OLEH :HADI PRAWIROEKO WIBOWOHERDIANTO

DIONO SAPUTROAHYAR

DEDENG RASMIN NART A.NDINDING

JURUSAN KIMIAFAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS HALUOLEOKENDARI

2013

Tugas Bioteknologi

PELABELAN RADIOISOTOP

PELABELAN RADIOISOTOP

Pembentukan fragmen-fragmen DNA untai tunggal dengan berbagai ukuran

melalui proses PCR

Pemisahan fragmen-fragmen DNA dengan gel elektroforesis

poliakrilamida

Pembacaan hasil elektroforesis

ELEKTROFORESIS Suatu proses migrasi molekul bermuatandi dalam suatu media yang bermuatan listrik, dimana kecepatan migrasinya tergantung pada muatan, ukuran dan bentuk setiap molekul yang terlibat

Pada saat arus listrik diberikan, molekul bermigrasi melalui media (biasanya berupa gel), molekul yang kecil akan bermigrasi lebih cepat daripada yang besar, sehingga akan terjadi pemisahan

Apabila arus listrik dihentikan, fragmen DNA tadi telah terpisah-pisah di dalam gel tersebut dan yang berukuran lebih kecil akan berada lebih dekat pada ujung positifFragmen tersebut akan terlihat seperti bentuk barcode

PRINSIP DASAR ELEKTROFORESIS

Pembacaan hasil elektroforesis dapat dilakukan bila ada label pada fragmen-fragmen DNA yang

terbentuk.Label dapat berbentuk isotop

radioaktif atau fluoresen.Pelabelan dapat dilakukan terhadap

primer maupun pada ddNTP.

Pelabelan dengan

Radioisotop

Pelabelan dengan

Pewarnaan Fluoresen

Dye primer

Dye terminator

Pada awal perkembangan teknik DNA sekuensing, pelabelan fragmen DNA dilakukan dengan menggunakan radioisotop, seperti 32P. Komponen reaksi yang dilabel adalah primer atau ddNTP. Dengan menggunakan pelabelan radioisotop, reaksi pembentukan fragmen DNA harus dilakukan dalam empat tabung terpisah, masing-masing mengandung ddNTP yang berbeda. Keempat hasil reaksi sekuensing tersebut selanjutnya harus di-run di empat lajur yang berbeda pada elektroforesis gel poliakrilamid.

DYE PRIMERJika pewarnaan fluoresen dilakukan pada primer, reaksi pembentukan fragmen DNA harus dilakukan dalam empat tabung terpisah, masing-masing mengandung ddNTP yang berbeda dan primer yang dilabel dengan empat warna yang berbeda. Keempat hasil reaksi sekuensing tersebut selanjutnya di-run di satu lajur pada elektroforesis gel poliakrilamid.

DYE TERMINATORPelabelan fluoresen yang dilakukan pada ddNTP (dye terminator labeling) memberikan kemudahan karena reaksi sekuensing dapat dilakukan hanya dalam satu tabung, dan tentu saja di-run di satu lajur pada elektroforesis gel poliakrilamid.

Sebuah print out hasil sequencing