kelompok 5_mic padat

LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI FARMASI

PENENTUAN MINIMUM INHIBITORY CONCENTRATION (MIC) DARI

SUATU SEDIAAN UJI YANG BERPOTENSI SEBAGAI ANTIBIOTIK

DENGAN METODE MIC PADAT

Rabu,22 April 2015

Kelompok V

Rabu, Pukul 13.30 16.30 WIB

Nama NPM Tugas

M. Nur Iqbal 260110130105 Alat dan Bahan,

Prosedur, Data

Pengamatan

Yulina Saragih 260110130106 Tujuan, Prinsip, Teori

Dasar, ,Daftar

Pustaka

Cyntia G 260110130107 Pembahasan,

Simpulan,

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI FARMASI

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS PADJADJARAN

2015

Nilai TTD

(Shintya Noor Amalya) (Benedictus Genta P)

PENENTUAN MINIMUM INHIBITORY CONCENTRATION (MIC) DARI

SUATU SEDIAAN UJI YANG BERPOTENSI SEBAGAI ANTIBIOTIK

DENGAN METODA MIC PADAT

I. TUJUAN

Menentukan Minimum Inhibitory Concentration (MIC) suatu

antibiotika (kloramfenikol) terhadap bakteri Gram negatif, Escherichia coli,

dan bakteri Gram positif, Staphylococcus aureus, dengan metoda MIC padat.

II. PRINSIP

Pengenceran Konsentrasi

larutan antibiotika (Rimfamisin ) V1.M1 = V2.M2

MIC

MIC adalah konsentrasi terendah dimana pertumbuhan bakteri

terhambat suatu antibiotik yang berlainan terhadap bakteri tertentu.

Pertumbuhan Bakteri

Media padat diperoleh dengan menambahkan agar. Agar berasal dari

ganggang merah. Agar digunakan sebagai bahan pemadat karena tidak

diuraikan oleh mikroorganisme,dan membeku pada suhu diatas 45C

kandungan agar berbagai bahan pemadat dalam media adalah 1,5-2%

Teknik Aseptis

adalah suatu metode atau teknik didalam memindahkan atau menstranfer

kultur bakteria dari satu tempat ke tempat lain secara aseptis agar tidak

terjadi kontaminasi oleh mikroba lain ke dalam kultur. Teknik transfer

aseptis ini sangat esensial dan kunci keberhasilan prosedur microbial

yang harus diketahui oleh seorang yang hendak melakukan analisis

mikrobiologi.

Metode Lempeng Agar

Informasi mengenai kinetika kematian suatu populasi bakteri sangat

penting untuk memahami dasar sterilisasi suatu bahan yang mematikan.

Kriteria kematian pada mikroba adalah hilangnya kemampuan untuk

berreproduksi yang berisifat irreversible. Hal ini biasanya ditentukan

melalui teknik lempeng agar dengan menghitung jumlah koloni yang

bertahan hidup.

III. TEORI DASAR

Minimum inhibitory concentration (MIC), adalah konsentrasi terendah

dari antimikroba yang akan menghambat pertumbuhan dari mikroorganisme

setelah diinkubasi semalaman. MIC sangat penting dalam diagnosa

laboratorium untuk mengetahui resistensi dari mikroorganisme terhadap

antimikroba dan juga untuk memonitor aktivitas dari senyawa-senyawa

antimikroba. Secara klinis, MIC tidak hanya digunakan untuk menentukan

jumlah dari antibiotik yang akan diterima oleh pasien tetapi juga tipe dari

antibiotik yang digunakan, yang mana dapat menurunkan resistensi mikroba

terhadap antimikroba tertentu.( Jawetz, et al. 2004.)

Antibiotik adalah bahan yang dihasilkan mikroorganisme yang

membunuh atau menghambat pertumbuhan mikroorganisme

lainnya.Antibiotik banyak digunakan dalam pengobatan penyakit. Namun

demikian tidak semua antibiotic dapat digunakan dalam pengobatan penyakit.

