies of fighting fungi protect chocolate trees. Diakses

pada 2 Maret 2017. < https://www.highbeam.com/doc/1G1-

115835614.html >.

Dwidjoseputro. 2005. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Djambatan. Jakarta.

Ellis MB. 1993. Dematiaceous hyphomycetes. International Mycological Institute,

London.

Ervia, 2012, Uji Aktivitas Antibakteri Kombinasi Ekstrak Etanolik Daun Pare

(Momordica charantia L.) Dan Daun Pepaya (Carica papaya L.)

Terhadap Bakteri Shigella dysenteriae ATCC 9361, Skripsi, Fakultas

Farmasi, Universitas Setia Budi.




90

Fayyaz, M. Irfan A.M., Zaheer A., Shahid., Aamir, dan Shanshad. 2013. In Vitro

Susceptibility of Chloramphenicol Against Methicillin Resistant

Staphylococcus aureus. Journal of the Collage of Physycians and

Surgeons Pakistan. 23 (9).

Gandjar, I. 2000. Pengenalan Kapang Tropic Umum. Yayasan Obor Indonesia,

Jakarta.

Gandjar, I., Koentjoro IR, Mangunwardoyo W, Soebagya L. 1992. Guidelines for

Basic Microbiology Laboratory. Department of Biology, Faculty of

Mathematic and Science. University of Indonesia, Depok.

Gandjar, I., R.A. Samson, K. van den Tweel-Vermeulen, A. Oetari, dan I.

Santoso. 1999. Pengenalan Kapang Tropik Umum. Yayasan Obor

Indonesia, Jakarta.

Gandjar, Indrawati., Sjamsuridjal, W. 2006. Mikologi: Dasar dan Terapan.

Yayasan Obor Indonesia, Jakarta.

Gautier, Laurent. 1992. Taxonomy and Distribution of a Tropical Weed:

Chromolaena odorata (L.) R. King & H. Robinson. Conservatoire et

Jardin Boyaniques de Geneve. 47 (2): 645-662.

Gerald TK, Dennis JK, Harrison’s. 1998. Principles of Internal Medicine.14. Vol.

1. New York: Mc Graw Hill.

Gibson, J.M, 1996, Mikrobiologi dan Patologi Modern untuk Perawat. EGC,

Jakarta.

Graige, M. dan Ahmed, S. 1988. Handbook of Plant With Pest Control

Properties. John Willey & Sons, Singapore.

Guo B, Dai J, Ng S, Huang Y, Leong C, Ong W, Carte BK. 2002. Cytonic Acid A

and B, Novel Tridepside Inhibitor Of hCMV Protease from The

Endophytic Fungus Cytonaena Sp. Journal of Natural Products. 63(5):

602-604.

Hajek AE. 2004. Natural enemies: an introduction to biological control.

Cambridge University Press, Cambridge.

Harmita, dan Maksum Radji. 2006. Analisis Hayati. EGC, Jakarta.

Hasnawati, dan Erna Prawita. 2010. Isolasi dan Identifikasi Senyawa Antibakteri

dari Daun Eupatorium odoratum L. Terhadap Bakteri Staphylococcus




91

aureus ATCC 25923 dan Escherichia coli ATCC 25922. Majalah obat

tradisional. 15 (1).

Hogg, S. 2005. Essential Microbiology. John Wiley & Sons Ltd., England.

Iwu, Maurice M. 1993. Handbook of African Medicinal Plants. CRC Press,

Prancis. 181-182.

J. L. Rodriguez-Tudela, F. Barchiesi, J. Bille, E. Chryssanthou, M. Cuenca-

Estrella, D. Denning, J. P. Donnelly, B. Dupont, W. Fegeler, C. Moore, M.

Richardson, P. E. Verweij. 2002. Method for the Determination of

Minimum Inhibitory Concentration (MIC) by Broth Dilution of

Fermentative Yeasts. Clinical Microbiology and Infection. 9 : 1-8.

