LAPORAN HASIL PRAKTEK KERJA LAPANGAN

KANDUNGAN KARBOHIDRAT, LEMAK, PROTEIN DAN PIGMEN DARI BERBAGAI

JENIS MIKROALGA

I Wayan Hermawan (1108105010)Luh De Dwi Jayanthi (1108105024)I Gede Andy Andika Parahita (1108105030)Muhammad Nazib (1108105036)

OLEH :

PENDAHULUAN• SEJARAH SINGKAT LEMBAGA Didirikan pada tanggal 13

Januari 1986 berdasarkan Kepres RI Nomor 1 Tahun 1986.

Fungsi : -program penelitian di bidang bioteknologi, rekayasa genetika, bioproses,-memberikan pelayanan di bidang bioteknologi, -memberikan masukan perumusan kebijakan IPTEK dibidang bioteknologi, -kerjasama penelitian dan penguasaan bioteknologi

Pusat Penelitian dan pengembangan (Puslitbang) Bioteknologi Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI)

PENDAHULUAN• VISI

• MISI

“Menjadi lembaga penelitian bioteknologi terdepan yang didukung oleh sumber daya profesional”

1. Menguasai iptek di bidang bioteknologi2. Pengungkapan, peningkatan nilai tambah dan penyelamatan

sumber daya alam hayati 3. Memberikan masukan kepada pemerintah dalam menyusun

kebijakan di bidang bioteknologi4. Ikut serta dalam usaha mencerdaskan kehidupan bangsa melalui

pemasyarakatan IPTEK bidang bioteknologi5. Meningkatkan kinerja dan tata kelola lembaga riset yang baik

(good corporate governance)6. Meningkatkan profesionalitas, kesejahteraan pegawai dan

karyawan

- Jalan Raya Jakarta-Bogor KM 46 Cibinong, Bogor

• LOKASI LEMBAGA

PENDAHULUAN• MANAJEMEN LEMBAGA

PENDAHULUAN• TUJUAN PRAKTEK KERJA LAPANGAN• TUJUAN UMUM

• TUJUAN KHUSUS

Untuk mengetahui aplikasi ilmu kimia dalam laboratorium bioproses, serta untuk mengenal dunia kerja yang nyata sehingga dapat menumbuhkan motivasi untuk mempersiapkan diri

Mengetahui pengukuran pertumbuhan sel mikroalga dengan mengukur optical density (OD) atau rapat optis kultur mikroalga Spirulina Platensis, Chlorella Vulgaris dan Nanochloropsis pada panjang gelombang (λ) 680 nm. Setelah diketahui nilai optical density (OD) dari masing-masing kultur, kemudian diuji kandungan karbohidrat, protein, pigmen untuk mikroalga Spirulina Platensis sedangkan untuk Chlorella Vulgaris dan Nanochloropsis dilakukan uji kandungan karbohidrat dan lemak

PENDAHULUAN• METODE PRAKTEK KERJA LAPANGAN

- Metode pengamatan secara langsung untuk memperoleh data primer, yaitu dengan melakukan analisis mikroalga di Laboratorium Bioproses, Puslit Bioteknologi LIPI.

- Pencatatan data hasil analisis mikroalga yang dilakukan secara berkala sesuai dengan metode kerja

- Metode yang digunakan untuk memperoleh data sekunder adalah melakukan pencarian referensi di internet dan literatur lain dari dalam maupun luar lembaga

ANALISIS KANDUNGAN KARBOHIDRAT, LEMAK, PROTEIN DAN PIGMEN DARI

BERBAGAI JENIS MIKROALGA

• ALAT :

• BAHAN :

Tabung reaksi, pipet tetes, pipet mikro, tip, gelas ukur 10 mL, 100 mL, dan 500 mL, Erlenmeyer, kertas pH, gelas kultur 2 liter, Sonifier , Spektrofotometer UV-Vis U-3900 H Hitachi, sentrifugator, fotobioreaktor

Medium Johnson, Medium Zarrouk, Larutan standar albumin, Larutan standar glukosa, Larutan biuret, Larutan fenol 5%, H2SO4, Buffer pospat pH 6,8, CaCl2, Metanol, Kloroform, aquadest

PROSEDUR PENELITIAN• Studi Literatur Studi literatur dilakukan sebelum menjalankan persiapan, semua literatur yang berkaitan dengan penelitian dikumpulkan dan dipelajari. 