Sebelum diberikan sebagai pengobatan, sebaiknya ditentukan dahulu

antibiotic mana yang paling ampuh untuk mengobati penyakit. Cara yang

lazim digunakan untuk engetahui keampuhan antibiotic adalah antibiogram

atau uji kepekaan antibiotic terhadap pathogen penyebab penyakit ( Bibiana,

1994).

Antibiotik dapat diklasifikasikan berdasarkan spectrum atau kisaran

kerja mekanisme aksi, strain penghasil, cara biosintesis maupun berdasarkan

struktur biokimianya. Berdasarkan spectrum atau kisaran kerjanya antibiotic

dapat dibedakan menjadi antibiotic berspektrum sempi (narrow spectrum) dan

antibiotic berspektrum luas ( broad spectrum). Berdasarkan mekanisme

aksinya antibiotic dibedaka menjadi lima, yaitu antibiotic dengan mekanisme

menghambat sintesis dinding sel, perusakan membrane plasma,

penghambatan sintesis protein, penghambatan sintesis asam nukleat, dan

penghambatan sintesis metabolit esensial (Pratiwi, 2007).

Penggunaan antibiotic secara kombinasi ( dua antibiotic yang

digunakan secara bersama-sama) dapat saling mempengaruhi kerja dari

masing-masing antibiotic. Kombinasi antibiotic tersebut dapat bersifat

antagonis, dimana antibiotic yang satu bersifat mengurangi atau meniadakan

khasiat antibiotic kedua. Kombinasi antibiotic dapat pula bersifat sinergis,

yaitu penggunaan antibiotic secara kombinasi yang menyebabkan timbulnya

efek teraupetiknya yang lebih besar dibandingkan bila antibiotic tersebut

diberikan secara sendiri-sendiri. (Pratiwi, 2007).

Resisten adalah ketahan suatu mikroorganisme terhadap suatu anti

mikroba atau antibiotic tertentu. Resisten tersebut dapat berupa resisten

alamiah, resisten karena adaya mutasi spontan (resisten kromonal) dan

resisten karena adanya factor R pada sitoplasma (resistensi ekstrakrosomal)

atau resisten karena terjadinya pemindahan gen yang resisten atau factor R

atau plasmid R atau plasmid (resisten silang) atau dapat dikatakan bahwa

suatu mikroorganisme dapat resisten terhadap obat-obat antimikroba, karena

mekanisme genetic atau no-genetik (Djide, 2008).

Penyebab terjadiya resisten terhadap mikroorganisme adalah

penggunaan antibiotic yang tidak tepat, mislanya penggunaan dengan dosis

yang tidak memadai, pemakaian yang tidak teratur atau tidak kontinyu,

demikian juga waktu pengobatan yang tidak cukup lama, sehingga untuk

mencegah atau memperlambat terjadinya resisten tersebut , maka cara

pemakaian antibiotic perlu diperhatikan ( Djide , 2008).

Ada beberapa cara untuk menentukan kekuatan preparat antibiotic.

Penentuan ini biasanya dilakukan dalam Laboratorium pengontrol dibawah

pengawasan instansi pemerintah, misalnya di Amerika dilakukan oleh FDA.

Cara-cara penentuan ini biasanya dimuat dalam farmakope dari tiap egara

pada pemeriksaan ini semua bahan-bahan yang digunakan, medium

pembiakan, organisme uji, alat-alat harus menurut ketentuan yang telah

dibakukan. Penentuan kekuatan ini dapat dilakukan dengan tujuan sebagai

berikut (Irianto, 2006).

1.Menghitung daerah penghambatan dalam lempeng agar dapat

menghambat pertumbuhan ( Minimal Inhibitory Concentration, MIC)

2. Penentuan kesensitifan (Sensivity test) dari suatu antibiotic terhadap

organism yang belum diketahui. Penentuan ini bisanya dilakukan di

laboratorium rumah sakit, dan penting untuk melakukan terapi.

