karya akhir analisis ekspresi cdk6 dan ki-67 pada …repository.unair.ac.id/55664/13/ppds. pa. 02-16...

ADLN – PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA

TESIS ANALISIS EKSPRESI Cdk6 ... MEYTA RINIASTUTI

KARYA AKHIR

ANALISIS EKSPRESI Cdk6 DAN Ki-67 PADA NEOPLASMA

KELENJAR LIUR

Oleh:

Meyta Riniastuti, dr.

Pembimbing:

Dyah Fauziah, dr., Sp.PA (K)

Alphania Rahniayu, dr., Sp.PA

Departemen / SMF Patologi Anatomi

Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga/

RSUD Dr. Soetomo Surabaya

2016



ANALISIS EKSPRESI Cdk6 DAN Ki-67 PADA

NEOPLASMA KELENJAR LIUR

KARYA AKHIR

Untuk Memperoleh Gelar Dokter Spesialis Dalam Program Pendidikan Dokter Spesialis I Patologi Anatomi

Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga

Oleh: Meyta Riniastuti, dr.

Departemen / SMF Patologi Anatomi

Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga/

RSUD Dr. Soetomo Surabaya

2016



LEMBAR PERSETUJUAN

Karya akhir ini telah direvisi dan disetujui

Pembimbing 1: Pembimbing 2:

Dyah Fauziah, dr., Sp.PA(K) Alphania Rahniayu, dr., Sp.PA NIP. 19731205 200312 2 001 NIP. 19810123 200604 2 001

Mengetahui:

Ketua Program Pendidikan Dokter Spesialis I Patologi Anatomi

Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga

Dyah Fauziah, dr., Sp.PA(K) NIP. 19731205 200312 2 001



PERNYATAAN KEASLIAN PENELITIAN

Yang bertanda tangan di bawah ini :

Nama : Meyta Riniastuti

NIM : 011181409

Judul Penelitian : Analisis Ekspresi Cdk6 dan Ki-67 pada Neoplasma

Kelenjar Liur

Dengan ini menyatakan bahwa hasil penelitian ini merupakan hasil karya sendiri

dan benar keasliannya serta berasal dari data asli dan bukan hasil rekayasa.

Apabila di kemudian hari penelitian ini mengandung plagiasi atau autoplagiasi

atau penjiplakan atas karya orang lain, maka saya bersedia bertanggung jawab

sekaligus menerima sanksi.

Demikian pernyataan ini saya buat dalam keadaan sadar dan tidak dipaksakan.

Dibuat di : Surabaya

Pada tanggal : 27 Juni 2016

Yang Membuat Pernyataan



PENETAPAN PANITIA PENGUJI

ANALISIS EKSPRESI Cdk6 DAN Ki-67 PADA NEOPLASMA KELENJAR

LIUR

Karya akhir ini telah diujikan

Pada tanggal : 9 Juni 2016

Oleh panitia penguji:

Sjahjenny Mustokoweni, dr., Sp.PA(K), MIAC

Dyah Fauziah, dr., Sp.PA(K)

Anny Setijo Rahaju, dr., Sp.PA (K)

DR. Willy Sandhika, dr., M.Si., Sp.PA(K)

DR. Hari Basuki N, dr., M.Kes

Prof. DR. I Ketut Sudiana, M.Si

Alphania Rahniayu, dr., Sp.PA



UCAPAN TERIMA KASIH

Puji syukur kepada Tuhan Yesus Kristus karena berkat dan tuntunanNya,

karya akhir dengan judul “Analisis Ekspresi Cdk6 dan Ki-67 pada Neoplasma

Kelenjar Liur” ini dapat diselesaikan. Karya ini merupakan salah satu persyaratan

pendidikan spesialisasi bidang Patologi Anatomi di Fakultas Kedokteran

Universitas Airlangga Surabaya.

Penulis menyampaikan rasa terima kasih yang tulus kepada guru-guru dan

keluarga serta berbagai pihak yang telah memberikan bantuan dan dukungan

sehingga karya akhir ini dapat diselesaikan. Penuh rasa hormat, ucapan terima

kasih ini penulis sampaikan kepada:

- Dyah Fauziah, dr., Sp.PA(K) sebagai pembimbing dan Ketua Program

Studi Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga atas

segala bimbingan, dukungan, semangat, solusi dan petunjuknya dalam

pembuatan karya akhir ini serta mencontohkan semangat dan motivasi

dalam menempuh pendidikan spesialisasi.

- Alphania Rahniayu, dr., Sp.PA sebagai pembimbing kedua yang sangat

membantu dalam penelitian dan membimbing proses pembuatan karya

akhir ini.

