sinkronisasi dan te

8/17/2019 Sinkronisasi Dan TE

1/49

SINKRONISASI BERAHI

Sinkronisasi berahi adalah suatu usaha yang bertujuan agar sekelompok ternak

memperlihatkan gejala-gejala berahi pada saat yang hampir bersamaan. Dengan kata lain,

sinkronisasi berahi adalah manipulasi dari siklus berahi atau induksi berahi yang

menyebabkan sebagian besar dari kelompok ternak menjadi berahi pada waktu yang telah

ditetapkan sebelumnya. Penggunaan teknik sinkronisasi berahi akan mampu meningkatkan

efisiensi dan produksi kelompok ternak serta optimasi program inseminasi buatan. Optimasi

yang dimaksud adalah:

1. mengurangi waktu dan memudahkan obserasi deteksi berahi.

!. menghemat tenaga kerja". efisiensi kerja inseminator karena dapat mengawinkan ternak pada suatu daerah

pada saat yang bersamaan.

#. dapat menentukan jadwal kelahiran yang diharapkan.

$. menurunkan usia pubertas pada sapi dara

%fisiensi reproduksi pada perkawinan &inseminasi' ternak dikontrol se(ara substansial oleh

pengaruh tingkat deteksi berahi dan angka konsepsi. )etidak(ermatan deteksi berahi

merupakan faktor yang mempunyai kontribusi utama terhadap rendahnya performansi

reproduksi. Oleh karena itu, eliminasi deteksi berahi pada program inseminasi buatan &*+'

menjadi rangsangan bagi peneliti untuk mengembangkan teknik sinkronisasi berahi yang

mempunyai kemampuan mengkontrol berahi tanpa mengurangi fertilitas. Sinkronisasi berahi

meningkatkan ekspresi tingkah laku berahi karena sejumlah ternak yang mengalami

sinkronisasi akan memperlihatkan gejala berahi pada waktu yang dapat diprediksi.

SIKLUS ESTRUS

)esuksesan program sinkronisasi membutuhkan pengetahuan mengenai siklus estrus.

ambar #.1 menjelaskan titik-titik penting selama siklus estrus. ari ke- adalah hari pertama

estrus. Pada saat ini, perkawinan alami terjadi. ormon estrogen men(apai pun(aknya pada

hari ke-1 dan kemudian menurun. /eel progesteron rendah karena (orpus luteum &0/'

belum hadir. Oulasi &pelepasan sel telur' terjadi 1!-1 jam setelah akhir standing estrus.

0orpus luteum yang menghasilkan hormon progesteron terbentuk pada tempat oulasi dan

se(ara (epat mengalami pertumbuhan mulai hari ke-#-2. pertumbuhan ini diikuti dengan

1


2/49

peningkatan leel progesteron. 3ulai hari ke-2-14, 0/ menghasilkan progesteron dalam leel

yang tinggi. Selama periode ini, 1 atau ! folikel mungkin menjadi besar, tetapi dalam waktu

yang singkat akan mengalami regresi. )ira-kira hari ke-14, prostaglandin dilepaskan dari

uterus dan menyebabkan leel progesteron menjadi turun. )etika leel progesteron menurun,

leel estrogen meningkat dan folikel baru mulai tumbuh. %strogen men(apai pun(aknya pada

hari ke-!, diikuti tingkah laku estrus pada hari ke-!1. Pada saat ini siklus estrus dimulai

kembali.

ambar #.1. /eel hormon selama siklus estrus sapi

Oleh karena itu terdapat ! mekanisme dasar sinkronisasi berahi pada ternak yakni 1'

memperpanjang5mempertahankan 0/ pada waktu tertentu dan !' penyingkiran 0/ dengan

pemberian preparat luteolitik. Oleh karena itu, sinkronisasi berahi pada ternak dapat

dilakukan dengan ! (ara, yaitu 1' menggunakan progesteron, dan !' menggunakan senyawa-

senyawa prostaglandin.

PRODUK UNTUK SINKRONISASI

Selama sepuluh tahun yang lalu, setidaknya terdapat beberapa produk yang digunakan untuk

sinkronisasi, meskipun se(ara umum berdasarkan prinsip dasar sinkronisasi diketahui dua

preparat untuk sinkronisasi. 3etode sinkronisasi tertua adalah menggunakan P6!7, atau

analognya, yang menyebabkan regresi 0/. Sinkronisasi estrus dan fertilitas yang dihasilkan

dengan preparat ini adalah baik pada hewan siklus tetapi tidak akan menginduksi siklus padasapi non-siklik seperti seperti pada sapi anestrus pas(a-partus.

!


3/49

3etode yang lebih baru adalah menggunakan gonadotropin-releasing hormone &n8' atau

analognya, yang menyebabkan oulasi pada folikel besar. Perlakuan n8 yang

dikombinasikan dengan P6!7 akan menghasilkan sinkronisasi estrus dan fertilitas yang baik

pada hewan siklus maupun pada sapi anestrus pas(a partus.

3etode ketiga adalah mengunakan progestin yang akan memelihara leel progesteron yang

tinggi. Sinkronisasi estrus terjadi setelah pengangkatan progesteron !-$ hari kemudian.

Sinkronisasi Menggunakan Prostaglandin

Se(ara alami prostaglandin &P6!7' dilepaskan oleh uterus hewan yang tidak bunting pada

hari ke-14-1 siklus yang berfungsi untuk menghan(urkan 0/. 0orpus luteum adalah suatu

struktur di dalam oarium yang menghasilkan hormon progesteron dan men(egah hewan

kembali berahi. Pelepasan P6!7 ini berfungsi mema(u suatu proses yang menyebabkan

hewan kembali berahi setiap !1 hari &pada sapi atau kambing'. Se(ara komersial penggunaan

P6!7 &/utalyse, %strumate, Prostamate' adalah untuk menghilangkan 0/ pada hewan siklus

sehingga waktu berahi dan perkawinan dapat ditentukan.

ormon P6!7 se(ara umum merupakan agen luteolitik yang mengakhiri masa hidup 0/

pada fase dan akhir diestrus. 9imbulnya berahi akibat pemberian P6!7 disebabkan lisisnya

0/ oleh kerja asokonstriksi P6!7 sehingga aliran darah menuju 0/ menurun se(ara

drastis. kibatnya, kadar progesteron yang dihasilkan 0/ dalam darah menurun. Penurunan

kadar progesteron ini akan merangsang hipofisa anterior melepaskan 6S dan /. )edua

hormon ini bertanggung jawab dalam proses folikulogenesis dan oulasi, sehingga terjadi

pertumbuhan dan pematangan folikel. 6olikel-folikel tersebut akhirnya menghasilkan hormon

estrogen yang mampu memanifestasikan gejala berahi. )erja hormon estrogen adalah untuk

meningkatkan sensitiitas organ kelamin betina yang ditandai perubahan pada ula dankeluarnya lendir transparan.

)elemahan dari P6!7 adalah tidak efektif pada hewan yang tidak memiliki 0/. ewan

tersebut meliputi hewan yang baru berahi 4-2 hari, ternak prepuber dan sapi anestrus

pas(apartus. Oleh karena itu, pada hewan siklus ada ! metode umum pemberiannya yakni

dengan injeksi tunggal &one shot' atau injeksi ganda &two shot'.

"


4/49

One Shot Prostaglandin

Pilihan pertama pemberian prostaglandin adalah injeksi tunggal pada betina siklus, dan

kemudian hewan betina akan dikawinkan pada saat betina memperlihatkan estrus. )elemahan

metode ini adalah hanya kira-kira sepertiga betina yang akan respon terhadap injeksi, sedang

kebaikannya adalah biaya yang dibutuhkan lebih rendah dan betina hanya mendapat

penanganan sekali sebelum perkawinan.

ambar #.! Penyuntikan P6!7 tunggal &one-shot '

Two Shot Prostaglandin

3etode umum sinkronisasi dengan P6!7 adalah seluruh hewan diinjeksi dan dikawinkan

ketika berahi. ewan yang tidak dideteksi berahinya setelah injeksi pertama akan diinjeksi

kembali 11 atau 1# hari. ewan yang berahi harus diinseminasi -1! jam kemudian. ;ika

jumlah tenaga terbatas, seluruh deteksi berahi dan perkawinan dapat ditunda sampai injeksi

ke-!.