Kemudian, para peneliti di seluruh dunia memperoleh banyak zat lain

dengan khasiat antibiotis. Akan tetapi, berhubung denga sifat toksisnya bagi

manusia, hanya sebagian kecil saja yang dapat digunakan sebagai obat. Yang

terpenting diantaranya adalah streptomisin(1944),kloramfenikol(1947),

tetrasiklin(1948),eritromisin(1952),rifampisin(1960),bleomisin(1965),

doksorubisin(1969),minosiklin(1972),dan,tobramisin(1974).

(Nester,E.W.,C.E.Roberts & B.J.McCarthy,1973).

Pembuatannya

Lazimnya antibiotika dibuat secara mikrobiologi, yaitu fungi dibiakan

dalam tangki-tangki besar bersama zat-zat gizi khusus. Oksigen atau udara

steril disalurkan ke dalam cairan pembiakan guna mempercepat pertumbuhan

fungi dan meningkatkan produksi antibiotikumya. Setelah diisolasi dai cairan

kultur antbiotikum dimurnikan dan aktifitasnya ditentukan.

Antibitika semisintetis, yaitu apabila pada persemaian(culture substrate)

dibubuhi

zat-zat pelopor tertentu, maka zat-zat ini diinkorporasi kedalam

antibiotikum dasarnya. Hasilnya disebut senyawa semisintetis, misalnya

penisilin-V.

Antibitika sintetis tidak dibuat lagi dengan jalan biosintetis tersebut,

melainkan dengan sintesa kimiawi, misalanya kloramfenikol.

(Entjang,2003).

Mekanisme Kerja

Cara kerja yang terpenting adalah perintangan sintesa protein, sehingga

kuman musnah atau tidak berkembang lagi, misalanya kloramfenikol,

tetrasiklin, aminoglikosida, makrolida, dan linkomisin. Selain itu

beberapa antibiotika bekerja terhadap dinding sel (penisilin dan

sefalosporin) atau membran sel (polimiksin, zat-zat polyen dan imidazol).

Antibiotika tidak aktif terhadap kebanyaka virus kecil, mungkin karena

virus tidak memiliki proses metabolisme sesungguhnya, melainkan

tergantung seluruhnya dari proses tuan-rumah. (Todar,2007).

Aktifitasnya

Pada umumnya aktivitasnya dinyatakan dengan satuan berat (mg),

kecuali zat-zat yan belum dapat diperoleh 100% murni dan terdiri dari

campuran beberapa zat. Misalnya, polimiksin B, basitrasin, dan nistatin,

yang aktivitasnya selalu dinyatakan dengan Satuan Internasional (I.U.).

Begitu pula senyawa kompleks dari penisilin, yakni prokain-dan

bezantin-penisilin.

Penggunaan

Antibiotika digunakan untuk mengobati berbagai jenis infeksi akibat

kuman aau juga untuk prevensi infeksi, misalnya pada pembedahan

besar. Secara profilaktis juga diberikan pada pasien dengan sendi dal klep

jantung buatan, juga sebelum cabut gigi.

Penggunaan penting non-terapeutis adalah sebagai stimulans

pertumbuhan dalam peternakan sapi, babi, dan ayam. Efek ini secara

kebetulan ditemuakan pada tahun 1940-an, tetapi mekanisme kerjanya

belum diketahui dengan jelas. Diperkirakan antibiotika bekerja setempat

di dalam usus dengan menstabilisir floranya. Kuman-kuman buruk

yang merugikan dikurangi jumlah dan aktivitasnya, sehingga zat-zat gizi

dapat dipergunakan lebih baik. Pertumbuhan dapat distimulasi dengan

rata-rata 10%. Yang digunakan adalah terutama makrolida dan

glikopeptida dalam makanan ternak dan jumlahnya kini sudah meningkat

sampai lebih dari 3 kali daripada pengunaannya sebagai obat pada

manusia. (Schlegel,1994).