- Dr. Hari Basuki N, dr., M.Kes. sebagai pembimbing statistik yang banyak

membantu dalam penyusunan rancangan dan metodologi penelitian serta

menganalisa data yang diperoleh.



- Sjahjenny Mustokoweni, dr., Sp.PA(K), MIAC sebagai Ketua Departemen

Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga yang

memberikan kesempatan belajar ilmu patologi anatomi dan memanfaatkan

fasilitas selama masa pendidikan serta selalu memberikan teladan

kedisiplinan, memberikan kepercayaan, arahan, dorongan dan motivasi

untuk terus belajar.

- Prof. Dr. I Ketut Sudiana, M.Si yang turut memberi arahan, saran dan

bimbingan selama penelitian dan penyusunan karya akhir ini.

- Anny Setijo Rahaju, dr., Sp.PA(K) sebagai Sekretaris Program Studi

Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga yang

membantu penulis selama masa pendidikan.

- Dr. Willy Sandhika, dr., M.Si, Sp.PA(K) sebagai koordinator ilmiah dan

penelitian dan sekretaris Program Studi Patologi Anatomi Fakultas

Kedokteran Universitas Airlangga saat penulis memulai masa pendidikan,

yang selalu mencontohkan semangat dan motivasi serta selalu memberi

bimbingan dan petunjuk dalam menempuh pendidikan spesialisasi.

- Prof. Dr. Juliati Hood Alsagaff, dr., Sp.PA(K), FIAC guru besar Patologi

Anatomi yang sering membagi pengalaman dan bimbingan selama masa

pendidikan.

- Prof. Dr. Endang Joewarini,dr., Sp.PA(K) sebagai guru besar Patologi

Anatomi yang selalu mengajarkan kemandirian, disiplin dan tanggung

jawab serta memberikan bimbingan selama masa pendidikan.



- Prof. Dr. Suhartono Taat Putra,dr., MS sebagai guru besar yang senantiasa

memberikan dorongan dan semangat untuk berpikir maju dalam ilmu

pengetahuan dan mengembangkan penelitian dengan tetap memperhatikan

fenomena terkini sebagai dasar acuan.

- Prof. Dr. Moh. Nasih, SE., MT., Ak., CMA sebagai Rektor Universitas

Airlangga dan Prof. Dr. H. Fasich, Apt yang merupakan rektor pada masa

awal pendidikan penulis, yang telah memberikan kesempatan kepada

penulis untuk mengikuti pendidikan spesialisasi Patologi Anatomi di

Universitas Airlangga.

- Prof. Dr. Soetojo, dr., Sp.U(K) sebagai Dekan Fakultas Kedokteran

Universitas Airlangga dan Prof. Dr. Agung Pranoto, dr., MSc, SpPD, K-

EMD, FINASIM yang merupakan Dekan pada masa awal pendidikan

penulis, yang telah memberikan kesempatan kepada penulis untuk

mengikuti pendidikan spesialisasi Patologi Anatomi di Universitas

Airlangga.

- Harsono, dr., sebagai Plt. direktur RSUD dr. Soetomo dan Dodo Anondo,

dr., MPH yang merupakan direktur pada masa awal pendidikan penulis,

yang telah memberikan kesempatan kepada penulis untuk bekerja dan

belajar di dalam lingkup RSUD dr. Soetomo Surabaya.

- Etty Hary Kusumastuti, dr., Sp.PA(K) sebagai Kepala Instalasi

Laboratorium Patologi Anatomi RSUD Dr. Soetomo dan Tulus Panuwun,

dr., MS, Sp.PA(K) sebagai Kepala Instalasi pada awal masa pendidikan



penulis, yang banyak membagi pengalaman dan ilmu khususnya di bidang

sitologi.

- Seluruh staf pengajar Departemen Patologi Anatomi yang selalu

memberikan masukan, bimbingan dan petunjuk dalam tugas keseharian

selama masa pendidikan.

- Roebijanti, dr., Sp.PA, selaku Kepala Bagian Laboratorium Patologi

Anatomi RSUD Haji Surabaya, beserta staf, atas bimbingan, petunjuk dan

kerja sama yang baik khususnya selama kami menjalani putaran haji.

- Dewi Astuti Kurniawati, dr., Fibriani Dyah Sofiana, dr., Sp.PA, Erlina, dr.

