TRANSCRIPT
UJI SENSITIVITAS PERASAN DAUN CEREMAI (Phyllanthus acidus
L) TERHADAP PERTUMBUHAN Escherichia coli
Karya Tulis Ilmiah
Diajukan Untuk Melengkapi Tugas-tugas dan Memenuhi
Syarat-syarat Guna Dapat Memperoleh Gelar
Ahli Madya Analis Kesehatan
Oleh :
T.HAMDANI
713401D09091
PEMERINTAH ACEH
AKADEMI ANALIS KESEHATAN
BANDA ACEH
2012
ABSTRAK
Penelitian ini berjudul “Uji Sensitivitas Perasan Daun Ceremai (Phyllanthus acidus
(L) Terhadap Pertumbuhan Escherichia coli Metode Invitro” yang bertujuan
untuk mengetahui pengaruh perasan daun ceremai terhadap pertumbuhan Escherichia
coli. Penelitian ini di lakukan di laboratorium Mikrobiologi Akademi Analis Kesehatan
Banda Aceh mulai tanggal 21 sampai dengan 25 Mei 2012, sampel penelitian ini
adalah daun ceremai yang masih muda dengan konsentrasi 100%, 80%, 60%, 40% dan
20% dengan rancangan secara eksperimen dengan melakukan perlakuan percobaan
terhadap pengaruh pertumbuhan Escherichia coli dengan tiga kali pengulangan. Dari
hasil penelitian menunjukkan bahwa air perasan daun ceremai pada konsentrasi 100%
bersifat bakterisida sedangkan pada konsentrasi 80%, dan 60%, bersifat bakteriostatik
dan pada konsentrasi 40% dan 20% resisten terhadap Escherichia coli.
Kesimpulannya air perasan daun ceremai pada konsentrasi yang lebih pekat dapat
dijadikan obat untuk infeksi yang disebabkan oleh Escherichia coli.
Sumber bacaan : 19 buku dan 2 internet
Tahun : 1988-2010
i
KATA PENGANTAR
Puji syukur kehadirat Allah SWT, Penguasa alam dimana berkat rahmat dan
karunia NYA akhirnya Karya Tulis Ilmiah ini dengan judul “UJI SENSITIVITAS
PERASAN DAUN CEREMAI (Phyllanthus acidus (L) TERHADAP
PERTUMBUHAN Escherichia coli”dapat diselesaikan dengan baik.
Shalawat beriring salam penulis hantarkan kepangkuan alam Nabi Besar
Muhammad SAW yang telah mereformasikan dunia menjadi dunia yang penuh
dengan peradaban ini.
Karya Tulis Ilmiah ini diajukan untuk melengkapi tugas-tugas dan memenuhi
syarat-syarat guna dapat memperoleh gelar Ahli Madya Analis Kesehatan. Dalam
penulisan Karya Tulis Ilmiah ini masih banyak kekurangan, hal ini disebabkan
kesulitan dan hambatan, namun dengan adanya dorongan dan bantuan dari berbagai
pihak maka Karya Tulis Ilmiah ini dapat diselesaikan. Dalam kesempatan ini saya
ingin mengucapkan terima kasih yang sebesar-besarnya kepada :
1. Bapak Badlisyah, S.Ag, S.Pd, M.Pd, selaku Direktur Akademi Analis Kesehatan
Pemerintah Aceh.
2. Ibu Fitriana, M.Si, sebagai Pembimbing I dan Bapak Drs. H Syamsudin, M.Kes,
sebagai Pembimbing II, yang telah banyak meluangkan waktunya untuk
membimbing dan memberi pengarahan, perbaikan serta memberikan saran dan
petunjuk dalam menyelesaikan Karya Tulis Ilmiah ini.
3. Ibu Erlinawati, M.Kes, yang telah bersedia menjadi Dosen penguji I.
ii
4. Semua teman-teman seperjuangan yang telah banyak membantu dalam
memberikan motivasi dan dorongan sehingga terselesainya Karya Tulis Ilmiah
ini.
5. Teristimewa kepada Ibunda tercinta Cut Syaribanun yang telah memberikan
bantuan moril ataupun materil, sehingga Karya Tulis Ilmiah ini dapat
terselesaikan.
Penulis menyadari dengan sepenuhnya bahwa penulisan Karya Tulis Ilmiah
ini jauh dari kesempurnaan dikarenakan keterbatasan ilmu pengetahuan yang penulis
miliki, oleh karena itu penulis mengharapkan kritik dan saran yang bersifat
membangun dari semua pihak demi kesempurnaan Karya Tulis Ilmiah ini. Akhirnya
dengan segala kerendahan hati, penulis berharap semoga segala amal budi baik
dosen-dosen mendapatkan balasan yang setimpal dari Allah SWT.
Amin ya rabbal a`lamin.
