spektro 10-11

UJI KINERJA SPEKTROFOTOMETER ULTRAVIOLET-TAMPAK BERKAS GANDA TERHADAP PENGUKURAN AMBROKSOL HCl

PADA TABLET EKSPEKTORAN

ACEP SUDARMAN

DEPARTEMEN KIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM INSTITUT PERTANIAN BOGOR

BOGOR 2012

ABSTRAK

ACEP SUDARMAN. Uji Kinerja Spektrofotometer Ultraviolet-Tampak Berkas Ganda Terhadap Pengukuran Ambroksol HCl pada Tablet Ekspektoran. Dibimbing oleh PURWANTININGSIH SUGITA dan MUJI HARJA.

Uji kinerja spektrofotometer ultraviolet-tampak (UV-Vis) berkas ganda terhadap pengukuran ambroksol HCl pada tablet ekspektoran meliputi 2 tahap pengujian. Tahap pertama meliputi uji akurasi panjang gelombang, deviasi serapan, resolusi, derau, kerataan baseline, stabilitas sinar, akurasi fotometri, dan linearitas instrumen. Tahap kedua ialah validasi metode, meliputi penentuan kadar sebenarnya ambroksol HCl pada tablet ekspektoran, uji linearitas, limit deteksi, limit kuantitasi, akurasi, dan presisi. Hasil uji kinerja instrumen menunjukkan deviasi panjang gelombang < 0.6 nm sesuai dengan standar NIST-SRM 2034; tidak ada deviasi serapan sinyal karena absorbans pada panjang gelombang cutoff > 2.000 (standar European Pharmacopeia); resolusi 1.8 nm; derau < 0.0001 (standar ASTM); kerataan baseline baik dengan fluktuasi sinyal < 0.002; stabilitas sinyal baik dengan serapan kuvet < 0.00200; akurasi fotometri baik karena absorbans terukur tidak berbeda nyata dari absorbans teoretis (standar NIST-SRM 1935), dan nilai regresi > 0.9970 yang disyaratkan oleh ICH. Hasil uji validasi metode menunjukkan regresi linear 0.9981, limit deteksi 0.0028 mg/mL, limit kuantitasi 0.00836 mg/mL, akurasi 101.01 101.24% dengan batas akurasi menurut ICH 98102%, simpangan baku uji keterulangan 0.06% dan uji ketertiruan 0.23%, masih memenuhi syarat ketelitian AOAC maksimum 1%. Berdasarkan hasil tersebut, spektrofotometer UV-Vis berkas ganda masih layak digunakan untuk melakukan analisis ambroksol HCl dalam sediaan tablet ekspektoran.

ABSTRACT ACEP SUDARMAN. Performance Test of Double Beam Ultraviolet-Visible Spectrophotometer on Ambroxol HCl's Measurements in Expectorant Tablet. Supervised by PURWANTININGSIH SUGITA and MUJI HARJA.

Performance test of double beam ultraviolet-visible (UV-Vis) spectrophotometer on ambroxol HCls measurement in expectorant tablet included two steps. The first test included wavelength accuracy, stray light, resolution, noise, baseline flatness, light stability, photometric accuracy, and linearity tests of the instrument. The second test was validation method, including determination of the actual content of ambroxol HCL in expectorant tablet, linearity, limit of detection, limit of quantitation, accuracy, and precision tests. The results of instrument performance test showed deviation of wavelength accuration < 0.6 nm, fulfilling the NIST-SRM 2034 standard; no stray light because the absorbance in cutoff wavelength > 2.000 (European Pharmacopeia standard); good baseline flatness with signal fluctuation < 0.002; resolution 1.8 nm; noise < 0.0001 (ASTM Standard); good signal stability with cuvette absorbance < 0.00200; good photometric accuracy because measured absorbance showed not significant difference from the theoretical value (NIST-SRM 1935 Standard), and regression value > 0.9970, eligible with ICH qualification. The results of the method validation tests showed linear regression of 0.9981, limit of detection 0.0028 mg/mL, limit of quantitation 0.00836 mg/mL, accuracy 101.01101.24% fulfilling the ICH recommendation 98102%, standard deviation of repeatability test 0.06% and 0.23% for reproducibility test, still qualified the AOAC criteria of 1%. Based on the above result, double beam UV-Vis spectrophotometer can still be used for ambroxol HCl analysis in expectorant tablet preparation.

UJI KINERJA SPEKTROFOTOMETER ULTRAVIOLET-TAMPAK BERKAS GANDA TERHADAP PENGUKURAN AMBROKSOL HCl

PADA TABLET EKSPEKTORAN

ACEP SUDARMAN

Skripsi Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

Sarjana Sains pada Departemen Kimia

DEPARTEMEN KIMIA FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

INSTITUT PERTANIAN BOGOR BOGOR

2012

Judul Skripsi : Uji Kinerja Spektrofotometer Ultraviolet-Tampak Berkas Ganda Terhadap Pengukuran Ambroksol HCl pada Tablet Ekspektoran Nama : Acep Sudarman NIM : G44076029

Disetujui

Pembimbing I Pembimbing II

Prof Dr Purwantiningsih Sugita, MS Muji Harja S Farm, Apt NIP 196312171988032002 NIP 198202022010011019

Diketahui Ketua Departemen Kimia

Prof Dr Ir Tun Tedja Irawadi, MS NIP 9501227 197603 2 002

Tanggal Lulus:

PRAKATA

Puji dan syukur penulis haturkan kepada Allah SWT atas segala karunia-Nya

sehingga skripsi ini berhasil diselesaikan. Penelitian ini berjudul Uji Kinerja Spektrofotometer Ultraviolet-Tampak Berkas Ganda Terhadap Pengukuran Ambroksol HCl pada Tablet Ekspektoran yang dilaksanakan pada bulan Juni 2009 hingga Januari 2010 di PT Guardian Pharmatama Tangerang, Banten.

Terima kasih penulis ucapkan kepada Prof Dr Ir Purwantiningsih Sugita MS dan Muji Harja S Farm, Apt selaku pembimbing yang telah banyak memberikan bantuannya. Terima kasih juga kepada Dra Anni M Wulandari Apt selaku Kepala Pabrik, Dra Rita Luthviana Apt selaku manajer QC, Dian Oktaviani SSi dan Rini Prihatini SSi atas kerja sama dan bantuannya hingga penelitian ini dapat terselesaikan.

Semoga tulisan ini bermanfaat bagi semua pihak yang membutuhkan.

Bogor, Maret 2012

Acep Sudarman

RIWAYAT HIDUP Penulis dilahirkan di Bogor pada tanggal 20 Maret 1985 dari ayah Acip Anda dan

ibu Epon Kartika. Penulis merupakan putra pertama dari dua bersaudara. Tahun 1999 penulis lulus dari SMA Negeri 4 Bogor. Penulis kemudian

melanjutkan sekolah di Institut Pertanian Bogor pada Program Studi Diploma 3 Analisis Kimia, Departemen Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. Penulis kemudian bekerja di salah satu pabrik farmasi di tangerang, yaitu PT Guardian Pharmatama sebagai Inspektur Quality Control yang bertugas sebagai pengawas proses produksi. Pada tahun 2007 penulis kembali diterima di Institut Pertanian Bogor pada Program Sarjana Kimia Penyelenggaraan Khusus, Departemen Kimia, FMIPA IPB.

vi

DAFTAR ISI

Halaman

DAFTAR TABEL ............................................................................................................ vii

DAFTAR GAMBAR ....................................................................................................... vii

DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................................... vii

PENDAHULUAN ........................................................................................................... 1

TINJAUAN PUSTAKA

Ambroksol HCl ...................................................................................................... 1 Spektrofotometer UV-Vis Berkas Ganda .............................................................. 2 Uji Kinerja Spektrofotometer UV-Vis Berkas Ganda ........................................... 3 Validasi Metode Penetapan Kadar Ambroksol HCl pada Tablet Ekspektoran ..... 5

BAHAN DAN METODE ................................................................................................ 6

Alat dan Bahan ...................................................................................................... 6 Metode Penelitian .................................................................................................. 7 Uji Kinerja Spektrofotometer ................................................................................ 7 Validasi Metode ..................................................................................................... 7

HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................................................ 8

Hasil Uji Kinerja Spektrofotometer ....................................................................... 8 Hasil Validasi Metode ........................................................................................... 10

SIMPULAN DAN SARAN ............................................................................................. 12

Simpulan ................................................................................................................ 12 Saran ...................................................................................................................... 12

DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................................... 12

LAMPIRAN ..................................................................................................................... 13

vii

DAFTAR TABEL

Halaman

1 Syarat nilai panjang gelombang ................................................................................. 7

2 Pengukuran akurasi fotometri .................................................................................... 7

3 Hasil pengukuran presisi ............................................................................................ 12

DAFTAR GAMBAR

Halaman

1 Struktur ambroksol HCl ............................................................................................. 2

2 Skema spektrofotometer UV-Vis berkas ganda ......................................................... 2

3 Spektrum serapan holmium oksida padat dan cair .................................................... 3

4 Spektrum resolusi spektrofotometer UV-Vis ............................................................. 4

5 Spektrum holmium oksida ......................................................................................... 8

6 Spektrum serapan KCl dan NaI ................................................................................. 8

7 Spektrum hubungan waktu dengan absorbans saat pengujian derau ......................... 9

8 Spektrum serapan baseline ........................................................................................ 9

9 Spektrum hubungan waktu dengan absorbans saat pengujian stabilitas sinyal ......... 10

10 Spektrum ambroksol HCl .......................................................................................... 11

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

1 Akurasi panjang gelombang ...................................................................................... 14

2 Deviasi serapan sinyal larutan KCl ........................................................................... 15

3 Deviasi serapan sinyal larutan NaI ............................................................................ 15

4 Resolusi ...................................................................................................................... 16

5 Derau .......................................................................................................................... 17

6 Kerataan baseline ....................................................................................................... 18

7 Stabilitas sinyal .......................................................................................................... 21

8 Akurasi fotometri ....................................................................................................... 22

9 Linearitas ................................................................................................................... 23

10 Kadar ambroksol HCl pada standar sekunder ............................................................ 24

11 Linearitas metode penentuan kadar ambroksol HCl .................................................. 25

12 Hasil penentuan parameter statistika kurva standar ambroksol HCl.......................... 26

13 Limit deteksi dan limit kuantisasi .............................................................................. 26

14 Perolehan kembali metode pengukuran kadar ambroksol HCl .................................. 27

1

PENDAHULUAN

Obat adalah sediaan atau paduan yang siap digunakan untuk mengetahui atau menyelidiki secara fisiologi atau patologi dalam rangka penetapan diagnosis, pencegahan, penyem-buhan, pemulihan, peningkatan kesehatan, dan kontrasepsi (Peraturan Menteri Kesehatan No. 917/Menkes/Per/X/1993). Sementara menurut Ansel (1985), obat merupakan zat yang digunakan untuk diagnosis, mengurangi rasa sakit, serta mengobati atau mencegah penyakit pada manusia atau hewan.