IV. ALAT DAN BAHAN

a). Alat

1. Cawan petri

2. Inkubator

3. Labu ukur 100 ml

4. Micro pipet

5. Mortir dan stamfer

6. Pembakar spiritus

7. Rak tabung

8. Tabung reaksi besar dan kecil

9. Volume pipet berukuran 1 ml dan 10 ml

b). Bahan

1. Air suling

2. Antibiotik

3. Berbagai suspensi bakteri Gram positif maupun Gram negatif

4. Nutrient Agar (NA)

5. Pelarut sediaan uji

c). Gambar alat

Prosedur

1 Cawan petri 2 inkubator 3 Labu ukur

6 Pembakaran Spirtus 5 Mikro pipet 4 Mortir & Stemper

7 Tabung Reaksi 6 Rak Tabung

8 Volume Pipet

V. PROSEDUR

Rimfamycine digerus dalam mortir lalu dimasukkan ke dalam labu

ukur dan dilarutkan dengan sedikit pelarutnya. Kemudian ditambahkan

air suling steril sampai tanda batas. Dihitung pengenceran dan konsentrasi

campuran pada masing- masing tabung reaksi besar. Pengenceran

dilakukan secara bertingkat larutan sediaan uji dengan air suling dalam

tabung-tabung reaksi besar. Tabung reaksi besar pertama diisi dengan

1mL antibiotic ditambah 4 ml aqudest steril, sedangkan tabung-tabung

reaksi selanjutnya diisi dengan 1 ml antibiotic ditambah 1 mL aquadest

steril. Setelah itu buatlah permukaan dasar cawan dibagi menjadi area-area

sama besar menggunakan spidol dan diberi label nama bakteri yang akan

digunakan pada setiap area. Dipipet 1 ml masing-masing pengenceran ke

dalam cawan-cawan petri dan ditambahkan 19 ml NA cair bersuhu 40-50

0C, dihomogenkan dengan cara goyangkan beberapa saat membentuk

angka delapan 8, lalu diamkan sampai membeku.Setelah itu diambil

menggunakan mikro pipet masing-masing bakteri pada area yang terpisah.

Dibuatkan kontrol positif yang terdiri dari 20 ml NA dalam cawan petri,

yang dipipet menggunakan mikro pipet oleh bakteri-bakteri yang

digunakan di area yang terpisah. Setelah itu barulah diinkubasikan semua

cawan petri pada suhu 37 0C selama 18-24 jam dan amati pertumbuhan

bakteri dari koloni-koloni yang tampak, kemudian dibandingkan

morfologi koloni-koloni tersebut dengan kontrol positif. Barulah

ditentukan dimana MIC nya. MIC terletak pada cawan petri terakhir yang

tidak tampak koloni bakteri. Masukkan sediaan uji ke dalam labu ukur,

larutkan dengan sedikit pelarutnya. Kemudian tambahkan air suling steril

sampai tanda batas. Jika sediaan uji berbentuk padat, gerus dahulu dalam

mortir, sebelum dimasukkan dalam labu ukur.

2. Rencanakan pengenceran dan hitung konsentnsi campuran pada

masing- masing tabung besar dan cawan-cawan petri.

3. Buat pengenceran bertingkat larutan sediaan uji dengan air suling dalam

tabung-tabung reaksi besar.

Setelah itu buatlah permukaan dasar cawan dibagi menjadi area-area sama

besar menggunakan spidol dan diberi label nama bakteri yang akan

digunakan pada setiap area. Dipipet 1 ml masing-masing pengenceran ke

dalam cawan-cawan petri dan ditambahkan 19 ml NA cair bersuhu 40-50

0C, dihomogenkan dengan cara goyangkan beberapa saat membentuk

angka delapan 8, lalu diamkan sampai membeku.Setelah itu diambil

menggunakan mikro pipet masing-masing bakteri pada area yang terpisah.

Dibuatkan kontrol positif yang terdiri dari 20 ml NA dalam cawan petri,

yang dipipet menggunakan mikro pipet oleh bakteri-bakteri yang

digunakan di area yang terpisah. Setelah itu barulah diinkubasikan semua

cawan petri pada suhu 37 0C selama 18-24 jam dan amati pertumbuhan

bakteri dari koloni-koloni yang tampak, kemudian dibandingkan

morfologi koloni-koloni tersebut dengan kontrol positif. Barulah

ditentukan dimana MIC nya. MIC terletak pada cawan petri terakhir yang

tidak tampak koloni bakteri.

