Mikroskopi dalam mendeteksi parasit malaria dan dalam identifikasi spesiesProsedur dasar . Kualitas tebal dan tipis film tinggi ( Bain , 2006; Bain et al , 2011) harus dipersiapkan dan diperiksa dalam semua kasus malaria dicurigai , terlepas dari hasil tes diagnostik cepat immunochromatographic ( RDT ) untuk deteksi antigen malaria . Film tebal harus digunakan untuk mendeteksi parasit malaria dan film tipis untuk identifikasi spesies . Hal ini berguna untuk mempersiapkan empat film tebal dan empat film tipis sehingga dua dari masing-masing dapat bernoda, meninggalkan film cadang untuk mengirim ke pusat rujukan ( lihat Lampiran 1 ) dan untuk studi lebih lanjut jika ada kesulitan diagnostik . Film harus dilakukan tanpa penundaan karena perubahan morfologis parasit terjadi dengan penyimpanan K2 asam ethylenediaminetetraacetic ( K2EDTA ) - antikoagulan darah. film tipisharus dikeringkan , terkena aseton selama 1 menit dan udara kering .A diberikan laboratorium harus memilih salah satu noda dan menjadi mahir menggunakannya . Jika menggunakan Giemsa stain , film tipis kemudian harus diperbaiki dalam metanol selama 1 menit sebelum pewarnaan . Seperti Leishman noda metanol berbasis noda harus dibiarkan pada slide selama 1 menit sebelum menambahkan air buffered pH 7 ? 2 (lihat Lampiran 2 dan 3 ) . Film tebal harus dikeringkan pada 37 C selama 15 menit atau , jika tidak ada urgensi, antara 30 menit dan 1 jam pada suhu kamar dan kemudian harus terkena aseton selama 10 menit dalam botol Coplin sebelum pewarnaan . Entah Giemsa stain atau Bidang noda dapat digunakan . Beberapa laboratorium menggunakan Lapangan noda (lihat Lampiran 2 dan 3 ) untuk film tebal karena lebih cepat . Rutin Mei - Gr unwald - Giemsa ( MGG ) , Wright - Giemsa dan Giemsa noda , termasuk yang digunakan dalam mesin pewarnaan otomatis , tampaknya tidak akan memuaskan karena pH yang digunakan adalah tidak pantas . Dalam kasus seorang pasien sakit parah , hal ini berguna untuk noda film tipis tetap ekstra dengan Lapangan dimodifikasi noda karena ini memungkinkan diagnosis sangat cepat infeksi P. falciparum . Giemsa atau Leishman pewarnaan masih diperlukan untuk identifikasi yang tepat dari spesies lain .Minimal 200 ladang minyak imersi ( 9100 tujuan ) harus diperiksa dalam film tebal , ini akan memakan waktu sekitar 5-10 menit untuk seorang pengamat yang berpengalaman tapi lagi bagi mereka yang tidak sering memeriksa film yang mengandung parasit malaria .Beberapa microscopists berpengalaman lebih memilih untuk memindai dengan A950 lensa minyak imersi dan menggunakan 9100 bertujuan untuk mengidentifikasi spesies parasit dicurigai . 9100 tetap harus digunakan untuk menghitung parasit . Setelah deteksi parasit malaria dalam film tebal, film tipis harus diperiksa untuk menentukan spesies . Jika pengamat yakin apakah parasit malaria yang hadir dalam film tebal , film tipis seluruh harus diperiksa dengan a9100 tujuan , dimulai dengan tepi dan ekor di mana sel-sel terparasit mungkin lebih sering. Hal ini mungkin untuk mengambil 20-40 menit . Jika parasit sangat jarang , co -koordinat dari setiap parasit terdeteksi harus dicatat atau Inggris Finder graticule harus digunakan , untuk memungkinkan konfirmasi kemudian. Perlu dicatat bahwa deteksi gametosit P.falciparum tanpa adanya tahapan lain dari siklus hidup mungkin secara klinis signifikan pada pasien yang tidak diobati karena dapat mengindikasikan infeksi aktif ditekan ( Warhurst & Williams , 1996) . Kuantifikasi parasit . Setiap kali P. falciparum atau P. knowlesi terdeteksi , persentase sel terparasit harus diukur dan dilaporkan segera kepada staf klinis bertanggung jawab , sebagai keparahan parasitemia dapat mempengaruhi pilihan pengobatan . Kuantifikasi harus dilakukan dengan menggunakan film tipis , dengan minimal 1000 sel darah merah sedang diperiksa di daerah yang berbeda dari film . Penggunaan lensa mata dengan graticule atau grid, misalnya , persegi Miller atau Indeks grid, memfasilitasi kuantifikasi . Dalam kasus infeksi ganda , kuantifikasi hanya berlaku untuk