Banda Aceh, Mei 2012
Penulis
iii
DAFTAR ISI
Halaman
ABSTRAK ...................................................................................................... i
KATA PENGANTAR .................................................................................... ii
DAFTAR ISI ................................................................................................... iv
DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................. vii
BAB I PENDAHULUAN ............................................................................... 1
A. Latar Belakang Masalah .................................................................. 1
B. Perumusan Masalah ......................................................................... 2
C. Hipotesis .......................................................................................... 3
D. Tujuan Penelitian ............................................................................. 3
E. Manfaat Penelitian ........................................................................... 3
BAB II TINJAUAN KEPUSTAKAAN ........................................................ 4
A. Tanaman ceremai (Phyllanthus acidus (L) ...................................... 4
1. Toksonomi ................................................................................ 4
2. Nama daerah daun ceremai ...................................................... 4
3. Morfologi .................................................................................. 5
4. Kandungan kimia...................................................................... 5
5. Kegunaan .................................................................................. 5
B. Bakteri ............................................................................................ 5
1. Pengertian bakteri ..................................................................... 5
C. Escherichia coli ............................................................................... 6
iv
D. Klasifikasi ....................................................................................... 7
Morfologi Escherichia coli ............................................................ 7
E. Sifat pertumbuhan ........................................................................... 7
F. Sifat dan ciri koloni ......................................................................... 8
G. Patogenitas dan Gejala Klinik ......................................................... 8
H. Dianogsis laboratorium ................................................................... 9
I. Pengobatan ..................................................................................... 9
J. Pencegahan ..................................................................................... 9
K. Variabel-variabel penelitian ............................................................ 10
L. Kerangka Konsep ........................................................................... 10
M. Definisi Operasional Variabel ......................................................... 10
BAB III METODOLOGI PENELITIAN .................................................... 12
A. Metode Penelitian ............................................................................ 12
B. Tempat dan Waktu Penelitian ......................................................... 12
C. Populasi dan Sampel ........................................................................ 12
D. Teknik Pengumpulan Data .............................................................. 13
E. Prosedur Kerja ................................................................................. 13
F. Pengolahan Data .............................................................................. 16
G. Analisa Data .................................................................................... 16
H. Penyajian Data ................................................................................. 16
v
BAB IV HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN .............................. 17
A. Hasil Penelitian ................................................................................ 17
B. Pembahasan ..................................................................................... 18
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ......................................................... 20
A. KESIMPULAN ............................................................................... 20
B. SARAN ............................................................................................ 20
DAFTAR PUSTAKA .................................................................................... 21
vi
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran I Daun ceremai (Phyllanthus acidus (L) .................................. 23
Lampiran II Skema Kerja ........................................................................... 25
Lampiran III Hasil Penelitian ...................................................................... 28
Lampiran IV Cara Pembuatan Media .......................................................... 30
Lampiran V Cara Kerja Alat ...................................................................... 33
Lampiran VI Rumus Pengenceran ............................................................... 36
Lampiran VII Test Katalase dan Oksidase .................................................... 37
Lampiran VIII Reaksi Biokimia Escherichia coli .......................................... 38
Lampiran IX Anggaran Biaya Penelitian ..................................................... 39
Lampiran X Jadwal Kegiatan Penelitian .................................................... 40
vii
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang Masalah
Penyakit infeksi merupakan salah satu masalah dalam bidang kesehatan yang
dari waktu ke waktu terus berkembang. Infeksi merupakan penyakit yang dapat di
tularkan dari satu orang ke orang lain atau dari hewan ke manusia. Infeksi
disebabkan oleh berbagai mikroorganisme seperti bakteri, virus, riketsia, jamur dan
protozoa (Shulman dkk,1994).
Escherichia coli merupakan flora normal di dalam intestin. Bakteri ini dapat
menyebabkan infeksi saluran kencing yang merupakan infeksi terbanyak (80%),
gastroenteritis dan meningitis pada bayi, peritonitis, infeksi luka, kolesistitis, syok
bakterimia karena masuknya organisme ke dalam darah dari uretra, kateterisasi atau
sitoskopi atau dari daerah sepsis pada abdomen atau pelvis (Gibson, 1996).
Dewasa ini penggunaan antibiotik sangat banyak terutama dalam pengobatan
yang berhubungan dengan infeksi. Walaupun telah banyak antibiotik ditemukan,
kenyataan menunjukkan bahwa masalah penyakit terus berkelanjutan. Hal tersebut
terjadi akibat pergeseran pada bakteri penyebab penyakit dan perkembangan
resistensi bakteri terhadap antibiotik. Karena berkembangnya populasi bakteri yang
resisten, maka antibiotik yang pernah efektif untuk mengobati penyakit-penyakit
tertentu kehilangan nilai kemoterapeutiknya (Pelczar dan Chan, 1988).
Di dunia ini banyak terdapat tanaman yang berguna sebagai obat-obatan dan
telah lama digunakan secara turun-temurun berdasarkan pengalaman, potensi
tanaman sebagai obat sebenarnya jauh lebih besar dari pada yang kita ketahui
1
sekarang, sehinga pencarian senyawa bioaktif dalam tanaman perlu digalakkan.
Salah satu tanaman yang dapat dimanfaatkan sebagai obat adalah tanaman
(Phyllanthus acidus L) lebih dikenal sebagai ceremai. Tumbuhan ini merupakan suku
Euphoorbiaceae, dibeberapa daerah di indonesia namanya berbeda-beda, Pohon ini
berasal dari india, dapat tumbuh pada tanah kekurangan sampai kelebihan air,
ceremai banyak ditanam orang dihalaman rumah, daun ceremai yang masih muda
bisa dimakan sebagai sayuran, buah muda bisa dimasak bersama sayuran untuk
menyedapkan masakan karena memberi rasa asam, buah yang sudah tua dapat
dimakan setelah diremas dengan garam untuk mengurangi rasa asam, dan dapat juga
dimakan setelah dibuat manisan atau selai. Tanaman ceremai diduga mempunyai
kandungan kimia yang aktivitasnya sebagai antibakteri. Kandungan - kandungan
yang terdapat dalam tanaman ini adalah polifenol, saponin, flavonoid dan tanin
(Hutapea, 1991). Kelompok-kelompok utama bahan kimia yang dapat memberikan
aktivitas antimikroba salah satunya adalah fenol dan turunan persenyawaan dari
fenol (Pelczar dan Chan, 1988).
B. Perumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang masalah dari uraian diatas, bahwa air perasan
daun ceremai (Phyllanthus acidus (L) mengandung polifenol dan mempunyai
aktivitas antibakteri. Maka peneliti ingin mengetahui apakah pengaruh perasan daun
ceremai (Phyllanthus acidus (L) dapat menghambat pertumbuhan Escherichia coli
secara invitro.
2
C. Hipotesis
Hipotesis nihil (Ho) : Perasan daun ceremai (Phyllanthus acidus (L) bukan
bersifat sebagai zat bakteriostatik terhadap Escherichia
coli secara invitro.
Hipotesis kerja (Hi) : Perasan daun ceremai (Phyllanthus acidus (L) bersifat
sebagai zat bakteriostatik terhadap Escherichia coli.
D. Tujuan Penelitian
1. Tujuan umum
Untuk mengetahui apakah air perasan daun ceremai (Phyllanthus acidus
(L) dapat bersifat bakteriostatik terhadap Escherichia coli.
2. Tujuan khusus
Untuk mengetahui pengaruh pertumbuhan Escherichia coli pada air
perasan daun ceremai ( phyllanthus acidus (L) dengan konsentrasi
100%,80%,60%,40%,dan20%.