Sp.PA, Aniek Meidy Utami, dr. Sp.PA dan Ayu Tyasmara Pratiwi, dr.

yang selalu memberikan semangat dan dorongan untuk terus maju dan

tidak menyerah dalam menjalani masa-masa sulit selama pendidikan serta

semua rekan PPDS I Patologi Anatomi FK. UNAIR untuk dukungan, rasa

persaudaraan dan kerja sama selama menjalani pendidikan.

- Seluruh karyawan Laboratorium – SMF Patologi Anatomi Fakultas

Kedokteran Universitas Airlangga – RSUD Dr. Soetomo Surabaya atas

kerja sama yang baik selama ini.

- Suami tercinta Andreas Didit Mifanto dan anak terkasih Adhyatma

Chrysostomos Davu yang tidak pernah henti memberikan dorongan, doa,

cinta, semangat dan mendampingi dengan kesabaran selama masa

pendidikan juga seluruh keluarga Bapak Supar Madijono, Ibu Sunarti,

kakak dan adik-adik yang memberikan dukungan dalam segala hal.



- Sahabat sepanjang masa: Catharine Mayung Sambo, dr., Sp.A, Nurul

Setyorini, dr., Tonny Sundjaja, dr., M.Sc dan Yuna Joy Uli Dame

Hutagaol, SH serta semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu,

yang turut menyumbangkan tenaga dan saran dalam penyelesaian karya

akhir ini.

Penulis menyadari penelitian ini masih jauh dari sempurna dan memiliki

banyak kekurangan. Oleh karena itu, masukan dan saran yang berguna untuk

perbaikan sangat diharapkan. Semoga karya ini bermanfaat.

Surabaya, Juni 2016

Penulis



ANALYSIS OF Cdk6 AND Ki-67 EXPRESSION ON SALIVARY GLAND

NEOPLASMS

Meyta Riniastuti, Dyah Fauziah, Alphania Rahniayu Department of Pathology

Universitas Airlangga / Hospital Dr.Soetomo Surabaya ABSTRACT

Background: Tumors with broad spectrum can arise in salivary glands and giving diagnostic difficulties in some subtypes due to morphologic similarities. Immunohistocemistry studies done to differentiate between benign and malignant neoplasms of salivary glands are very few, including Cdk6 and Ki-67. Cdk6 role in tumorigenesis, halting cellular proliferation and differentiation. Ki-67 is actively expressed in cells that are proliferating, particularly neoplasms.

Objective: To analyze differences of Cdk6 and Ki-67 expression in benign and malignant salivary gland neoplasms, as well as analyzing the correlation between the Cdk6 and Ki-67expression in the salivary gland neoplasms.

Methods: This is an analytic observational study with cross sectional design. Samples were taken in proportion, each 15 samples of benign and malignant salivary gland neoplasms, derived from pathological archives during period of 1 January 2011-30 June 2013. Immunohistochemical staining with Cdk6 and ki-67 monoclonal antibody were performed. Differences in Cdk6 and Ki-67 expression of both group were analyzed using Mann Whitney. The correlation between the Ki-67 and Cdk6 expression were analyzed using Spearman.

Results: There were significant differences in the Cdk6 and Ki-67 expression between benign and malignant salivary gland neoplasms.The expressions of Ki-67 have a cut-off point of 6.50%. There was a significant correlation between Cdk6 and Ki-67 expression in the salivary gland neoplasms.

Conclusion: Cdk6 and Ki-67 can be used to distinguish between benign and malignant neoplasms of the salivary glands. There were correlation between Cdk6 and Ki-67 expression in the salivary gland neoplasms.

Keywords: Neoplasms of the salivary glands, Cdk6, Ki-67



ANALISIS EKSPRESI Cdk6 DAN Ki-67 PADA NEOPLASMA KELENJAR

LIUR

Meyta Riniastuti, Dyah Fauziah, Alphania Rahniayu Departemen Patologi Anatomi

Universitas Airlangga/RSUD Dr.Soetomo Surabaya

ABSTRAK

Latar Belakang: Neoplasma dengan berbagai spektrum dapat muncul dari kelenjar liur dan memberikan gambaran morfologi yang hampir sama pada masing-masing subtipe sehingga menimbulkan kesulitan dalam penegakkan diagnosis. Penelitian dengan imunohistokimia yang pernah dilakukan untuk membedakan neoplasma jinak dan ganas pada kelenjar liur tidak banyak, termasuk Cdk6 dan Ki-67. Peran Cdk6 dalam tumorigenesis, memutus proliferasi seluler dan diferensiasi. Ki-67 terekspresi secara aktif dalam sel yang sedang berproliferasi, terutama neoplasma.