)elebihan metode ini adalah sapi yang akan mengalami estrus lebih banyak dibanding injeksi

tunggal. *njeksi ! kali mempunyai kelemahan berupa tingginya biaya untuk perlakuan. Dalam

beberapa kasus dilaporkan penurunan performansi reproduksi berikutnya. Sampai sekarang

tetap menjadi perdebatan waktu inseminasi yang optimal setelah sinkronisasi dengan P6!7.

+anyak literatur komersial merekomendasikan dua kali *+ pada saat # dan 2! jam atau 2!

dan


5/49

ambar #." Penyuntikan P6 ganda &two shot '

Pertimbangan penyuntikan satu atau dua kali perlu diperhatikan dari segi biaya. ;ika status

siklus ternak dapat diketahui maka akan lebih efisien jika diinjeksi satu kali, sedang jika

status siklus tidak diketahui maka injeksi ! kali merupakan pilihan yang tepat. Pada

penyuntikan ! kali, penyuntikan pertama berfungsi menggiring ternak memasuki fase luteal

sehingga pada penyuntikan kedua responnya akan tinggi. 9ingginya respon berahi pada

penyuntikan kedua disebabkan P6!7 efektif untuk penyerentakan berahi mulai fase

pertengahan luteal. 9ernak yang tidak berada pada fase ini pada penyuntikan pertama akan

memasuki fase mid5akhir luteal pada penyuntikan kedua, sedang ternak yang berada pada fase

mid5akhir luteal pada injeksi pertama, akan kembali memasuki fase ini 11 hari kemudian.

ormon P6!7 efektif dalam meregresi 0/ fungsional tidak pada 0/ yang sedang tumbuh

karena pada 0/ fungsional sudah terdapat reseptor untuk P6!7. lasan interal penyuntikan

1-11 hari dapat dijelaskan melalui ambar # berikut.

-----------------------------------siklus berahi !1 hari--------------------------------

/uteal awal &tak peka' peka &11-!1 hari' 6olikuler &tak peka'

#-$ hari "-# hari

ambar #.# Diagram kepekaan sapi pada P6!7

3eskipun se(ara teoritis direkomendasikan injeksi P6!7 dengan interal 1-11 hari, tetapi

beberapa peternakan di luar negeri (enderung mengimplementasikan interal 1# hari. al ini

dianggap lebih mudah pada sistem kalender karena penyuntikan kedua dilakukan ! minggu

setelah injeksi pertama. Pertimbangan lain adalah bahwa ternak yang respon pada injeksi

pertama, tetapi berahinya tidak dideteksi, akan berada pada hari ke-2-< siklus pada injeksi

dengan interal 11 hari. al ini dianggap terlalu dini, karena respon terhadap P6!7 akan

$


6/49

lebih baik jika 0/ menjadi lebih matang. Perbedaan selama " hari tersebut terbukti se(ara

signifikan dapat memperbaiki respon hewan. +eberapa protokol sinkronisasi menggunakan

P6!7 pada sapi yang terlihat pada 9abel #.1

9abel #.1 +eberapa metode sinkronisasi berahi dengan P6!7 pada sapi

=o. ;umlah injeksi >aktu *njeksi >aktu *+

1. Dua kali *nteral 11 hari 2! dan


7/49

ini adalah baik tetapi fertilitasnya rendah karena terjadi hambatan pembelahan embrio,

disebabkan panjangnya waktu pemberian.

asil penelitian membuktikan bahwa fertilitas induksi berahi terbesar di(apai pada

penggunaan 1-!1 hari tetapi fertilitas normal di(apai menggunakan waktu yang lebih pendek

yakni -1 hari. Pada domba, periode dominasi progesteron yang lebih panjang berpengaruh

terhadap fertilitas disebabkan efek pada transport intrauterin. Sebaliknya, periode pemberian

progesteron yang pendek tidak se(ara sempurna efektif dalam mengkontrol siklus berahi,

sebab dalam beberapa kasus, pemberian pada awal siklus, dimana korpus luteum natural

belum terbentuk, sinkronisasi berahi tidak terjadi. asil penelitian lain membuktikan bahwa

pemberian progesteron tunggal pada sinkronisasi siklus berahi pada sapi pas(a partus

menghasilkan ariasi interal yang besar antara hari pengangkatan &penghentian' progesteron

dengan terjadinya berahi5oulasi. Oleh karena alasan ini diperlukan kerjasama dengan agen

luteolitik lain seperti P6!7 untuk menjamin kontrol maksimal siklus.

Metode Pemberian Progestagen

ambar #.$ Sinkronisasi dengan 3

3elengesterol a(etat &3' merupakan progestin aktif yang tidak mahal, sampai sekarang

tetap digunakan untuk sinkronisasi berahi pada sapi potong di AS. )ombinasi pemberian

pakan B 3 pada periode pendek &,$ mg per hari selama 2 hari' dan P6 pada hari

terakhir pemberian 3 akan menghasilkan angka konsepsi yang tinggi. Preparat ini bekerja

melalui negatif feedba(k terhadap hypothalamus yang membatasi pelepasan / dan 6S dari

pituitari. Oleh karena itu, akan men(egah ternak untuk estrus karena leel progesteron

dipelihara tetap dalam kedaaan tinggi. Pola pemberian 3 dapat dilihat pada ambar #.$

9eknik pemberian intraaginal telah di(oba pada sapi menggunakan 0P, 3, dan

fluogestone a(etat &6' namun terdapat beberapa kelemahan yakni hasilnya lebih berariasi,

2


8/49

sukar dalam menahan spon dan terjadi infeksi agina. Pada sekitar tahun 1


9/49

ambar #.4 Struktur 0*D8 untuk sinkronisasi sapi

Protokol Sinkronisasi Kombinasi PGF dan GnRH

Sejumlah protokol sinkronisai yang baru merekomendasikan penggunaan gonadotropin-

releasing hormone &n8' dan P6!7. ormon n8 se(ara komersial dikenal dengan

merek dagang 0ystorelin, 6a(trel, and 6ertagyl. Protokol injeksi adalah P6 diberikan 2 hari

setelah pemberian n8.

*njeksi n8 menyebabkan pelepasan / dari hipofisa anterior. / surge ini akan

menghasilkan oulasi atau luteinisasi pada folikel dominan. )arena n8 menstimulasi

perkembangan jaringan luteal pada folikel dominan, persentase sapi-sapi yang memiliki

jaringan luteal yang respon terhadap P6!7 akan tinggi. *njeksi dengan P6 tujuh hari

kemudian akan mensikronisasi regresi luteal. 8espon berahi yang dihasilkan dengan metode

ini akan lebih tinggi dibanding pemberian P6 tunggal.

Protokol kombinasi n8 dan P6!7 untuk sinkronisasi adalah injeksi n8 yang diikuti

dengan injeksi P6!7 tujuh hari kemudian. Deteksi berahi dimulai !#-# jam sebelum injeksi

P6!7. al ini dimaksudkan untuk efisiensi. ewan yang memperlihatkan berahi sebelum

injeksi dengan P6!7 akan dikeluarkan dan diinseminasi. ewan berahi akan diinseminasi -

1! jam setelah standing berahi. Pola kombinasi ini dikenal dengan Select Synch System seperti

yang terlihat pada ambar #.2.


10/49

ambar #.2 Program Select-Synch

ambar #. Program Ovsynch

Protokol kombinasi n8 dan P6!7 yang lain dikenal dengan Ovsynch System. Protokol ini

dapat dilihat pada ambar #. .

Ovsynch adalah protokol sinkronisasi yang banyak digunakan pada sapi perah. Protokol

dilakukan sama seperti pola di atas tetapi diikuti dengan injeksi n8 kedua # jam setelah

injeksi P6!7. *njeksi n8 kedua berfungsi menginduksi oulasi pada folikel dominan

yang direkruit setelah injeksi n8 pertama. Seluruh sapi diinseminasi tanpa pengamatan

berahi -1 jam setelah injeksi n8 kedua, tetapi beberapa studi melaksanakan *+ pada saat

injeksi n8 kedua. Pola ketika *+ dilakukan pada saat injeksi n8 kedua disebut dengan

Cosynch System seperti yang terlihat pada ambar #.


