nelson a

7/16/2019 nelson a

http://slidepdf.com/reader/full/nelson-a 1/32

81

LAMPIRAN

Lampiran 1. Diagram Alir Penelitian

1. Preparasi Sampel

a) Proses perendaman dengan menggunakan H2SO4

- dicuci

- dikeringkan

- dipotong kecil-kecil

- dihaluskan menggunakan mesin penepung

- diayak menggunakan ayakan 30-40 mesh

- ditimbang masing-masing 50 gram

- dimasukkan kedalam erlemeyer 250 mL

- direndam dengan H2SO4 7%

- ditutup- dibiarkan selama 48 jam pada suhu kamar

- dicuci dengan akuades

Al a

Te un kasar

Tepung

Hasil

7/16/2019 nelson a


82

b) Proses perendaman tanpa menggunakan H2SO4

- dicuci

- dikeringkan


- dihaluskan menggunakan mesin penepung

- diayak menggunakan ayakan 30-40 mesh

- ditimbang masing-masing 50 gram

- dimasukkan kedalam erlemeyer 250 mL

- direndam dengan akuades

- ditutup

- dibiarkan selama 48 jam pada suhu kamar

- dicuci dengan akuades

Al a

Tepung kasar

Tepung

Hasil

7/16/2019 nelson a


83

2. Pembuatan Media Pertumbuhan Aspergilus niger

a. Media padat (Potato Dextrose Agar)

- ditimbang sebanyak 20 gram


- dimasukkan kedalam 100 mL akuades

- didihkan selama 1 jam

- didinginkan

- disaring

- volume ditepatkan 100 mL dengan penambahan akuades

- ditambahkan buffer asetat pH 5 sebanyak I mL

- ditambahkan 1,5 gram tepung agar

- ditambahkan 2 gram dekstrosa

- dipanaskan sampai mendidih

- dipipet sebanyak 7 mL- dimasukkan dalam tabung reaksi

- ditutup dengan kapas

- disterilisasi dalam autoklaf selama 15 menit dengan

temperatur 1210C dan tekanan 15 psi

- tabung reaksi diletakkan dalam keadaan miring

- dibiarkan pada suhu kamar hingga memadat

Kentan

Filtrat

Hasil

Media agar

7/16/2019 nelson a


84

b. Media cair



- dimasukkan kedalam 100 mL akuades

- didihkan selama 1 jam

- didinginkan

- disaring

- volume ditepatkan 100 mL dengan penambahan akuades

- ditambahkan buffer asetat pH 5 sebanyak I mL

- ditambahkan 2 gram dekstrosa

- dipanaskan sampai mendidih

c. Regenerasi Aspergilus niger

- diambil 1 ose

- dimasukkan pada media cair (Potato Dextrose)

- dishaker pada suhu 280C selama 97 jam dengan kecepatan

150 rpm

- diambil sebanyak 1 ose

- digoreskan pada media padat

Kentan

Filtrat

Media cair

Aspergilus niger

Hasil

Hasil

7/16/2019 nelson a


85

d. Pembuatan inokulum dan isolasi ekstrak kasar enzim selulase

- dimasukkan kedalam media cair yang telah steril

- diinkubasi pada suhu suhu 280C selama 97 jam

- disentrifuge selama 15 menit dengan kecepatan 5000 rpm

3. Analisa Kadar Glukosa

a. Pembuatan kurva standar glukosa

- dipipet sebanyak 1 mL

- dimasukkan dalam tabung reaksi

- ditambahkan 1 mL akuades

- ditambahkan 1 mL reagen Nelson

- ditutup dengan alumunium foil

- dipanaskan dengan penangas air selama 20 menit

- diambil- didinginkan

- ditambahkan reagen Arsenomolibdat 1 mL

- divortex

- didiamkan


- dikocok dengan vortex

- diperoleh larutan

- ditentukan serapannya pada panjang gelombang 540 nm

menggunakan spektronik 20.

Larutan Glukosa den an tia konsentrasi 0 20 30 40 50 60

Hasil

1 mL biakan As er illus ni er

Filtrat

7/16/2019 nelson a


86

4. Analisis glukosa pada alga sebelum hidrolisis


- dilarutkan kedalam 25 mL akuades


- dimasukkan labu ukur 10 mL

- diencerkan dengan penambahan akuades

- dipipet 1 mL






- diambil

- didinginkan


- divortex

- didiamkan- ditambahkan 6 mL akuades

- dikocok dengan vortex

- diperoleh larutan

- ditentukan serapannya pada panjang gelombang 540 nm

menggunakan spektronik 20.