Tujuan: Menganalisis perbedaan ekpresi Cdk6 dan Ki-67 pada neoplasma kelenjar liur yang jinak dan ganas, serta menganalisis korelasi antara ekspresi Cdk6 dan Ki-67 pada neoplasma kelenjar liur.

Metode: Jenis penelitian ini adalah obervasional analitik menggunakan rancangan cross sectional. Sampel penelitian diambil secara proporsional masing-masing kelompok, jinak dan ganas, sejumlah 15 sampel selama periode 1 Januari 2011-30 Juni 2013. Sampel diberikan pulasan imunohistokimia dengan antibodi monoklonal Cdk6 dan Ki-67. Perbedaan ekspresi Cdk6 dan Ki-67 pada neoplasma jinak dan ganas dianalisis menggunakan uji Mann Whitney. Hubungan antara ekspresi Cdk6 dan Ki-67 dianalisis menggunakan uji Spearman.

Hasil: Ekspresi Cdk6 memiliki perbedaan bermakna antara neoplasma kelenjar liur jinak dan ganas. Ekspresi Ki-67 memiliki bermakna pada neoplasma kelenjar liur yg jinak dan ganas serta memiliki nilai cut off 6,50%. Ekspresi Cdk6 dan Ki-67 memiliki hubungan yang bermakna pada neoplasma kelenjar liur.

Kesimpulan: Ekspresi Cdk6 dan Ki-67 dapat digunakan untuk membedakan neoplasma kelenjar liur jinak dan ganas. Cdk6 dan Ki-67 memiliki korelasi pada neoplasma kelenjar liur.

Kata kunci : Neoplasma kelenjar liur, Cdk6, Ki-67



DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL...................................................................................... i

LEMBAR PERSETUJUAN........................................................................... iii

PERNYATAAN KEASLIAN PENELITIAN................................................ iv

PENETAPAN PANITIA PENGUJI............................................................... v

UCAPAN TERIMA KASIH.......................................................................... vi

ABSTRAK..................................................................................................... xi

DAFTAR ISI.................................................................................................. xiii

DAFTAR TABEL.......................................................................................... xvii

DAFTAR GAMBAR...................................................................................... xviii

DAFTAR SINGKATAN................................................................................ xx

DAFTAR LAMPIRAN.................................................................................. xxi

BAB 1 PENDAHULUAN.......................................................................... 1

1.1 Latar Belakang.......................................................................... 1

1.2 Rumusan Masalah.................................................................... 2

1.3 Tujuan Penelitian...................................................................... 3

1.3.1 Tujuan umum.................................................................. 3

1.3.2 Tujuan khusus.................................................................. 3

1.4 Manfaat..................................................................................... 3

1.4.1 Manfaat akademik........................................................... 3

1.4.2 Manfaat operasional........................................................ 4

BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA................................................................. 5