11/49

ambar #.< Program 0o-syn(h

Program Hybrid-Synch dilakukan dengan injeksi n8 pada hari ke-1, injeksi P6!7 pada

hari ke-, kemudian deteksi estrus dan perkawinan mulai hari ke--11. +etina yang tidak

diobserasi estrusnya mulai hari ke--11 dikawinkan pada hari ke-11 dan diberikan injeksi

n8 kedua &ambar #.1'. Program ini mempunyai biaya yang lebih rendah dan

penanganan yang lebih sedikit dibanding Ovsynch dan Co-Synch tetapi lebih mahal daripada

Select Synch. )euntungan utama dari Hybrid-Synch adalah angka konsepsinya lebih tinggi

dibanding seluruh perlakuan kombinasi program n8 dan P6!7.

ambar #.1 Program Hybrid Synch

Pre-Syn(h adalah modifikasi Ovsynch dimana injeksi P6!7 dilakukan ! kali dengan

interal 1# hari kemudian, sebelum diinisiasi dengan injeksi pertama n8 seperti pada

Ovsynch. ;adi, protokol ini adalah gabungan sistem sinkronisasi standar &konensional'

dengan ! kali injeksi P6!7 dan Ovsynch. Pre-Synch terbukti memperbaiki angka konsepsi

11


12/49

pada perkawinan pertama dibanding Osyn(h dan merupakan strategi untuk program sapi

yang diinseminasi pertama kali pas(a partus &ambar #.11'

ambar #.11 Program Pre Synch

ambar #.1! Program Heat Synch

Heat-Synch &ambar #.1!' adalah alternatif Ovsynch/Pre-Synch dimana 1, mg of estradiol

(ypionate &%0P' diberikan !# jam setelah injeksi P6 pada Ovsynch untuk menginduksi

oulasi menggantikan peran n8. eat-Syn(h menghasilkan performansi reproduksi yang

sama dengan Pre-Syn(h tetapi mungkin tidak efektif untuk sinkronisasi pada sapi anoulasi.

+eberapa sistem sinkronisasi lain diringkas pada bagian berikut.

a. 7/11 Synch

G 3 pada makanan selama 2 hari.

G *njeksi /utalyseF &P6!7' pada hari terakhir pemberian pakan 3.

G *njeksi n8 # hari kemudian.

G *njeksi /utalyseF &P6!7 ' 2 hari kemudian.

G Pengamatan berahi dan perkawinan.

1!


13/49

b. PGPG Synch

G *njeksi /utalyseF &P6!7'.

G *njeksi n8 # hari kemudian.

G *njeksi /utalyseF &P6!7' hari kemudian.

G *njeksi n8 ! hari kemudian.

G *+ sapi dara # jam kemudian, dan sapi dewasa jam kemudian.

(. Raid Resynch !RR"

G Diagnosis kebuntingan.

G *njeksi /utalyseF &P6!7' pada sapi yang tidak bunting.

G *njeksi n8 ! hari kemudian

G *+ sapi dara # jam kemudian, dan sapi dewasa jam kemudian

d. #$mstart Resynch

G *njeksi n8 2 hari sebelum diagnosis kebuntingan.

G *njeksi sapi tidak bunting dengan P6!7.

G *njeksi n8 ! hari kemudian atau %0P 1 hari kemudian.

G *+ pada saat injeksi n8 terakhir atau 14 jam &Osyn(h'. Pada banyak kasus pada

perlakuan dengan %0P, perkawinan dilakukan pada saat obserasi berahi atau # jam

setelah injeksi %0P.

Protokol Sinkronisasi pada Kambing

Se(ara umum, tidak ada perbedaan yang signifikan antara sinkronisasi berahi sapi dan

kambing. +eberapa ma(am preparat sinkronisasi yang sering digunakan pada kambing terlihat

pada 9abel #.".

9abel #." +eberapa preparat sinkronisasi berahi pada kambing

Preparat 3erek Dagang Sumber Dosis

H*=/

P8O%S9%8O=%

H%83*I

0*D8 &natural

progesterone'

Ap;ohn 0o

Hetropharm

P8OS9/=D*= %strumate

/utalyse

S(hering 0o

Apjohn 0o

1!$ Jg

mg

P3S %Kuine@

Stimukron

6olligon

yerst

PHA

*nteret

$ *A

n8 6a(trel

0ystorelin

yerst

0%H

$ Jg

1"


14/49

+eberapa protokol umum untuk sinkronisasi berahi pada kambing adalah sebagai

berikut:

Protokol 1 : &kombinasi lengkap dengan P3S dan n8'

ari ke-1:

*nsersi 0*D8 &jika menggunakan progesteron'.

ari ke-:

*njeksi prostaglandin

ari ke-1:

Pengangkatan 0*D8 plus P3S &"-$ *A'

ari ke-11:

*ntroduksi pejantan atau n8 &$ Jg'

ari ke-1! :

)awinkan !# jam setelah berahi pertama terlihat atau 1! jam setelah berahi pertama terihat

dan diulang 1!-!# jam kemudian. )awinkan ketika mukosa terlihat. Perkawinan pada saat

yang telah ditetapkan adalah $# jam setelah pengangkatan 0*D8 jika menggunakan semen

beku dan $-$! jam setelah pengangkatan 0*D8 jika menggunakan semen segar.

Protokol !: pada kambing lpin dan Saanen

ari ke-1:

*nsersi sponge atau 0*D8

ari ke-< :

*njeksi P3S B prostaglandin jam 1#. >*+ &lpin' atau jam 1!. &Saanen'

ari ke-11:

Pengangkatan sponge atau 0*D8 jam 1#. >*+ &lpin' atau jam 1!.

&Saanen'

ari ke-1!:

Deteksi berahi dimulai pada jam !. >*+ &lpin' dan jam 1. >*+

&Saanen'

ari ke-1":

*+ jam *+ setelah dideteksi dengan pejantan

Protokol ": Pada kambing lokal &hasil penelitian penulis dkk. di 6akultas )edokteran ewan

Aniersitas Syiah )uala'

a. ;ika menggunakan prostaglandin

dilakukan ! kali dengan interal 1 hari

1#


15/49

dosis intramus(ular adalah 1!$ Jg (loprostenol &%stroplan'L dosis intraula "1,!$

Jg (loprostenol &%stroplan'

fertilitas yang lebih baik di(apai jika dikombinasikan dengan introduksi pejantan

pada saat penyuntikan ke-! perkawinan 1 jam setelah gejala berahi mun(ul dan diulang 1! jam kemudian.

b. ;ika menggunakan 0*D8 &progesteron'

insersikan 0*D8 selama 1-1! hari

fertilitas yang lebih baik di(apai jika pada saat pengangkatan 0*D8 diintroduksi

dengan pejantan

beberapa publikasi terakhir, insersi 0*D8 (ukup dilakukan selama $-2 hari. perkawinan 1 jam setelah gejala berahi mun(ul dan diulang 1! jam kemudian.

(. Sistem sinkronisasi singkat

injeksi dengan "1,!$ Jg (loprostenol &%stroplan' se(ara intraula

1! jam kemudian diinjeksi dengan !$ *A h0 B ,$ mg mg estradiol benMoate

perkawinan 1 jam setelah gejala berahi mun(ul dan diulang 1! jam kemudian

1$


16/49

TRANSFER EMBRIO

9ransfer embrio pertama kali dilakukan oleh >alter eape tahun 1


17/49

pas(a partus yang normal dan mempunyai panjang siklus 1-!# hari. Sapi yang digunakan

pada prosedur transfer embrio harus berada 4 hari pas(a partus.

+eberapa pertimbangan umum dalam seleksi sapi donor adalah :

G memiliki siklus berahi reguler minimal ! siklus berturut-turut.

G memiliki jumlah perkawinan per kebuntingan tidak lebih dari !.

G interal kelahiran sebelumnya kira-kira "4$ hari.

G tidak ada gangguan melahirkan atau irreguler reproduksi

G tidak ada defek genetik yang dapat dideteksi.