Tepung alga

filtrat

Hasil

7/16/2019 nelson a


87

5. Analisis Glukosa Pada Alga Setelah Hidrolisis

a. Perlakuan untuk masing-masing substrat dari berbagai variasi konsentrasi

ektrak kasar enzim selulase dan variasi lama hidrolisis.


- dimasukkan labu ukur 10 mL

- diencerkan dengan penambahan akuades

- dipipet 1 mL






- diambil

- didinginkan


- divortex

- didiamkan

- ditambahkan 6 mL akuades- dikocok dengan vortex

- diperoleh larutan

- ditentukan serapannya pada panjang gelombang 540 nmmenggunakan spektronik 20.

Substrat

Hasil

7/16/2019 nelson a


88

LAMPIRAN 2. Perhitungan Pembuatan Reagen

1. Pembuatan larutan H2SO4 7%

V1 . M 1 = V2 . M2

5mL . 98% = V2 . 7%

V2 =

= 70 mL

Larutan H2SO4 98% diambil sebanyak 5 mL dan diencerkan dengan penambahan

akuades sebanyak 70 mL. Dan didapatkan larutan H2SO4 7%.

2. Pembuatan Reagen Nelson

a) Nelson A

Natrium karbonat anhidrat12,5 gram, garam rochelle 12,5 gram, natrium

bikarbonat 10 gram, natrium sulfat anhidrat 100 gram dilarutkan dalam 500

mL akuades.

b) Nelson B

(CuSO4.5H2O) 7,5 gram dan HCL pekat 1 tetes dilarutkan dalam 50 mL

akuades

c) Reagen Nelson

Dicampurkan 25 bagian reagen nelson A dengan 1 bagian nelson B.

Pencampuran dilakukan ketika reagen akan digunakan.

3. Pembuatan Reagen Arsenomolibdat

Ammonium molibdat 25 gram dilarutkan kedalam 450 mL akuades.

Kemudian ditambahkan 25mL HCL pekat ( larutan 1).

7/16/2019 nelson a


89

Na2HASO47H2O 3 gram dilarutkan kedalam 25 mL akuades. Setelah

larut dicampurkan kedalam larutan 1. Dimasukkan kedalam botol berwrna

cokelat dan diinkubasi padasuhu 370C selama 24 jam.

4. Pembuatan larutan standar

100 mg glukosa dilarutkan dalam 1000 mL akuades, sehingga diperoleh larutan

glukosa dengan konsentrasi 10 ppm.

a) Pembuatan larutan glukosa 2 ppm

V1 . M 1 = V2 . M2

5mL . 10 = V2 . 2

V2 = 25 mL

Diambil larutan glukosa 10 ppm sebanyak 5 mL dan diencerkan dengan

penambahan akuades sebanyak 25 mL. Sehingga diperoleh larutan glukosa

dengan konsentrasi 2 ppm.