P. falciparum atau P. knowlesi . Hanya parasit stadium aseksual harus dihitung yaitu gametosit P. falciparum yang dikeluarkan dari hitungan sel positif . Jika jumlah parasit < 1 dalam 1000 sel , hal ini berguna untuk mengukur pada film tebal . Organisasi Kesehatan Dunia ( WHO ) menggunakan jumlah parasit per mikroliter ( / ll ) darah bukannya persentase parasitemia (World Health Organization , 2010) . Nomor Parasit / ll dapat dihitung dalam kaitannya dengan jumlah sel darah putih ( Warhurst & Williams , 1996; Bowers et al , 2009) atau dari parasitemia persentase dan jumlah sel darah merah . Kuantifikasi parasit harus diulang setiap hari sampai tidak ada parasit ( selain gametosit ) tetap .Konfirmasi diagnosis dan spesies . Semua film malaria harus diperiksa oleh dua pengamat terlatih . Para pengamat kedua dapat memeriksa film secara bersamaan atau kemudian ( misalnya , keesokan harinya ketika film telah diperiksa on call ) . Pengamat kedua harus memiliki pengalaman yang signifikan dalam diagnosis malaria dan harus menjaga / nya keterampilan diperbarui. Pengamat mengkonfirmasikan keberadaan dan spesies parasit malaria juga harus mengkonfirmasi bahwa hitung parasit dari urutan yang benar . Namun, tidak diharapkan bahwa jumlah parasit kedua akan persis sama dengan yang pertama karena batas kepercayaan dari jumlah rendah cukup lebar ( Tabel I ) dan hitung diubah hanya boleh dikeluarkan jika hitungan pertama tidak benar . Jika seorang pasien yang telah melakukan perjalanan di kawasan Asia - Pasifik telah parasit dianggap P. malariae , rujukan mendesak harus dilakukan untuk Referensi Laboratorium Malaria P. knowlesi polymerase chain reaction ( PCR ) karena kedua spesies ini sangat sulit untuk membedakan oleh morfologi . Infeksi P. knowlesi dapat berkembang sangat pesat karena siklus erythrocytic yang hanya membutuhkan waktu 24 jam , dibandingkan dengan 72 jam untuk P. malariae , sehingga tim klinis harus diberitahu bahwa diagnosis P. knowlesi sedang dipertimbangkan . Mikroskopi dalam mendeteksi parasit malaria dan dalam identifikasi spesiesProsedur dasar . Kualitas tebal dan tipis film tinggi ( Bain , 2006; Bain et al , 2011) harus dipersiapkan dan diperiksa dalam semua kasus malaria dicurigai , terlepas dari hasil tes diagnostik cepat immunochromatographic ( RDT ) untuk deteksi antigen malaria . Film tebal harus digunakan untuk mendeteksi parasit malaria dan film tipis untuk identifikasi spesies . Hal ini berguna untuk mempersiapkan empat film tebal dan empat film tipis sehingga dua dari masing-masing dapat bernoda, meninggalkan film cadang untuk mengirim ke pusat rujukan ( lihat Lampiran 1 ) dan untuk studi lebih lanjut jika ada kesulitan diagnostik . Film harus dilakukan tanpa penundaan karena perubahan morfologis parasit terjadi dengan penyimpanan K2 asam ethylenediaminetetraacetic ( K2EDTA ) - antikoagulan darah. film tipisharus dikeringkan , terkena aseton selama 1 menit dan udara kering .A diberikan laboratorium harus memilih salah satu noda dan menjadi mahir menggunakannya . Jika menggunakan Giemsa stain , film tipis kemudian harus diperbaiki dalam metanol selama 1 menit sebelum pewarnaan . Seperti Leishman noda metanol berbasis noda harus dibiarkan pada slide selama 1 menit sebelum menambahkan air buffered pH 7 ? 2 (lihat Lampiran 2 dan 3 ) . Film tebal harus dikeringkan pada 37 C selama 15 menit atau , jika tidak ada urgensi, antara 30 menit dan 1 jam pada suhu kamar dan kemudian harus terkena aseton selama 10 menit dalam botol Coplin sebelum pewarnaan . Entah Giemsa stain atau Bidang noda dapat digunakan . Beberapa laboratorium menggunakan Lapangan noda (lihat Lampiran 2 dan 3 ) untuk film tebal karena lebih cepat . Rutin Mei - Gr unwald - Giemsa ( MGG ) , Wright - Giemsa dan Giemsa noda , termasuk yang digunakan dalam mesin pewarnaan otomatis , tampaknya tidak akan memuaskan karena pH yang digunakan adalah tidak pantas . Dalam kasus seorang pasien sakit parah , hal ini berguna untuk noda film tipis tetap ekstra dengan Lapangan dimodifikasi noda karena ini memungkinkan diagnosis sangat cepat infeksi P. falciparum . Giemsa atau Leishman pewarnaan masih diperlukan untuk identifikasi yang tepat dari spesies lain .Minimal 200 ladang minyak imersi ( 9100 tujuan ) harus diperiksa dalam film tebal , ini akan memakan waktu sekitar 5-10 menit untuk seorang pengamat yang berpengalaman tapi lagi bagi mereka yang tidak sering memeriksa film yang mengandung parasit malaria .Beberapa microscopists berpengalaman lebih memilih untuk memindai dengan A950 lensa minyak imersi dan menggunakan 9100 bertujuan untuk mengidentifikasi spesies parasit dicurigai . 