Sapi-sapi harus dipelihara pada leel nutrisi tertentu untuk memelihara leel produksi susu

dan ukurannya. Sapi yang gemuk dan kurus akan menurunkan fertilitas. Oleh karena itu amat

penting memelihara skor kondisi tubuh sapi pada leel tertentu pada saat transfer embrio.

ewan donor dengan kondisi gemuk akan mempunyai respon yang rendah terhadap hormon

gonadotropin. +eberapa studi menunjukkan bahwa sapi yang mempunyai lemak tinggi

&gemuk' mempunyai respon yang rendah terhadap perlakuan superoulasi. Proses fisiologis

dari kondisi ini tidak diketahui. Diduga pada kondisi gemuk, hormon pituitary endogenus

dilepaskan dalam jumlah yang sedikit. Sapi dengan kondisi rendah lemak &kurus' mempunyai

respon yang baik terhadap superoulasi. al ini terlihat pada sapi breed 0hianina dan ;ersey,

meskipun pada breed lain malah tidak menunjukkan respon. Oleh karena itu dianjurkan pakan

dengan roughage untuk memelihara aktiitas oarium yang sesuai untuk superoulasi dan

menghindari green pasture dan konsentrat tanpa roughage selama ! bulan lebih.

Salah satu proses yang dapat menyebabkan gangguan pada saluran reproduksi hewan donor

adalah flushing. Sapi-sapi yang telah dewasa dan mempunyai siklus reguler dapat digunakan

pada program transfer embrio. +eberapa sapi muda & bulan' mempunyai kesuksesan yang

sama dengan sapi tua &1 tahun' pada proses fl$shin% . Problem yang biasa dihasilkan dari

proses flushing adalah abnormalitas saluran reproduksi atau abnormalitas sekunder yang

disebabkan oleh penyakit atau luka.

Problem utama yang dihadapi pada seleksi donor adalah respon indiidual yang tidak dapat

diprediksi. 8espon sapi dapat berariasi mulai dari -" atau lebih sel telur sebagai respon

superoulasi, tetapi rata-rata sekitar #-4 sel telur yang tergantung pada breed, usia dan

12


18/49

kematangan. ;ika hewan donor tidak berada dalam kondisi yang baik maka tidak akan

menghasilkan banyak sel telur yang difertilisasi.

Salah satu keuntungan dari program transfer embrio adalah memungkinkan penggunaan

hewan prepubertal dan beberapa jenis infertilitas digunakan sebagai donor. ewan

prepubertal kadang-kadang dapat berhasil digunakan sebagai hewan donor,

meskipun se(ara umum derajat kesuksesannya adalah rendah. %mbrio dapat

diperoleh dari sapi dara ketika siklus mulai yakni sekitar usia 1! bulan. Pada

kambing, embrio dapat diperoleh mulai usia " bulan dengan kualitas embrio yang

lebih rendah dibanding kambing dewasa. Sapi yang mengalami beberapa jenis

infertilitas telah terbukti dapat digunakan sebagai donor. 9ingkat kesuksesan sapi

infertil sekitar "N dibanding sapi fertil, meskipun kadang-kadang diperoleh hasil

yang spektakuler. Sebagai (ontoh seekor sapi 6 pada 0olorado State Aniersity,

yang mengalami endometritis dan oari sistik mampu menghasilkan !" anak sapi

pada periode ! tahun. 3eskipun demikian, tidak dianjurkan memperbanyak hewan

donor dengan kondisi infertil. ewan infertil yang dapat digunakan sebagai kandidat

donor yang baik meski infertil adalah hewan dengan kriteria mempunyai siklus

normal tetapi tidak dapat memelihara kebuntingan karena penyakit, luka atau

ketuaan.

Seleksi untuk resipien didasarkan pada pertimbangan kualitas dan aspek ekonomi. 8esipien

yang ideal adalah muda, bebas penyakit, fertil dan mempunyai kemampuan menjadi induk.

Disebabkan sapi yang akan dilahirkan besar maka sapi resipien harus mempunyai

pertumbuhan yang baik dan mempunyai sejarah mudah melahirkan. +reed resipien tidak

menjadi pertimbangan utama meskipun sapi (rossbreed se(ara umum akan lebih fertil. Sapi

berumur di atas 1 tahun tidak baik digunakan sebagai resipien karena mengalami penurunan

kemampuan memelihara kebuntingan.

SUPEROULASI

Pada waktu lahir, seekor sapi mempunyai oarium yang berisi 1 kali oosit yang lebih

banyak dibanding yang dioulasikan. Pada perjalanan kehidupan reproduksinya, folikel

dengan oosit di dalamnya akan mengalami degenerasi. Superoulasi memberikan keuntungan

1


19/49

untuk optimasi folikel-folikel tersebut yang tanpa perlakuan superoulasi mungkin tidak akan

pernah oulasi. ;adi, proses superoulasi menyelamatkan folikel dari degenerasi.

Superoulasi adalah langkah berikutnya pada proses transfer embrio. Superoulasi adalah

pelepasan multiple eggs pada satu siklus tunggal. Sapi dewasa atau sapi dara yang mendapat

perlakuan superoulasi dapat melepaskan sebanyak 1 atau lebih sel telur pada periode satu

siklus. )ira-kira $N donor fertil normal akan respon terhadap perlakuan superoulasi

dengan rata-rata $ embrio dapat ditransfer. +eberapa sapi dapat mendapat perlakuan berulang

dengan interal 4 hari dengan terjadi sedikit penurunan jumlah embrio. Prinsip dasar

superoulasi adalah untuk menstimulasi perkembangan folikel se(ara ekstensif melalui

penggunaan hormon yang diberikan se(ara intramuskuler atau subkutan. Sediaan hormon

harus mempunyai aktiitas folli(le stimulating hormone &6S'. Se(ara komersial sediaan

6S diinjeksikan ! kali sehari selama # hari, -1# hari setelah estrus dengan 0/ fungsional

pada oarium. *njeksi prostaglandin diberikan pada hari ke-" skedul, yang menyebabkan 0/

regresi dan estrus akan terjadi #-4 jam kemudian.

Preparat Superovulasi

Sampai saat ini terdapat ! tipe hormon yang paling sering digunakan untuk tujuansuperoulasi yakni pregnant mare serum gonadotrophin &P3S' dan folli(le stimulating

hormone &6S'. )edua hormon ini masing-masing mempunyai kelebihan dan kekurangan.

9eknik Superoulasi dengan P3S

Se(ara umum, terdapat ! metode superoulasi pada sapi yang didasarkan pada perbedaan

gonadotrophin, meskipun terdapat beberapa ariasi ke(il pada perlakuan metode tersebut,

yakni P3S dan 6S. Prostaglandin diperlukan untuk induksi luteolisis pada perlakuan

superoulasi.

Salah satu sediaan P3S di pasaran adalah 6olligon93 &*nteret *nt., +.H., +o@meer,

olland'. Dosis P3S yang dianjurkan adalah 1.$-$. *A *A yang diinjeksikan se(ara

intramuskuler. Antuk membantu proses oulasi dan men(egah terjadinya folikel anoulasi

kadang-kadang perlu diberi h0 dengan dosis ".-$. *A pada saat inseminasi.

P3S merupakan suatu glikoprotein kompleks yang mempunyai aktiitas seperti 6S dan

/. Pada sapi, P3S mempunyai daya kerja yang sangat panjang, waktu paruhnya !-$ hari,

1


20/49

sedangkan residunya tetap dalam sirkulasi darah hewan sampai 1 hari. P3S bekerja

dengan kemampuannya men(egah atau menghambat proses atresi folikel.

Pemakaian hormon P3S untuk tujuan superoulasi lebih banyak digunakan karena

harganya relatif lebih murah serta lebih mudah didapat, meskipun respon yang dihasilkannya

tergolong rendah dibanding 6S. 8endahnya respon superoulasi dengan P3S mungkin

berhubungan dengan panjangnya masa sirkulasinya yang menghasilkan perkembangan folikel

yang berlebihan, nimphomania &berahi yang terus-menerus', dan kegagalan oulasi. 6olikel

yang gagal mengalami oulasi ini akan meningkatkan sekresi estrogen. Sekresi estrogen yang

tinggi mempunyai efek yang merugikan terhadap perkembangan embrio. Pada sapi,

pemberian antibodi monoklonal terhadap P3S &anti-P3S' akan menurunkan kadar estrogen karena adanya netralisasi terhadap P3S. Penurunan kadar estrogen ini akan diikuti

dengan peningkatan laju oulasi dan kualitas embrio.