Secara umum, obat dibagi menjadi 4 golongan. (1) Obat bebas biasanya berupa suplemen, vitamin, obat gosok, beberapa analgesik, antipiretik, dan antasida. (2) Obat bebas terbatas meliputi obat batuk, influenza, penghilang rasa sakit, penurun panas, antiseptik, dan obat tetes mata. Obat jenis ini hanya dapat dibeli di apotek dan toko obat berizin. (3) Obat keras contohnya obat jantung, hipertensi, hormon, dan beberapa antibiotik. Obat ini diperoleh hanya dengan resep dokter dan dapat dibeli di apotek. (4) Golongan psikotropika, diawasi dengan ketat oleh Badan Pengawasan Obat dan Makanan dan hanya dapat dibeli dengan resep dokter asli.

Obat batuk banyak ditemui di pasaran. Berdasarkan jenis batuknya, ada 2 jenis, yaitu ekspektoran dan antitusif. Ekspektoran digunakan untuk penderita batuk berdahak (batuk disertai cairan kental yang disebabkan masuknya zat asing melalui tenggorokan). Obat ini dapat meringankan pernapasan, sesak napas, dan terutama serangan asma hebat yang dapat mematikan jika sumbatan lendir sedemikian kentalnya sehingga tidak dapat dikeluarkan (Tjay & Rahardja 2002). Contoh zat aktif yang digunakan adalah ambroksol HCl, amonium klorida, dan gliseril guaiakol. Antitusif digunakan pada penderita batuk kering, yaitu batuk yang tidak disertai cairan (lendir). Obat ini bekerja dengan menekan rangsangan batuk agar tidak berkepanjangan, biasanya menggunakan zat-zat pereda seperti kodein atau noskapin.

Ambroksol HCl adalah zat aktif yang banyak ditemui pada obat batuk ekspektoran. Zat ini dapat digunakan dalam sediaan obat cair berupa sirup ataupun sediaan padat berupa tablet untuk dewasa. Jumlah zat tersebut dalam sediaan cair lebih kurang 15 mg/5 mL, dalam sediaan padat sekitar 30 mg/180 mg tablet. Kecilnya jumlah ini mengharuskan pengawasan yang ketat pada proses pembuatannya untuk menjamin mutu

obat yang dihasilkan, yaitu kesesuaian jumlah zat dalam sediaan obat dengan spesifikasi kadar bahan aktifnya. Metode pengujian kimia yang akurat diperlukan agar data yang dihasilkan mendekati nilai sebenarnya.

Metode analisis kuantitatif yang baik harus memenuhi beberapa parameter, antara lain teliti, tepat, dapat-ulang, linearitas tinggi, dan limit deteksi-kuantitasi memenuhi syarat. Faktor pendukung sahihnya sebuah metode antara lain analis, instrumen analisis, pereaksi, dan faktor lingkungan. Suatu metode analisis tidak mungkin baik jika faktor-faktor tadi tidak mendukung. Faktor yang cukup penting adalah instrumen analisis. Semakin sering dipakai kinerja alat akan semakin menurun, menyebabkan hasil pengukuran tidak dapat dipercaya. Uji berkala kinerja suatu instrumen analisis diperlukan untuk menghindari galat instrumen. Parameter uji kinerja ini beragam, bergantung pada parameter yang diukur oleh instrumen.

Penentuan jumlah ambroksol HCl pada sediaan obat dapat dilakukan menggunakan metode spektrofotometri ultraviolet-tampak (UV-Vis). Metode ini lazim digunakan oleh berbagai pabrik farmasi sebagai standar operasional penentuan ambroksol pada sediaan obat. Prosedur yang mudah dan hasil yang baik menjadi pertimbangannya.

Tujuan penelitian ini adalah menentukan kinerja spektrofotometer UV-Vis berkas ganda terhadap pengukuran kadar ambroksol HCl dalam tablet ekspektoran. Tahap pertama ialah pengujian kinerja spektrofotometer dan tahap kedua adalah verifikasi metode pengukuran. Diharapkan hasil penelitian ini dapat menentukan baik-tidaknya kinerja alat.

TINJAUAN PUSTAKA

Ambroksol HCl

Ambroksol HCl adalah metabolit aktif dari

bromheksin dengan rumus struktur 4-(2-amino-3,5-dibromobenzilamina)sikloheksanol hidroklorida (Gambar 1). Zat ini banyak ditemukan pada obat batuk ekspektoran sebagai agen sektetolitik yang berfungsi menurunkan viskositas mukus melalui pemutusan serat-serat mukopolisakarida sehingga lendir mudah dikeluarkan lewat bantuan batuk (Tjay & Rahardja 2002).

Ambroksol HCl berbentuk kristal putih atau kekuningan, kandungannya dalam bentuk murni 99101%. Ambroksol HCl larut dalam alkohol, sedikit larut dalam air, dan tidak larut

2

Br

Br

NH2

OH

N

H

H Cl+

Gambar 1 Struktur ambroksol HCl.

dalam metilena klorida. Nilai pH 4.56.0 dan kadar air 0.5%. Bahan pengotor berupa logam berat (maksimum 20 ppm) dan senyawa sulfat (maksimum 0.1%) di dalam 1 g serbuk. Untuk pengujian secara kualitatif, dapat digunakan metode spektrofotometri inframerah dengan cara membandingkan puncak serapan dengan standar. Metode lain adalah kromatografi lapis tipis (KLT) dengan pelarut metanol dan fase gerak campuran amonia:1-propanol:etil asetat:heksana (1:10:20:70 v/v/v/v). Noda kromatogram diamati menggunakan sinar UV 254 nm (British Pharmacopeia 2007).

Penentuan kadar ambroksol HCl dapat dilakukan menggunakan titrasi potensiometri, spektrofotometer UV-Vis, atau kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC). Metode titrasi potensiometri mengukur beda potensial sel yang dihasilkan dari reaksi elektrokimia ambroksol HCl dan NaOH. Jumlah ambroksol HCl pada sampel sebanding dengan jumlah NaOH yang digunakan untuk menghasilkan perubahan potensial yang signifikan. Metode spektrofotometri UV-Vis didasarkan atas besarnya radiasi yang diserap pada panjang gelombang tertentu, yang berbanding lurus dengan jumlah ambroksol HCl pada sampel. Sementara untuk HPLC, penentuan didasarkan pada pemisahan ambroksol HCl berdasarkan kepolarannya di antara fase diam dan fase gerak (British Pharmacopeia 2007).

Spektrofotometer UV-Vis Berkas Ganda Spektrofotometer banyak digunakan dalam

analisis kimia, baik makanan, obat, maupun pertambangan. Analisisnya mudah, cepat, dan cukup akurat. Beberapa instrumen spektrofotometer yang lazim digunakan antara lain spektrofotometer UV-Vis, inframerah, serapan atom dan massa.

Berdasarkan sistem optiknya, ada 2 jenis spektrofotometer UV-Vis, yaitu single beam (berkas tunggal) dan double beam (berkas ganda). Perbedaannya adalah perlakuan terhadap sinar radiasi: pada berkas tunggal, radiasi langsung dilewatkan pada sampel, sedangkan pada berkas ganda, radiasi dipecah

menjadi 2 sinar menggunakan cermin berbentuk V; sinar pertama dilewatkan pada blangko, lainnya dilewatkan pada sampel (Underwood & Day 1980) (Gambar 2).

Gambar 2 Skema spektrofotometer UV-Vis

berkas ganda.

Prinsip kerja spektrofotometer UV-Vis ialah interaksi sinar ultraviolet atau tampak dengan molekul sampel. Energi cahaya akan mengeksitasi elektron terluar molekul ke orbital lebih tinggi. Pada kondisi ini, elektron tidak stabil dan dapat melepas energi untuk kembali ke tingkat dasar, dengan disertai emisi cahaya. Besarnya penyerapan cahaya sebanding dengan jumlah molekul, sesuai dengan hukum Lambert-Beer:

A = B C Keterangan: A = serapan = absorptivitas molar B = tebal tempat komponen C = konsentrasi komponen

(Underwood & Day 1980). Agar hukum LambertBeer berlaku, larutan harus encer; analat tidak boleh terdisosiasi, berasosiasi, atau bereaksi dengan pelarut; radiasi cahaya harus monokromatis (mempunyai 1 macam panjang gelombang), dan larutan tidak boleh keruh (bebas partikel koloid) (Hendayana 1994).

Sumber sinar pada spektrofotometer UV-Vis berdasarkan panjang gelombang terbagi menjadi 2, yaitu lampu deuterium dan tungsten. Lampu deuterium menghasilkan sinar 160500 nm. Lampu tungsten digunakan di daerah sinar tampak 3502500 nm, dihasilkan oleh senyawa astiri WI2 yang terbentuk ketika sejumlah kecil iodin yang menyublim bereaksi dengan gas tungsten (Currell 2000). Sumber radiasi dikatakan ideal jika memancarkan spektrum radiasi yang kontinu, intensitasnya tinggi, dan stabil pada semua panjang gelombang.

Monokromator berfungsi menghasilkan sinar dengan 1 panjang gelombang. Monokromator terdiri atas beberapa bagian: celah masuk (slit), filter, prisma, kisi, dan celah keluar (Underwood & Day 1980).

Kuvet (tempat analit) harus transparan agar sinar dapat berinteraksi dengan analit

3

tanpa berkurang intensitasnya. Kuvet dibentuk dari kaca kuarsa dan kaca silika. Kuvet dari kaca silika banyak dipakai karena dapat digunakan pada panjang gelombang 3502000 nm (Currell 2000).

Detektor berisi katode dan anode fotoemisi yang akan memancarkan elektron ketika dikenai elektron lain. Radiasi foton yang me-masuki tabung detektor menyentuh katode dan mengemisikan sebagian elektron. Elektron ini kemudian masuk ke dalam diode pertama, kembali tereksitasi dan berpindah ke diode kedua. Demikian selanjutnya hingga pada akhirnya, di anode terkumpul 106107 elektron. Elektron ini akan diperkuat oleh penguat sinyal dan arus yang keluar setara dengan konsentrasi analit. Dikenal 2 jenis detektor, yaitu detektor foton dan detektor panas. Sel photovoltaic, phototube, tabung fotopengganda, semikonduktor, dan diode silikon merupakan detektor foton, sedangkan detektor panas termokupel dan bolometer bisa digunakan pada pengukuran radiasi infra-merah. Detektor yang sering digunakan adalah rangkaian fotodiode, sebuah detektor foton multikanal yang mampu mengukur sampel pada beberapa panjang gelombang sekaligus secara kontinu (Currell 2000).