VI. DATA PENGAMATAN DAN PERHITUNGAN

Data Pengamatan

NO Konsentrasi Setelah Inkubasi

1

10g/mL

2

5g/mL

3

2,5g/mL

JENIS BAKTERI CAWAN PETRI

1. 10g/mL 2. 5g/mL 3. 2,5g/mL

SA + + +

EC + + +

BS - - -

PERHITUNGAN KONSENTRASI :

Pengenceran :

1. N1 x V1 = N2 x V2

1000 x 1 = 200 x V2

V2 = 5 mL ( 1mL antibiotic 2500g/mL, 4mL aqua.steril )

2. N1 x V1 = N2 x V2

200 x 1 = 100 x V2


3. N1 x V1 = N2 x V2

100 x 1 = 50 x V2


Konsentrasi Antibiotik Dalam Cawan ( V=20 mL )

1. N1 x V1 = N2 x V2

200 x 1 = N2 x 20

N2 = 10 g/mL

2. N1 x V1 = N2 x V2

100 x 1 = N2 x 20

N2 = 5 g/mL

3. N1 x V1 = N2 x V2

50 1 = N2 x 20

N2 = 2,5 g/mL

Simpulan :

MIC untuk bakteri SA > 10g/mL

MIC untuk bakteri BS < 2,5g/mL

MIC untuk bakteri EC > 10g/mL

VII. PEMBAHASAN

Pada praktikum ini dilakukan uji MIC (Minimum Inhibition

Concentration) atau konsentrasi antibiotika minimum yang diperlukan

untuk menghambat pertumbuhan bakteri, yang ditandai dengan adanya

pertumbuhan koloni pada media. Uji ini dilakukan pada media padat yang

dibuat dari MHA (Mueller Hinton Agar). Tujuan uji MIC ini adalah untuk

menentukan pada konsentrasi antibiotic berapa, tidak ditemukan lagi

pertumbuhan koloni bakteri yang diinokulasikan. Nilai MIC digunakan

untuk menentukan nilai MBC (Minimum Bactericidal Concentration) dan

menentukan nilai MEC (Minimum Effective Concentration).

Uji MIC dilakukan terhadap Escherichia coli, Staphylococcus Aureus dan

Bacillus Subtilis. Jenis antibiotik yang digunakan dalam pengujian yaitu

rifampisin pada konsentrasi g/mL. Masing-masing jenis antibiotik

ditambahkan pada media agar yaitu MHA. Pertama-tama, sediaan uji yaitu

rifampisin digerus dahulu dalam mortir, kemudian dimasukkan ke dalam

labu ukur 100 mL. Antibiotik dalam labu ukur kemudian dilarutkan

dengan sedikit pelarutnya. Kemudian ditambahkan air suling steril sampai

tanda batas (hingga 100 mL).

Selanjutnya, dihitung konsentrasi pengenceran antibiotic pada masing-

masing tabung besar dan cawan-cawan petri. Konsentrasi yang ingin

dicapai yaitu 250 g/mL , 125 g/mL dan 62,5 g/mL . Dibuat

pengenceran bertingkat larutan sediaan uji dengan air suling dalam

tabung-tabung reaksi besar. Pengenceran pertama, 1 mL larutan stok

antibiotik diambil lalu dimasukkan kedalam tabung reaksi baru dan

ditambah air suling 19 mL, sehingga konsentrasi yang didapatkan sebesar

100 g/mL. Pengenceran kedua, 1 mL antibiotik konsentrasi 100 g/mL

diambil dan dimasukkan kedalam tabung reaksi baru dan ditambahkan 1

mL air, sehingga didapatkan konsentrasi 50 g/mL. Pengenceran ketiga, 1

mL antibiotic 50 g/mL diambil dan dimasukkan kedalam tabung reaksi

baru dan ditambahkan 1 mL air, sehingga didapatkan konsentrasi 25

g/mL.