2.1 Neoplasma Kelenjar Liur.... .................................................... 5

2.1.1 Epidemiologi................................................................... 5

2.1.2 Etiologi............................................................................ 6

2.1.3 Genetik............................................................................ 7

2.1.4 Histogenesis dan morfogenesis....................................... 7

2.2 Pleomorphic Adenoma............................................................. 8

2.2.1 Epidemiologi.................................................................... 8

2.2.2 Makroskopik..................................................................... 8

2.2.3 Histopatologi.................................................................... 9

2.2.4 Diagnosis banding............................................................ 12

2.3 Mucoepidermoid Carcinoma.................................................... 12

2.3.1 Epidemiologi.................................................................... 12

2.3.2 Makroskopik..................................................................... 13

2.3.3 Histopatologi.................................................................... 13

2.3.4 Diagnosis banding............................................................ 15

2.4 Adenoid Cystic Carcinoma...................................................... 15

2.4.1 Epidemiologi.................................................................... 16

2.4.2 Makroskopik.................................................................... 16

2.4.3 Histopatologi................................................................... 16

2.4.4 Diagnosis banding........................................................... 18

2.5 Acinic Cell Carcinoma............................................................. 18

2.5.1 Epidemiologi................................................................... 18

2.5.2 Makroskopik.................................................................... 19



2.5.3 Histopatologi................................................................... 19

2.5.4 Diagnosis banding........................................................... 21

2.6 Peran Cdk6 dalam Neoplasma Kelenjar Liur........................... 21

2.7 Peran Ki-67 dalam Neoplasma Kelenjar Liur.......................... 25

BAB 3 KERANGKA KONSEPTUAL DAN HIPOTESIS........................ 28

3.1 Kerangka Konseptual............................................................... 28

3.2 Hipotesis................................................................................... 30

Bab 4 METODE PENELITIAN............................................................... 31

4.1 Rancangan Penelitian............................................................... 31

4.2 Populasi dan Besar Sampel...................................................... 31

4.3 Variabel Penelitian................................................................... 32

4.4 Batasan Operasional................................................................. 33

4.5 Cara Kerja................................................................................. 34

4.6 Alur Penelitian.......................................................................... 35

4.7 Pengelolaan dan Analisis Data................................................. 35

BAB 5 HASIL PENELITIAN.................................................................... 37

5.1 Karakteristik Sampel Penelitian............................................... 37

5.1.1 Distribusi jenis kelamin................................................... 37

5.1.2 Distribusi usia................................................................. 39

5.1.3 Distribusi lokasi tumor.................................................... 40

5.2 Ekspresi Cdk6 pada Tumor Kelenjar Liur Jinak dan Ganas.... 41

5.3 Ekspresi Ki-67 pada Tumor Kelenjar Liur Jinak dan Ganas.... 45

5.4 Hubungan Antara Ekspresi Ki-67 dan Cdk6 pada Tumor



Kelenjar Liur............................................................................ 47

BAB 6 PEMBAHASAN............................................................................. 49

6.1 Karakteristik Sampel Penelitian............................................... 49

6.2 Ekspresi Cdk6 pada Tumor Kelenjar Liur Jinak dan Ganas.... 50

6.3 Ekspresi Ki-67 pada Tumor Kelenjar Liur Jinak dan Ganas.... 53

6.4 Hubungan Antara Ekspresi Ki-67 dan Cdk6 pada Tumor

Kelenjar Liur............................................................................

57

BAB 7 KESIMPULAN DAN SARAN...................................................... 59

7.1 Kesimpulan............................................................................... 59

7.2 Saran......................................................................................... 59

DAFTAR PUSTAKA..................................................................................... 60

LAMPIRAN................................................................................................... 65



DAFTAR TABEL

Tabel 2.1 Scoring yang digunakan untuk menentukkan derajat MEC.............................. 14

Tabel 5.1 Distribusi Penderita Tumor Kelenjar Liur Berdasarkan Jenis Kelamin............ 38

Tabel 5.2 Distribusi Penderita Tumor Kelenjar Liur Berdasarkan Usia............................ 39

Tabel 5.3 Deskripsi Usia Penderita Berdasarkan Jenis Tumor Kelenjar Liur................... 39

Tabel 5.4 Distribusi Penderita Tumor Kelenjar Liur Berdasarkan Lokasi........................ 40

Tabel 5.5 Distribusi Skor Pulasan Cdk6 Berdasarkan Jenis Neoplasma........................... 41

Tabel 5.6. Analisis Ekspresi Cdk6 pada Neoplasma Kelenjar Liur Jinak dan Ganas....... 42

Tabel 5.7 Distribusi Ekspresi Ki-67 Berdasarkan Cut-Off Point 6,50%........................... 46



DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Gambaran makroskopik pleomorphic adenoma.............................. 9

Gambar 2.2 Gambaran mikroskopik pleomorphic adenoma............................... 11

Gambar 2.3 Mucoepidermoid carcinoma............................................................ 15

Gambar 2.4 Adenoid cyctic carcinoma............................................................... 17

Gambar 2.5 Acinic cell carcinoma...................................................................... 20

Gambar 2.6 Skema siklus sel............................................................................... 22

Gambar 2.7 Perbandingan ekspresi cdk6 pada inti dan sitoplasma sel............... 24

Gambar 2.8 Ekspresi cdk6 pada tumor dan kelenjar liur..................................... 25

Gambar 3.1 Kerangka konsep.............................................................................. 29

Gambar 2.9 Ekspresi Ki-67 pada kelenjar liur.................................................... 27

Gambar 5.1 Distribusi penderita tumor kelenjar liur berdasarkan jenis kelamin 38

Gambar 5.2 Distribusi penderita tumor kelenjar liur berdasarkan usia............... 40

Gambar 5.3 Distribusi neoplasma kelenjar liur berdasarkan lokasinya.............. 41

Gambar 5.4 Mean / rerata ekspresi CDk6 pada tumor kelenjar liur.................... 42

Gambar 5.5 Neoplasma kelenjar liur dengan ekpresi Cdk6 skor 1..................... 43




Gambar 5.9 Mean / rerata ekspresi Ki-67 pada tumor kelenjar liur.................... 45

Gambar 5.10 Ekspresi Ki-67 pada neoplasma jinak....................................... 46



Gambar 5.11 Ekspresi Ki-67 pada neoplasma ganas........................................... 47

Gambar 5.12 Hubungan ekspresi Ki-67 dengan Cdk6 menggunakan uji

korelasi Spearman..........................................................................