Kolimator adalah bagian khusus pada spektrofotometer UV-Vis berkas ganda. Fungsinya memecah sinar dari sumber menjadi 2 untuk diteruskan pada jalur masing-masing. Jalur pertama melalui larutan blangko, dan jalur kedua melewati larutan sampel.

Uji Kinerja Spektrofotometer UV-Vis Berkas Ganda

Akurasi Panjang Gelombang

Deviasi panjang gelombang dapat menyebabkan galat yang signifikan pada hasil pengukuran secara kualitatif atau kuantitatif. Sinyal khas absorbans sampel menjadi tidak representatif. Selain itu, sensitivitas dan akurasi hasil pengukuran berkurang karena terjadi pergeseran panjang gelombang maksimum (Chan et al. 2004). Akurasi panjang gelombang pada spektrofotometer UV-Vis berkas ganda dipengaruhi oleh monokromator. Pergeseran kisi mono-kromator yang tidak sesuai menyebabkan panjang gelombang yang dihasilkan berbeda dari nilai teoretisnya (Currell 2000).

Pada panduan standar seperti USP (United States Pharmacopeia) dan JP (Japanese Pharmacopeia), akurasi panjang gelombang dapat diukur menggunakan standar lampu

deuterium, lampu merkuri, filter holmium oksida, atau larutan holmium oksida dalam HClO4. Sementara BP (British Pharmacopeia) dan EP (European Pharmacopeia) tidak menggunakan filter holmium oksida atau larutan holmium oksida dalam HClO4 (Chan et al. 2004).

Holmium(III) oksida (Ho2O3) merupakan senyawa yang bersifat paramagnetik kuat dan menyerap sinar pada rentang panjang gelombang UV maupun tampak (200900 nm). Holmium oksida tidak larut dalam air, tetapi larut dalam larutan asam (asam perklorat). Larutan dibuat dengan men-campurkan 10% asam perklorat dengan kemurnian 99.99% pada holmium oksida padat hingga konsentrasinya 2, 4, dan 6%. Untuk filter padat, holmium oksida yang digunakan memiliki kemurnian 7072% dengan ukuran partikel 2 m (Weidner 1986). Menurut Hellma Corp, perbedaan penggunaan filter holmium oksida padat dan dalam larutan HClO4 ialah pada puncak serapan yang dihasilkan. Filter cair menghasilkan lebih banyak puncak gelombang (Gambar 3).

(a)

(b) Gambar 3 Spektrum serapan holmium oksida

padat (a) dan cair (b). Deviasi Serapan Sinyal

Deviasi serapan sinyal menyebabkan galat pada hasil pengukuran, terjadi karena sinar lain ikut terukur sebagai serapan sinyal sampel oleh detektor. Serapan ini bisa berupa sinar di luar panjang gelombang pengukuran, faktor lingkungan, yaitu suhu, waktu pengukuran, atau faktor komponen instrumen (Chan et al. 2004).

4

Larutan sampel yang lazim digunakan untuk pengukuran ini adalah KCl, NaI, dan NaNO2, pada panjang gelombang berturut-turut 200, 220, dan 340 nm. Ketiga larutan ini mampu menyerap seluruh sinar secara akurat hingga panjang gelombang serapan maksimumnya (cutoff) dan meneruskan seluruh sinar radiasi setelah itu. Nilai kemiringannya baik sehingga deviasi serapan sinyal pada cutoff dapat diketahui (Chan et al. 2004).

Semakin kecil panjang gelombang sinar, energi foton yang dimiliki semakin besar; hal ini berbanding lurus dengan sensitivitasnya. Pada panjang gelombang 200 nm, sensitivitas cukup besar sehingga deviasi sangat kecil menghasilkan galat pengukuran cukup tinggi. Batas simpangan maksimum pada panjang gelombang 220 nm sebesar 0.1% akan memberikan galat pengukuran sebesar 0.5%. Di atas 300 nm, sensitivitas cukup rendah (Swarbrick 2007). Resolusi

Resolusi ialah ukuran kemampuan spektrofotometer UV-Vis mendeteksi pita serapan pada setiap panjang gelombang. Semakin tinggi resolusi, pengukuran akan semakin akurat. Resolusi dapat ditunjukkan oleh keruncingan spektrum serapan: semakin runcing, resolusi yang dihasilkan semakin tinggi (Chan et al. 2004). Pengaruh resdusi akan terlihat jelas pada pengukuran 2 puncak serapan yang berdekatan. Resolusi yang baik menghasilkan pemisahan sempurna 2 puncak (Gambar 4).

Gambar 4 Spektrum resolusi spektrofoto-

meter UV-Vis.

Resolusi spektrofotometer UV-Vis berkas ganda dipengaruhi oleh kinerja monokromator dan detektor. Monokromator yang baik mampu menghasilkan intensitas sinar mono-kromatis yang stabil sehingga interaksi antara

sinar dan sampel memiliki tingkat akurasi yang tinggi. Hanya sisa serapan sinar blangko dan analit pada panjang gelombang tertentu yang diteruskan ke detektor.

Resolusi spektrofotometer UV-Vis berkas ganda dapat ditentukan dengan mem-bandingkan nilai teoretis dengan hasil pengukuran. Nilai yang dapat diterima adalah 2.0 pada panjang gelombang 266269 nm. Pengukuran nisbah ini dapat dilakukan dengan larutan toluena 0.02% (UV grade). Cara lain ialah menggunakan nilai akurasi panjang gelombang maksimum, dari dasar puncak hingga setengah puncak serapannya (Chan et al. 2004). Noise (Derau)

Derau pada spektrofotometer UV-Vis dihasilkan dari sumber sinar dan komponen elektroniknya. Derau berpengaruh terhadap akurasi hasil pengukuran. Pengaruh sumber sinar terlihat pada absorbans rendah, sedangkan pengaruh komponen elektronik terlihat pada absorbans tinggi. Nilai derau yang tinggi juga akan memengaruhi presisi dan menurunkan limit deteksi. Sinyal juga menjadi kurang sensitif (Chan et al. 2004).

Faktor penyebab munculnya derau antara lain adalah kalor dari komponen elektronik seperti detektor. Elektron yang ada di dalamnya memiliki energi kinetik yang menghasilkan kalor dan dapat menciptakan beban listrik acak sehingga sinyal yang dihasilkan beragam. Aliran listrik juga dapat menyebabkan derau. Perbedaan beban muatan yang dibawa oleh masing-masing elektron dalam aliran listrik menyebabkan fluktuasi aliran listrik dan berakibat munculnya derau (Currell 2000). Kerataan Baseline

Derau menggambarkan kemampuan spektrofotometer UV-Vis untuk membedakan antara sinyal yang dihasilkan sampel dan pengganggu (instrumen atau lingkungan) pada panjang gelombang tertentu, sedangkan baseline merupakan nilai derau dalam suatu rentang panjang gelombang pengukuran. Baseline biasanya digunakan sebagai nilai nol (zero point) dalam pengukuran secara kuantitatif.

Saat ini, banyak instrumen spektrofoto-meter UV-Vis memiliki 2 sumber sinar, yaitu deuterium untuk pengukuran daerah UV dan tungsten untuk daerah tampak. Perbedaan intensitas radiasi dari sumber sinar menyebabkan perbedaan pembacaan detektor. Kerataan baseline memperlihatkan kemampu-

Keterangan lebar celah: A : 1 nm B : 5 nm C : 10 nm D : 20 nm E : 50 nm

5

an instrumen menormalisasi intensitas radiasi sumber sinar pada berbagai panjang gelombang (Chan et al. 2004).

Pada sistem berkas ganda, adanya 2 sumber sinar atau pemisah sumber sinar dapat menyebabkan ketidakseragaman sinar yang dihasilkan saat perubahan panjang gelombang. Oleh karena itu, absorbans 0.0000 pada perubahan panjang gelombang tidak mudah dihasilkan (Currell 2000). Stabilitas Sinyal

Intensitas sinyal yang dihasilkan oleh sumber sinar dalam spektrofotometer harus stabil. Variasi intensitas sumber sinar dan komponen elektronik pada instrumen spektrofotometer UV-Vis dipengaruhi oleh usia lampu serta fluktuasi suhu dan panjang gelombang pengukuran. Variasi ini dapat menyebabkan galat positif atau negatif.

Akurasi pengukuran akan berkurang karena penyerapan sinar oleh sampel tidak merata (Chan et al. 2004). Metode pengukuran stabilitas sinyal ialah dengan mengukur serapan sinyal yang dihasilkan dalam selang waktu tertentu pada panjang gelombang analisis. Akurasi Fotometri

Spektrofotometer UV-Vis mengukur jumlah analit, dengan cara membandingkan sinyal analit dengan sinyal standar pada konsentrasi yang sama, pada waktu dan dengan instrumen yang sama. Reproduksi sumber sinar yang linear (akurasi fotometri) berperan penting terhadap akurasi koefisien ekstingsi yang akan digunakan untuk mencirikan analit serta memastikan transmitans atau absorbans merupakan sinyal dari analit atau standar. Akurasi fotometri dapat diukur dengan menggunakan pereaksi yang memiliki beberapa puncak panjang gelombang, antara lain kalium dikromat (K2Cr2O7). Pereaksi ini memiliki puncak panjang gelombang pada 235, 257, 313, dan 350 nm (Chan et al. 2004). Linearitas

Respons linear absorbans terhadap konsentrasi sangat diperlukan pada sistem spektrofotometer UV-Vis. Batas bawah dan batas atas pengukuran akan memengaruhi respons instrumen dan dapat menimbulkan ketidakpercayaan terhadap sinyal yang dihasilkan (Currell 2000).

Pengujian linearitas spektrofotometer UV-Vis bertujuan menentukan hubungan linear antara konsentrasi dan sinyal instrumen

pada serapan normal, deviasi serapan sinyal pada absorbans maksimum, dan pengaruh derau pada absorbans minimum. Untuk pengukuran rutin yang melibatkan sampel dan standar, akurasi terlihat dari presisi dan linearitas pengukuran (Chan et al. 2004), yang dapat ditentukan dengan membuat kurva kalibrasi dari beberapa konsentrasi larutan standar. Kurva tersebut akan menghasilkan persamaan garis y = a + bx dan nilai regresi (r). Nilai regresi inilah yang menunjukkan linearitas suatu analisis. Penetapan dilakukan dengan 5 konsentrasi berbeda dan nilai regresi yang memenuhi syarat adalah lebih besar atau sama dengan 0.99770 (ICH 1995, diacu dalam Chan et al. 2004).

Validasi Metode Penetapan Kadar Ambroksol HCl pada Tablet Ekspektoran

Suatu analisis kimia bertujuan mengetahui

komposisi atau jumlah zat dalam sampel. Data hasil uji diharapkan mendekati nilai sebenar-nya dengan galat sekecil-kecilnya. Untuk itu, diperlukan validasi terhadap metode yang digunakan.