Suntikan tunggal hormon P3S dengan dosis 1.$ - $. *A se(ara intramuskuler

merupakan (ara klasik untuk induksi superoulasi pada sapi. ormon ini dapat diberikan

tunggal atau dikombinasi dengan pemberian h0. >aktu penyuntikan P3S maupun 6S

adalah hari ke aktu Perlakuan 1

P3S B h0

Perlakuan !

P3S B anti P3S

1 Pagi ". *A P3S ". *A P3SSore

11 Pagi

Sore

1! Pagi P P

Sore

1" Pagi

Sore

1# Pagi *+ B ". *A h0 *+ B =eutra P3S

Sore *+ *+

1$ Pagi *+ *+Sore

!


21/49

14 Pagi

Sore

9eknik Superoulasi dengan 6S & &ollicle Stim$latin% Hormone'

3etode superoulasi kedua adalah dengan injeksi se(ara subkutan atau intramuskulus 6S

dengan interal hari. Pemberian se(ara intramuskulus lebih tepat digunakan pada kondisi

lapangan. Seperti halnya dengan perlakauan P3S, P6 ! alpha diberikan #-2! jam setelah

inisiasi perlakuan yakni pada perlakuan 6S ke-$, ke-4 atau ke-2. Perlakuan umum dengan

6S adalah dengan interal hari. Pemberian 6S multipel & kali' akan membutuhkan

biaya ekstra dan juga juga menimbulkan stres yang berlebihan pada hewan donor yang akan

menganggu respon superoulasinya. Sekarang telah ditemukan (ara pemberian 6S dosis

tunggal dengan pelarut 1 m/ PHP &polyinylpyrolidone' dengan penyuntikan intramuskuler

atau subkutan.

+ila dibandingkan dengan penggunaan P3S, respon oarium terhadap hormon 6S

biasanya lebih baik karena lebih banyak menghasilkan oulasi, jumlah folikel anoulasi lebih

sedikit, lebih banyak embrio yang dapat diperoleh, dan kualitas embrio lebih baik.

)elemahan dari 6S adalah dapat sukar diperoleh di pasar domestik, harganya relatif mahal,

dan pemberiannya harus berulang-ulang sehingga mengakibatkan stres dan menurunkan

kualitas embrio. Se(ara umum, penggunaan 6S lebih disukai dibanding P3S karena

menghasilkan oulasi lebih banyak oulasi, jumlah folikel anoulasi lebih sedikit, lebih

banyak embrio yang diperoleh, dan kualitas embrio yang dihasilkan lebih baik. 0ara klasik

perlakuan 6S, karena waktu paruhnya pendek adalah dengan dosis multipel, diberikan

selama # hari berturut-turut, pagi dan sore, dengan dosis menurun se(ara intramuskuler.

Antuk sapi perah dengan berat badan #-$ kg digunakan dosis 4-4, $-$, #-#, dan "-" mg.

Sedang untuk sapi potong digunakan dosis $-$, #-#, "-", dan !-! mg. Antuk sapi dengan berat badan kg digunakan dosis yang lebih tinggi pada ! hari pertama, sedang ! hari

berikutnya diberikan dosis $ mg.

Antuk superoulasi sapi-sapi dengan siste oarium atau sapi prepubertas, implan syn(hromate

+ &norgestomet, 0*D8, atau P8*D' diberikan pada hari ke-1-1! siklus estrus dan diangkat

pada hari ke-1-!. ormon 6S atau P3S dimulai hari ke-! dan pertengahan hari ke-"

sebelum implant diangkat. Sistem ini se(ara umum tidak digunakan pada donor normal

karena waktu dan biaya. 6aktor-faktor lain yang dipertimbangkan untuk men(apai hasil

!1


22/49

optimal superoulasi adalah pengulangan perlakuan. Pengulangan perlakuan dengan interal

1$-! hari menghasilkan keberhasilan yang rendah. Direkomendasikan interal pengulangan

adalah #$-4 hari. Protokol perlakuan superoulasi dengan 6S dapat dilihat pada 9abel $.!a

dan $!b.

9abel $.!a. Perlakuan superoulasi pada sapi donor dengan 6S dengan pelarut akuabidesari

siklus

>aktu Perlakuan 1

Dosis multipel 6S

Perlakuan !

Dosis multipel 6S

1 Pagi $ mg $ mg

Sore $ mg $ mg

11 Pagi # mg " mg

Sore # mg " mg

1! Pagi " mg B P ! mg B P

Sore " mg ! mg

1" Pagi ! mg

Sore ! mg1# Pagi *+ *+

Sore *+ *+

1$ Pagi *+ *+

Sore

14 Pagi

Sore

9abel $.!b Perlakuan superoulasi pada sapi donor dengan 6S dengan pelarut PHP

ari

siklus

>aktu Perlakuan 1

Dosis multipel 6S

Perlakuan !

Dosis tunggal 6S1 Pagi 1 mg " mg

Sore

11 Pagi 1 mg

Sore

1! Pagi 1 mg B P P

Sore

1" Pagi

Sore

1# Pagi *+ *+

Sore *+ *+1$ Pagi *+ *+

!!


23/49

Sore

14 Pagi

Sore

SINKRONISASI ESTRUS DONOR DAN RESIPIENSinkronisasi estrus saat menjelang proses superoulasi diperlukan untuk menyamakan waktu

oulasi masing-masing folikel hasil perlakuan superoulasi, di samping juga untuk

menyamakan stadium estrus antara hewan donor dan resipien pada kasus penggunaan embrio

segar untuk transfer embrio. Protokol $.1, $.!a dan $.!b di atas khusus ditujukan pada

superoulasi hewan donor dengan kondisi embrio akan dibekukan. Pada kondisi embrio segar

&tanpa pembekuan' maka hewan donor dan resipien harus mempunyai stadium siklus yang

sama agar keberhasilan proses transfer embrio ter(apai. Preparat yang digunakan untuk

sinkronisasi adalah prostaglandin 6! alpha atau senyawa analognya. Dosisnya adalah dosis

luteolitik bila disuntikkan se(ara intramuskuler atau Q dari dosis luteolitik bila disuntikkan

se(ara intrauterin atau intraulasubmukosal. +iasanya berahi pada donor setelah pemberian

prostaglandin akan terjadi dalam waktu B # jam kemudian.

Protokol superoulasi &donor' dan sinkronisasi seperti dapat dilihat di bawah ini:

ari 1 :

*njeksi donor dengan P6! alpha

ari # :

• Sebagian donor akan estrus. Donor yang tidak estrus disebabkan

kemungkinan donor berada pada fase folikuler atau awal luteal siklus

estrus

• *njeksi seluruh resipien dengan P6! alpha

ari 2 :

Sebagian resipien estrus, sedang sebagian lagi tidak. lasan sama seperti

hewan donor.

ari 1#-12 :

*njeksi donor dengan 6S ! kali sehari atau dengan P3S tunggal pada hari

ke-1#.ari 14 :

*njeksi seluruh resipien dengan P6! alpha kedua

ari 12 :

*njeksi donor dengan P6 ! alpha kedua yang juga merupakan hari terakhir

pemberian 6S

ari 1< :

Donor dan resipien estrus.

Pada pemberian P6! alpha kedua, terlihat bahwa terdapat perbedaan sekitar 1 hari waktu

pemberian antara donor dan resipien &resipien lebih awal 1 hari'. al ini dilakukan karena

!"


24/49

pada hewan donor yang mendapat perlakuan dengan hormon gonadotrophin, estrus akan

terjadi lebih (epat yakni sekitar # jam setelah perlakuan sedang pada hewan resipien yang

tidak mendapat perlakuan dengan gonadotrophin estrus akan terjadi sekitar 2! jam kemudian.

ambar $.1 6otograf oarium yang disuperoulasi selama prosedur koleksi embrio se(ara

s$r%ical

INSEMINASI

Setelah perlakuan superoulasi, donor harus dobserasi se(ara ketat terhadap gejala-gejala

estrus. Sapi-sapi yang disuperoulasi kadang-kadang tidak memperlihatkan tingkah laku

estrus sejelas sapi yang tidak mendapat perlakuan, sehingga deteksi estrus membutuhkan

bantuan seperti indikator )a3ar, tailpaint, dll. Sekitar 1N donor tidak pernah

memperlihatkan gejala estrus. ewan-hewan tersebut tidak dikawinkan.