48



DAFTAR SINGKATAN

ACC : Acinic Cell Carcinoma

AdCC : Adenoid Cyctic Carcinoma

BMP-2 : Bone Morphogenic Protein 2

Cdk : Cyclin dependent kinase

Cip/Kip : CDK interacting protein/ Kinase inhibitory protein)

CKI : Cdk Inhibitor

DNA : Deoxyribose-Nucleic Acid

ECM : Extra Cellular Matrix

HE : Hematoxylin Eosin

HER-2 : Human Epidermal Growth Factor Receptor 2

HIV : Human Immunodeficiancy Virus

IHC : Immunohistochemistry

INK : Inhibitor of Kinase

LI : Labeling Index

MEC : Mucoepidermoid Carcinoma

NOS : No Other Specified

PRB : Retinoblastoma Protein

rRNA : ribosomal Ribonucleic Acid

SD : Standard Deviasi

UVB : Ultra Violet B



DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Lampiran Hasil Analisis............................................................. 65

Lampiran 2. Teknik Pengecatan Hematoksilin Eosin Cara Meyer................. 70

Lampiran 3. Teknik Pulasan Imunohistokimia dengan antibodi Cdk6........... 71

Lampiran 4. Teknik Pulasan Imunohistokimia dengan antibodi Ki-67.......... 72

Lampiran 5. Data Sheet Cdk6....................................................................... 73

Lampiran 6. Data Sheet Ki-67...................................................................... 74

Lampiran 7. Keterangan Kelaikan Etik......................................................... 76



BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Neoplasma pada kelenjar liur termasuk neoplasma yang jarang terjadi. Insiden

per tahun dari neoplasma kelenjar liur antara 0,5 - 2 tiap 100.000 penduduk pada

daerah yang berbeda di seluruh dunia (Cheuk dan Chan, 2007). Angka kejadian

neoplasma kelenjar liur mayor periode tahun 2005 - 2007 di RSUD Dr. Sutomo

Surabaya sebanyak 166 kasus (Rahniayu dan Fauziah, 2008).

Neoplasma kelenjar liur memiliki berbagai macam spektrum dan gambaran

morfologi yang hampir sama pada masing-masing subtipe (Mills, 2010).

Penegakkan diagnosis menggunakan preparat dengan pengecatan hematoxylin-

eosin (HE) masih merupakan standar baku, namun seringkali sulit untuk

menegakkan diagnosis pastinya. Imunohistokimia (IHK), sangat berguna saat

diagnosis pasti sulit ditegakkan berdasarkan pemeriksaan histopatologi rutin,

misalnya sifat sel dan status diferensiasi, proliferasi sel dan ekspresi protein tumor

(Nagao et al., 2012).

Protein Cdk6, bekerja sama dengan cyclin D, mengendalikan progresi siklus

sel fase G1 ke S melalui fosforilasi dan selanjutnya inaktivasi protein Rb1

(Meyerson dan Harlow, 1994). Beberapa penelitian mengungkapkan fungsi Cdk6,

antara lain peran Cdk6 dalam tumerogenesis, memutus proliferasi seluler dan

diferensiasi (Nagaswara et al., 2001; Ericsson et al., 2003; Slomiany et al., 2006).



Penanda siklus sel yang paling sering digunakan dalam imunohistokimia

adalah antibodi Ki-67 monoklonal yang aktif pada semua fase siklus sel. Ki-67

meningkat pada putaran kedua fase S, mencapai puncaknya pada fase G2 dan M

dan segera menghilang setelah mitosis. Ki-67 terekspresi secara aktif dalam sel

yang sedang berproliferasi, utamanya neoplasma. Imunoreaktivitasnya ditemukan

memiliki hubungan yang erat dengan variabel lain dalam proliferasi sel

(Slootweg, 1995; Macluskey et al., 1999).

Sangat sedikit penelitian yang menggambarkan neoplasma kelenjar liur

pada tingkat molekuler dan proliferasi sel (Pardis et al., 2004). Penelitian ekspresi

Ki-67 pada neoplasma kelenjar liur belum memberikan nilai cut-off yang

disepakati. Demikian juga studi mengenai ekspresi Cdk6 pada neoplasma masih

jarang dikerjakan, terlebih pada jaringan kelenjar liur. Selain itu studi tentang

ekspresi Ki-67 dan Cdk6 pada neoplasma kelenjar liur belum pernah dilakukan di

RSUD Dr. Soetomo. Berdasarkan uraian di atas, peneliti merasa perlu meneliti

tentang ekspresi 2 protein yang berperan dalam proliferasi sel tersebut pada

neoplasma kelenjar liur jinak dan ganas.