Menurut good manufacturing practices, validasi adalah pembuktian bahwa prosedur, proses, alat, bahan, aktivitas, atau sistem yang dilakukan menghasilkan nilai yang dapat dipercaya (GMP 2003; diacu dalam Huber 2007). Validasi metode analisis bertujuan memastikan kesesuaian metode tersebut dengan peruntukannya. Selain itu, tingkat kepercayaan hasil uji dari metode maupun dari instrumen yang digunakan dapat diperkirakan. Validasi harus dilakukan ketika ada perubahan kondisi analisis atau perubahan metode dari metode standar. Beberapa manfaat validasi adalah dapat mengevaluasi kinerja suatu metode; menjamin prosedur, keakuratan, dan kedapatulangan analisis; serta mampu mengurangi risiko deviasi (Wulandari 2007).

Proses validasi secara umum mencakup metode dan alat yang digunakan (Nugroho 2006). Parameter yang diuji meliputi sensitivitas, ketelitian dan ketepatan, linearitas, limit deteksi dan limit kuantitasi, juga ketangguhan metode. Akurasi (Ketepatan)

Akurasi adalah kedekatan hasil percobaan dengan nilai sebenarnya. Secara matematis, nilai akurasi sangat dipengaruhi oleh nilai galat sistematik. Sebagai pembanding, dapat digunakan metode baku yang sudah diketahui nilai ketidakpastiannya atau hasil pengukuran

6

dengan standar primer. Secara umum, nilai akurasi 80%120% dapat diterima untuk kemurnian analit 100% (AOAC 1998).

Akurasi dapat ditentukan dengan 2 cara, yaitu metode simulasi (spiked-placebo recovery) dan metode penambahan standar. Dalam metode simulasi, sejumlah analit murni (standar) ditambahkan ke dalam sampel plasebo, biasanya 80120% dari perkiraan kadar analit dalam sampel. Campuran lalu dianalisis dengan metode yang akan divalidasi dan hasilnya dibandingkan dengan kadar standar yang ditambahkan (kadar sebenarnya).

Bila tidak mungkin membuat sampel plasebo karena matriksnya tidak diketahui seperti obat-obatan paten, atau karena analit berupa senyawa endogen, misalnya metabolit sekunder pada kultur kalus, maka dapat dipakai metode penambahan standar. Sampel dianalisis lalu sejumlah tertentu analit ditambahkan dan dianalisis kembali. Selisih kedua hasil analisis dibandingkan dengan kadar sebenarnya. Namun, metode ini tidak dapat digunakan jika penambahan analit dapat mengganggu pengukuran, misalnya meng-habiskan pereaksi atau mengubah pH atau kapasitas bufer (Riyadi 2009). Presisi

Presisi merupakan ukuran kesamaan hasil dari tiap ulangan ketika suatu metode diterapkan berulang kali pada berbagai pencuplikan dari contoh yang homogen. Nilai perolehan kembali dapat ditentukan dari simpangan baku relatif (RSD). Nilai RSD akan meningkat saat konsentrasi menurun. Batas ketelitian menurut AOAC adalah sangat teliti ( 0.99770 (ICH 1995, diacu dalam Chan et al 2004).

Nilai a (intersep) menyatakan pengaruh matriks. Semakin besar nilainya, semakin besar pengaruh matriks terhadap pengukuran sampel. Nilai b (kemiringan) menunjukkan sensitivitas suatu metode, yaitu pengaruh perubahan konsentrasi terhadap sinyal yang dihasilkan. Semakin besar nilainya, semakin besar sensitivitas suatu metode (Chan et al. 2004).

Limit Deteksi (LD) dan Limit Kuantitasi (LK)

Limit deteksi adalah konsentrasi analit terendah di dalam sampel yang dapat dideteksi, tetapi tidak harus terkuantisasi pada kondisi percobaan yang ditetapkan. Secara umum, respons analit terhadap derau adalah 3:1 (AOAC 1998).

Limit kuantitasi adalah konsentrasi analit terendah dalam sampel yang dapat diukur secara tepat dan teliti (respons analit terhadap derau sebesar 10:1) (AOAC 1998). Limit kuantitasi berhubungan dengan presisi dan akurasi. Jika nilai limit kuantitasi menurun, maka nilai presisi dan akurasi pun akan menurun.

Limit deteksi dan limit kuantitasi dapat dihitung dari simpangan baku intersep dan rerata kemiringan kurva standar. Rumusnya ialah sebagai berikut:

. (1)

. (2)

Keterangan : LD = limit deteksi (mg/mL) LK = limit kuantitasi (mg/mL) Sa = simpangan baku intersep (n = 6) b = rerata kemiringan

BAHAN DAN METODE

Alat dan Bahan Alat-alat yang digunakan antara lain

spektrofotometer UV-Vis berkas ganda Shimadzu UV-1601PC, pengaduk ultrasonik, dan neraca mikroanalitik. Bahan-bahan yang digunakan adalah isopropanol p.a, HCl 0.1 N, H2SO4 0.005 M, tablet ekspektoran, standar ambroksol HCl, larutan KCl, NaI, H2SO4, K2Cr2O7, kertas Whatman No 1, dan filter Ho2O3 cair.

7

Metode Penelitian Penelitian terdiri atas uji kinerja

spektrofotometer UV-Vis berkas ganda dan validasi metode pengukuran kadar ambroksol HCl pada tablet ekspektoran. Uji kinerja meliputi pengukuran akurasi panjang gelombang, deviasi serapan sinyal, resolusi, derau, kerataan baseline, stabilitas sinyal, akurasi fotometri, dan linearitas. Sementara validasi metode mencakup uji akurasi, presisi, linearitas, serta limit deteksi dan kuantitasi.

Uji Kinerja Spektrofotometer


Filter holmium oksida dimasukkan ke dalam wadah sampel kemudian diukur dengan kecepatan rendah. Pengukuran dilakukan pada panjang gelombang 200 hingga 680 nm. Deviasi Serapan Sinyal

Larutan 1.2 g KCl dan 1.0 g NaI masing-masing dalam 100 mL air diukur. Digunakan berbagai panjang gelombang seperti ditunjukkan pada Tabel 1.

Tabel 1 Syarat nilai panjang gelombang (nm) Larutan maks (nm)

190220 KCl (12g/L) 200 200230 NaI (10g/L) 220

Resolusi

Pengukuran dilakukan menggunakan filter holmium oksida cair pada panjang gelombang 480490 nm dan 650660 nm. Lebar pita setengah puncak tidak boleh melebihi 2 nm. Derau

Serapan udara (kuvet tanpa sampel) diukur selama 10 menit pada panjang gelombang 500 nm. Simpangan serapan maksimum adalah 0.7. Kerataan Baseline

Pengukuran baseline serupa dengan derau, tetapi dilakukan pada panjang gelombang 190700 nm, dengan simpangan serapan tidak lebih dari + 0.002. Pengukuran dilakukan dengan kecepatan rendah. Stabilitas Sinyal

Absorptivitas udara (tanpa sampel) diukur selama 60 menit pada panjang gelombang tertentu. Simpangan maksimum 0.0010. Akurasi Fotometri

Sebanyak 60.06 mg K2Cr2O7 ditimbang dengan neraca mikroanalitik, dilarutkan dalam

H2SO4 0.005 M. Larutan diukur dengan panjang gelombang sesuai dengan Tabel 2.

Tabel 2 Pengukuran akurasi fotometri

(nm) Absorbans 235 0.748 257 0.865 313 0.292 350 0.640

Uji Linearitas

K2Cr2O7 dilarutkan dalam H2SO4 0.005 M dengan konsentrasi 20, 40, 60, 80, dan 100 mg/L. Masing-masing diukur pada panjang gelombang 235, 257, 313, dan 350 nm.

Validasi Metode

Uji Pendahuluan (Penentuan Kadar Ambroksol HCl pada Standar Sekunder)

Larutan standar primer yang telah diketahui konsentrasi dan ketidakpastiannya dibandingkan dengan standar sekunder yang digunakan sebagai bahan aktif saat proses pencetakan tablet ekspektoran. Standar primer dan sekunder ditimbang sebanyak 50 mg, masing-masing dilarutkan dalam 10 mL HCl 0.1 N dan isopropanol 50 mL pada labu ukur 100 mL. Larutan dikocok selama 1 jam menggunakan pengaduk ultrasonik lalu ditepatkan menggunakan larutan isopropanol hingga tanda tera. Larutan primer dipipet 3 mL ke dalam labu ukur 50 mL dan diencerkan lagi menggunakan isopropanol p.a hingga tanda tera. Kedua larutan diukur pada panjang gelombang maksimum dan dibandingkan konsentrasinya. Linearitas

Standar sekunder ditimbang sebanyak 40, 45, 50, 55, dan 60 mg, masing-masing dilarutkan dalam HCl 0.1 N dan isopropanol 50 mL pada labu ukur 100 mL, dan ditepatkan menggunakan isopropanol hingga tanda tera. Larutan diukur pada panjang gelombang maksimum, sebanyak 3 kali ulangan. Limit Deteksi dan Limit Kuantitasi

Limit deteksi (LD) dan limit kuantitasi (LK) dapat ditentukan dari kurva linearitas dengan menggunakan persamaan (1) dan (2). Akurasi

Larutan standar sekunder disiapkan seperti pada uji pendahuluan. Larutan contoh disiapkan dari 350 mg granul tablet (diperoleh dengan menggerus 20 tablet ekspektoran

8

hingga homogen) dan diperlakukan sama seperti standar sekunder. Larutan contoh disaring menggunakan kertas saring Whatman no. 41. Sebanyak 6 mL filtrat dimasukkan masing-masing ke dalam 3 buah labu ukur 100 mL, ditambahkan larutan standar sekunder sebanyak 4, 6, dan 8 mL, kemudian diencerkan dengan isopropanol p.a. hingga tanda tera. Larutan standar sekunder dan ketiga larutan contoh kemudian diukur pada panjang gelombang maksimum. Presisi

Larutan standar sekunder dan larutan contoh disiapkan seperti uji akurasi. Bedanya untuk larutan contoh, filtrat dipipet masing-masing sebanyak 6 mL ke dalam 6 labu ukur 100 mL dan diencerkan menggunakan isopropanol hingga tanda tera. Larutan standar sekunder dan keenam larutan contoh diukur pada panjang gelombang maksimum.