E. Manfaat penelitian
1. Untuk memberi informasi kepada masyarakat tentang khasiat perasan daun
ceremai.
2. Dapat bermanfaat bagi masyarakat maupun untuk peneliti sendiri dalam
menambah ilmu serta aplikasi ilmu dilapangan.
3. Sebagai referensi untuk lingkungan Akademi Analis Kesehatan.
3
BAB II
TINJAUAN KEPUSTAKAAN
A. Tanaman ceremai (Phyllanthus acidus (L)
1. Toksonomi
Berdasarkan toksonomi Phyllanthus acidus (L) dapat diklasifikasikan sebagai
berikut:
Kingdom : Spermathophyta
Divisio : Angiospermae
Class : Dicotyledoneae
Ordo : Euphorbiales
Family : Euphorbiaceae
Genus : Phyllanthus
Spesies : Phyllanthus acidus (L) (Hutapea, 1991)
2. Nama daerah daun ceremai
Sumatera : ceremoi (Aceh), crème (Gayo), cerme (Batak), camincamin
(Minangkabau). Jawa : cerme (Sunda), crème (Jawa), careme (Madura) Bali :
carmen, Nusa Tenggara : saruma (Bima), cerme (Sasak) Sulawesi : caramele
(Makasar), tili (Gorontalo), cara mele (Bugis) Maluku : ceremin (Ternate) (Utami,
2008).
4
3. Morfologi
Ceremai merupakan pohon, tinggi ± 3 m. Batang tegak, bulat, berkayu, mudah
patah, kasar, percabangan monopodial, dan berwarna coklat tua. Daun berupa daun
majemuk, lonjong, berseling, panjang 5-6 cm, lebar 2-3 cm, tepi rata, ujung runcing,
pangkal tumpul, pertulangan menyirip, halus, tangkai silindris, panjang ± 2 cm, dan
berwarna hijau tua. Buah berbentuk bulat, permukaannya berlekuk, dan berwarna
kuning keputih-putihan. Biji berbentuk bulat pipih dan berwarna coklat muda.
Akarnya berupa akar tunggang dan berwarna coklat muda (Utami, 2008).
4. Kandungan kimia
Daun, kulit, batang dan kayu( Phyllanthus acidus (L) mengandung polifenol,
saponin, flavonoid, dan tanin, di samping itu kayunya juga mengandung alkaloid
(Hutapea, 1991).
5. Kegunaan
Daun ceremai ( Phyllanthus acidus (L) berkhasiat untuk pelansing badan,
mual-mual, kanker dan sariawan. (Dalimarta, 2003 ).
B. Bakteri
1. Pengertian bakteri
Bakteri (yunani; bacterion = tongkat atau batang) adalah mikroorganisme
bersel satu, mempunyai dinding yang kuat dan bentuk yang tetap, inti prokariot
(primitif yang terbuka dan tidak terbungkus dalam suatu selaput atau membran dan
5
terdiri dari DNA), berkembang biak dengan cara memperbanyak diri dengan
pembelahan biner, dapat bergerak dengan menggunakan flagel, ada juga dengan
serabut poros, dan dapat hidup sendiri atau dalam bentuk koloni (Sutio, 2009).
C. Escherichia coli
Escherichia coli umumnya merupakan flora normal saluran pencernaan
manusia dan hewan. Sejak 1940 di Amerika Serikat telah ditemukan strain-strain
Escherichia coli yang tidak merupakan flora normal saluran pencernaan. Strain
tersebut dapat menyebabkan diare pada bayi (Sukamto dkk, 1999).
Escherichia coli merupakan kuman oportunis yang banyak ditemukan
didalam usus besar manusia sebagai flora normal. Sifatnya unik karena dapat
menyebabkan infeksi primer pada usus misalnya diare pada anak-anak dan juga
kemampuannya menimbulkan infeksi pada jaringan tubuh lain diluar usus (Karsinah,
dkk 1994).
Escherichia coli merupakan spesies bakteri yang termasuk kedalam golongan
Enterobacteriaceae, pewarnaan gram negatif batang, bersifat aerob dan anaerob.
Escherichia coli umumnya berasal dari kotoran manusia, oleh karena itu terdapatnya
Escherichia coli pada air dianggap sebagai indikator adanya pencemaran kotoran
pada air tersebut dan memerlukan tindakan secepatnya.
Escherichia coli tidak membentuk spora, yang dapat meragikan laktosa
dengan pembentukan asam dan gas pada suhu 37oC dan 44
oC dalam waktu kurang
dari 48 jam. Escherichia coli dapat menghasilkan indol didalam air pepton yang
6
berisi troptofan dan tidak dapat menggunakan natrium sitrat saja sebagai satu-
satunya sumber karbon (Purnomo, 2003).
D. Klasifikasi
Menurut Agus (Staf FKUI,1994) Escherichia coli di klasifikasikan sebagai
berikut:
Ordo : Enterobacteriales
Family : Enterobacteriaceae
Tribe : Escherichia
Genus : Escherichia
Species : Escherichia coli
Morfologi Escherichia coli
Morfologi basil berbentuk batang pendek (basil) ukuran P = 1,4, L= 0,4-0,7
mikron tidak berkapsul ada yang berkapsul, tersusun tunggal, tidak berspora dan
bergerak aktif dan ada yang tidak bergerak, memiliki flagella yaitu peritrik sehingga
dapat bergerak, pewarnaan gram negatif basil (Soemarno, 2000).
E. Sifat Pertumbuhan
Escherichia coli tumbuh suasana aerob dan fakultatif anaerob. Suhu
pertumbuhan optimal 37oC. Untuk pertumbuhan terbaik, media dengan pH 7,0 –
7,5.Escherichia coli tumbuh baik pada hampir semua media yang di pakai di
laboratoriugm mikrobiologi. Pada media yang digunakan untuk isolasi kuman
7
enterik, sebagian besar strain Escherichia coli tumbuh sebagai koloni yang meragi
laktosa. Beberapa strain bila di tanam pada media darah menunjukkan hemolisis tipe
beta (Staf FKUI, 1994).