1.2 Rumusan Masalah

1. Apakah terdapat perbedaan ekspresi Ki-67 antara neoplasma kelenjar

liur yang jinak dan ganas?

2. Apakah terdapat perbedaan ekspresi Cdk6 antara neoplasma kelenjar

liur yang jinak dan ganas ?



3. Apakah terdapat hubungan antara ekspresi Ki-67 dan Cdk6 pada

neoplasma kelenjar liur yang jinak dan ganas ?

1.3 Tujuan Penelitian

1.3.1 Tujuan umum

Untuk mengungkapkan peran protein Ki-67 dan Cdk6 pada jalur

proliferasi neoplasma kelenjar liur jinak dan ganas terutama pada kasus

yang sulit agar didapatkan diagnosis yang lebih tepat.

1.3.2 Tujuan khusus

1. Mengetahui perbedaan ekspresi Ki-67 antara neoplasma kelenjar liur

yang jinak dan ganas

2. Mengetahui perbedaan ekspresi Cdk6 antara neoplasma kelenjar liur

yang jinak dan ganas

3. Mengetahui hubungan antara ekpresi Ki-67 dan Cdk6 pada neoplasma

kelenjar liur yang jinak dan ganas

1.4 Manfaat

1.4.1 Manfaat akademik

Dari segi pengembangan ilmu pengetahuan, hasil penelitian ini diharapkan

dapat mengungkapkan peran protein Ki-67 dan Cdk6 dalam jalur

proliferasi neoplasma kelenjar liur jinak dan ganas.



1.4.2 Manfaat operasional

Dengan pengetahuan tentang ekspresi Ki-67 dan Cdk6 pada neoplasma

kelenjar liur sesuai dengan sifat tumor, diharapkan Ki-67 dan Cdk6 dapat

digunakan sebagai pemeriksaan tambahan bila dari pemeriksaan

hitopatologik rutin terdapat kesulitan untuk membedakan apakah

neoplasma tersebut jinak atau ganas.



BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Neoplasma Kelenjar Liur

2.1.1 Epidemiologi

Neoplasma kelenjar liur adalah kasus yang jarang. Kebanyakan kasus

merupakan neoplasma jinak dengan kejadian paling banyak adalah pleomorphic

adenoma (sekitar 65% dari seluruh tumor) dan hanya 20% kasus keganasan.

Insiden per tahun dari neoplasma kelenjar liur antara 0,5 - 2 tiap 100.000 pada

daerah yang berbeda di seluruh dunia, dengan angka kejadian tertinggi di Kroasia.

Di Amerika Serikat, terdapat kenaikan insiden kanker kelenjar liur. Tercatat 6,3%

seluruh kanker kelenjar liur pada tahun 1974-1976 dan pada tahun 1998-1999 ada

8,1% kasus (Cheuk dan Chan, 2010, Howe et al., 2012).

Ada variasi geografi yang mempengaruhi frekuensi dari jenis tumor. Pada

penelitian kasus di Denmark dan bagian Pennsylvania, sekitar 30% kasus

neoplasma kelenjar liur adalah tumor Warthin, meningkat tujuh kali lipat dari

frekuensi pada umumnya. Dilaporkan bahwa frekuensi mucoepidermoid

carcinoma di Inggris sekitar 2,1% sementara angka kejadian di seluruh dunia

sekitar 5-15%. Survey yang dilakukan pada beberapa etnis di Malaysia

menunjukkan frekuensi tertinggi kasus neoplasma kelenjar liur terdapat pada etnis

Melayu dibandingkan pada etnis India dan Cina (Cheuk dan Chan, 2010).

Distribusi kasus pada laki-laki dan perempuan tidak terdapat perbedaan

(Howe et al., 2012). Namun ada juga literatur yang menyebutkan bila wanita lebih



sering menderita neoplasma kelenjar liur dibanding pada laki-laki, kecuali untuk

kasus tumor Warthin dan keganasan tipe high grade (Cheuk dan Chan, 2010,

Bernes et al., 2005). Tumor kelenjar liur dapat terjadi baik pada kelenjar mayor

maupun minor. Neoplasma kelenjar liur mayor 80% terdapat pada kelenjar

parotis, sedangkan neoplasma kelenjar minor terdapat pada kelenjar palatum.

Sebagai pegangan klinis praktis, kelenjar liur yang lebih kecil lebih mungkin

merupakan kasus keganasan. Pada kelenjar parotis, 20-25% merupakan kasus

keganasan. Sementara 40% keganasaan terjadi pada kelenjar submandibula dan

lebih dari 90% keganasan pada kelenjar submandibula (Howe et al., 2012).