b) Pembuatan larutan glukosa 3 ppm

V1 . M 1 = V2 . M2

5mL . 10 = V2 . 3

V2 = 16,67 mL


penambahan akuades sebanyak 16,67 mL. Sehingga diperoleh larutan glukosa


c) Pembuatan larutan glukosa 4 ppm

V1 . M 1 = V2 . M2

5mL . 10 = V2 . 4V2 = 12,5 mL




7/16/2019 nelson a


90

d) Pembuatan larutan glukosa 5 ppm

V1 . M 1 = V2 . M2

5mL . 10 = V2 . 5

V2 = 10 mL


penambahan akuades sebanyak 10 mL. Sehingga diperoleh larutan glukosa


e) Pembuatan larutan glukosa 6 ppm

V1 . M 1 = V2 . M2

5mL . 10 = V2 . 6

V2 = 8,33 mL




5. Perhitungan konsentrasi enzima) Konsentrasi 5%

5 mL enzim selulase ditambahkan kedalam 95 mL media cair

b) Konsentrasi 10%


c) Konsentrasi 15%


d) Konsentrasi 20%


7/16/2019 nelson a


91

LAMPIRAN.3 Data dan Grafik Hasil Hidrolisis

1. Eucheuma spinosum tanpa perendaman

Hari

ke-

Konsentrasi

Enzim

Selulase

Konsentrasi Etanol (ppm) Konsentrasi

Etanol

rata-rata

(ppm) Ulangan

1

Ulangan

2

Ulangan

3

1 0.05 51.33 48.00 51.33 50.22

0.1 41.33 51.33 38.00 43.55333

0.15 58.00 58.00 64.67 60.22333

0.2 111.33 84.67 118.00 104.66672 0.05 134.67 134.67 141.33 136.89

0.1 191.33 151.33 184.67 175.7767

0.15 151.33 124.67 148.00 141.3333

0.2 98.00 74.67 98.00 90.22333

3 0.05 141.33 134.67 141.33 139.11

0.1 154.67 151.33 151.33 152.4433

0.15 108.00 124.67 108.00 113.5567

0.2 58.00 74.67 58.00 63.55667

4 0.05 308.00 311.33333 308 309.1111

0.1 491.33 424.66667 458 457.9989

0.15 291.33 288 298 292.4433

0.2 424.67 391.33333 424.66667 413.5567

5 0.05 324.67 291.33333 324.66667 313.5567

0.1 254.67 218 258 243.5567

0.15 54.67 54.666667 48 52.44556

0.2 158.00 158 161.33333 159.1111

7/16/2019 nelson a


92

Univariate Analysis of Variance

Betwe en-Subjects Factors

12

12

12

12

12

15

15

15

15

20

20

20

1

2

3

4

5

HARI

1

2

3

4

KONSEN

1

2

3

ULANGAN

N

Tes ts of Betw een-Subjects Effects

Dependent Variable: DATA

2713538.275a 22 123342.649 826.687 .000

656227.321 4 164056.830 1099.568 .000

55741.488 3 18580.496 124.533 .000

148061.098 12 12338.425 82.697 .0002015.780 2 1007.890 6.755 .003

5669.647 38 149.201

2719207.922 60

Source

Model

HARI

KONSEN

HARI * KONSEN

ULANGAN

Error

Total

Type III Sum

of Squares df Mean Square F Sig.

R Squared = .998 (A djusted R Squared = .997)a.

7/16/2019 nelson a


93

Post Hoc TestsHARIHomogeneous Subsets

KONSEN

Homogeneous Subsets

DATA

Duncana,b

12 64.6575

12 117.1667

12 136.0558

12 192.1675

12 368.2778

1.000 1.000 1.000 1.000 1.000

HARI

1

3

2

5

4

Sig.

N 1 2 3 4 5

Subset

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

Based on Type III Sum of Squares

The error term is Mean Square(Erro r) = 149.201.

Uses Harmonic Mean Sample Size = 12.000.a.

Alpha = .05.b.

DATA

Duncana,b

15 132.0007

15 166.2160

15 189.7775

15 214.6660

1.000 1.000 1.000 1.000

KONSEN

3

4

1

2

Sig.

N 1 2 3 4

Subset

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.Based on Type III Sum of Squares



Alpha = .05.b.

7/16/2019 nelson a


94

Post Hoc TestsHomogeneous Subsets

DATA

Duncana

3 43.5533

3 50.2200

3 52.4467

3 60.2233

3 63.5567

3 90.2233

3 104.6333

3 113.5567

3 136.8900

3 139.11003 141.3333

3 152.4433 152.4433

3 159.1100 159.1100

3 175.7767

3

3

3

3

3

3

.122 .057 .086 .057

PERLAK

2

1

19

3

12

8

4

11

5

97

10

20

6

18

15

13

17

16

14

Sig.