9100 tetap harus digunakan untuk menghitung parasit . Setelah deteksi parasit malaria dalam film tebal, film tipis harus diperiksa untuk menentukan spesies . Jika pengamat yakin apakah parasit malaria yang hadir dalam film tebal , film tipis seluruh harus diperiksa dengan a9100 tujuan , dimulai dengan tepi dan ekor di mana sel-sel terparasit mungkin lebih sering. Hal ini mungkin untuk mengambil 20-40 menit . Jika parasit sangat jarang , co -koordinat dari setiap parasit terdeteksi harus dicatat atau Inggris Finder graticule harus digunakan , untuk memungkinkan konfirmasi kemudian. Perlu dicatat bahwa deteksi gametosit P.falciparum tanpa adanya tahapan lain dari siklus hidup mungkin secara klinis signifikan pada pasien yang tidak diobati karena dapat mengindikasikan infeksi aktif ditekan ( Warhurst & Williams , 1996) . Kuantifikasi parasit . Setiap kali P. falciparum atau P. knowlesi terdeteksi , persentase sel terparasit harus diukur dan dilaporkan segera kepada staf klinis bertanggung jawab , sebagai keparahan parasitemia dapat mempengaruhi pilihan pengobatan . Kuantifikasi harus dilakukan dengan menggunakan film tipis , dengan minimal 1000 sel darah merah sedang diperiksa di daerah yang berbeda dari film . Penggunaan lensa mata dengan graticule atau grid, misalnya , persegi Miller atau Indeks grid, memfasilitasi kuantifikasi . Dalam kasus infeksi ganda , kuantifikasi hanya berlaku untuk P. falciparum atau P. knowlesi . Hanya parasit stadium aseksual harus dihitung yaitu gametosit P. falciparum yang dikeluarkan dari hitungan sel positif . Jika jumlah parasit < 1 dalam 1000 sel , hal ini berguna untuk mengukur pada film tebal . Organisasi Kesehatan Dunia ( WHO ) menggunakan jumlah parasit per mikroliter ( / ll ) darah bukannya persentase parasitemia (World Health Organization , 2010) . Nomor Parasit / ll dapat dihitung dalam kaitannya dengan jumlah sel darah putih ( Warhurst & Williams , 1996; Bowers et al , 2009) atau dari parasitemia persentase dan jumlah sel darah merah . Kuantifikasi parasit harus diulang setiap hari sampai tidak ada parasit ( selain gametosit ) tetap .Konfirmasi diagnosis dan spesies . Semua film malaria harus diperiksa oleh dua pengamat terlatih . Para pengamat kedua dapat memeriksa film secara bersamaan atau kemudian ( misalnya , keesokan harinya ketika film telah diperiksa on call ) . Pengamat kedua harus memiliki pengalaman yang signifikan dalam diagnosis malaria dan harus menjaga / nya keterampilan diperbarui. Pengamat mengkonfirmasikan keberadaan dan spesies parasit malaria juga harus mengkonfirmasi bahwa hitung parasit dari urutan yang benar . Namun, tidak diharapkan bahwa jumlah parasit kedua akan persis sama dengan yang pertama karena batas kepercayaan dari jumlah rendah cukup lebar ( Tabel I ) dan hitung diubah hanya boleh dikeluarkan jika hitungan pertama tidak benar . Jika seorang pasien yang telah melakukan perjalanan di kawasan Asia - Pasifik telah parasit dianggap P. malariae , rujukan mendesak harus dilakukan untuk Referensi Laboratorium Malaria P. knowlesi polymerase chain reaction ( PCR ) karena kedua spesies ini sangat sulit untuk membedakan oleh morfologi . Infeksi P. knowlesi dapat berkembang sangat pesat karena siklus erythrocytic yang hanya membutuhkan waktu 24 jam , dibandingkan dengan 72 jam untuk P. malariae , sehingga tim klinis harus diberitahu bahwa diagnosis P. knowlesi sedang dipertimbangkan .