Jawetz, E., Melnick, J. L., & Adelberg, E. A., 2001, Mikrobiologi Kedokteran,

diterjemahkan oleh Mudihardi, E., Kuntaman, Wasito, E. B., Mertaniasih,

N. M., Harsono, S., Alimsardjono, L. Salemba Medika, Jakarta.

Karsinah, Lucky HM, Suharto, Mardiastuti HW. 1994. Mikrobiologi Kedokteran.

Binarupa Aksara, Jakarta.

Kemenkes RI. 2012. Profil Kesehatan Indonesia. Jakarta: Kementrian Kesehatan

Republik Indonesia.

Kemenkes. 2015. Profil Kesehatan Indonesia. Jakarta. Kementerian Kesehatan

Republik Indonesia.

Kloepper, J.W., dan Ryu, C. M.. 2006. Bacterial Endophytes as Elicitors of

Induced Systemic Resistance. In B. Schulz, C. Boyle, T.N. Sieber (Eds).

Microbial root endophytes. Springer-Verlag Berlin Heidelberg.

Kumala, S. 2005. Isolasi dan Penapisan Mikroba Endofit Tanaman Brucea-

javanica (L) Merr. Serta Uji Sitotoksik Metabolit Sekunder terhadap

Beberapa Sel Kanker Secara In Vitro. Disertasi. Fakultas Kedokteran,

Universitas Indonesia, Jakarta.

Kumala, S., Endah Puji Septisetyani, dan Edy Meiyanto. 2009. Fraksi n-butanolik

Kapang Endofit Buah Makasar Meningkatkan Efek Apoptosis

Doxorubusin pada Sel MCF-7. Majalah Farmasi Indonesia. 20(1): 42 –

47.

Kumala S, Pratiwi AP. Efek antimikroba dari kapang endofit ranting tanaman

biduri. Jurnal Farmasi Indonesia. 2014;7(2):111-20.

Kumar, D.S.S. and Hyde, K.D. 2004. Biodiversity and Tissue-Recurrence of

Endophytic Fungi in Tripterygium wilfordii. Fungal Diversity. 17: 69-90.




92

Kusumaningtyas, E., E. AStuti, dan Darmono. 2008. Sensivitas Metode

Bioautografi Kontak dan Agar Overlay dalam Penentuan Senyawa

Antikapang. Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia. 6(2): 75-79.

Larran, S., Monaco, C., and H.E Alippi. 2001. Endophytic Fungi in Leaves of

Lycopersicon esculentum. World Journal of Microbiology and

Biotechnology. 17: 181-184.

Lee, J. C., Lobkovsky, E., Pliam, N. B., Strobel, GA., Clardy, J. 1995.

Subglutinols A and B; immunosuppressive compounds from the

endophytic fungus Fusarium subglutinans. J Org Chem. 60:7076-7077.

Lenny, S. 2006. Senyawa Terpenoida dan steroida.Karya Ilmiah departemen

Kimia FMIPA Universitas Sumatra Utara Medan.

Liani, Esthi. 2015. Fungi Endofit. Diakses pada 20 maret 2017.

<http://tgc.lk.ipb.ac.id/2015/05/18/fungi-endofit/>.

Lu, H., Zou, W. X., Meng, J. C., Hu, J., dan Tan R. X. 2000. New Bioactive

Metabolites Produced by Colletotrium sp., An Endophytic Fungus in

Artemisia annua. Plant Science. 151: 76-73.

Marutani, M., and Muniappan, R. 1991. Interactions between Chromolaena

odorata (Asteraceace) and Pareuchaetes pseudoinsulata (Lepidoptera,

Arctiidae). Annals of Applied Biology. 119: 227-237.

Marwoto. 2001. Potensi dan peluang parasitoid Trichogramma untuk menekan

populasi hama pada tanaman kedelai. Prosiding Seminar Nasional Kinerja

Teknologi untuk Meningkatkan Produktivitas Tanaman Kacang-kacangan

dan Umbi-umbian. Pusat Penelitian dan Pengembangan Tanaman Pangan,

Bogor.