Prosedur uji ketertiruan sama seperti uji keterulangan. Bedanya, 6 larutan contoh disiapkan dengan 6 kali penimbangan granul.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Hasil Uji Kinerja Spektrofotometer


Akurasi panjang gelombang ditentukan untuk mengetahui sejauh mana deviasi panjang gelombang maksimum untuk suatu sampel. Pengujian dilakukan dengan meng-ukur filter holmium oksida dalam wadah sampel (USP 2006). Hasil pengukuran berupa spektrum pada beberapa panjang gelombang. Selisih hasil dengan nilai teoretis meng-gunakan standar SRM 2034 pada suhu 25 + 5 oC tidak boleh lebih dari 0.6 nm. Pada penelitian ini, galat minimum didapatkan 0.01 pada 345.41 nm, sedangkan galat maksimum didapatkan pada 278.60 nm sebesar 0.50. Filter holmium oksida menghasilkan 13 puncak serapan antara 241 dan 640 nm, masing-masing memiliki nilai serapan yang khas dan berbeda (Gambar 5).

Gambar 5 Spektrum holmium oksida.

Hasil penelitian Weidner (1986), menunjukkan bahwa pergeseran serapan UV-Vis menjadi lebih besar dan kepekaan pengukuran pita serapan oleh instrumen menjadi menurun pada lebar celah yang semakin besar. Lebar celah yang digunakan pada penelitian ini adalah 1.5 nm dan akurat karena masih di bawah nilai maksimum deviasi yang ditentukan, yaitu 1.000 (Lampiran 4). Tingkat keterulangan pengujian akurasi panjang gelombang cukup baik karena simpangan maksimum untuk 3 kali peng-ulangan adalah 0.025. Deviasi Serapan Sinyal

Deviasi serapan sinyal pada spektrofotometer UV-Vis berkas ganda diperoleh dengan mengukur spektrum sampel yang memiliki nilai cutoff yang khas. Sinar yang berlebih akan menyebabkan pelebaran puncak panjang gelombang sehingga me-nurunkan absorbans pada panjang gelombang serapan maksimum dan juga linearitas sinyal dari sumber radiasi. Sampel uji yang digunakan adalah KCl dan NaI. Larutan KCl memiliki nilai cutoff pada 200 nm sehingga pada panjang gelombang ini, akan muncul serapan maksimum. Hasil pengujian tidak menunjukkan deviasi serapan sinyal, karena absorbans pada 200 nm sebesar 2.419, sementara batas bawahnya 2.000 (Gambar 6a).

(a)

(b)

Gambar 6 Spektrum serapan KCl (a) dan NaI (b).

Larutan NaI juga tidak memperlihatkan

deviasi serapan sinyal dari sumber sinar, karena saat diukur pada panjang gelombang

9

cutoff-nya (220 nm), nilai absorbans 3.3375, lebih tinggi dari batas bawah 2.000 (Gambar 6b). Berdasarkan parameter ini, dapat disimpulkan bahwa sinyal yang dihasilkan instrumen masih baik. Data hasil pengamatan deviasi sinyal larutan KCl dan NaI selengkapnya dapat dilihat pada Lampiran 2 dan 3.

Resolusi

Kurang baiknya keterpisahan pita-pita serapan dapat menyebabkan ketidaktepatan hasil pengukuran, dan berakibat menurunnya nilai koefisien intrinsik dari pengukuran tersebut. Resolusi spektrofotometer UV-Vis ini dipengaruhi oleh kinerja celah dan daya pemisahan sinar polikromatis oleh mono-kromator (Chan et al. 2004).

Energi total yang keluar dari celah monokromator pada panjang gelombang tertentu digambarkan sebagai fungsi segitiga. Lebar celah ditentukan dari setengah tinggi puncak energi, dan lebar panjang gelombang pada setengah tinggi puncak tersebut dinyatakan sebagai resolusi. Lampu deuterium memiliki puncak energi pada panjang gelombang antara 480 dan 490 nm serta antara 650 dan 660 nm. Semakin lebar pita puncak serapan, semakin rendah resolusi instrumen. Sebaliknya, semakin runcing berarti semakin tinggi resolusinya.

Pada rentang 480490 nm, puncak energi dihasilkan pada 486 nm, dengan resolusi 1.8 nm. Sementara pada kisaran 650660 nm, puncak energi dari sumber sinar adalah 656 nm, juga dengan resolusi sebesar 1.8 nm (Lampiran 4). Nilai resolusi spektrofotometer ini tergolong baik karena masih di bawah batas maksimum yang dapat diterima, yaitu 2. Derau

Derau (noise) merupakan salah satu parameter kinerja spektrofotometer UV-Vis berkas ganda. Pengujian dilakukan pada 500 nm, yaitu panjang gelombang yang memiliki energi emisi terendah dari lampu deuterium. Waktu pengukuran 10 menit setelah instrumen dinyalakan karena dianggap sebagai selang waktu yang sering lazim.

Pada pengukuran absorbans rendah, pengaruh derau sangat tinggi dan dapat menyebabkan ketidakakuratan hasil peng-ukuran. Semakin lama waktu pengukuran, derau juga akan meningkat, akibat pengaruh komponen elektronik dan sumber sinar. Derau terjadi karena fluktuasi foton dari sumber sinyal yang terdeteksi oleh detektor. Pada absorbans tinggi, fluktuasi ini tidak terlihat, tetapi saat absorbans rendah, derau akan

terlihat sangat jelas dan dapat memengaruhi sinyal yang dihasilkan (Ando 1988).

Selisih antara nilai derau minimum dan maksimum adalah 0.0005 (Gambar 7 dan Lampiran 5). Nilai ini cukup tinggi, tetapi tidak melebihi batas maksimum, yaitu 0.001. Jadi, derau dari instrumen tidak memengaruhi pengukuran analit dalam konsentrasi yang tinggi, tetapi sinyal hasil pengukuran memiliki bias 0.0005 dari sinyal analit sesungguhnya.

Gambar 7 Spektrum hubungan waktu dengan

absorbans saat pengujian derau.

Kerataan Baseline Kestabilan intensitas sinar tecermin dari

kerataan garis dasar spektrum baseline. Kerataan baseline diuji dengan mengukur derau pada panjang gelombang 190 hingga 700 nm. Perubahan sumber sinar dari lampu deuterium ke tungsten akan menyebabkan perubahan intensitas cahaya. Dengan pengujian ini, kemampuan menstabilkan intensitas sinyal yang diberikan oleh kedua lampu tersebut akan dapat ditentukan (Chan et al. 2004).

Fluktuasi sinyal yang terdeteksi dalam penelitian ini tidak melebihi 0.002. Fluktuasi terbesar terjadi pada panjang gelombang 380400 nm (Gambar 8), karena perubahan filter ultraviolet dan tampak yang digunakan (Ando 1988). Fluktuasi sinyal yang kecil (0.002) tidak cukup memengaruhi pengukuran analit pada konsentrasi tinggi, maka untuk keperluan analisis rutin, instrumen masih dapat dipergunakan. Hal ini juga berarti intensitas sinar dari sumber sinar dan juga kemampuan instrumen menormalisasi intensitas sinar yang datang dari 2 sumber sinar masih baik.

Gambar 8 Spektrum serapan baseline.

10

Stabilitas Sinyal Keterulangan dan keakuratan pengukuran

sampel sangat dipengaruhi oleh kestabilan sinyal yang dihasilkan oleh suatu instrumen. Saat pengukuran, sinyal yang diterima sampel dan selanjutnya diteruskan untuk dibaca haruslah sinyal sampel saja, tanpa ada pengurangan atau penambahan sinyal karena faktor lingkungan atau instrumen (Chan et al. 2004).

Stabilitas sinyal diuji menggunakan kuvet kosong pada panjang gelombang 240 nm selama 60 menit. Tujuannya menentukan ada tidaknya serapan selain analit pada rentang panjang gelombang pengukuran ambroksol HCl sehingga dapat diketahui pengaruh bias sinyal instrumen. Sejak menit pertama, tidak ada serapan selain dari sampel dan semakin besar dengan bertambah lamanya waktu pengukuran (Gambar 9). Nilai serapan terbesar adalah 0.00130 pada menit ke-53, dengan perubahan tingkat serapan rata-rata sebesar 0.00020. Pada menit ke-52, serapan naik hanya 0.00010 dan stabil hingga menit ke-60 pada angka 0.00130 (Lampiran 7).

Gambar 9 Spektrum hubungan waktu dengan

absorbans saat pengujian stabilitas sinyal.

Jika dilihat dari hasil ini, akan ada deviasi

serapan sampel pada saat pengukuran. Namun, hasil ini masih memenuhi syarat karena nilai serapan maksimum (0.00130) masih di bawah batas maksimum (0.00200). Karena itu, stabilitas sinyal spektrofotometer UV-Vis berkas ganda Shimadzu UV-1601PC dapat dikatakan baik.

Akurasi Fotometri

Akurasi fotometri diukur untuk menentukan deviasi pembacaan serapan sampel pada panjang gelombang maksimum. Pengukuran dilakukan menggunakan pereaksi K2Cr2O7 yang memiliki beberapa puncak serapan, yaitu pada 235, 257, 313, dan 350 nm. Standar serapan pada masing-masing panjang gelombang tersebut telah diketahui (Tabel 2). Akurasi fotometri ditentukan

dengan membandingkan serapan terukur dengan nilai teoretis tersebut (Lampiran 8).

Selisih serapan tertinggi diperoleh pada 350 nm, yaitu sebesar 0.0032, dan terendah pada 257 nm yaitu sebesar 0.0001. Perbedaan ini dapat disebabkan oleh faktor instrumen atau lingkungan. Pengujian lebih lanjut dengan uji t menghasilkan nilai t hitung lebih kecil daripada t teoretis. Karena itu, dapat disimpulkan bahwa perbedaan hasil pengukuran dengan nilai teoretis tidak signifikan dan masih dapat diterima. Jadi, keterulangan sinar radiasi masih baik.

Uji Linearitas

Seperti pada penentuan akurasi fotometri, larutan K2Cr2O7 digunakan sebagai analit, diukur pada 235, 257, 313, dan 350 nm. Konsentrasi analit yang diukur 20, 40, 60, 80, dan 100 ppm. Linearitas ditentukan sebagai nilai regresi (R2) dari kurva hubungan konsentrasi dengan serapan sampel. Nilai regresi berkisar antara 0.9989 pada 313 nm dan 0.9973 pada 257 nm (Lampiran 9). Hasil tersebut sudah memenuhi syarat yang ditetapkan ICH (1995), yaitu minimum 0.9970.

Nilai intersep (a) pada panjang gelombang di atas 300 nm lebih kecil daripada di atas 200 nm. Hal ini menyatakan bahwa pengaruh matriks sampel tidak terlalu besar pada panjang gelombang lebih tinggi. Nilai kemiringan (b) menyatakan sensitivitas instrumen. Kemiringan garis yang kecil menunjukkan bahwa perubahan konsentrasi yang kecil tidak memengaruhi sinyal yang dihasilkan. Jadi, sensitivitas alat juga lebih baik pada panjang gelombang di atas 300 nm.

