METODE TRANSFORMASITransformasi sel kompeten E. coli dengan metode CaCl2 pertama kali diperkenalkan oleh Mandel dan Higa (1970). Metode ini cukup efisien dan tidak membutuhkan alat khusus. Dagert dan Ehrlich (1974) memodifikasi metode ini dengan meningkatkan lama paparan sel terhadap CaCl2. Kushner (1978) berusaha meningkatkan efisiensinya dengan menggantikan kalsium dengan kation lainnya . Sedangkan Hanahan (1983) menambahkan beberapa senyawa lain untuk meningkatkan efisiensinya. Protokol di bawah adalah protokol dasar yang relatif tidak rumit.1. Siapkan 10 ng DNA yang akan ditransformasikan (volume DNA0,01-0,025 mL). Masukkan ke dalam 15 mL round-bottom test tube. Letakkan di bak yang berisi es.2. Ambil sel kompeten yang sudah dipersiapkan, cairkan dengan cara dihangatkan dengan tangan, lalu ambil 0,1 mL sel kompeten dan segera masukkan ke dalam tube berisi DNA di atas. Goyang-goyang tabung agar DNA dan sel kompeten tercampur rata, lalu letakkan di bak yang berisi es selama 10 menit. Buang sisa sel kompeten yang tidak terpakai (jangan dibekukan ulang).3. Berikan kejutan panas dengan menempatkan tube berisi DNA dan sel kompeten tersebut ke dalam inkubator air 42 derajat Celcius selama 2 menit ATAU masukkan ke dalam inkubator 37 derajat Celcius selama 5 menit.4. Tambahkan ke dalam tube tersebut 1 mL medium LB. Inkubasi di incubator shaker (250 rpm) 37 derajat Celcius selama 1 jam.5. Sebarkan ke petri agar LB yang mengandung antibiotik yang sesuai. Inkubasi 37 derajat Celcius selama 12-16 jam.Transformasi plasmid DNA ke dalam sel kompeten dengan metode CaCl2 mudah bukan?Daftar pustaka:Dagert, M and Ehrlich, SD. 1974. Prolonged incubation in calcium chloride improves competence of Escherichia coli cells. Gene. 6:23-28.Hanahan, D. 1983. Studies on transformation of Escherichia coli with plasmids. J Mol Biol.166:557-580.Kushner SR. 1978. An improved method for transformation of Escherichia coli with ColEI derived plasmids. In: Genetic Engineering (Boyer, HW.andNicosia, S.eds). Elsevier/North Holland, Amsterdam. pp 17-23.Mandel, M. and Higa, A. 1970. Calcium-dependent bacteriophage DNA infection. J. Mol. Biol. 53:159-162.Ausubel, I. and Frederick, M. 1990. Current protocols in molecular biology. Greene Publishing Associates and Wiley-Interscience.

Transformasi plasmid DNA metode elektroporasi setahu saya adalah metode transformasi yang paling efisien. Saya sendiri sering menggunakan metode ini, terutama untuk plasmid sulit. Metode ini juga dapat digunakan untuk mentransformasikan DNA ke dalam bakteri gram negatif dan positif lainnya (tidak hanya E. coli). Sayangnya alat ini butuh micropulser. Jadi bagi kita yang tidak punya alat ini, mungkin bisa menggunakan metode CaCl2 atau metode satu langkahnya Chung. Untuk transformasi metode elektroporasi, protokolnya bisa dibaca di brosur alat micropulser-nya, yang biasanya seperti ini:1. Set micropulser 2,5 kV, 25 F, 200-400 ohms. Untuk sel mamalia dan sel protoplast membutuhkan 0,5-8 kV/cm, sedangkan untuk E. coli sekitar 12,5 kV/cm.2. Masukkan 5 pg 500 ng DNA (dalam 1-2 L) ke eppendorf tube yang berisi sel kompeten yang sudah disiapkan sebelumnya, baik dengan metode ini maupun metode ini. Campur dengan cara memipet secara lembut, jangan sampai ada gelembung udara!!!3. Pindahkan DNA dan sel kompeten di atas ke dalam cuvette yang sudah didinginkan di bak es selama 5 menit, ketuk-ketuk perlahan agar campuran tersebut sampai ke dasar cuvette, lalu keringkan dinding luar cuvette dengan Kimwipe (sampai kering betul). JIka tidak ada Kimwipe boleh menggunakan tissue yang benar-benar halus.4. Letakkan cuvette ke dalam sumurnya.5. Tekan tombol pulse 5-10 detik (pada beberapa alat sampai terdengar bunyi beep).6. Ambil cuvette dan segera masukkan 1 mL medium SOC dengan menggunakan pipet Pasteur, lalu segera pindahkan semuanya ke dalam 15 ml-PP tube. Inkubasi selama 30-60 menit (jangan sampai lebih dari 90 menit!) di incubator shaker (250 rpm) 37 derajat Celcius.7. Sebarkan ke petri agar LB yang mengandung antibiotik yang sesuai.Mudah, bukan?Daftar Pustaka:Ausubel, I. and Frederick, M. (eds).1990. Current protocol in molecular biology. Greene Publishing Associates and Wiley-Interscience.Calvin, HM. and Hanawalt, PC. 1988. High-efficiency transformation of bacterial cells by electroporation. J Bacteriol. 170:2796-2801.Dower, WJ., Miller, JF., and Ragsdale, CW. 1988. High efficiency transformation of E. coli by high voltage electroporation. Nucl Acids Res. 16:6127-6145.