Mc Donnell, G., and A. D. Russell. 1999. Antiseptic and disinfectants: Activity,

Action, and Resistance. Clinical Microbiology review. 12(1): 147-179.

McFadyen, R.E.Cruttwell, 1989. Siam Weed: A New Threat to Australia's North.

Plant Protection Quarterly. 4(1): 3-7.

McFadyen, R.E.Cruttwell, 1996. National Report from Australia and the Pacific.

In: U.K. Prasad, R. Muniappan, P. Ferrar, J.P. Aeschlimann and H. de

Foresta (Editors), Distribution, Ecology and Management of Chromolaena

odorata. Proceedings of 3rd International Chromolaena odorata

Workshop. University of Guam, Mangilao, USA.

http://tgc.lk.ipb.ac.id/2015/05/18/fungi-endofit/




93

McFadyen, Rachel Cruttwell dan Bryce Skarratt. 1996. Potential distribution of

Chromolaena odorata ( siam weed) in Australia, Africa and Oceania.

Agriculture, Ecosystems and Environment Elsevier 59: 89-96.

Miles PG and ST Chang. 1997. Mushrooms Biology. Concise Basics and Current

Developments. Singapore (SG), World Scientific.

Michael, P.W.. 1989. Review Paper on Weeds of Concern to Northern Australia.

Unpublished Report to AQIS, Canberra.

Mirsam, H., Rosya, A., Rahim, Y. F., Rusae, A., dan Abdul Munif. 2015.

Eksplorasi Cendawan Antagonis dari Tanaman Kirinyuh (Chromolaena

odorata L.) sebagai Agens Hayati dan Pemacu Pertumbuhan. Prosiding

Seminar nasional Perlindungan Tanaman II. Institut Pertanian Bogor,

Bogor.

Mirwan, Agus. 2013. Keberlakuan Model Hb-Gft Sistem N-Heksana – Mek – Air

Pada Ekstraksi Cair-Cair Kolom Isian. Konversi, Volume 2.

Nakagiri, A., Okane, I., Ito, T., Kramadibrata, K., Suciatmih, Retnowati, A. 2005.

A Guidebook to Identification of Fungi Inhabiting Mangrove and

Surrounding Area in Indonesia. Research Center for Biology, Bogor.

Natheer, S. E., Seekar. C, Amutharaj, M. S Abdul Rahman dan K. Feroz Khan.

2012. Evaluation of antibacterial activity of Morinda citrifolia, Vitex

trifolia and Chromolaena odorata. African Journal of Pharmacy and

Pharmacology. 6(11).

Niere B. 2002. Banana Endophyte: Potential for Pest Biocontrol. IITAESARC.

Kampala, Uganda.

Noor, S. Purwoko. 2006. Aktivitas Ekstrak Lengkuas terhadap Pertumbuhan

Jamur Aspergilus spp. Fakultas MIPA, Skripsi. UNS. Surakarta.

Noverita, Dinah Fitria,dan Ernawati Sinaga. 2009. Isolasi dan Uji Aktivitas

Antibakteri Jamur Endofit dari Daun dan Rimpang Zingiber ottensii Val.

Jurnal Farmasi Indonesia. 4: 171 -176.

Nugroho, D. 2004. Eksplorasi Bakteri Endofit Pada AkarTanaman Kentang Yang

Berpotensi Sebagai Antagonis Pseudomonas solanacearum. Skripsi.

Fakultas Pertanian, Universitas Brawijaya, Malang.

Nuria, Cut., 2009, Uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun jarak pagar

(Jatropha curcas L.) terhadap bakteri staphylococcus aureus , Escherechia

coli dan Salmonela typhi , Jurnal uji antibakteri , 5 (2), h 10-12.




94

Oyen, L. 1995. Experiences from South East Asia aggressive colonisers work for

the farmers. ILEIA (Centre for Research and Information on Low External

Input and Sustainable Agriculture). 11(3).

Pelczar, M. J. and Chan, ECS. 1986. Dasar-dasar Mikrobiologi. UI Press, Jakarta.