Hasil Validasi Metode

Uji Pendahuluan Pengujian dilakukan dengan mem-

bandingkan standar primer ambroksol HCl yang telah diketahui kadarnya dengan standar sekunder yang digunakan dalam pembuatan tablet espektoran untuk ditentukan kadarnya. Asam klorida digunakan untuk melarutkan ambroksol HCl, sedangkan isopropanol digunakan sebagai pengencer larutan ambroksol HCl. Sampel diaduk menggunakan pengaduk ultrasonik agar proses pelarutan ambroksol HCl berlangsung sempurna, dengan dibantu suhu. Penentuan kadar ini dimulai dengan menentukan panjang gelombang maksimum (maks) standar primer. Diperoleh maks maksimum 248 nm, berbeda 4 nm dari literatur, yaitu 244 nm (Wirbitzki et al. 2002) (Gambar 10).

11

Gambar 10 Spektrum ambroksol HCl Kadar standar sekunder ambroksol HCl

berkisar 100.04 hingga 100.86% dengan rata-rata 100.32% (Lampiran 10). Nilai ini digunakan untuk menentukan kadar ambroksol HCl pada sampel tablet ekspektoran untuk validasi metode. Linearitas

Linearitas ditentukan dengan membuat kurva hubungan antara absorbans dan konsentrasi standar. Pengujian dilakukan 6 kali ulangan dengan konsentrasi larutan 0.0241, 0.0270, 0.0302, 0.0331, dan 0.0360 mg/mL. Dihasilkan 6 persamaan regresi dengan nilai koefisien korelasi 0.99700.9994 (Lampiran 11), memenuhi syarat linearitas yang ditetapkan ICH (1995), yaitu lebih tinggi dari 0.9970.

Persamaan regresi linear untuk kurva standar rerata adalah y = 55.2160x 0.7849 (Lampiran 11). Nilai intersep (a) dan batas galatnya (tSa) pada selang kepercayaan 95% sebesar 0.7849 + 0.1089 (Lampiran 12). Nilai intersep yang cukup besar menunjukkan bahwa terdapat gangguan matriks pada pengukuran analit dalam sampel. Nilai kemiringan (b) dan batas galatnya (tSb) adalah 55.2160 + 3.5957 (Lampiran 12). Rentang nilai ini sangat besar sehingga instrumen dikatakan memiliki sensitivitas yang kurang baik.

Limit Deteksi dan Limit Kuantitasi

Limit deteksi (LD) dan limit kuantitasi (LK) dapat ditentukan dari persamaan regresi linear hasil penentuan linearitas, dengan menggunakan persamaan (1) dan (2). Limit deteksi merupakan konsentrasi terendah yang dapat membedakan antara sinyal blangko dan analit. Dalam penelitian ini, diperoleh LD sebesar 0.0028 mg/mL, berarti pada konsentrasi di bawah itu, instrumen tidak dapat membedakan secara nyata sinyal blangko dan analit.

Limit kuantitasi (LK) merupakan konsentrasi terendah yang terukur oleh metode dengan ketelitian dan ketepatan yang baik. Dalam penelitian ini, LK adalah 0.00836 mg/mL. Konsentrasi analit yang lebih rendah akan menghasilkan sinyal yang kurang baik sehingga hasil pengukuran tidak akurat. Perhitungan LD dan LK diberikan di Lampiran 13. Akurasi

Akurasi metode pengukuran kadar ambroksol HCl diukur menggunakan metode penambahan standar dan dinyatakan dengan persen perolehan kembali. Perolehan kembali merupakan jumlah standar yang dapat diperoleh kembali setelah ditambahkan ke dalam sampel. Perolehan kembali dapat menunjukkan galat sistematik dari metode analisis yang digunakan, di antaranya adalah saat pengambilan sampel, proses preparasi, kurva kalibrasi yang tidak linear, dan instrumen yang digunakan.

Akurasi metode ditentukan dengan menambahkan 1.2, 1.8, dan 2.4 mg standar ambroksol HCl pada sampel tablet ekspektoran yang berisi 30 mg ambroksol HCl. Nilai perolehan kembali yang didapat antara 101.01% dan 101.24% (Lampiran 14). Menurut ICH (1995), nilai ini berada pada kisaran akurasi yang baik, yaitu 98102%. Jadi, metode penentuan kadar ambroksol HCl ini cukup akurat. Presisi

Galat pengukuran yang disebabkan oleh analis, instrumen, atau lingkungan dapat ditentukan dengan melakukan uji presisi (ketelitian). Ada 2 jenis pengujian, yaitu uji keterulangan dan ketertiruan. Keterulangan diuji dengan mengulangi pengukuran sampel yang sama sebanyak 6 kali ulangan selama 5 hari. Tujuannya ialah mengetahui galat acak yang dilakukan oleh operator pada tahap penyiapan larutan, penyaringan, atau saat pengukuran analit, atau galat acak dari instrumen dan kondisi lingkungan pengukuran pada hari yang berlainan. Hasil pengukuran menunjukkan konsentrasi ambroksol HCl berkisar antara 30.00 dan 30.06 mg dengan nilai RSD 0.020.09% (Tabel 6). RSD yang dihasilkan jauh lebih kecil dari 2%, maka dapat disimpulkan bahwa galat acak tidak memengaruhi hasil analisis.

12

Tabel 3 Hasil pengukuran presisi

Hari ke-

Uji Keterulangan Uji ketertiruan Amb HCl

(mg) SBR (%)

Amb HCl (mg)

SBR (%)

1 30.03 0.09 30.02 0.142 30.06 0.08 29.86 0.32 3 30.03 0.02 30.17 0.19 4 30.01 0.07 29.86 0.325 30.00 0.06 29.97 0.21

Parameter presisi ketertiruan dilakukan

untuk mengetahui galat acak dalam proses penimbangan sampel. Pengujian juga dilakukan selama 5 hari dengan 6 ulangan setiap harinya. Konsentrasi ambroksol HCl yang dihasilkan berkisar antara 29.86 dan 30.17 mg dengan SBR 0.140.32%. Nilai SBR maksimum (0.32%) jauh di bawah batas simpangan maksimum, 2%. Karena itu, dapat disimpulkan bahwa galat acak dari penimbangan dan instrumen juga tidak memengaruhi hasil pengukuran.

SIMPULAN DAN SARAN

Simpulan Kinerja spektrofotometer UV-Vis berkas

ganda untuk pengukuran kadar ambroksol HCl masih baik. Demikian pula metode yang digunakan untuk pengukuran kadar ambroksol HCl, karena semua parameter uji validasi masih dalam kisaran penerimaan data yang baik.

Saran Untuk uji kinerja instrumen analisis,

digunakan reagen yang terkalibrasi sehingga hasil uji kinerja lebih sahih dibandingkan dengan reagen untuk preparasi analit.

DAFTAR PUSTAKA

Ando D. 1988. Analytical Instrumentation Performance Characteristics And Quality. New Jersey: J Wiley.

Ansel CH. 1989. Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi. UI Pr.

[AOAC] Association of Official Analytical Chemists. 1998. AOAC Perr Verified Methods Program. Arlington: AOAC International.

British Pharmacopeia. 2007. Ambroxol Hydrochloride. South Lamberth: System Simulation.

Chan C et al. 2004. Analytical Method Validation and Instrument Performance Verification. New Jersey: J Wiley.

Currell G. 2000. Analytical Instrumentation Performance Characteristics and Quality. New Jersey: J Wiley.

Departemen Kesehatan. 1993 Peraturan Menteri Kesehatan Nomor 917/Menkes/Per/X/1993 tentang Wajib Daftar Obat Jadi. Jakarta

Hendayana, S. 1994. Kimia Analitik Instrumen. Semarang: IKIP Semarang Pr.

Huber L. 2007. Validation and Qualification in Analytical Laboratories. Ed-2. New York: Informa Healthcare.

[ICH] International Conference on Harmonization. 1995. Validation of Analytical Procedures: Methodology Q2B [terhubung berkala]. www.ich.org [01 Jan 2010]

Riyadi W. 2009. Validasi Metode Analisis [terhubung berkala]. www.chem-is-try.org [01 Jan 2010]

Satiadarma K et al. 2004. Azas Pengembangan Prosedur Analisis. Surabaya: Universitas Airlangga.

Swarbrick J. 2007. Encyclopedia of Pharmaceutical Technology. Ed ke-3. New York: Informa Healthcare.

Tjay TH, Rahardja K. 2002. Obat-obat Penting: Khasiat, Penggunaan, dan Efek-efek Sampingnya. Ed ke-4. Jakarta: Elex Media Komputindo.

Underwood AL, Day. 1980. Analisis Kimia Kuantitatif. Ed ke-4. Soendoro et al., penerjemah. Jakarta: Erlangga. Terjemahan dari: Quantitative Analysis. 4th Edition.

Weidner, RV. 1986. A Wavelength Standard for the Near Infrared Based on the Reflectance. Maryland: NIST. Journal of Research of the National Bureu of Standards.

Wulandari N. 2007. Validasi metode spektrofotometri derivatif ultraviolet untuk penentuan respirin dalam tablet obat [skripsi]. Bogor. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. Institut Pertanian Bogor

13

LAMPIRAN

14

Lampiran 1 Akurasi panjang gelombang

Ulangan Pengukuran (nm) Rerata (nm)

Galat (nm)

Rerata (nm)

Teoretis (nm) Simpangan

1 241.40 0.28 2 241.37 241.40 0.25 0.28 241.12 0.025 3 241.42 0.3 1 250.20 0.17 2 250.23 250.21 0.20 0.18 250.03 0.021 3 250.19 0.16 1 278.60 0.5 2 278.58 278.60 0.48 0.50 278.10 0.025 3 278.63 0.53 1 287.80 0.28 2 287.77 287.80 0.25 0.28 287.52 0.025 3 287.82 0.3 1 333.60 0.13 2 333.57 333.59 0.10 0.12 333.47 0.015 3 333.59 0.12 1 345.40 -0.02 2 345.42 345.41 0.00 -0.01 345.42 0.010 3 345.41 -0.01 1 385.80 0 2 385.78 385.80 -0.02 0.00 385.80 0.015 3 385.81 0.01 1 416.50 -0.07 2 416.48 416.49 -0.09 -0.08 416.57 0.012 3 416.50 -0.07 1 451.10 -0.22 2 451.12 451.11 -0.20 -0.21 451.32 0.012 3 451.12 -0.2 1 467.70 -0.2 2 467.67 467.69 -0.23 -0.21 467.90 0.021 3 467.71 -0.19 1 485.10 -0.15 2 485.12 485.12 -0.13 -0.13 485.25 0.015 3 485.13 -0.12 1 536.61 -0.26 2 536.60 536.61 -0.26 -0.25 536.86 0.012 3 536.62 -0.24 1 640.50 -0.29 2 640.48 640.49 -0.31 -0.30 640.79 0.010 3 640.49 -0.3