Pemeriksaan mikroskopis SlideDi daerah endemik yang paling , pemeriksaan geser mikroskopis darah perifer tetap tes yang paling banyak digunakan serta standar emas untuk mendeteksi parasitemia malaria . Tahun 2011 WHO report1 menunjukkan bahwa pada tahun 2010 ada total 165 juta pemeriksaan mikroskopis geser di seluruh dunia . Perkiraan sensitivitas diagnostik evaluasi geser mikroskopis bervariasi sesuai dengan jenis menginfeksi spesies , wilayah geografis , dan faktor lainnya , namun secara umum sensitivitas diagnostik dianggap tidak lebih tinggi dari 75 % . Angka ini didasarkan pada tingkat deteksi parasitemia pada pasien dengan malaria klinis . Untuk pasien dengan malaria nonfalciparum , tingkat rendah parasitemia , atau kekebalan parsial , atau mereka yang sebagian telah dirawat untuk malaria , sensitivitas diagnostik mungkin bahkan lebih rendah dari 75 % . Meski begitu , mikroskop menawarkan keuntungan signifikan atas metode lain , dan , di mana hal itu dapat dilakukan dengan benar dan dengan jaminan kualitas yang baik , tetap standar emas terhadap yang metode lain yang dibandingkan . Mikroskop didasarkan pada pemeriksaan kedua film tebal dan tipis yang terbuat dari sampel yang sama dari darah perifer . Film tipis dibuat dengan cara yang sama seperti untuk setiap apusan darah tepi . Sejumlah noda yang berbeda dapat digunakan , tetapi penting untuk diingat bahwa tidak semua noda memungkinkan deteksi beberapa fitur karakteristik malaria ( misalnya , Schu titik ffner ) . Hal ini juga penting untuk diingat bahwa noda dapat bervariasi dalam kualitas dan konsistensi , dan kontrol kualitas yang memadai dan pengalaman keduanya dibutuhkan untuk memberikan noda yang optimal . Film tebal yang dibuat dengan menempatkan beberapa tetes darah pada slide kaca , memungkinkan darah kering , dan kemudian melisiskan darah (biasanya dengan air ) sebelum pewarnaan . Meskipun film tebal lebih sensitif untuk mendeteksi adanya parasit malaria , mereka tidak sangat berguna dalam speciating parasit , yang harus dilakukan dengan menggunakan film tipis . Meskipun teknologi mikroskop sederhana dan mudah , membuat dan menafsirkan pap malaria membutuhkan pelatihan dan pengalaman yang memadai .Keuntungan diagnostik mikroskop adalah bahwa hal itu ( 1 ) memungkinkan identifikasi definitif menginfeksi spesies serta infeksi campuran , (2 ) dapat digunakan untuk menentukan besarnya parasitemia , (3 ) dapat digunakan untuk pemeriksaan serial untuk memantau efektivitas terapi, ( 4 ) memerlukan prasarana laboratorium kecil , dan ( 5 ) relatif murah . Pemeriksaan mikroskopis geser memang memiliki kelemahan diagnostik , termasuk ( 1 ) tidak mendeteksi parasitemias sangat rendah , (2 ) kesalahan dalam penafsiran yang paling umum dengan baik parasitemias sangat rendah atau sangat tinggi ( yang diagnosis yang akurat sangat penting ) , (3 ) infeksi campuran sering terlewat , dan ( 4 ) itu tidak berguna di daerah tanpa endemis malaria karena ketidakmampuan orang membaca hasil tes tetap cukup kompeten untuk membuat diagnosis yang akurat dan direproduksi .Pemeriksaan mikroskopis geser juga memiliki kelebihan dan kekurangan nondiagnostic . Di antara keuntungan adalah bahwa mikroskop dan personil terlatih dapat digunakan untuk mendiagnosa penyakit menular lainnya , slide dapat dipertahankan untuk membuat catatan permanen untuk pengendalian kualitas , slide mikroskop berlebih dapat digunakan kembali atau didaur ulang , dan metode yang memerlukan prasarana laboratorium minimal. Di antara kelemahan nondiagnostic adalah bahwa metode ini padat karya , yang relatif lambat ( terutama untuk film tebal ) , noda variabel dan metode menghasilkan kualitas smear variabel , metode ini membutuhkan pelatihan yang memadai , dan untuk daerah yang sebelumnya tidak menggunakan metode , memperoleh peralatan yang diperlukan dan personil pelatihan dapat mahal . Kesulitan dalam belajar mengartikan usapan malaria umumnya dibesar-besarkan sebagai batasan , bahkan individu tanpa latar belakang laboratorium dapat dilatih untuk membaca pap dalam jumlah yang wajar waktu dan dengan kesuksesan yang baik .