Pelczar, M. J., & Chan, E. C. S. 1988, Dasar-Dasar Mikrobiologi. Volume 2. UI

PRESS, Jakarta.

Petrini, O., P. J. Fisher, dan L. E. Petrini. 1992. Fungal Endophytes of Bracken

(Pteridium aquilinum), with Some Reflections on Their Use in Biological

Control. Sydowia. 44: 282-293.

Petrini, Stone, and Carroll, E. 1982. Endophytic Fungi in Evergreen Shrubs in

Western Oregon A Preliminary Study. Canadian Joumal of Botany. 60:

789-796.

Prihatiningtias, W. Widyastuti, S.M, dan Wahyuono, S. Tanpa tahun. Aktivitas

Anti-bakteri Fungi Endofit Thievalia Polygonoperda, Isolat Dari

Tumbuhan Akar Kuning (Fibraurea Chloroleuca Miers). Universitas

Gadjah Mada, Yogyakarta.

Pokhrel CP and S Ohga. 2007. Submerged culture conditions for mycelial yield

and polysaccharides production by Lyophyllum decastes. Food

Chemistry.105,641-646.

Radji, M. 2005. Peranan Bioteknologi dan Mikroba Endofit dalam Pengembangan

Obat Herbal. Majalah Ilmu Kefarmasian. 2(3): 113-126.

Rao, S. 2008. Sterilization and Disinfection. Diakses pada 14 Juni 2017.

www.microrao.com/micronotes/sterilization.pdf.

Reynolds, Jackie & Richland college. 2011. Kirby-Bauer Test for Antibiotic

Susceptibility. BIOL 2420. 1-4.

Rianto, L. Indri. Annisa. 2015. Uji Aktivitas Ekstrak Etanol 96% Biji Srikaya

(Annona Squamosa L.) Sebagai Antidiare Yang Disebabkan Oleh Bakteri

Shigella Dysenteriae Dengan Metode Difusi Cakram. Jurnal Ilmiah

Manuntung. 1(2).

Rijayanti, R. K., 2014, Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Mangga

Bacang (Mangifera Foetida L.) terhadap Staphylococcus Aureus Secara In

Vitro, Naskah Publikasi, Program Studi Pendidikan Dokter, Fakultas

Kedokteran Universitas Tanjungpura.

http://www.microrao.com/micronotes/sterilization.pdf




95

Rubiyanto, Dwiarso. 2016. Teknik Dasar Kromatografi. CV Budi Utama,

Yogyakarta.

Rubiyanto, Dwiarso. 2017. Metode Kromatografi: Prinsip Dasar, Praktikum, dan

Pendekatan Pembelajaran. CV Budi Utama, Yogyakarta.

Rusman, Y., 2006. Isolation of new secondary metabolites from sponge associated

and plant derived endophytic fungi. Disertasi. Fakultas Matematika dan

Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Heinrich-Heine, Dusseldorf Jerman.

Sack DA, Lyke C, Laughlin CM, Suwanvanichkij V. Antimicrobial Resistance In

Shigellosis, Cholera And Campylobacteriosis. Diakses pada 13 April

2017. <http:// www.who.int/emc-documents/antimicrobial resistance/docs/

shigellosis.pdf>.

Saifudin, Aziz. 2012. Senyawa Alam Metabolit Sekunder: Teori, Konsep, dan

Teknik Pemurnian. CV Budi Utama, Yogyakarta.

Sajise PE, Palis RK, Norcio NV, Lales JS. 1974. The biology of C.odorata L.

King and Robinson. 1. Flowering behaviour, pattern of growth and nitrate

metabolism. Philipine Weed Science Bulletin. 1:17-24.

Setiabudi, R. 2007. Farmakologi dan Terapi Edisi 5. Departemen Farmakologi

dan Terapeutik FKUI, Balai Penerbit FKUI, Jakarta.

Sherma, J. dan B. Fried. 2003. Handbook of Thin-layer Chromatography. 3rd

Ed.