>aktu ketika donor pertama kali standing estrus merupakan titik penting untuk perlakuan

inseminasi. )arena oum dioulasikan pada akhir periode dan karena transportasi sperma dan

oum dirubah oleh perlakuan superoulasi, maka dianjurkan mengawinkan sapi lebih sering

dan menggunakan lebih banyak semen normal. Semen segar lebih superior dibanding semen

beku karena semen yang tidak dibekukan kemungkinan tetap mempunyai iabilitas yang lebih

lama dalam saluran reproduksi betina.

*nseminator harus melakukan inseminasi dengan tenang dan menggunakan teknik yang paling

bersih karena stres perlakuan superoulasi membuat saluran reproduksi sapi lebih sensitif.

3anipulasi yang berlebihan pada saluran reproduksi akan menyebabkan gangguan

pengangkutan oum oleh fimbriae. *nfeksi yang terjadi pada saat inseminasi akan mengurangi

!#


25/49

angka fertilisasi dan angka perolehan embrio. Sebagai tambahan, waktu inseminasi pertama

kali, beberapa folikel mungkin belum oulasi oleh karena itu, manipulasi harus dilakukan

sedikit mungkin untuk men(egah folikel ruptur.

REO!ER" !KOLEKSI" EMBRIO

wal tahun 1


26/49

dapat dibuat. Sebagai (ontoh, flushing donor dengan respon superoulasi yang jelek maka

dipertimbangkan untuk membatalkan pelaksanaan koleksi. Altrasonography memberikan

informasi yang akurat dibanding palpasi, tetapi peralatannya mahal sehingga hanya dilakukan

pada leel penelitian atau proram transfer embrio dalam skala besar.

Prosedur re(oery non surgi(al melibatkan manipulasi per rektum. )arena anestesi epidural,

rektum dapat menggembung dan dengan mudah dimasuki udara pada saat tangan masuk-

keluar. ;ika ini terjadi, maka akan sangat sulit bekerja se(ara efektif. Adara dapat dikeluarkan

dari rektum dengan tabung ke(il yang dilekatkan dengan Rwet a( a(uum (leaner seperti

yang terlihat pada ambar $.!.

ambar $.! Pompa akum untuk eakuasi udara dari rektum

%pidural nesthesia

Setelah donor ditempatkan dalam nostal, anestesi kauda epidural dilakukan dengan injeksi $-

1 m/ analgesik &!N pro(aine atau ligno(aine hydro(hloride' ke dalam ruang di antara

(o((ygeal ertebrae satu dan dua &ambar $."'. Penyuntikan dilakukan dalam dosis yang

tidak terlalu besar. )etika anestesi sudah efektif, rektum segera dikosongkan. Hula di(u(i,

pertama dengan antiseptik kulit dan kemudian dengan surgi(al spirit, dan terakhir dikeringkan

&ambar $.#'. )esalahan anestesi sering terjadi karena kelebihan anestesi atau anestesi

dilakukan terlalu jauh ke depan yang mengakibatkan sapi kehilangan kontrol dan jatuh di

dalam nostal. nestesi epidural yang baik dapat dimonitor melalui flasiditas ekor.

!4


27/49

ambar $." Posisi anestesi epidural

ambar $.# &' 3enggosok area ula dengan sabun iodium

&+' sisten membuka se(ara perlahan labia ula untuk menghindari

kontaminasi (eri(al e@pander atau kateter koleksi

Dilatasi Seriks pada Sapi Dara

Satu problem yang ditemukan pada recovery non s$r%ical adalah saat melewatkan kateter

melalui seriks selama fase luteal siklus estrus, khususnya pada sapi dara. Dilatasi mekanis

sederhana dengan menggunakan metal cervical e'ander &ambar $.$' mungkin akan

memberikan resiko trauma. Dengan alasan ini, terdapat beberapa perlakuan untuk dilatasi

seriks atau aplikasi beberapa agen. Dalam beberapa laporan, dilatasi seriks dilakukan

dengan menggunakan (arba(hol. 3etode ini dilaporkan lebih efektif, mudah diberikan dan

relatif tidak mahal.

!2


28/49

ambar $.$ Ajung cervical e'ander

9eknik &l$shin% %mbrio

+eberapa pertimbangan dalam fl$shin% donor meliputi:

• 0airan fl$shin% harus men(apai ujung kornua uterus. Pada lokasi ini embrio banyak

ditemukan 1 minggu setelah estrus.

• Seluruh (airan fl$shin% yang dimasukkan ke dalam kornua harus dapat dikoleksi

kembali.

• &l$shin% harus dilakukan dalam kondisi stres dan trauma minimum.

&l$shin% dikatakan efektif jika


29/49

ambar $.4 (wo-way &oley catheters dengan atau tanpa balon

Dilator dan kateter ditutup dengan pembungkus bersih sebelum diintroduksi ke dalam agina.

Pelindung protektif ini dikoyak sesaat sebelum instrumen masuk ke dalam os seriks. +ibir

ula dikuakkan lagi dan penutup kateter 6oley dengan stilet, diinsersi ke dalam agina dan

masuk ke dalam lumen seriks. lat ini kemudian dimanipulasi ke dalam kornua tertentu

sampai balon dipompa pada dasar kornua &ambar $.2'. +alon perlahan-lahan diisi dengan

1$T!$ udara pada sapi5kerbau dewasa dan 1T1$ ml udara pada sapi dara.

!


30/49

"


31/49

ambar $.2 Posisi 6oley (atheter pada flushing kornua uteri

Setelah kateter dalam posisinya, stilet dikeluarkan dan kateter dihubungkan melalui U-

)$nction oleh tabung steril pada suatu botol berukuran 1 ml yang berisi (airan fl$shin% .

/engan lain dari U- )$nction dihubungkan pada tabung kosong. liran medium dalam kedua

tabung dikontrol oleh *$ick-release clams. )etika tabung o$tlet ditutup, maka (airan

fl$shin% akan masuk ke uterus melalui aliran graitasi dari botol yang berada 1 meter di atasuterus. )etika aliran masuk berhenti, jepitan o$tlet dibuka maka (airan akan masuk se(ara

langsung melalui filter embrio &berukuran pori-pori 2$-V'.

Pada hewan yang lebih tua dengan saluran reproduksi panjang tergantung, manipulasi seriks

dan uterus difasilitasi melalui penarikan seriks ke dalam agina dengan (eri(al forces.

Pada hewan yang mengalami superoulasi, prosedur fl$shin% diulang pada kornua lainnya

menggunakan kateter steril lain.

Pengisian (airan flushing ke dalam uterus berjumlah kira-kira sampai uterus men(apai besar

seperti pada hari ke-# kebuntingan. Satu liter (airan digunakan per donor. +eberapa operator

mengunakan olume yang lebih ke(il dan melakukan flushing pada satu kornua. 3asing-

masing uterus diisi dan dikosongkan $-1 kali dengan "-! ml (airan flushing.

*solasi %mbrio

0airan uterus biasanya dikoleksi dalam tabung silinder bertingkat atau melalui filter 2$-V

&ambar $.'. )etika silinder digunakan, (airan fl$shin% disedimentasikan selama !$ menit.

"1


32/49

)ebanyakan embrio normal diperoleh pada bagian bawah silinder. 3asing-masing silinder

di(u(i setidaknya ! kali dengan ! ml medium untuk memperoleh embrio yag tertahan.

Dengan metode filtrasi embrio, (airan melewati unit filter dan memungkinkan untuk keluar

melalui tabung pendek. Antuk menghindari dehidrasi, setidaknya 1 (m (airan medium harus

tinggal di dalam filter untuk melindungi filter dimana embrio tinggal. Antuk melindungi

embrio dari filter, satu putaran filter diisi dan tuangkan isinya ke dalam dish, dan kemudian

se(ara (epat filter di(u(i.

3etode filter dipertimbangkan lebih (epat daripada metode silinder, meskipun dalam $N

kasus pada donor, filter tersumbat oleh mu(us sehingga filter kedua harus digunakan, dan

keduanya harus di(u(i untuk recovery embrio. 3etode filter dari segi ekonomi lebih mahal

dibanding metode silinder.