F. Sifat dan ciri Koloni
Satu sel kuman yang hidup akan segera membagi diri (multifikasi) menjadi
suatu kelompok massa sel (koloni). Pada permukaan medium padat akan membentuk
suatu koloni. Ciri-ciri Escherichia coli pada media MCA (Mac Conkey Agar) besar
merah menyebar keruh. Koloni warna merah pada MCA terjadi peragian laktosa (+)
positif, umumnya Enterobacteriaceae nonphatogen sedangkan, koloni warna opak
(abu-abu krem) pada MCA tidak terjadi peragian laktosa, umumnya golongan
Enterobacteriaceae phatogen (Zulfendi, 2010).
G. Patogenitas dan Gejala Klinik
Menurut Jawetz, (2005) bakteri menjadi patogen ketika mereka mencapai
jaringan di luar intestinal normal atau tempat flora normal yang kurang umum.
Escherichia coli ini selalu terdapat di dalam saluran cerna manusia sebagai flora
normal tetap menyebabkan peritonitis jika isi usus memasuki rongga peritoneum.
Kuman ini juga dapat menginfeksi kandung kencing dan pyelonefritis. Genus tertentu
dapat menyebabkan gastroenteritis pada anak. Akhir-akhir ini juga ditemukan bahwa
kuman ini biasa mengakibatkan shock bakterimia karena infasinya yang mendadak
kedalam peredaran darah (Jawetz, 2005).
8
H. Diagnosis laboratorium
Untuk isolasi dan identifikasi kuman Eschericia coli dari pemeriksaan klinik
di pakai motode dan media yang sesuai dengan metode untuk kuman enterik lain.
Diagnosis laboratorium penyakit diare yang di sebabkan Eschericia coli masih sulit
dilakukan secara rutin. Karena pemeriksaan secara tradisional dan serologi sering
kali tidak mampu menditeksi kuman penyebabnya. Deteksi sebagian besar strain
Eschericia coli patogen memerlukan metode khusus untuk mengidentifikasi toksin
yang di hasilkan (Staf FKUI, 1994).
I. Pengobatan
Kuman Eschericia coli yang diisolasi dari infeksi di dalam masyarakat
biasanya sensitif terhadap obat-obatan anti mikroba yang digunakan untuk organisme
gram negatif. Pada khasus diare, pasien perlu menjaga keseimbangan cairan elektolit
dalam tubuhnya.
J. Pencegahan
Untuk mencegah terjadinya diare, maka cara yang paling efektif untuk
menurunkan morbiditas akibat penyakit ini adalah melalui perbaikan sanitasi
lingkungan, pendidikan hygiene pribadi dan penyediaan air bersih yang memadai
(Supardi, 2001).
9
K. Variabel-Variabel Penelitian
1. Variabel bebas/ pengaruh : perasan daun ceremai (Phyllanthus acidus L)
konsentrasi 100%, 80%, 60%, 40% dan 20% sebagai zat bakteriostatik.
2. Variabel tidak bebas/ terpengaruh : sensitivitas bakteri Escherichia coli.
L. Kerangka Konsep
Independent Dependent
M. Definisi Operasional Variabel
Sensitivitas : Keadaan rentan terhadap suatu obat atau antigen dalam
mikrobiologi test yang dilakukan untuk menentukan
sensitivitas atau resistensi suatu mikroorganisme
terhadap berbagai macam obat antimikroba (Brooker,
2001).
Intermediate : Terletak diantara, menyisip sebagian, menyerupai setiap
dua perbedaan (Dorland, 1998).
Resisten : Derajat perlawanan terhadap suatu aksi (Brooker, 2001).
Bakteriostatik : Agen yang bekerja menghambat pertumbuhan bakteri
atau multiplikasi bakteri (Dorland, 1998).
Perasan daun ceremai
(Phyllanthus acidus L)
Konsentrasi 100%, 80%,
60%, 40%, 20%
Sensitivitas
Escherichia coli.
10
Bakterisida : Sifat mampu menghancurkan bakteri (Brooker, 2001).
In vitro : Proses atau reaksi yang dilakukan dalam tabung
percobaan dalam laboratorium atau secara harfiahnya
berarti “dalam kaca” seperti dalam tabung laboratorium
(Hinchhliff, 1999).
Perasan : Sari (berbentuk cairan).
Escherichia coli : Escherichia coli adalah kuman oportunis yang banyak di
temukan dalam usus besar manusia sebagai flora normal
(Karsinah dkk, 1994).
11
BAB III
METODOLOGI PENELITIAN
A. Metode Penelitian
Penelitian ini menggunakan metode eksperimen yaitu dengan melakukan
percobaan terhadap konsentrasi air perasan daun ceremai (Phyllanthus acidus (L)
terhadap pertumbuhan Escherichia coli secara invitro (Pratiknya, 2003).
B. Tempat dan Waktu Penelitian
1. Tempat Penelitian
Penelitian ini dilakukan di laboratorium Mikrobiologi Akademi Analis
Kesehatan Jln. Tgk. Daud Berueueh No. 168A Banda Aceh.
2. Waktu Penelitian
Penelitian ini telah dilakukan pada tanggal 21 s/d 25 Mei 2012.
C. Populasi dan Sampel
1. Populasi
Populasi pada penelitian ini digunakan daun ceremai yang masih muda.
2. Sampel
Sampel penelitian ini adalah air perasan daun ceremai (Phyllantus acidus (L)
yang masih muda lebih kurang 300 gram dengan konsentrasi 100%, 80%,
60%, 40%, 20% dan stamp Escherichia coli.
12
D. Teknik Pengumpulan Data
Data diperoleh dari pemeriksaan perasan daun ceremai (Phyllantus acidus (L)
pada konsentrasi 100%, 80%, 60%, 40%, dan 20% terhadap pertumbuhan
Escherichia coli secara Invitro pada suhu 37ºC.
E. Prosedur Kerja
1. Alat-alat yang digunakan
Oven, Inkubator, Autoclave, Erlenmeyer, Corong gelas, Pipet ukur, Petridish,
Tabung reaksi, Beaker glass, Kapas lidi steril, mortal, Lampu Bunsen, Hole, Masker,
Handskun Tissue, Handuk, Kapas dan kertas.