Marcel Dekker, Inc. New York.

Simanjuntak, P., Parwati, T., Bustanussalam, Prana, T. K., Wibowo, S., Shibuya,

H. 2002. Isolasi dan kultivasi mikroba endofit penghasil senyawa alkaloid

kinkona dari Chinchona spp. Mikrobiology Indonesia. 7: 27-30.

Sinaga, E., Noverita, Dinah Fitria, 2009. Isolasi Dan Uji Aktivitas Antibakteri

Jamur Endofit Dari Daun Dan Rimpang Zingiber ottensii Val. Jurnal

Farmasi Indonesia Vol. 4

Sipayung A., RD, DE, Chenon dan, PS, Suhadto. 1991. Observations on

Chromolaena odorata (L.) R.M. King and H. Robinson in I: 43-

49ndonesia. Second International Workshop on the Biological Control and

Management of Chromolaena odorata. Biotrop Special Publication 44:

43-49.

Strobel G, Daisy B, dan Castillo U, Harper J. 2004. Natural Products from

Endophytic Microorganisms. J Nat Prod. 67:257–268.

http://www.who.int/emc-documents/antimicrobial%20resistance/docs/%20shigellosis.pdf

http://www.who.int/emc-documents/antimicrobial%20resistance/docs/%20shigellosis.pdf




96

Strobel GA., and B. Daisy. 2003. Bioprospecting for Microbial Endophytes and

Their Natural Products. Microbiol Mol Biol Rev. 67(4):491-502.

Strobel, G., Daisy, B. dan Castillo, U. 2005. The biological promise of microbial

endophytes and their natural products. Plant Pathology Journal. 4: 161-

176.

Strobel, G.A. 2003. Endophytes as Sources of Bioactive Products. Microbes and

Infection, Elsevier. 5(6): 535-544.

Strobel, GA., Ford, E., Woapong, J., Harper, J. K., Arif, A. M., Grant, D. M.,

Fung P. C. W., Chan, K. 2002. Isopestacin, An Isobenzopuranone from

Pestalotiopsis Microspora, Prossesing Antifungal and Antioxidant

Activities. Phytochemistry. 60:179-183.

Sundari. 2012. Suatu Model Pengembangan Media Pembelajaran Slide Culture

untuk Pengamatan Struktur Mikroskopik Kapang pada Matakuliah

Mycology. Jurnal bioedukasi. 1.

Suwandi, U. 1989. Mikroorganisme Penghasil Antibiotik. Pusat Penelitian dan

Pengembangan PT. Kalbe Farma. Jakarta.

Suwandi U. 1992. Mekanisme Kerja Antibiotik. Pusat Penelitian dan

Pengembangan P.T. Kalbe Farma. Jakarta. Cermin Dunia Kedokteran 76:

10-11.

Syarmalina. 2008. Endofit dan Pelestarian Alam. Diakses pada Mei 10 2017.

http://www.isfinational.or.id.

Tan, R.X. dan W.X. Zou. 2001. Endophyte: A Rich Source of Functional

Metabolites. Nat. Prod. Rep. 18: 448-459.

Tanaka, M., Sukiman, H., Takebayashi, M., Saito, K., Suto, M., Prana, M.S., and

Tomita, F., 1999. Isolation, Screening and Phylogenetic Identification of

Endophytes from Plants in Hokaido Japan and Java Indonesia. Microbes

and Environment 14(4):237–241.

Todar, Kanneth. 2012. Todar’s Online Textbook of Bacteriology. Diakses pada 7

April 2017. <http://textbookofbacteriology.net/Shigella.html>.

Todar,K. 2009. Online Textbook of Microbiology. Diakses pada 21 April 2017

<http://www.textbookofbacteriology.net/>.

Ulrich K, Ulrich A, dan Ewald D. 2008. Diversity of endophytic bacterial

communities in poplar grown under field conditions. FEMS Microbiol

Ecol. 63:169–180

http://textbookofbacteriology.net/Shigella.html




97

UNICEF (2018). Undernutrition contributes to nearly half of all deaths in children

under 5 and is widespread in Asia and Africa. Diakses pada 12

September 2017. <https://data.unicef.org/topic/nutrition/malnutrition/>.