N 1 2 3 4

Subset for



7/16/2019 nelson a


95

2. Eucheuma spinosum dengan perendaman

Hari

ke-

Konsentrasi

enzim

sellulase


Rata-rata

(ppm)Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3

1 0.05 28 31. 33 31. 33 30.22

0.1 18 18 24. 67 20.22

0.15 24.67 31. 33 34. 67 30. 22

0.2 31. 33 34.67 41.33 35.78

2 0.05 48 54.67 54.67 52.440.1 31. 33 38 28 32.44

0.15 18 24.67 11.33 18

0.2 38 38 41.33 39.11

3 0.05 134.67 141.33 121.33 132.44

0.1 131.33 144. 67 124. 67 133.56

0.15 168 154. 67 154.67 159.11

0.2 198 208 191.33 199.11

4 0.05 88 91.33 88 89.11

0.1 74. 67 71.33 74.67 73.56

0.15 424.67 424.67 424.67 424.67

0.2 91.33 84.67 91.33 89.115 0.05 91.33 94.67 98 94.67

0.1 108 104.67 108 106.89

0.15 491.33 524.67 458 491.33

0.2 124.67 124.67 114.67 121.33

7/16/2019 nelson a


96



12

12

12

12

12

15

15

15

15

20

20

20

1

2

3

4

5

HARI

1

2

3

4

KONSEN

1

2

3

ULANGAN

N



1763390.660a 22 80154.121 1026.234 .000

313030.820 4 78257.705 1001.954 .000

229169.923 3 76389.974 978.041 .000

375890.609 12 31324.217 401.052 .000387.896 2 193.948 2.483 .097

2967.994 38 78.105

1766358.654 60

Source

Model

HARI

KONSEN

HARI * KONSEN

ULANGAN

Error

Total

Type III Sum



7/16/2019 nelson a


97


DATA

Duncana,b

12 29.110812 35.5000

12 156.0558

12 169.1117

12 203.5567

.085 1.000 1.000 1.000

HARI

1

2

3

4

5

Sig.

N 1 2 3 4

Subset



The error term is Mean Square(Error) = 78.105.


A lpha = .05.b.

7/16/2019 nelson a


98

KONSENHomogeneous Subsets

DATA

Duncana,b

15 73.3340

15 79.7773

15 96.8887

15 224.6680

.053 1.000 1.000

KONSEN

2

1

4

3

Sig.

N 1 2 3

Subset


Based on Type III Sum of SquaresThe error term is Mean Square(Error ) = 78.105.


Alpha = .05.b.

7/16/2019 nelson a


99


DATA

Duncana

3 18.0000

3 20.2233 20.2233

3 30.2200 30.2200 30.2200

3 30.2233 30.2233 30.2233

3 32.4433 32.4433 32.4433

3 35.7767 35.7767

3 39.1100 39.11003 52.4467

3 73.5567

3 89.1100 89.1100

3 89.1100 89.1100

3 94.6667 94.66

3 106.89

3

3

3

3

3

3

3

.091 .069 .298 .082 .055 .490 .

PERLA K

7

2

1

3

6

4

85

14

13

16

17

18

20

9

10

11

12

15

19

Sig.

N 1 2 3 4 5 6 7

Subset for a



7/16/2019 nelson a


100

3. Eucheuma cottoni tanpa perendaman

Harike- Konsentrasienzim

sellulase

Konsentrasi Etanol (ppm) KonsentrasiRata-rata

(ppm)Ulangan

1

Ulangan

2

Ulangan

3

1 0.05 71.33 81.33 71.33 74.66

0.1 81.33 91.33 81.33 84.66

0.15 88 81.33 88 85.78

0.2 74.67 71.33 74.67 73.56

2 0.05 88 78 88 84.67

0.1 104.67 98 104.67 102.45

0.15 131.33 138 131.33 133.55

0.2 98 91.33 98 95.78

3 0.05 91.33 101.33 91.33 94.650.1 94.67 104.67 94.67 98.01

0.15 121.33 134.67 121.33 125.78

0.2 81.33 88 81.33 83.55

4 0.05 44.67 51.33 41.33 45.78

0.1 61.33 64.67 51.33 59.11

0.15 81.33 91.33 88 86.89

0.2 41.33 38 34.67 38

5 0.05 191.33 191.33 184.67 189.12

0.1 221.33 224.67 231.33 225.77

0.15 391.33 424.67 391.33 402.43

0.2 141.33 134.67 141.33 139.11

7/16/2019 nelson a


101



12

12

12

12

12

15

15

15

15

20

20

20

1

2

3

4

5

HARI

1

2

3

4

KONSEN

1

2

3

ULANGAN

N



1182794.157a 22 53763.371 1420.186 .000

243440.141 4 60860.035 1607.648 .000

57383.476 3 19127.825 505.271 .000

72059.400 12 6004.950 158.624 .000243.413 2 121.707 3.215 .051

1438.550 38 37.857

1184232.707 60

Source

Model

HARI

KONSEN

HARI * KONSEN

ULANGAN

Error

Total

Type III Sum



7/16/2019 nelson a


102


DATA

Duncana,b

12 57.4433

12 79.6650

12 100.4992

12 104.1108

12 239.1100

1.000 1.000 .159 1.000

HARI

4

1

3

2

5

Sig.