Setelah dilakukan pengenceran, dibagi permukaan dasar cawan

menjadi area-area sama besar sebanyak 3 area. Diberi label nama bakteri

yang akan digunakan pada setiap area. Dipipet 1 ml masing-masing

pengenceran ke dalam cawan-cawan petri. Tambahkan 19 ml MHA cair

bersuhu 40-50oC sehingga konsentrasi dalam cawan petri menjadi 1/10

konsentrasi tiap-tiap pengenceran. Pada cawan petri pertama, didapatkan

konsentrasi sebesar 10 g/mL, pada cawan petri kedua, didapatkan

konsentrasi sebesar 5 dan pada cawan petri ketiga didapatkan konsentrasi

sebesar 2,5 g/mL. Setelah ditambahkan MHA, digoyangkan beberapa

saat, lalu diamkan sampai membeku. MHA yang digunakan tidak boleh

terlalu panas karena mungkin akan merusak antibiotik, dan tidak boleh

terlalu dingin karena ketika membeku, permukaan akan berlekuk-lekuk

sehingga sulit diamati pertumbuhan bakteri.

Selanjutnya, bakteri dimasukkan pada area yang terpisah dengan

menggunakan mikro pipet sebanyak 1 L. Setelah itu, dinkubasikan

semua cawan petri pada suhu 370C selama 18-24 jam. Kontrol positif dan

negative tidak dibuat karena cawan petri tidak cukup dan tidak diminta

untuk dilakukan.

Penentuan MIC padat lainnya dapat dilakukan dengan metode dilusi

agar yaitu dengan menambahkan bakteri kedalam media agar, kemudian

media dilubangi dengan perforator dan diisi dengan antibiotic atau

menggunakan cakram kertas yang berisi antibiotic. Selanjutnya,

diinkubasi dan dilihat apakah ada zona bening yang terbentuk disekeliling

lubang atau cakram kertas. Jika terbentuk lubang, berarti antibiotic mampu

menghambat pertumbuhan bakteri atau bahkan mebunuhnya. Keuntungan

MIC padat adalah satu konsentrasi antibiotika dapat digunakan untuk

menguji beberapa bakteri, atau satu bakteri dapat diuji pada beberapa

konsentrasi antibiotic.

Pengerjaan dilakukan dengan teknik aseptis untuk menghilangkan

kontaminasi bakteri lain atau jamur dalam percobaan. Pengerjaan

dilakukan dekat dengan api, sehingga bakteri dalam udara yang

kemungkinan akan melekat pada alat dan atau bahan segera mati. Pipet

volume dan mikro pipet tidak boleh difiksasi diatas api karena dapat

merusak skala pengukuran dan alat dapat terbakar. MHA dan air suling

yang ditambahkan kedalam antibiotic harus steril. Cara sterilisasi

misalnya dengan autoklaf. Autoklaf adalah alat pemanas tertutup yang

digunakan untuk mensterilisasi suatu benda menggunakan uap bersuhu

dan bertekanan tinggi (1210C, 15 lbs) selama kurang lebih 15 menit.

Penurunan tekanan pada autoklaf tidak dimaksudkan untuk membunuh

mikroorganisme, melainkan meningkatkan suhu dalam autoklaf. Suhu

yang tinggi inilah yang akan membunuh microorganisme. Autoklaf

terutama ditujukan untuk membunuh endospora, yaitu sel resisten yang

diproduksi oleh bakteri, sel ini tahan terhadap pemanasan, kekeringan, dan

antibiotik. Perhitungan waktu sterilisasi autoklaf dimulai ketika suhu di

dalam autoklaf mencapai 121 C (Madigan et.al, 2006)

Rifampisin adalah antibiotik derivat dari rifamisin yang di produksi

oleh Streptomyces mediterranei dan biasanya digunakan bersamaan

dengan obat anti tuberkulosis dalam penanganan tuberkulosis serta

menjadi profilaksis untuk anak anak yang terkena kontak dengan

haemophilus influenzae (Katzung, 1997). Rifampisin diketahui memiliki

aktivitas bakterisidal terhadap Staphylococcus aureus. Karena tingkat

pembentukan resistensi yang tinggi, maka Rifampisin tidak boleh

digunakan sendiri dalam mengobati suatu penyakit dan sebaiknya di

kombinasikan (Liu et al., 2011).