Valera, M. C., Silva, K. C. G., Maekawa, L. E., Carvalho, C. A. T., Kogaito, C.

Y., Camargo, C. H. R., Lima, R. S. 2009. Antimicrobial Activity of

Sodium Hypochlorite Associated with Intracanal Medication for Candida

albicans and Enterococcus faecalis Inoculated in Root Canals. Journal of

Appied Oral Science. 17(6): 555-559.

Villaseñor, I.M., A.P. Canlas, K.M. Faustino, & K.G. Plana. 2004. Evaluation of

the Bioactivity of Triterpene Mixture Isolated from Carmona retusa

(Vahl.) Masam Leaves. Journal of Ethnopharmacol. 92: 53-56.

Vineetha, N., R. A. Vignesh, dan D. Sridhar. 2015. Preparation, Standarization of

Antibiotic Disc and Study of Resistance Pattern for First-Line Antibiotics in

Isolates from Clinical Samples. International Journal of Apllied Research.

1(11): 624-631.

Wahyono, Pudjiono, Widyati P. Uji aktivitas senyawa antiplasmodium dari fungi

endofit tanaman Artemisia annua L. Majalah Farmasi Indonesia.

2010;21(4):230-5.

Waites, M. J., Morgan, N.L., Higton. G., dan Rockey, J.S. 2001. Industrial

Microbiology: An Introduction. Blackwell Science, London.

Welk, Gerk dan Hager, Ron. 2010. Lifestyles for Health, Fitness, and Wellness

(Vol.1). New York: Mc Graw Hill.

Weni, Wilia, Sri Mulyati, Husda Marwan, Yulia Alia, Rike Puspitasari Tamim.

2008. Penyuluhan pemanfaatan Cendawan Antagonis Trichoderma sp.,

untuk Pengendalian Penyakit Tanaman pada Petani di Desa Sumber Jaya

Kec. Kumpeh Ulu Kab. Jurnal Pengabdian pada Masyarakat. 45: 19-23.

WHO. (2013). Diarrhoeal Disease. Diakses pada 12 September 2017.

<http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs330/en/>

Yu, H., Zhang, L., Lin, L., Zheng, C., Guo, L., Li, W., Sun, P., and Qin, L. 2010.

Recent Developments and Future Prospects of Antimicrobial Metabolites

Produced by Endophytes. Microbiology Research Elsevier. 265: 437-449

Yulia, P. R. 2005. Isolasi Dan Seleksi Kapang Endofit Penghasil Antimikroba

Pada Beberapa Tanaman Obat Tradisional Indonesia. Skripsi. Univesitas

Indonesia.

http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs330/en/




98

Yulianti, Titiek. 2012. Menggali potensi endofit untuk meningkatkan kesehatan

tanaman tebu mendukung peningkatan produksi gula. Perspektif. 11 (2):

111-122.

Zhang, B., Salituro, G., Szalkowski, D., Li, Z., Zhang, Y., Royo, I., Vilella, D.,

Dez, M., Pelaes, F., Ruby, C., Kendal, RL., Griffin, P., Calaycay, J.,

Zierath, JR., Heck, JV., Smith, RG., and Moller, DE. 1999. Discovery of

small molecule insulin mimetic with antidiabetic activity in mice. Science.

284(5416): 974-981.

Zinniel, DK, Lambrecht, P, Haris, NB., Feng, Z., Kuczmarski, D., Higley, P.,

Ishimaru, CA., Arunakumari, A., Barletta, RG., and Vidader, AK. 2002.

Isolation and Characterization of Endophytic Colonizing Bacteria from

Agronomics Crops and Prairie Plants. Appl Environ Microbiol. 68: 2198-

2208.

uji aktivitas antibakteri ekstrak fungi endofit dan ...digilib.uinsby.ac.id/26157/2/khoirun...

Documents