2. Media dan Reagensia
a. Mueller Hinton Agar (MHA)
b. Mac Conkey Agar (MCA)
c. Barium Sulfat Standar (BSS) 0,5 %
d. Laktosa Broth (LB)
e. Aquadest
f. NaCl
3. Sampel
Daun ceremai yang masih muda, dengan ciri-cirinya warna daun hijau muda,
ukuran daun sedang dan daunnya tidak kaku.
13
4. Cara Kerja
a. Pemilihan Daun Ceremai (Phyllantus acidus L )
1). Daun segar, sehat, serta tidak berlubang berwarna hijau muda.
2). Daun ceremai ditimbang kurang lebih 300 gram.
b. Pembuatan air perasan daun ceremai (Phyllantus acidus L)
1). Daun ceremai dibersihkan, kemudian ditumbuk dengan
menggunakan mortal steril hingga halus.
2). Selanjutnya di saring dengan kain kasa steril, maka di peroleh
konsentrasi 100%, dimasukkan ke dalam tabung reaksi I.
3). Tabung reaksi II di isi 4 ml perasan daun ceremai, ditambah 1 ml NaCl
0,85%, perasan konsentrasi 80%.
4). Tabung reaksi III di isi 3 ml perasan daun ceremai, ditambah 2 ml NaCl
0,85%, perasan konsentrasi 60%.
5). Tabung reaksi IV di isi 2 ml perasan daun ceremai, ditambah 3 ml
NaCl 0,85%, perasan konsentrasi 40%.
6). Tabung reaksi V di isi 1 ml perasan daun ceremai, ditambah 4 ml NaCl
0,85%, perasan konsentrasi 20%.
c. Perlakuan Bakteri Escherichia coli
1) Diambil kuman Escherichia coli dari stam dan dimasukkan ke dalam
media LB di inkubasi 6-8 jam, apabila positif (+) keruh.
2) Kemudian dari media LB ditanam ke media isolasi MCA di inkubasi
370C 1 × 24 jam.
14
3) Diambil koloni dari MCA di masukkan ke dalam tabung reaksi yang
sudah di isi NaCl 0,85% sebanyak 5 ml dan disamakan kekeruhan
dengan BSS 0,5%.
4) Siapkan media MHA kemudian apuskan sampel Escherichia coli
dengan KLS (Kapas Lidi Steril).
5) Buat tujuh lubang dengan menggunakan hole dengan diameter 5
mm dan kedalamannya ± 5 mm.
6) Pada lubang I masukkan 100µl perasan daun ceremai Konsentrasi
100%.
7) Pada lubang II masukkan 100µl perasan daun ceremai Konsentrasi
80%.
8) Pada lubang III masukkan 100µl perasan daun ceremai Konsentrasi
60%.
9) Pada lubang IV masukkan 100µl perasan daun ceremai Konsentrasi
40%.
10) Pada lubang V masukkan 100µl perasan daun ceremai Konsentrasi
20%.
11) Pada lubang VI masukkan 100µl kontrol positif (+) antibiotic
Cloramfenicol.
12) Pada lubang VII masukkan 100µl kontrol negatif (-) NaCl.
13) Kemudian di inkubasi 37˚C selama 1 X 24 jam di dalam Incubator.
14) Amati zona hambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli yang
terbentuk.
15
15) Zona hambat pertumbuhan bakteri diukur dengan memakai ruler
(Soemarno, 2000).
F. Pengolahan Data
Pengolahan data di lakukan dengan cara menghitung rata-rata zona hambatan
daya aktif pertumbuhan Escherichia coli terhadap air perasan daun ceremai
dibandingkan dengan zona hambatan diameter standar zona sensitif (S) anti mikroba
18 mm yang berpengaruh terhadap daya aktif pertumbuhan Escherichia coli.
G. Analisa Data
Data yang telah diolah dianalisa dengan mengukur rata-rata zona diameter
hambatan anti mikroba terhadap pertumbuhan Escherichia coli yaitu, mengukur zona
hambatan resisten (tahan), zona intermediate (kurang peka) dan zona sensitif (peka).
H. Penyajian Data
Data disajikan dalam bentuk tabulasi untuk melihat tingkat kemampuan air
perasan daun ceremai pada konsentrasi 100%, 80%, 60%, 40% dan 20%, dalam
menghambat pertumbuhan Escherichia coli.
16
BAB IV
HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
A. Hasi Penelitian
Setelah dilakukan penelitian uji sensitivitas perasan daun ceremai
(Phyllanthus acidus L) terhadap Escherichia coli Metode Invitro, maka hasilnya
dapat di lihat pada tabel di bawah ini:
Tabel 1.Zona size interpretative standar
(Sumber: yunus )
Tabel 2. Rata-rata zona hambat pemberian konsentrasi air perasan daun ceremai
terhadap Escherichia coli
No Konsentrasi P1 P2 P3 Rata-rata
zona hambat (mm) Keterangan
1 100% 19 20 20 20 S
2 80% 13 15 14 14 I
3 60% 9 9 9 9 R
4 40% 0 0 0 0 R
5 20% 0 0 0 0 R
6 Cloramfenicol 40 40 40 40 S
7 NaCl 0 0 0 0 R
(Sumber : Hasil penelitian 2012)
Keterangan :
Cloramfenicol =Kontrol positif S =Sensitif
NaCl =Kontrol negatif I =Intermediate
P1,P2,P3 =Percobaan 1,2,3 R =Resisten
Anti mikroba Resisten Intermediate Sensitif
Chloramphenenicol 12 or less 13-17 18 or more
17
Dari tabel di atas dapat di lihat bahwa air perasan daun ceremai pada
konsentrasi 100% sensitif terhadap Escherichia coli dengan diameter zona
hambat (20 mm), hal ini sama dengan diameter zona hambat kontrol positif
yaitu Chloramphenicol dengan diameter ( ≥ 18 mm).
B. Pembahasan
Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian air perasan daun ceremai
dapat mempengaruhi pertumbuhan Escherichia coli secara in vitro. Zona hambat
yang terbentuk berupa daerah terang yang tidak memperlihatkan adanya
pertumbuhan bakteri di sekitar perasan daun ceremai. Kemampuan dari air perasan
daun ceremai tersebut membuktikan bahwa air perasan daun ceremai mengandung
zat anti bakteri.