Rifampisin ditambah antibiotika lain seperti golongan betalaktam

dapat menekan jumlah carrier bakteri Staphylococcus aureus bahkan dapat

menyembuhkannya, tapi perlu hati-hati karena resistensi terhadap

rifampin sangat sering terjadi (Yuwono, 2012).

Pengamatan aktivitas antibiotic pada cawan petri dengan konsentrasi

antibiotic 2,5 g/mL terhadap bakteri Escherichia coli ditemui

pertumbuhan koloni bakteri, pada konsentrasi 5 g/mL juga masih ditemui

pertumbuhan koloni bakteri, dan pada konsentrasi 10 g/mL tetap masih

ditemui pertumbuhan koloni bakteri. Tidak ditemukan nilai MIC karena

tidak ada bening (koloni tidak tumbuh) pertama. Kemungkinan nilai MIC

berada diatas konsentrasi 10 g/mL. Perlu dilakukan uji pada tingkat

konsentrasi antibiotik rifampisin pada konsentrasi yang lebih tinggi untuk

bakteri ini.


2,5 g/mL terhadap bakteri Bacillus Subtilis sudah tidak ditemui

pertumbuhan koloni, demikian halnya pada konsentrasi yang lebih tinggi

juga tidak ditemukan pertumbuhan koloni. Nilai MIC tidak dapat

ditentukan karena tidak ditemukan pertumbuhan koloni sebelum bening

(koloni tidak tumbuh) pertama. Kemungkinan MIC berada pada

konsentrasi yang lebih kecil dari 2,5 g/mL. Perlu dilakukan uji pada

tingkat konsentrasi antibiotik rifampisin pada konsentrasi yang lebih

rendah untuk bakteri ini.


2,5 g/mL terhadap bakteri Staphylococcus aureus ditemui pertumbuhan

koloni bakteri, pada konsentrasi 5 g/mL juga masih ditemui pertumbuhan

koloni bakteri, dan pada konsentrasi 10 g/mL tetap masih ditemui

pertumbuhan koloni bakteri. Tidak ditemukan nilai MIC karena tidak ada

bening (koloni tidak tumbuh) pertama. Kemungkinan nilai MIC berada

diatas konsentrasi 10 g/mL. Perlu dilakukan uji pada tingkat konsentrasi

antibiotik rifampisin pada konsentrasi yang lebih tinggi untuk bakteri ini.

Diamati juga pertumbuhan bakteri yang banyak pada media agar selain

pada daerah yang diinokulasikan bakteri. Ini mungkin disebabkan oleh

pengerjaan praktikan yang kurang aseptis pada saat menginokulasikan

bakteri dari suspense bakteri menggunakan mikro pipet. Kontaminasi

mungkin terjadi oleh udara saat memindahkan bakteri. Sehingga

menyebabkan bakteri lain tumbuh dalam media agar dan tidak diketahui

mana yang bakteri uji sebenarnya dan yang bukan.

Antibiotik rifampisin memiliki nilai dosis tengah sekitar 5

g/mL.Antibiotik rifampisin memiliki efek yang berbeda pada tiap bakteri

uji karena tiap bakteri memiliki sifat-sifat yang berbeda. Rifampisin

berefek kuat pada bakteri Bacillus subtilis karena pada konsentrasi kecil

saja sudah dapat menginhibisi pertumbuhan atau bahkan membunuh

bakteri, sedangkan pada Escherichia coli dan Staphylococcus aureus

memiliki efek yang kurang.