N 1 2 3 4

Subset



The error term is Mean Square(Error) = 37.857.


A lpha = .05.b.

7/16/2019 nelson a


103


DATA Duncan a,b

15 85.9993 15 97.7760 15 114.0000 15 166.8873

1.000 1.000 1.000 1.000

KONSEN 4 1 2 3 Sig.

N 1 2 3 4 Subset

Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on Type III Sum of Squares The error term is Mean Square(Error) = 37.857.

Uses Harmonic Mean Sample Size = 15.000. a.

Alpha = .05. b.

7/16/2019 nelson a


104


DATA

Duncana

3 38.0000

3 45.7767

3 59.1100

3 73.5567

3 74.6633 74.6633

3 83.5533 83.5533 83.5533

3 84.6633 84.6633 84.6633

3 84.6667 84.6667 84.6667

3 85.7767 85.7767

3 86.8867 86.8867

3 94.6633 94.6633 94

3 95.7767 95.7767 95

3 98.0033 98

3 102

3

33

3

3

3

.150 1.000 .067 .066 .050 .060

PERLAK

16

13

14

4

112

2

5

3

15

9

8

10

6

11

720

17

18

19

Sig.

N 1 2 3 4 5 6

Subset for alpha



7/16/2019 nelson a


105

4. Eucheuma cottoni dengan perendaman

Hari

ke-

Konsentrasi

enzim

sellulase


Rata-rata

(ppm)Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3

1 0.05 108 108 108 108

0.1 74.67 74.67 81.33 76.89

0.15 58 58 61.33 59.11

0.2 68 68 74.67 70.22

2 0.05 54.67 54.67 58 55.78

0.1 58 58 58 58

0.15 101.33 101.33 104.67 102.440.2 154.67 154.67 158 155.78

3 0.05 91.33 91.33 78 86.89

0.1 108 108 108 108

0.15 104. 67 104. 67 114.67 108

0.2 291.33 291. 33 281.33 288

4 0.05 164.67 171.33 174.67 170.22

0.1 74.67 68 71.33 71.33

0.15 81.33 91.33 81.33 84.67

0.2 68 74.67 68 70.22

5 0.05 111.33 118 111.33 113.56

0.1 458 391.33 524.67 4580.15 134.67 148 134.67 139.11

0.2 658 51.33 68 259.11

7/16/2019 nelson a


106



12

12

12

12

12

15

15

15

15

20

20

20

1

2

3

4

5

HARI

1

2

3

4

KONSEN

1

2

3

ULANGAN

N



1620360.550a 22 73652.752 11.805 .000

214854.119 4 53713.530 8.609 .000

53839.499 3 17946.500 2.877 .049

292334.263 12 24361.189 3.905 .00111277.436 2 5638.718 .904 .414

237080.526 38 6238.961

1857441.076 60

Source

Model

HARI

KONSEN

HARI * KONSEN

ULANGAN

Error

Total

Type III Sum



7/16/2019 nelson a


107

Post Hoc TestsHARI

Homogeneous Subsets


DATA

Duncana,b

12 78.5558

12 92.9925

12 99.1108

12 147.7217

12 242.4442

.056 1.000

HARI

1

2

4

3

5

Sig.

N 1 2

Subset





Alpha = .05.b.

DATA

Duncana,b

15 98.6667

15 106.8887

15 154.4447 154.4447

15 168.6600

.074 .625

KONSEN

3

1

2

4

Sig.

N 1 2

Subset





Alpha = .05.b.

7/16/2019 nelson a


108


DATA

Duncana

3 55.7800

3 58.0000

3 59.1100

3 70.2233

3 70.2233

3 71.3333

3 76.8900

3 84.6633

3 86.88673 102.4433

3 108.0000

3 108.0000

3 108.0033

3 113.5533

3 139.1133 139.1133

3 155.7467 155.7467 155.7467

3 170.2233 170.2233 170.2233

3 259.1100 259.1100

3 287.9967

3 458.0000.149 .095 .066 1.000

PERLAK

5

6

3

4

16

14

2

15

97

1

10

11

17

19

8

13

20

12

18Sig.

N 1 2 3 4

Subset for alpha = .05



7/16/2019 nelson a


109

7/16/2019 nelson a


110

LAMPIRAN 4. GAMBAR

7/16/2019 nelson a


111

7/16/2019 nelson a


112

nelson a

Documents