•Persiapan Peralatan dan Medium Peralatan seperti fotobioreaktor (tempat kultur), filter udara, selang pengalir udara saat aerasi, pipa plastik pengalir udara, dan  medium  Johnson serta medium Zarrouk disterilisasi terlebih dahulu untuk meninimalisasi adanya kontaminan saat melakukan kultur. 

• STERILISASI PERALATANLangkah-langkah sterilisasi alat adalah sebagai berikut : 1.Pencucian alat2.Pengeringan• PEMBUATAN MEDIUM JOHNSON

Bahan JumLah

NaCl 27 gram

MgCl2 1,5 gram

MgSO4 0,5 gram

KCl 0,2 gram

CaCl2 0,2 gram

NaHCO3 0,043 gram

KH2PO4 0,035 gram

Mikronutrien 1 mL

Larutan Fe+EDTA 1 mL

KNO3 0,4 gram

• PEMBUATAN MEDIUM ZARROUCK

Bahan JumLah

MgSO4 heptahidrat 0,2 gram

CaCl2 0,12 gram

EDTA 0,64 gram

Urea 0,31 gram

TSP 0,18 gram

KOH 0,5 gram

K2SO4 0,5 gram

NaHCO3 16,8 gram

FeSO4 0,01 gram

• KULTUR MIKROALGA

Pengkulturan mikroalga pada media botol kaca

• PENENTUAN OPTICAL DENSITY (OD)

10 ml kultur mikroalga

diambil dengan pipet volume, ditaruh dalam tabung reaksiKemudian absorbansi diukur pada λ 680 nm

Nilai absorbansi pada λ 680 nm 

• PEMBUATAN KURVA STANDAR PROTEIN

0,05 gram albumin + aquades hingga 10 ml

Diambil sebanyak 200, 400, 600 dan 800 µL kemudian diencerkan dengan akuades hingga 1 mL dan ditambahkan larutan biuret

Larutan standar protein 5000 ppm

Larutan standar protein 1000, 2000, 3000, 4000 ppm

Diukur absorbansi pada λ 550 nm

Nilai absorbansi pada λ 550 nm

• PEMBUATAN KURVA STANDAR GLUKOSA

0,0001 gram glukosa dilarutkan dengan akuades hingga 10 ml

Larutan standar glukosa 100 ppm

Larutan diencerkan berturut-turut 50,100,150,200,250 dan 300 μL dengan akuades

Larutan yang diencerkan

Ditambahkan 500 μL dan 2,5 mL H2SO4 pekat 

Larutan standar glukosa

Diukur absorbansi menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada λ 485 nm

Nilai absorbansi pada λ 485 nm 

• Data absorbansi standar protein pada Tabel 3.3

Konsentrasi

(ppm)

Absorbansi

0 0,018

1000 0,085

2000 0,135

3000 0,185

4000 0,232

5000 0,281

Tabel 3.3 Absorbansi larutan standar protein

Dari data tersebut, diperoleh kurva dengan Persamaan 3.1  r = 0,9981. Persamaan 3.1 diperoleh melalui perhitungan pada Lampiran 1.

y = 0,0000516x + 0,027

Kurva kalibrasi standar protein

• Data absorbansi standar glukosa pada Tabel 3.4

Tabel 3.4 Absorbansi larutan standar glukosa

Konsentrasi

(ppm)

Absorbansi

0 0,095

10 0,147

20 0,308

30 0,427

40 0,508

50 0,614

60 0,830

Dari data tersebut, diperoleh kurva dengan Persamaan 3.2 r = 0,9901 Persamaan 3.2 diperoleh dari perhitungan Lampiran 2.

y = 0,0119x + 0,0607

Kurva kalibrasi standar karbohidrat

UJI PROTEIN

100 mg biomassa  mikroalga 

Dimasukkan dalam 3 buah tabung reaksi + 4 mL biuret, lalu disonikasi selama 4 menit pada 40 Hz