Pada penelitian lain, bakteri yang digunakan adalah Mycobacterium

tuberculosis. Rifampisin merupakan antibiotik yang umum digunakan

untuk pengobatan penyakit tuberculosis. Penelitian ini membandingkan

antibiotic Rifampisin dengan Amikasin. Tujuan penelitian yaitu untuk

mengetahui pengaruh pemberian amikasin dan rifampisin terhadap

pertumbuhan rapidly growing mycobacterium (RGM) melalui metode in

vitro (Rachman, 2014).

Metode penelitian yang dilakukan merupakan penelitian deskriptif

observasional secara in vitro menggunakan metode makrodilusi. Subyek

dalam penelitian ini adalah amikasin, rifampisin, dan 7 isolat klinis rapidly

growing mycobacterium koleksi Bagian Mikrobiologi Fakultas

Kedokteran Universitas Gadjah Mada. Dari 7 isolat RGM yang diuji,

didapat 86% isolat sensitif dengan rentang KHM 15.75 g/L

terhadap rifampisin. Kesimpulan yang didapatkan dalam penelitian

tersebut adalah isolat RGM lebih sensitif terhadap amikasin dibandingkan

dengan rifampisin (Rachman, 2014).

VIII. SIMPULAN

Didapatkan nilai MIC terhadap bakteri Escherichia coli > 10g/mL,

Bacillus subtilis < 2,5g/mL , Staphylococcus aureus > 10g/mL MIC

DAFTAR PUSTAKA

Bibiana, W, Lay.1994.Analisis Mikrobiologi di Laboratorium.PT.Raya Grafindo

Persada: Jakarta.

Djide M, Natsir.2008.Dasar-dasar Mikrobiologi.Universitas

Hasanuddin:Makassar.

Entjang Indan, Dr. 2003. Mikrobiologi dan Parasitologi. CV YRAMA WIDYA,

Bandung, Indonesia.

Irianto.2006. mikrobiologi menguak dunia mikroorganisme, Yrama

Widya:Jakarta.

Jawetz, et al. 2004. Medical Microbiology. Twenty-Third Edition. San Fransisco :

McGraw-Hill.

Katzung, B.G., 1997. Basic and Clinical Pharmacology 10th Edition. McGraw Hill

Lange, Singapore.

Liu, C., Bayer,A., Cosgrove, S.E.,Daum, R.S.,Fridkin, S.K.,Gorwitz, R.J., Kaplan,

S.L, Karchmer, A.W., Levine, D.P, Murray, B.E, Rybak, M.J., Talan, D.A,

and Chambers, H.F., 2011. Clinical Practice Guidelines by the Infectious

Diseases Society of America for the Treatment of MethicillinResistant

Staphylococcus Aureus Infections in Adults and Children,Clinical Infectious

Disease, 52: 138.

Madigan MT, Martinko JM, Brock TD. 2006. Brock Biology of Microorganisms.

New Jersey: Pearson Prentice Hall.

Nester,E.W.,C.E.Roberts & B.J.McCarthy. 1973. Microbiology Molecules, Microbes,

and Man. United State America: Pear sall halt,Rinehart and Winston,Inc.

Pratiwi, 2007, Mikrobiologi Farmasi. Universitas Gajah Mada. Yogyakarta.

Rachman. 2014. Uji Potensi Amikasin dan Rifampisin terhadap Pertumbuhan

Rapidly Growing Mycobacterium. Available online at

http://etd.repository.ugm.ac.id/index.php?mod=penelitian_detail&sub=Penelitia

nDetail&act=view&typ=html&buku_id=68072 (diakses 27 April 2015).

Schlegel,H.G. dan Schmidt, K.1994. Mikrobiologi Umum. Gadjah Mada University

Press : Yogyakarta.

Todar, K., 2007. Staphylococcus. University of Wisconsin-Madison Department

Of Bacteriology, http:// www.bact.wisc edu/.com

Yuwono. 2012. Mikrobiologi Kedokteran. Available online at

http://eprints.unsri.ac.id/1786/2/Mikrobiol2012_OK.pdf (diakses 27 April

2015).

kelompok 5_mic padat

Documents