15

Lampiran 2 Deviasi serapan sinyal larutan KCl

(nm) Absorbans (nm) Absorbans (nm) Absorbans (nm) Absorbans 245.0 -0.3079 213.0 1.3290 229.0 0.9941 199.7 2.3424 244.0 -0.2096 212.0 1.3464 228.0 0.9832 199.6 2.3588 243.0 -0.1115 211.0 1.3604 227.0 0.9763 199.5 2.3745 242.0 -0.1138 210.0 1.3690 226.0 0.9774 199.4 2.3925 241.0 -0.2624 209.0 1.3724 225.0 0.9858 199.3 2.4096 240.0 -0.4189 208.0 1.3728 224.0 0.9993 199.2 2.4287 239.0 -0.3218 207.0 1.3680 223.0 1.0210 199.1 2.4475 238.0 -0.1484 206.0 1.3627 222.0 1.0471 199.0 2.4682 237.0 -0.2800 205.0 1.3578 221.0 1.0776 198.0 2.7229 236.0 0.1879 204.0 1.3567 220.0 1.1122 197.0 3.0684 235.0 0.3552 203.0 1.3678 219.0 1.1466 196.0 3.4456 234.0 0.9240 202.0 1.3961 218.0 1.1818 195.0 3.6707 233.0 0.9930 201.0 1.4581 217.0 1.2164 194.0 3.6709 232.0 0.9620 200.0 2.4190 216.0 1.2494 193.0 3.5833 231.0 -0.0648 199.9 2.3139 215.0 1.2783 192.0 3.4859 230.0 0.0120 199.8 2.3273 214.0 1.3048 191.0 3.3288

Lampiran 3 Deviasi serapan sinyal larutan NaI

(nm) Absorbans (nm) Absorbans (nm) Absorbans (nm) Absorbans 245.0 3.5022 220.7 3.3459 231.0 3.6058 213.0 3.2090 244.0 3.5242 220.6 3.3616 230.0 3.5242 212.0 3.2743 243.0 3.5398 220.5 3.3496 229.0 3.5461 211.0 3.2111 242.0 3.5682 220.4 3.3496 228.0 3.5839 210.0 3.2111 241.0 3.5022 220.3 3.3496 227.0 3.5242 209.0 3.1991 240.0 3.5618 220.2 3.3651 226.0 3.5022 208.0 3.1602 239.0 3.5242 220.1 3.3375 225.0 3.5178 207.0 3.1282 238.0 3.5461 220.0 3.3375 224.0 3.5242 206.0 3.0970 237.0 3.5682 219.0 3.3027 223.0 3.5618 205.0 3.0907 236.0 3.6058 218.0 3.3616 222.0 3.3993 204.0 3.0486 235.0 3.5839 217.0 3.3219 221.0 3.3424 203.0 3.0197 234.0 3.5902 216.0 3.2687 220.9 3.3424 202.0 2.9769 233.0 3.6058 215.0 3.2566 220.8 3.3580 201.0 2.9297 232.0 3.5461 214.0 3.2603

16

b. Spektrum serapan energi pada panjang gelombang 650660 nm

Lampiran 4 Resolusi

1.8nm

1.8nm

a. Spektrum serapan energi pada panjang gelombang 480490 nm

17

Lampiran 5 Derau

Waktu (detik) Absorbans Waktu (detik) Absorbans 10 0.0002 300 0.0005 20 0.0002 320 0.0005 30 0.0002 330 0.0005 40 0.0002 340 0.0005 50 0.0002 350 0.0005 60 0.0002 360 0.0005 70 0.0002 360 0.0005 71 0.0002 370 0.0006 80 0.0002 380 0.0006 90 0.0002 390 0.0006 90 0.0002 400 0.0006 100 0.0002 410 0.0006 110 0.0004 420 0.0006 120 0.0004 430 0.0006 120 0.0004 440 0.0006 130 0.0004 450 0.0006 140 0.0004 460 0.0006 150 0.0004 470 0.0006 160 0.0004 480 0.0006 170 0.0004 490 0.0007 180 0.0004 500 0.0007 190 0.0004 510 0.0007 200 0.0004 520 0.0007 210 0.0004 530 0.0007 220 0.0005 540 0.0007 230 0.0005 550 0.0007 240 0.0005 560 0.0007 260 0.0005 570 0.0007 270 0.0005 580 0.0007 280 0.0005 590 0.0007 290 0.0005 600 0.0007

18

Lampiran 6 Kerataan baseline

(nm) Abs (nm) Abs (nm) Abs (nm) Abs 190 0.00055 231 0.00033 272 0.00045 313 0.00077 191 0.00055 232 0.00045 273 0.0004 314 0.00057 192 0.00075 233 0.00035 274 0.00033 315 0.00033 193 0.00055 234 0.00033 275 0.0004 316 0.00047 194 0.00065 235 0.00033 276 0.00045 317 0.00067 195 0.00055 236 0.00033 277 0.00045 318 0.00077 196 0.00035 237 0.00033 278 0.00045 319 0.00067 197 0.00025 238 0.00033 279 0.00045 320 0.00047 198 0.00019 239 0.00033 280 0.00045 321 0.00042 199 0.00018 240 0.00033 281 0.0004 322 0.00042 200 0.00018 241 0.00033 282 0.00033 323 0.00042 201 0.00018 242 0.00033 283 0.0004 324 0.00042 202 0.00018 243 0.00033 284 0.00045 325 0.00042 203 0.00018 244 0.00043 285 0.0004 326 0.00047 204 0.00018 245 0.00035 286 0.00033 327 0.00057 205 0.00018 246 0.00033 287 0.0004 328 0.00057 206 0.00029 247 0.00033 288 0.00048 329 0.00057 207 0.00033 248 0.00033 289 0.0004 330 0.00047 208 0.00033 249 0.00033 290 0.00038 331 0.00042 209 0.00033 250 0.00039 291 0.00033 332 0.00042 210 0.00033 251 0.00045 292 0.0004 333 0.00042 211 0.00033 252 0.00045 293 0.00047 334 0.00049 212 0.00033 253 0.00045 294 0.0004 335 0.00069 213 0.00033 254 0.00045 295 0.00047 336 0.00084 214 0.00033 255 0.00045 296 0.00057 337 0.00069 215 0.00033 256 0.00045 297 0.00067 338 0.00084 216 0.00033 257 0.00045 298 0.00047 339 0.00069 217 0.00033 258 0.00045 299 0.0004 340 0.00084 218 0.00033 259 0.00037 300 0.00033 341 0.00069 219 0.00033 260 0.00033 301 0.0004 342 0.00084 220 0.00033 261 0.00037 302 0.00042 343 0.00069 221 0.00033 262 0.00045 303 0.00043 344 0.00059 222 0.00033 263 0.00037 304 0.00047 345 0.00062 223 0.00033 264 0.00033 305 0.00067 346 0.00065 224 0.00033 265 0.00033 306 0.00057 347 0.00067 225 0.00033 266 0.00033 307 0.00067 348 0.0007 226 0.00033 267 0.00033 308 0.00057 349 0.00084 227 0.00033 268 0.00039 309 0.00067 350 0.00062 228 0.00033 269 0.00045 310 0.00057 351 0.0007 229 0.00033 270 0.00045 311 0.00047 352 0.00084 230 0.00033 271 0.00045 312 0.00033 353 0.00062

19

lanjutan Lampiran 6 (nm) Abs (nm) Abs (nm) Abs (nm) Abs

354 0.00084 395 0.00078 436 0.00053 477 0.00053 355 0.00074 396 0.00078 437 0.00045 478 0.00042 356 0.00064 397 0.00078 438 0.00053 479 0.00053 357 0.00063 398 0.00088 439 0.00045 480 0.00045 358 0.00062 399 0.0012 440 0.00053 481 0.00045 359 0.00057 400 0.00088 441 0.00045 482 0.00045 360 0.00042 401 0.00078 442 0.00053 483 0.00045 361 0.0004 402 0.00078 443 0.00056 484 0.00045 362 0.00057 403 0.00078 444 0.00059 485 0.00045 363 0.00057 404 0.00078 445 0.00059 486 0.00045 364 0.00057 405 0.00078 446 0.00059 487 0.00045 365 0.00057 406 0.00078 447 0.00059 488 0.00045 366 0.00067 407 0.00078 448 0.00059 489 0.00045 367 0.00063 408 0.00078 449 0.00073 490 0.00045 368 0.00053 409 0.00078 450 0.00059 491 0.00045 369 0.0004 410 0.00078 451 0.00059 492 0.00045 370 0.0004 411 0.00078 452 0.00059 493 0.00042 371 0.0004 412 0.00078 453 0.00059 494 0.00035 372 0.00063 413 0.00078 454 0.00054 495 0.00042 373 0.00053 414 0.00078 455 0.00044 496 0.00045 374 0.00051 415 0.00072 456 0.00044 497 0.00065 375 0.00047 416 0.00072 457 0.00044 498 0.00045 376 0.00051 417 0.00078 458 0.00044 499 0.00035 377 0.00053 418 0.00072 459 0.00044 500 0.00035 378 0.00058 419 0.00062 460 0.00057 501 0.00035 379 0.00067 420 0.00059 461 0.00059 502 0.00035 380 0.00058 421 0.00078 462 0.00059 503 0.00032 381 0.00053 422 0.00059 463 0.00059 504 0.00022 382 0.00047 423 0.00062 464 0.00059 505 0.00022 383 0.00058 424 0.00059 465 0.00057 506 0.00032 384 0.00047 425 0.00055 466 0.00049 507 0.00035 385 0.00047 426 0.00055 467 0.00042 508 0.00032 386 0.00058 427 0.00049 468 0.00049 509 0.00022 387 -0.00015 428 0.00045 469 0.00057 510 0.00021 388 -0.00075 429 0.00045 470 0.00049 511 0.00021 389 0.00047 430 0.00049 471 0.00042 512 0.00021 390 0.00078 431 0.00055 472 0.00042 513 0.00021 391 0.00078 432 0.00065 473 0.00042 514 0.00024 392 0.00078 433 0.00075 474 0.00042 515 0.00034 393 0.00078 434 0.00065 475 0.00053 516 0.00024 394 0.00078 435 0.00055 476 0.00042 517 0.0002