"!


33/49

ambar $. 3etode filtrasi untuk

isolasi embrio dari (airan fl$shin% .

Anit filter embrio &', jaring lubang

dimana embrio tertahan &+', dan

penyu(ian filter untuk recovery embrio

&0'

0airan fl$shin% harus diuji se(ara sistematis dengan pembesaran 1T1#I untuk menempatkan

embrio. %mbrio harus ditransfer pada medium segar sesegera mungkin setelah ditemukan, dan

di(u(i sedikitnya pada tiga medium yang berbeda.

Koleksi Embrio se%ara Surgi%al

9eknik koleksi awal melibatkan pemotongan betina dan penyayatan oidu(t, atau se(ara

surgi(al mengangkat oidu(t dari betina hidup sekitar 2! jam setelah oulasi sehingga embrio

daat dikoleksi melalui flushing. 3etode ini dilakukan melalui laparotomi &insisi daerah flank

atau midline abdominal' untuk membuka saluran reproduksi. Suatu penjepit atau ibu jari dan

jari telunjuk dapat digunakan untuk memblokade 15" distal kornua uterus, sehingga (airan

injeksi ke dalam segmen dapat dipaksa melalui oidu(t dan dikoleksi pada infundibulum.

Prosedur lain adalah menutup kornua uterus pada badan uterus. 3edium kultur diintroduksi

melalui penyayatan pada uterotubal jun(tion atau melalui oidu(t sampai uterus

membengkak. Aterus kemudian disayat dengan suatu needle tumpul yang dilekatkan pada

kateter fleksibel. 9ekanan akan menyebabkan medium menyembur melalui kateter, dengan

turbulensi yang (ukup untuk membawa embrio ke dalam tabung koleksi. Prosedur tersebut

memungkinkan koleksi dengan persentase embrio yang tinggi. )eterbatasan metode ini

adalah timbulnya trauma pembedahan dan menghasilkan adhesi sehingga sapi donor hanya

dapat digunakan beberapa kali saja. Seekor donor biasanya hanya bisa digunakan maksimal "kali.

""


34/49


35/49

ambar $.1 Perbedaan lokasi stadium perkembangan embrio sapi pada saluran reproduksi

Selama stadium morula, embrio berubah bentuk dari spheri(al menjadi poligonal. 6enomena

ini dikenal dengan istilah (ompa(tion. Selama (ompa(tion, terbentuk hubungan antar sel

sehingga sel-sel dapat berkomunikasi dengan sel lainnya. 3orula kompak dikenal dengan

istilah ti%ht morula. 3orula kompak lebih ke(il daripada embrio pre-(ompa(ted. Comaction

adalah penanda yang baik bahwa embrio se(ara normal sedang berkembangL ketiadaan

(ompa(tion pada hari ke-4 setelah estrus mengindikasikan hambatan perkembangan.

)etika morula berkembang menjadi blastosis, dia membentuk (aum &rongga' yang disebut

blasto(oele. Oleh karena itu, pembentukan blastosis juga megindikasikan perkembangan

embrio yang normal. Sebaliknya, ketiadaan pembentukan blasto(oele pada hari ke-2- setelah

estrus pada sapi menandakan perkembangan embrio yang terhambat.

"$


36/49

ambar $.11 Diagram embrio sapi normal

Cona pellu(ida &CP' adalah kapsul seperti gelatin yang mengelilingi oosit dan embrio awal.Cona pellu(ida berfungsi sebagai reseptor untuk sperma dan akan menjadi inaktif setelah

fertilisasi, menjaga sel-sel embrio re-comaction, melindungsi sel-sel muda dari sistem imun

dan pathogen lainnya. ;ika CP diangkat dari embrio re-comaction sel-sel menjadi terpisah

setelah transfer embrio dan kemudian mengalami degenerasi. )etika blasto(oele menjadi

besar, embrio memanjang &se(ara normal, -< hari setelah estrus' dikenal sebagai stadium

blastosis e@panded. Setelah satu hari atau lebih, perpanjangan menjadi begitu besar sehingga

embrio hatches o$t dari CP. Proses ini mungkin dibantu oleh enMim. Hatched blastocysts

menjadi berbentuk elips 11-1" hari setelah estrus, dan kemudian memanjang se(ara men(olok

pada ke-1#T14 pas(a estrus. Pada hari ke- 12T1< embrio (ukup panjang untuk men(apai

ujung kedua kornua uterus.

"4


37/49

ambar 1!. &' Oosit dengan sel-sel folikel &+' Oosit setelah sel-sel folikel diangkat &0'

%mbrio 1-sel yang diperoleh $ hari setelah estrus. &D' Oum yang tidak

difertilisasi yang diperoleh " hari setelah estrus.

%mbrio yang dikoleksi 4 hari pas(a estrus harus berada pada post-(ompa(tion atau disebut

tight morulae. %mbrio ini mempunyai $T sel. 3eskipun tidak mungkin menghitung

jumlah sel-sel se(ara akurat pada embrio post-(ompa(tion tanpa merusak embrio, sangat

berguna untuk mengestimasi jumlah sel-sel. %mbrio harus berbentuk spheris atau oal,

warnanya tidak terlalu gelap dan tidak terlalu terang, dan mempunya sel-sel dengan ukuran

yang seragam. Penyimpangan dari bentuk normal meliputi sel-sel dengan ukuran irregular,

akuola di dalam sel besar, area degenerasi di dalam embrio, beberapa sel tidak kompak, dan

Mona pellu(ida rusak. Setidaknya !T"N embrio yang baik mempunyai beberapa morfologi

yang dapat dideteksi abnormal seperti keluarnya blastomer. )ebanyakan abnormalitas

tersebut adalah penanda penurunan kualitas. ;ika sebagian embrio terlihat mengalami

degenerasi, tetapi sebagian besar normal, embrio ini mempunyai kesempatan yang baik

"2


38/49

berkembang menjadi fetus normal. %mbrio dengan morfologi abnormal tidak akan

menghasilkan anak yang normal.

ambar $.1" &' oosit yang tidak difertilisasi $ hari setelah estrus. &+' Oum yang sama

seperti &' &0' Sobek, Mona pellu(ida tidak ada, diperoleh $ hari pas(a estrus

&D' Oosit anfertilisasi yang diperoleh 4 hari pas(a estrus

"


39/49

ambar $.1# &' Degenerasi, oum yang tidak difertilisasi yang diperoleh $ hari pas(a estrus

&+' Oum yang tidak difertilisasi dengan ! fragmen sitoplasma &0' Oum

fragmentasi, mirip oum yang tidak difertilisasi yang diperoleh $ hari pas(aestrus &D' Oum desintegrasi

ambar $.1$ &' %mbrio ! sel normal yang diperoleh sekitar hari ke-# pas(a estrus &+'

%mbrio ! sel yang mengalami degenerasi yang diperoleh $ hari pas(a estrus &0'

"


40/49

%mbrio # sel normal yang diperoleh ! hari pas(a estrus &D' embrio ! sel yang

diperoleh$ hari pas(a estrus. Sitoplasma tidak jelas.

Pada hari ke-2 embrio harus berada pada fase awal blastosis. )ehadiran (aum blasto(oeli(

adalah penanda yang baik pada fase ini. Pada hari ke- embrio harus mempunyai suatu

blasto(oele yang besar dan meluas, seperti diameter harus meningkat sehingga CP menipis.

Satu hal yang dapat dibuat pembeda adalah terdapatnya inner (ell mass.

ambar $.14 &' %mbrio sel yang diperoleh " hari pas(a estrus &+' %mbrio yang sama

seperti &' &0' %mbrio 1!-1# sel yang diperoleh # hari pas(a estrus &D'

angguan pertumbuhan pada embrio 1!-1# sel yang diperoleh 4 hari pas(a

estrus.