Zona hambat yang terbentuk pada konsentrasi 100% (20 mm) dinyatakan
sensitif, sedangkan konsentrasi 80% (14 mm), 60% (9 mm), 40% dan 20% (negatif)
dinyatakan resisten terhadap pertumbuhan Escherichia coli.
Menurut Pelczar dan Chan (1988) zat anti bakteri adalah zat yang dapat
mengganggu pertumbuhan dan metabolisme bakteri, Berdasarkan aktifitasnya zat
anti bakteri dapat bersifat bakterisida yaitu yang memiliki aktifitas dalam membunuh
dan aktifitas yang bersifat menghambat yaitu bakteriostatik. Dalam hal ini perasan
daun ceremai bersifat bakteriostatik, akan tetapi zat anti bakteri dapat bersifat
bakteriostatik pada konsentrasi 80%, dan 60%, namun yang bersifat bakterisida pada
konsentrasi 100%. Daun ceremai (Phyllanthus acidus) mengandung zat-zat yang
bersifat bakteriostatik diantaranya mengandung polifenol, saponon dan flavonoid.
18
Dalam penelitian ini digunakan bakteri Escherichia coli sebagai sampel
yang telah dibiakkan pada media MCA ( Mac Conkey Agar), kemudian dibuat
suspensi yang sebanding dengan BSS ( Barium Sulfat Standar ) dan dilanjutkan
penanaman ke media MHA ( Mueller Hilton Agar ) dengan menggunakan kapas lidi
steril diapuskan merata pada media tersebut.
Antibiotik yang digunakan dalam penelitian ini adalah Cloramfenicol, yaitu
sepotongan senyawa baik alami maupun sintetik yang mempunyai efek menekan
atau menghentikan proses biokimia pada organisme khusus dalam proses infeksi oleh
bakteri, antibiotik bekerja dengan menekan satu mata rantai metabolisme bakteri
sehingga ampuh membunuh dan menghambat bakteri Escherichia coli.
19
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
Dari hasil penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa:
1. Perasan daun ceremai dengan konsentrasi 100 %, dapat bersifat bakterisida
terhadap Escherichia coli..
2. Perasan daun ceremai dengan konsentrasi 80 %, dan 60 %, bersifat
bakteriostatik terhadap Escherichia coli.
3. Sedangkan perasan daun ceremai dengan konsentrasi 40 , dan 20 %, tidak
bersifat bakteriostatik terhadap Escherichia coli.
4. Semakin tinggi konsentrasi perasan daun ceremai yang diberikan maka
semakin besar daya hambat pertumbuhan Escherichia coli.
B. Saran
1. Sebagai himbauan kepada masyarakat agar perasan daun ceremai dengan
konsentrasi 100 , dapat juga digunakan untuk mengobati infeksi yang
disebabkan oleh kuman Escherichia coli.
2. Air perasan daun ceremai dapat di rekomendasikan sebagai bahan makanan
obat-obatan.
3. Perlu penelitian selanjutnya untuk mengetahui efektifitas terhadap
mikroorganise lain.
20
DAFTAR PUSTAKA
Brooker Christine. Kamus Saku Keperawatan. Jakarta: EGC, 2001.
Dalimartha, Setiawan, Trubus Agriwidya, Atlas Tumbuhan Obat, Jakarta Anggota
Ikapi 2003.
Dorland. Kamus Saku Kedokteran. Jakarta: EGC, 1998.
Gibson, J.M. Mikrobiologi Dan Patologi Modern Untuk Perawat, Penerbit Buku
Kedokteran, EGC, Jakarta, 1996.
Hinchhliff Sue. Kamus Keperawatan. Jakarta: EGC, 1999.
Hutapea, Aneka Tanaman Obat, Jakarta : Penebar Swadaya, 1991.
http://www.google.co.id/imgres?q=pewarnaan+gram+Escherichia coli.
http://www.google.co.id/imgres?imgurl=http://upload.wikimedia.org/wikipedia/com
mons/f/f 8/Escherichia coli,_Mac Conkey Agar.
Jawetz, Melnick, Adelberg`s, Geo.F.Brooks, Janet S.Butel, Stephen A.Morse.
Mikrobiologi Kedokteran, Jakarta: Selemba Medika, 2005.
Karsinah, Syahrurachman, Agus, Lina Isjah, Sujudi, Suharto, Robert Utji. Staf
pengajar Fakultas Kedokteran Universitas indonesia. Buku Ajar
Mikrobiologi kedokteran. Jakarta: PT Bina Rupa Aksara, 1994.
Pelczar, Michael J. Dasar-Dasar Mikrobiologi, Jakarta: Universitas Indonesia,
1988.
Pratiknya, Ahmat Watik. Dasar-Dasar Metodelogi Penelitian Kedokteran, Edisi 1
PT Raja Grafindo persada, Jakarta, 2003.
Purnomo, Basuki. Buku Ajar Mikrobiologi Kedokteran, Jakarta: PT. Gramedia
Pustaka Utama, 2003.
Shulman, Stanford T, John P phair , Herbert M ,Sommers. Dasar Biologis Dan
Klinis Penyakit Infeksi, yogyakarta :Univercity Gajah mada 1994.
Soemarno, Isolasi dan Identifikasi Bakteri Klinik, Yogyakarta: AAK Yogyakarta
Departeman Kesehatan Republik Indonesia, 2000.
Sukamto, Supardi Imam. Mikrobiologi Dalam Pengolahan Dan Keamanan
Pangan. Bandung: Penerbit Alumni, 1999.
Supardi. Mikrobiologi Khusus, Alumni 2001, IKAPI, Bandung, 2001.
21
Sutio. Buku Penuntun Kuliah Mikrobiologi Dasar, Banda Aceh: Akademi Analis
Kesehatan, 2009.
Staf FKUI. Mikrobiologi kedokteran, Binarupa Aksara, Jakarta1994.
Utami, Prapti .Buku Pinter Tanaman Obat, Jakarta :Agromedia pustaka, 2008.
Zulfendi, Diktat Penuntun Praktikum Bakteriologi Pemerintah Aceh, Akademi
Analis Kesehatan Banda Aceh, 2010.
22
LAMPIRAN 1
Gambar 2.1 Daun ceremai
Sumber : http://arvianhidayat.blogspot.com/2011/12/di-indonesia-banyak-
sekali-tumbuhan.html.
