sensitivitas dan spesifisitas elisa

7/25/2019 Sensitivitas Dan Spesifisitas ELISA

1/5

1.2 Identifikasi dan Rumusan Masalah

1.2.1 Identifikasi Masalah

Perbandingan sensitivitas dan spesifisitas dengan metode carik celup terhadap

metode ELISA untuk mendeteksi virus EBV penyebab K!"

1.2.2 Rumusan Masalah

Bagaimanakah sensitivitas dan spesifisitas metode carik celup dan ELISA dalam

mendeteksi virus EBV#

1.3 Hipotesis

Sensitivitas dan spesifisitas ELISA lebih baik daripada metode carik celup

dalam mendeteksi virus EBV"

1.4 Pertanyaan Penelitian

$" Apa yang dimaksud dengan karsinoma nasofaring#

%" Bagaimana sensitivitas dan spesifisitas metode carik celup dalam mendeteksi

virus EBV#

&" Bagaimana sensitivitas dan spesifisitas metode ELISA dalam mendeteksi

virus EBV#

'" Bagaimana perbandingan sensitivitas dan spesifisitas metode carik celup dan

ELISA untuk mendeteksi virus EBV penyebab K!#


2/5

2.3 Metode ELIS

2.3.1 !efinisi

ELISA (En)yme*linked immunosorbent assay+ merupakan u,i serologis

yang umum digunakan di berbagai laboratorium imunologi" -,i ini memilikibeberapa keunggulan seperti teknik penger,aan yang relatif sederhana.

ekonomis. dan memiliki sensitivitas yang cukup tinggi" ELISA diperkenalkan

pada tahun $/0$ oleh Peter Perlmann dan Eva Engvall untuk menganalisis

adanya interaksi antigen dengan antibodi di dalam suatu sampel dengan

menggunakan en)im sebagai pelapor (reporter label+"

2.3.2 "enis

-mumnya ELISA dibedakan men,adi dua ,enis. yaitu competitive

assay yang menggunakan kon,ugat antigen1en)im atau kon,ugat antobodi1

en)im. dan non*competitive assay yang menggunakan dua antibodi" Pada

ELISA non*competitive assay. antibodi kedua akan dikon,ugasikan dengan

en)im sebagai indikator" 2eknik kedua ini seringkali disebut sebagai

3Sand4ich3 ELISA"

2.3.3 Prinsip !asar

Pertama antigen atau antibodi yang hendak diu,i ditempelkan pada

suatu permukaan yang berupa microtiter" Penempelan tersebut dapat dilakukan

melalui dua cara. yaitu penempelan secara non spesifik dengan adsorbs kepermukaan microtiter. dan penempelan secara spesifik dengan menggunakan

antibody atau antigen lain yang bersifat spesifik dengan antigen atau antibodi

yang diu,i (cara ini digunakan pada teknik ELISA sand4ich+" Selan,utnya

antibodi atau antigen spesifik yang telah ditautkan dengan suatu en)im

signal"5arus disesuaikan dengan sampel. bila sampel berupa antigen. maka

digunakan antibodi spesifik . sedangkan bila sampel berupa antibodi. maka

digunakan antigen spesifik" 6ampurkan ke atas permukaan tersebut. sehingga

dapat ter,adi interaksi antara antibodi dengan antigen yang bersesuaian"

Kemudian ke atas permukaan tersebut dicampurkan suatau substrat yang dapatbereaksi dengan en)im signal" Pada saat substrat tersebut dicampurkan ke

permukaan. en)im yang bertaut dengan antibodi atau antigen spesifik yang

berinteraksi dengan antibodi atau antigen sampel akan bereaksi dengan

substrat dan menimbulkan suatu signal yang dapat dideteksi" Pda ELISA

flourescense misalnya. en)im yang tertaut dengan antibodi atau antigen

spesifik akan bereaksi dengan substrat dan menimbulkan signal yang berupa

pendaran flourescense"


3/5

2.3.4 #ahapan

2.3.4.1 Indire$t ELIS

2ahap umum yang digunakan dalam indirect ELISA untukmendeterminasi konsentrasi antibodi dalam serum adalah7

$+ Suatu antigen yang sudah dikenal dan diketahui konsentrasinya

ditempelkan pada permukaan lubang plate mikrotiter" Antigen tersebut

akan menempel pada permukaan plastik dengan cara adsorpsi" Sampel

dari konsentrasi antigen yang diketahui ini akan menetapkan kurva

standar yang digunakan untuk mengkalkulasi konsentrasi antigen dari

suatu sampel yang akan diu,i"

%+ Suatu larutan pekat dari protein non*interacting. seperti bovine

serum albumin (BSA+ atau kasein. ditambahkan dalam semua lubang

plate mikrotiter" 2ahap ini dikenal sebagai blocking. karena proteinserum memblok adsorpsi non*spesifik dari protein lain ke plate"

&+ Lubang plate mikrotiter atau permukaan lain kemudian dilapisi

dengan sampel serum dari antigen yang tidak diketahui. dilarutkan

dalam buffer yang sama dengan yang digunakan untuk antigen standar"

Karena imobilisasi antigen dalam tahap ini ter,adi karena adsorpsi non*

spesifik. maka konsentrasi protein total harus sama dengan antigen

standar"

'+ Plate dicuci. dan antibodi pendeteksi yang spesifik untuk antigen

yang diu,i dimasukkan dalam lubang" Antibodi ini hanya akan

mengikat antigen terimobilisasi pada permukaan lubang. bukan pada

protein serum yang lain atau protein yang terbloking"

8+ Antibodi sekunder. yang akan mengikat sembarang antibodi

pendeteksi. ditambahkan dalam lubang" Antibodi sekunder ini akan

berkon,ugasi men,adi en)im dengan substrat spesifik" 2ahap ini bisa

dile4ati ,ika antibodi pendeteksi berkon,ugasi dengan en)im"

9+ Plate dicuci untuk membuang kelebihan kon,ugat en)im*antibodi

yang tidak terikat"

0+ :imasukkan substrat yang akan diubah oleh en)im untuk

mendapatkan sinyal kromogenik; fluorogenik; elektrokimia"


4/5

$+ :isiapkan permukaan untuk mengikatkan antibodi =penangkap>"

%+ Semua non spesifik binding sites pada permukaan diblokir"

&+ Sampel berisi antigen dimasukkan dalam plate"

'+ Plate dicuci untuk membuang kelebihan antigen yang tidak terikat

8+ Antibodi primer ditambahkan. supaya berikatan secara spesifik

dengan antigen"9+ Antibodi sekunder yang berikatan dengan en)im dimasukkan. yang

akan berikatan dengan antibodi primer"

0+ Plate dicuci. sehingga kon,ugat antibodi*en)im yang tidak terikat

dapat dibuang"


5/5

4aktu pembentukan antibodi terhadap suatu virus baru dimulai sehingga

,umlah antibodi tersebut masih sedikit dan kemungkinan tidak dapat

terdeteksi"

sensitivitas dan spesifisitas elisa

Documents