Campuran 

Disentrifugasi pada 4000 rpm ; 5 menit

Pelet Supernatan

Absorbansi diukur dengan spektrofotometer UV-Vis pada λ 550 nm

Nilai absorbansi pada λ 550 nm

UJI KARBOHIDRAT

100 mg biomassa mikroalga 

Dimasukkan ke dalam tiga buah tabung reaksiDitambahkan 400μL  larutan fenol 5% dan 2,5 mL H2SO4 pekat, diinkubasi 30 menit

Campuran

Absorbansi diukur dengan spektrofotometer UV-Vis pada λ 485 nm

Nilai absorbansi pada λ 485 nm

UJI PIGMEN

100 mg biomassa mikroalga

Dimasukkan ke dalam tiga buah tabung reaksiDisentrifugasi pada 4000 rpm; 5 menit

Supernatan Pelet

Campuran IICampuran I

5 mL CaCl2  5mL akuades

Campuran III

5 mL BP pH 6,8

Disimpan dalam freezer selama 1 hari, kemudian diinkubasi dalam ruangan gelap hingga mencair

UJI PIGMEN

Masing- masing campuran

Disentrifugasi pada 4000 rpm; 5 menit

SupernatanPelet

Absorbansi diukur dengan spektrofotometer UV-Vis pada λ 620 nm, λ 650 nm dan λ 565 nm

Nilai absorbansi pada λ 620 nm, λ 650 nm dan λ 565 nm 

Kadar pigmen diukur dengan rumus : 

UJI LEMAK

100 mg biomassa mikroalga

Dimasukkan ke dalam tiga buah tabung reaksiDitambah 5 mL pelarut (metanol : kloroform: air = 2:1:0,8)

Campuran

Supernatan

Disonikasi 5 menit, 40 HzDisentrifugasi 5 menit pada 4000 rpm

Pelet

Ditambah 4 mL pelarut (kloroform : air = 1:1)Diinkubasi selama satu hari, suhu kamar 

Lapisan air Lapisan Kloroform

Berat lemak dihitung sesuai dengan Persamaan 3.4Berat lemak = (Berat tabung reaksi + crude lemak) – berat tabung reaksi kosong.

Lapisan Kloroform

Ditampung dalam tabung reaksiDioven

Crude lemak

Ditimbang

Crude lemak

UJI LEMAK

HASIL PENGAMATANOptical Density (OD) Berbagai Jenis Mikroalga

HASIL PENGAMATANKADAR PROTEIN

HASIL PENGAMATANKADAR PROTEIN

HASIL PENGAMATANKADAR KARBOHIDRAT

HASIL PENGAMATANKADAR KARBOHIDRAT

HASIL PENGAMATANKADAR KARBOHIDRAT

HASIL PENGAMATANKADAR KARBOHIDRAT

HASIL PENGAMATANKADAR PIGMEN

HASIL PENGAMATANKADAR PIGMEN

HASIL PENGAMATANKADAR PIGMEN

HASIL PENGAMATANKADAR LEMAK

SIMPULAN DAN SARAN

• SIMPULAN• Nilai OD dari mikroalga yang diukur semakin meningkat menunjukkan mikroalga dapat tumbuh dari medium yang dibuat.

• Mikroalga yang memiliki kandungan karbohidrat dan lemak paling tinggi  adalah Nannochloropsis sp.

• Mikroalga yang memiliki kandungan protein dan pigmen paling tinggi adalah Spirullina Platensis dalam medium Zarrouck.

• Kandungan karbohidrat, lemak, protein, dan pigmen dari mikroalga berbanding lurus dengan meningkatnya nilai OD.

SIMPULAN DAN SARAN

• SaranKarena  pertumbuhan  mikroalga  yang  didapatkan  kurang maksimal  dan  beberapa  jenis  mikroalga  lain  juga  tidak  dapat diteliti  karena  tidak  dapat  tumbuh  sesuai  dengan  yang diharapkan,  maka  saran  yang  dapat  diberikan  adalah  untuk melakukan  pengawasan  secara  lebih  teliti  mengenai pengkulturan mikroalga dengan menggunakan alat  yang  sesuai dengan  standar  laboratorium dan menjaga  sterilisasi  alat  serta media  yang  digunakan  sehingga  pertumbuhan mikroalga  tidak terganggu.  

Terimakasih