#


41/49

ambar $.12 &' 3orula tidak kompak yang diperoleh " hari setelah estrus &+' 3orula tidak

kompak yang diperoleh " hari setelah estrusL sitoplasma gelap &0' angguan

pertumbuhan dan degenerasi embrio yang diperoleh 4 hari pas(a estrus &D'

angguan pertumbuhan embrio yang diperoleh 2 hari pas(a estrus

#1


42/49

ambar $.1 &' 3orula kompak yang diperoleh 2 hari pas(a estrus &+' 3orula kompak

yang diperoleh 2 hari pas(a estrus dengan beberapa sel menonjol &0' 3orula

kompak yang diperoleh 2 hari pas(a estrus dengan beberapa pembesaran, sel-sel menonjol, kualitas morfologi sedang &D' 3orula kualitas buruk dengan

beberapa sel-sel degenerasi.

#!


43/49

ambar $.1< &' dan &+' =ormal, e@panded blasto(yst yang diperoleh 2 hari pas(a estrus &0'

=ormal, e@panded blasto(yst yang diperoleh 2-2 hari pas(a estrus &D'

at(hing blasto(yst yang ditemukan < hari pas(a estrus

ambar $.! &' 3orula kompak dengan kualitas baik dengan beberapa sel-sel degenerasi

yang diperoleh 4-4 hari pas(a estrus. &+' Oum yang tidak difertilisasi yang

#"


44/49

diperoleh 2 hari pas(a estrus &0' dan &D' Degenerasi, kemungkinan oum yang

tidak difertilisasi.

ambar $.!1&' 3orula kompak dengan kualitas baik dengan beberapa sel-sel degenerasi

&atas kanan' yang diperoleh 4 hari pas(a estrus. &+' Oum yang tidak

difertilisasi yang dapat dikelirukan dengan morula &0' +lastosis normal yang

diperoleh 2-2 pas(a estrus &D' Oum yang tidak difertilisasi dengan esikula

besar yang diperoleh $ hari pas(a estrus

##


45/49

9abel $." Stadium perkembangan embrio normal

Stadium perkembangan ari setelah onset estrus

1-(ell T!

!-(ell 1T"

#-(ell !T"

-(ell "T$W

14-(ell #T$W

%arly morula $T4

9ight morula $T2

%arly blasto(yst 2T

+lasto(yst 2T<

%@panded blasto(yst T1

at(hing blasto(yst


46/49

6air #! "1 b

Poor #! 1!(

a, b, ( ngka kebuntingan dengan signifikansi PX,$.

• +'cellent &Sempurna': embrio sempurna sesuai dengan umurnya

• Good &+aik': sedikit kurang sempurna seperti Mona pellu(ida oal, beberapa sel

menonjol atau bentuk sedikit asimetri.

• &air &Sedang': bnormalitas tidak berat seperti jumlah sel-sel yang menonjol

sedang, ukuran ke(il, sejumlah ke(il degenerasi aau hambatan perkembangan

men(apai 1 hari.

• Poor &+uruk': Degenerasi, ariasi ukuran sel besar, tidak kompak, sangat ke(il

dan5atau terhambat ! hari perkembangan.

• Degenerasi: degenerasi berat dan tidak dapat ditransfer.

• 9idak mengalami fertlisasi atau !-" sel.

TRANSFER EMBRIO

Pada sapi, embrio se(ara rutin ditransferkan ke dalam kornua uterus. al ini dikarenakan

seluruh embrio dikoleksi se(ara non s$r%ical dari uterus, dan oleh karena itu dikembalikan

pada tempat tersebut. Pertimbangan selanjutnya adalah lebih mudah mentransfer embrio ke

dalam uterus dibanding oidu(t.

3etode untuk transfer dapat dilakukan baik dengan metode s$r%ical maupun non- s$r%ical .

9ransfer dengan metode non s$r%ical lebih disukai meskipun transfer dengan metode s$r%ical

dapat dilakukan dengan lebih (epat.

Trans&er Surgi%al

3eskipun ribuan embrio telah ditransfer ia insisi mid-line abdominal pada sapi di bawah

kontrol anestesi umum, pada banyak kondisi, insisi flank adalah lebih praktis. 8esipien

ditempatkan dalam kandang jepit. /okasi 0/ ditentukan melalui palpasi rektal dan flank

ipsilateral terhadap 0/ dijepit, di(u(i dengan sabun dan air, dan disterilisasi dengan iodium

atau alkohol. Sekitar 4 ml prokain !N diberikan sepanjang garis insisi. Dalam prakteknya,

metode ini lebih baik dibanding menggunakan blokade paraertebral. Penyayatan dilakukan

dengan panjang sekitar 1$ (m, di atas, dekat anterior pinggul. /apisan muskulus dipisahkan,

#4


47/49

dan peritonium dipotong. 3asukkan tangan dan lengan bawah ke dalam sayatan, tentukan

oarium, biasanya sekitar !$ (m dari posterior insisi, dan isualisasi atau papasi 0/. )ornua

uterus dieksteriorisasi dengan menggenggam dengan ibu jari dan telunjuk pada ligamen

uterus, yang terletak di medial kornua uterus. )ornua uterus sangat kaku. 9usukan dibuat

dengan jarum tumpul melalui dinding sepertiga kranial. Seorang asisten, menggunakan

medium ,1 ml dalam pipet ka(a ke(il &diameter sisi luar X1.$ mm', menarik ke atas embrio

dari kontainer penyimpanan. Pipet kemudian diinsersikan ke dalam lumen uterus, dan embrio

dikeluarkan. *nsisi kemudian ditutp, menggunakan dua lapisan jahitan. Se(ara praktis, metode

ini dapat dilakukan sekitar 1$ menit.

Trans&er #on$Surgi%al

Problem besar dengan transfer non-surgi(al adalah kesukaran dalam men(apai keahlian dalam

teknik ini. Pertama, adalah penting untuk mampu melakukan palpasi oarium se(ara akurat

untuk seleksi sisi oulasi. ngka kebuntingan nyata lebih rendah jika embrio ditransferkan

pada kornua kontralateral terhadap 0/. ;uga, resipien harus direjeksi jika tidak ada 0/ atau

patologi alat reprduksi. Seringkali palpator melakukan kesalahan pada palpasi 0/.

/angkah berikutnya adalah melewatkan alat transfer embrio melalui seriks. al ini akan sulit

selama fase luteal, waktu dimana embrio ditransferkan, dibanding saat estrus, waktu ketika

inseminasi buatan dilakukan dan seriks dalam keadaan lebih terbuka. Pada sapi dara akan

lebih sulit karena memiliki seriks yang ke(ilL beberapa breed sapi juga lebih sulit dibanding

breed lain, seperti +os indi(us membutuhkan keahlian yang lebih besar. Pelatihan terbaik

sebelum melakukan transfer embrio non-surgi(al adalah pengalaman dalam inseminasi

buatan. *dealnya, teknisi untuk transfer embrio non surgi(al harus telah menginseminsi seratus

ekor sapi yang tedapat sejumlah besar sapi dara.

/angkah ketiga pada transfer embrio non-surgi(al adalah kemampuan menginsersi ujung

instrumen ke dalam kornua uterus se(ara (epat, lembut dan tidak menimbulkan trauma.

+eberapa orang tidak pernah mempunyai kemampuan yang tinggi dalam menguasai teknik

ini, sedang yang lain membutuhkan seratus kali transfer untuk menjadi terampil. al ini tidak

mengejutkan ketika angka kebuntingan hasil inseminasi biasanya lebih rendah pada $-1

ekor sapi pertama pada inseminator pemula dibanding inseminator yang telah terampil.

*nseminator yang telah terlatih baik membutuhkan 1T! transfer non-surgi(al untuk

men(apai angka kebuntingan yang ideal, yang lain biasanya membutuhkan lebih.

#2


48/49


49/49

Prosedur Trans&er

Proses transfer embrio sesungguhnya sama dengan metode inseminasi buatan, ke(uali gun

transfer dilewatkan men(apai kornua uterus ipsilateral 0/. )un(i keberhasilan pelaksanaan

adalah melewatkan gun tanpa merusak endometrium. Oleh karena itu, (ara terbaik adalah

menginsersi instrumen sedikit dalam dan tidak menyebabkan kerusakan. )e(epatan

dibutuhkan ketika seriks dilewati tetapi pada saat yang sama teknisi harus tenang. )arena

sapi akan (enderung bergerak sekitar nostal, terdapat sedikit peluang kerusakan jaringan jika

prosedur dilakukan se(ara (epat.

sinkronisasi dan te

Documents