Gambar 2.2 Bakteri Escherichia coli pada pewarnaan gram.
Sumber : http://www.google.co.id/imgres?q=pewarnaan+gram+
Escherichia coli.
23
Gambar 2.3 Koloni Bakteri Escherichia coli pada media MCA
Sumber : http://www.google.co.id/imgres?imgurl=http://upload.wikimedia.org/
wikipedia/commons/f/f8/Escherichia coli,_MCA
24
LAMPIRAN II
SKEMA KERJA
1x24 Incubasi 37 0
C
Amati Zona Hambat
MHA
+
Kontol (+), Kontol (-),
konsentrasi ceremai 100%,
80%, 60%, 40%, 20%
80%, 60%, 40%,
20%
PEMBUATAN
KONSENTRASI AIR
PAERASAN DAUN
CEREMAI
PERLAKUAN KUMAN
Kekeruhan
Standar BSS
0,5
DAUN
CEREMAI
Di gerus dan di
saring
Air perasan ceremai
konsentrasi 100%
Suspensi
kuman
Stam kuman Escherichia
coli
MCA
LB
Sebanding
Diencerkan
dengan NaCl
25
Daun Ceremai Cons 60%
Daun Ceremai Cons 80%
Daun Ceremai Cons 100%
Daun Ceremai Cons 40%
Daun Ceremai Cons 20%
Ctrl (+) Kloramfenikol
Ctrl ( - ) NaCL
26
Keterangan :
Cons = Konsentrasi Sampel
Ctrl = Kontrol (+) & (-)
BSS = Barium Sulfat Standar
NaCl = Natrium Klorida
MHA = Mueller Hinton Agar
27
LAMPIRAN III
HASIL PENELITIAN
Gambar 2.4 Sampel Penelitian
Gambar 2.5 Perasan Daun Ceremai
28
Gambar 2.6 Hasil Penelitian
29
LAMPIRAN IV
CARA PEMBUATAN MEDIA
A. Perhitungan Media
1. Media MCA(Mac Conkey Agar)
x 50 ml = 2 gr
2. Media MHA (Mueller Hinton Agar) Merck.
2. Media Laktosa Broth (LB) Merck.
13 gr
1000ml𝑥10 ml = 0,13 gr
3. Media NaCl
85 gr
1000ml𝑥100 ml = 8,5 gr
B. Pembuatan Media
A. Media MCA
Komposisi:
Peptone from casein : 17,0 gr
Peptone from meat : 3,0 gr
Sodium chioride : 5,0 gr
Lactose : 10,0 gr
Bile salt mixture : 1,5 gr
Neutral red : 0,03 gr
34 gr
1000 ml x 120 ml = 4,08 gr
40 gr
1000 ml
mlml
30
Crystal violet : 0,001 gr
Agar-agar : 13,5 gr
Cara membuat :
1. Di timbang media MCA sebanyak 1.25 gram dan masukkan ke dalam
Erlenmeyer.
2. Kemudian di tambahkan aquadest sebanyak 25 ml dan di panaskan di atas
penagas sambil di aduk dengan tangkai pengaduk.
3. Setelah itu erlenmeyer tersebut di bungkus dengan kertas, lalu disterilkan ke
dalam Autoklave selama 15 menit, pada suhu 121˚ C atau tekanan 0,5 atm,
setelah selesai di tunggu dingin.
4. Selanjutnya di bagi-bagikan ke Petridish.
1. MHA (Mueller Hinton Agar) Merck.
Komposisi :
Infusatd de Viande 2,0
Hydrolisat de Caseine 17,5
Amidon 1,5
Agar-agar 13,0
Di timbang media MHA sebanyak 4,08 gr dilarutkan dalam 120 ml
aquadest. Di panaskan sampai mendidih sambil diaduk. Setelah mendidih
diangkat dan lalu disterilkan ke dalam autoclave selama 15 menit pada suhu
1210C setelah itu dibagikan ke dalam petridish steril masing-masing 20 ml.
31
2. Media Laktosa Broth (LB) Merk
Komposisi :
Ekstrak Sapi : 3,0 gr
Laktosa : 5,0 gr
Pepton : 5,0 gr
Di timbang 0,13 gr lactosa broth dilarutkan dalam 10 ml aquadest. Di
panaskan sampai mendidih sambil diaduk. Setelah mendidih diangkat dan
dimasukkan ke dalam tabung, lalu disterilkan ke dalam autoclave selama 15
menit pada suhu 1210C.
3. Reagensia NaCl Fisiologis
1. Reagensia NaCl ditimbang sebanyak 8,5 gram, kemudian dimasukkan
kedalam erlenmeyer.
2. Ditambahkan 100 ml aquadest, aduk hingga homogen dan panaskan
sampai mendidih.
3. Diangkat, bungkus dengan kertas lalu di sterilkan kedalam autoclave pada
suhu 121˚ C selama 15 menit kemudian angkat.
4. Dinginkan, NaCl siap untuk digunakan.
32
LAMPIRAN V
CARA KERJA ALAT
1. Autoclave
Prinsip : Pemanasan atau sterilisasi menggunakan udara lembab (uap)
bertekanan tinggi, dimana uap air ini dapat mengkoagulasikan
protein dari mikroorganisme.
Cara Kerja :
a. Diisi air kedalam bejana sampai setinggi penyangga dan tutup
pengatur airnya.
b. Dimasukkan alat atau bahan yang akan disterilkan.
c. Ditutup dengan rapat.
d. Diatur temperatur pada suhu 121˚C dengan tekanan 0,5 atm.
e. Diatur waktu pada 15 menit.
f. Posisikan ke ster (untuk mensterilkan media) atau ke dry (untuk
mensterilkan alat). Ditutup lubang udaranya.
g. Hidupkan ke ON dan tunggu sampai alarm berbunyi.
h. Setelah alarm berbunyi, matikan kearah tombol OFF.
i. Buka lubang udara secara perlahan-lahan, buka juga lubang air
agar air dapat keluar.
j. Tunggu sampai suhu menunjukkan angka nol (0).
k. Buka tutup autoclave dan keluarkan alat-alat atau media yang
sudah disterilkan.