20


518 0.0002 559 -0.00009 600 -0.00032 641 -0.00055 519 0.0002 560 -0.00009 601 -0.00032 642 -0.00055 520 0.0002 561 -0.00012 602 -0.00032 643 -0.00043 521 0.00024 562 -0.00022 603 -0.00032 644 -0.00055 522 0.00034 563 -0.00012 604 -0.00022 645 -0.00055 523 0.00024 564 -0.00012 605 -0.00022 646 -0.00039 524 0.0002 565 -0.00012 606 -0.00022 647 -0.00033 525 0.0002 566 -0.00012 607 -0.00022 648 -0.00031 526 0.0002 567 -0.00012 608 -0.00028 649 -0.00031 527 0.00018 568 -0.00012 609 -0.00032 650 -0.00031 528 0.00012 569 -0.00022 610 -0.00028 651 -0.00031 529 0.0001 570 -0.00022 611 -0.00022 652 -0.00031 530 0.00018 571 -0.00022 612 -0.00022 653 -0.00031 531 -0.00025 572 -0.00022 613 -0.00022 654 -0.00031 532 -0.00015 573 -0.00022 614 -0.00022 655 -0.00031 533 0.00018 574 -0.00022 615 -0.00022 656 -0.00031 534 -0.00007 575 -0.00022 616 -0.00022 657 -0.00031 535 0.00018 576 -0.00022 617 -0.00022 658 -0.00021 536 -0.00007 577 -0.00022 618 -0.00022 659 -0.00031 537 -0.00007 578 -0.00022 619 -0.00022 660 -0.00031 538 -0.00007 579 -0.0001 620 -0.00022 661 -0.00021 539 0.00018 580 -0.00012 621 -0.00022 662 -0.00021 540 -0.00012 581 -0.00022 622 -0.00022 663 -0.00021 541 0.00008 582 -0.00022 623 -0.00022 664 -0.00021 542 -0.00009 583 -0.00022 624 -0.00022 665 -0.00021 543 -0.00009 584 -0.00022 625 -0.00022 666 -0.00021 544 -0.00009 585 -0.00022 626 -0.00022 667 -0.00021 545 -0.00009 586 -0.00022 627 -0.00022 668 -0.00021 546 -0.00009 587 -0.00022 628 -0.00022 669 -0.00021 547 -0.00009 588 -0.00022 629 -0.00022 670 -0.00021 548 -0.00009 589 -0.00022 630 -0.00022 671 -0.00011 549 -0.00009 590 -0.00022 631 -0.00022 672 -0.00021 550 -0.00009 591 -0.00012 632 -0.00022 673 -0.00011 551 -0.00009 592 -0.00022 633 -0.00022 674 -0.00011 552 -0.00009 593 -0.00022 634 -0.00022 675 -0.00011 553 -0.00009 594 -0.00022 635 -0.00022 676 -0.00011 554 -0.00012 595 -0.00022 636 -0.00028 677 -0.00011 555 -0.00019 596 -0.00022 637 -0.00033 678 -0.00011 556 -0.00012 597 -0.00032 638 -0.00043 679 -0.00011 557 -0.00009 598 -0.00032 639 -0.00053 680 -0.0002 558 -0.00009 599 -0.00032 640 -0.00043 681 -0.0002

21


682 -0.0002 687 -0.00032 692 -0.00032 697 -0.00022 683 -0.0002 688 -0.00032 693 -0.00022 698 -0.00022 684 -0.0002 689 -0.00032 694 -0.00032 699 -0.00022 685 -0.0002 690 -0.00032 695 -0.00032 700 -0.00022 686 -0.00022 691 -0.00032 696 -0.00022

Lampiran 7 Stabilitas sinyal

Waktu (menit) Absorbans Waktu (menit) Absorbans 1 0.00020 31 0.00100 2 0.00020 32 0.00100 3 0.00020 33 0.00120 4 0.00040 34 0.00120 5 0.00040 35 0.00120 6 0.00040 36 0.00120 7 0.00040 37 0.00120 8 0.00050 38 0.00120 9 0.00050 39 0.00120 10 0.00060 40 0.00120 11 0.00060 41 0.00120 12 0.00060 42 0.00120 13 0.00060 43 0.00120 14 0.00060 44 0.00120 15 0.00060 45 0.00120 16 0.00080 46 0.00120 17 0.00080 47 0.00120 18 0.00080 48 0.00120 19 0.00080 49 0.00120 20 0.00080 50 0.00120 21 0.00080 51 0.00120 22 0.00080 52 0.00120 23 0.00080 53 0.00130 24 0.00100 54 0.00130 25 0.00100 55 0.00130 26 0.00100 56 0.00130 27 0.00100 57 0.00130 28 0.00100 58 0.00130 29 0.00100 59 0.00130 30 0.0010 60 0.00130

22

Lampiran 8 Akurasi fotometri

(nm) Abs Pengukuran Rerata s Abs

Teoretis Uji t

350 0.6462

0.6432 0.0026 0.6400 diterima 0.6413 0.6422

313 0.2941

0.2938 0.0005 0.2920 diterima 0.2933 0.2941

257 0.8646

0.8649 0.0011 0.8650 diterima 0.8640 0.8661

235 0.7467

0.7470 0.0003 0.7480 diterima 0.7470 0.7473

Contoh perhitungan:

S = =0.0026

thitung :

thitung :

thitung : 2.13

ttabel(n = 3, a = 0.05) = 4.3027 thitung < ttabel, sehingga nilai hasil pengukuran tidak berbeda signifikan dengan nilai

teoretis.

Spektrum larutan K2Cr2O7

23

Lampiran 9 Linearitas

(nm) [K2Cr2O7] (mg/L) Absorbans r Persamaan regresi

linear

350

20 0.2080

0.9988 y = 0.0089x + 0.0423 40 0.4032 60 0.5854 80 0.7509 100 0.9193

313

20 0.0945

0.9989 y = 0.0040x + 0.0104 40 0.1662 60 0.2455 80 0.3257 100 0.4122

257

20 0.2814

0.9973 y = 0.0118x + 0.0528 40 0.5541 60 0.7506 80 0.9780 100 1.2418

235

20 0.2437

0.9978 y = 0.0104x + 0.0284 40 0.4501 60 0.6371 80 0.8429100 1.0869

24

Lampiran 10 Kadar ambroksol HCl pada standar sekunder

Bobot (mg)

Konsentrasi (mg/mL) Standar Absorbans

Kadar ambroksol HCl (%)

Rerata (%)

31 0.0305 Primer 0.8792

31 0.0310 Sekunder 0.8956 100.22

100.20 Sekunder 0.8953 100.19 Sekunder 0.8953 100.19

30 0.0303 Sekunder 0.8749 100.17


30 0.0304 Sekunder 0.8778 100.17


31 0.0309 Sekunder 0.8985 100.87


30 0.0304 Sekunder 0.8766 100.03


31 0.0305 Sekunder 0.8838 100.52


Rerata 100.32 Contoh perhitungan:

Kadar Ambroksol HCl = 100

Kadar Ambroksol HCl = 100

Kadar Ambroksol HCl = 100.20%

25

Lampiran 11 Linearitas metode pengentuan kadar ambroksol HCl

Ulangan Konsentrasi (mg/mL) Bobot (mg) Absorbans Persamaan regresi r

1

0.02412 40 0.5496

y = 54.3880x - 0.7705

0.02700 45 0.677 0.03018 50 0.8868 0.9970 0.03306 55 1.0264 0.03600 60 1.2049

2

0.02436 41 0.5569

y = 55.9370x - 0.8158

0.02718 45 0.6989 0.03012 50 0.8651 0.9994 0.03324 55 1.0486 0.03606 60 1.1957

3

0.02424 40 0.5537

y = 56.6871x - 0.7739

0.02706 45 0.6929 0.03036 51 0.9068 0.9976 0.03312 55 1.0299 0.03618 60 1.2029

4

0.02400 40 0.5436

y = 53.6706x - 0.7458

0.02730 46 0.70829 0.03012 50 0.8847 0.9988 0.03300 55 1.0244 0.03642 61 1.2056

5

0.02442 41 0.5575

y = 55.4496x - 0.8002

0.02718 45 0.7008 0.03024 50 0.8847 0.9989 0.03312 55 1.0244 0.03606 60 1.2056

6

0.02412 40 0.5488

y = 55.1635x - 0.8031

0.02730 46 0.6928 0.03006 50 0.8829 0.9970 0.03336 56 1.0501 0.03618 60 1.2034

Rerata y = 55.2160x - 0.7849 0.9981

26

Lampiran 12 Hasil penentuan parameter statistika kurva standar ambroksol HCl

xi (xi-X) (xi-X)2 xi2 yi Y (yi-Y) (yi-Y)2

0.0240 -0.0060 3.6x10-5 5.8x10-4 0.5517 0.5403 0.0114 0.00010.0270 -0.0030 9.0x10-6 7.3x10-4 0.6918 0.7059 -0.0142 0.00020.0300 0.0000 0.0000 9.0x10-4 0.8885 0.8716 0.0169 0.000290.0330 0.0030 9.0x10-6 10.9x10-4 1.0340 1.0372 -0.0033 1.1x10-5

0.0360 0.0060 3.6x10-5 13.0x10-4 1.2030 1.2029 0.0001 1.6x10-8

Persamaan regresi rerata : y = 55.2160x - 0.7849 xi2 = 0.00459 (yi-Y)2 = 0.000627 (xi-X)2 = 9x10-5

Simpangan baku regresi (Sr) = S = = 0.0144

Simpangan baku intersep (Sa) = S = Sr = 0.0462

Simpangan baku kemiringan (Sb) = 1.5236

Selang kepercayaan intersep untuk a = 0.05 dan derajat bebas = 7 (ttabel = 2.36) ialah:

a + tSa = 0.7849 + (2.36)(0.0462)

=0.7849+0.1089

Selang kepercayaan kemiringan garis untuk a = 0.05 dan derajat bebas = 7 (ttabel = 2.36) yaitu:

b + tSb = 55.2160 + (2.36)( 1.5236)

=55.2160 +3.5957

Lampiran 13 Penentuan Limit Deteksi dan Limit Kuantisasi

LD = 0.0028 mg/L

LK = 0.0084 mg/L

Keterangan di persamaan (1) dan (2)

Lampiran 14 Perolehan kembali metode pengukuran kadar ambroksol HCl

27

Standar ambroksol HCl (mg) Perolehan kembali (%)

Rerata (%)

Batas Galat

SBR (%) Ditambahkan Terukur Ditemukan

1.2000 31.0376 1.2129 101.07

1.2000 31.0387 1.2140 101.17 101.0

1 0.0049 0.0020 1.2000 31.0342 1.2095 100.79 1.8000 31.6394 1.8147 100.82

1.8000 31.6456 1.8209 101.16 101.0

5 0.0049 0.0020 1.8000 31.6456 1.8209 101.16 2.4000 32.2474 2.4227 100.95

2.4000 32.2567 2.4320 101.33101.2

4 0.0065 0.00262.4000 32.2593 2.4346 101.44

Contoh perhitungan untuk jumlah standar yang ditambahkan: Perolehan kembali (%) = 100%

(%) = 100%

(%) = 101.07%

Keterangan: a = konsentrasi contoh + konsentrasi standar yang terukur b = konsentrasi contoh c = konsentrasi standar teoretis yang ditambahkan

Simpangan baku (SB) = = 0.0020 mg

Simpangan baku relatif (%) = 100%

= 100%

= 0.0020 mg

Batas galat =

=

= 0.0049 mg

Q0

spektro 10-11

Documents