33
2. Oven
Prinsip : Sterilisasi menggunakan udara kering panas untuk mencapai
steril
Cara Kerja :
a. Alat-alat atau gelas yang akan dsterilkan harus dalam keadaan
bersih dan kering. Untuk tabung reaksi ditutup dengan kapas,
sedangkan petridish dan alat gelas lain dibungkus dengan kertas
yang tahan panas.
b. Kemudian dimasukkan kedalam oven.
c. Diatur suhu pada 180˚C selama 30-60 menit.
d. Oven ditutup dan diputar ke ON.
e. Diputar tombol pengatur waktu.
II : untuk waktu yang dibatasi atau ditentukan.
f. Setelah sampai waktunya putar ke OFF dan tunggu dingin
kemudian buka pintu oven untuk mengeluarkan alat-alat yang
sudah disterilkan.
3. Inkubator
Prinsip : Dengan pengatur suhu dan pengatur waktu dapat memeram
smikroorganisme pada suhu yang terkontrol (0oC-120
oC) yang
memiliki ketelitian yang tinggi.
Cara kerja :
a. Hubungkan dengan sumber listrik.
b. ON-kan dengan tanda lampu pilot merah dan kuning menyala.
34
c. Atur suhu yang dikehendaki hingga lampu hijau menyala.
d. Timer di- ON-kan, masukkan media yang akan diinkubasi.
e. Bila masa pembiakan telah cukup, ambil media dari incubator.
f. Matikan incubator.
g. Putuskan hubungan sumber arus listrik.
35
LAMPIRAN VI
A. Rumus Pengenceran
1. Konsentrasi 80%
K1.V1 = K2.V2
100%.V1 =80%.5 ml
V1 =400 ml : 100
= 4 ml
2. Konsentrasi 60%
K1.V1 =K2.V2
100%.V1 =60%.5 ml
V1 =300 ml : 100
=3 ml
3. Konsetrasi 40%
K1.V1 =K2.V2
100%.V1 =40%.5 ml
V1 =200 ml : 100
=2 ml
4. Konsentrasi 20%
K1.V1 =K2.V2
100%.V1 =20%.5 ml
V1 =100 ml : 100
=1 ml.
36
LAMPIRAN VII
TEST KATALASE DAN OKSIDASE
A. TES KATALASE, H2O2 (PERHIDROL) 3%
1. Disediakan objek glass yang steril
2. Diteteskan perhidrol 1 tetes pada objek glasss dan ditambahkan 1 ose koloni
bakteri, aduk
3. Diamati perubahan yang terjadi
4. Positif : terjadi gas atau gelembung
5. Negatif : tidak terbentuk gas
B. TES OKSIDASE (PADAM- H 1 %)
1. Disediakan kertas saring secukupnya dan diletakkan diatas objek glass.
2. Diteteskan 1 tetes Padam- H 1 % dan ditambah 1 ose koloni bakteri.
3. Amati perubahan yang terjadi.
4. Positif : goresan kertas saring berwarna ungu.
5. Negatif : tidak ada goresan warna ungu pada kertas saring.
37
Lampiran VIII
REAKSI BIOKIMIA Escherichia coli
1. CATALASE (+)
2. OKSIDASE (-)
3. GLUKOSA F (+)
4. GLUKOSA O (+)
5. GAS GF (+)
6. LAKTOSA (+)
7. MOTILITY (+)
8. H2S (-)
9. INDOL (+)
10. VP (-)
11. UREA (-)
12. CITRAT (-)
Sumber : Zulfendi (2010)
38
LAMPIRAN IX
Anggaran Biaya Penelitian
No Bahan/Reagensia Harga/gram Pemakaian
gram/ml
Harga
Kebutuhan
1 Media LB Rp.2.000 /gram 0,13gr/20 ml Rp. 260
2 Media MCA Rp.1.400 /gram 0,91gr/20ml Rp. 1.820
3 Media MHA Rp.4.400 /gram 4,08gr/120 ml Rp. 8.976
4 Kloramfenikol Rp.500 4 kapsul Rp. 2,000
5 Aquadest Rp.5.000/L 1 Liter Rp. 5.000
6 Daun ceremai - - -
7 NaCl Rp. 650/ gram 8,5gram Rp. 5.525
8 Tes katalase Rp.1.000 1 test Rp. 1.000
9 Test oksidase Rp.1.000 1 test Rp. 1.000
10 DP Gram Rp.20.000/gr 1 test Rp. 20.000
Adm Laboratorium Rp. 40.000
Total Rp. 85.581
39
LAMPIRAN X
JADWAL KEGIATAN PENELITIAN
No Bulan Januari Februari Maret Mei Juni
Kegiatan/Minggu Ke I II III IV I II III IV I II III IV I II III IV I II III IV
1 Pengumpulan Teori
2 Penulisan Proposal
3 Seminar Proposal
4 Permohonan Penelitian
5 Persiapan Alat dan Bahan
6 Penelitian
7 Penulisan KTI
8 Sidang KTI
40
21 Mei 2012 s/d 25 Mei 2012.
BIODATA MAHASISWA
Nama : T.hamdani
NIM : 713401 D 09091
Jenis Kelamin : Laki-laki
Tempat dan Tanggal Lahir : Bangkeh, 15 mei 1987
Alamat : Jl Chik Gempa No 27 Gampong Beurawe
Kecamatan Kuta Alam Banda Aceh
Nama Orang Tua
Ayah : T.rusli (alm)
Ibu : Cut Syaribanun
Pekerjaan
Ayah : Petani
Ibu : Tukang jahit
Alamat : Jl.Tutut–Meulaboh, Dusun Lhokkuala
Kec.Geumpang Kab.Pidie
Jenjang Pendidikan Yang Ditempuh
Tahun 1994-1999 : MIN 1 Lhok kuala Kec,Geumpang
Tahun 1999-2002 : SMPN 1 Kec, Geumpang
Tahun 2002-2005 : SMAN 1 Kec, Geumpang
Tahun 2009 sampai sekarang : Terdaftar sebagai mahasiswa Akademi Analis
Kesehatan Banda Aceh
Judul KTI : UJI SENSITIVITAS PERASAN DAUN CEREMAI
(Phyllanthus acidus L) TERHADAP
PERTUMBUHAN Escherichia coli