Terdapat sekitar 80-90% keganasan dapat terjadi pada lidah, dasar mulut dan area

retromolar (Bernes et al., 2005).

2.1.2 Etiologi

Faktor risiko utama yang dikenali adalah paparan radiasi seperti yang

menimpa orang-orang yang selamat dari serangan bom maupun pasien yang

menerima terapi radiasi. Namun tidak terdapat peningkatan risiko terhadap

paparan radiasi UVB (Zarbo, 2002).

Infeksi Epstein-Barr virus terlibat dalam patogenesis salivary

lymphoepithelioma-like carcinoma yang sering terjadi pada penduduk Eskimo dan

Cina dibanding pada orang-orang Barat. Tidak seperti kanker kepala dan leher

lainnya, peminum alkohol dan perokok tidak berhubungan dengan kenaikan risiko

terjadinya neoplasma kelenjar liur, kecuali pada tumor Warthin yang risiko

terjadinya meningkat pada perokok. Beberapa faktor risiko terjadinya kanker

kelenjar liur antara lain terapi radiasi untuk kanker kepala leher lainnya, terekspos



materi dari perusahaan karet dan kayu, industri metal, plumbing dan nikel juga

penata rambut dan toko kosmetik. Penelitian di Swedia menyebutkan bahwa

menderita Non Hodgkin’s Lymphoma meningkatkan resiko terjadinya kanker

kelenjar liur empat kali lipat. Infeksi HIV juga dapat meningkatkan resiko kanker

kelenjar liur (Barnes et al., 2005, Howe et al., 2012, Zarbo, 2002).

2.1.3 Genetik

Penelitian genetik telah mengidentifikasi kejadian berulang pada

pleomorphic adenoma (penyusunan kembali kromosom 8q12 dan 12q13-15),

mucoepidermoid carcinoma (translokasi kromosom 11q21 dan 19p13), adenoid

cystic carcinoma (perubahan struktural atau molekular pada 6q, 8q, dan 12q) dan

salivary duct carcinoma (amplifikasi HER-2). Penelitian mengenai profil ekspresi

gen menggunakan microarrays juga telah mengidentifikasi gen yang dapat

memisahkan jaringan kelenjar liur jinak dengan neoplasma dan menunjukkan

gambaran yang berbeda pada pleomorphic adenoma, adenoid cystic carcinoma,

mucoepidermoid carcinoma, clear cell carcinoma, acinic cell carcinoma dan

salivary duct carcinoma. Namun saat ini studi molekuler belum memiliki peran

yang telah ditetapkan dalam penegakkan diagnosis yang rutin (Cheuk dan Chan,

2007).

2.1.4 Histogenesis dan morfogenesis

Selama bertahun-tahun, patologi tumor kelenjar liur terfokus pada

hubungan tumor secara histologik dengan asal selnya. Yang paling populer adalah

hipotesis Batsakis dkk yang menyatakan adanya dua stem cell progenitor pada

regio proksimal dan distal sistem duktus. Hipotesis selanjutnya intercalated duct



reserve cell bagian distal dianggap sebagai sel asal suatu tumor yang memiliki

ductus yang besar, dengan diferensiasi sel squamous atau mucous. Namun, konsep

dan klasifikasi baru yang disusun oleh Dardick adalah tentang morfogenetik yang

menghubungkan morfologi dengan diferensiasi sel yang berasal dari ekspresi gen

yang berbeda pada stem sel dengan produksi matrik tumor (Zarbo, 2002).

2.2 Pleomorphic Adenoma

Pleomorphic adenoma adalah neoplasma jinak yang terdiri dari

diferensiasi sel epithelial dan myoepithelial biasanya disertai adanya jaringan

mucoid, myxoid atau chondroid (Cheuk dan Chan, 2007, Barnes et al., 2005).

2.2.1 Epidemiologi

Pleomorphic adenoma adalah tumor kelenjar liur yang paling sering

terjadi dan merupakan 60% dari seluruh tumor kelenjar liur. Dilaporkan, angka

kejadian per tahun 2,4-3,05 per 100.000 penduduk. Usia rata-rata penderita 46

tahun, namun pada rentang usia dekade pertama sampai dekade 10 dan didominasi

kaum wanita. Sekitar 80% pleomorphic adenoma tumbuh dari parotis, 10% pada

kelenjar submandibular dan 10% pada kelenjar liur minor pada cavum oris, cavum

nasi, dan sinus paranasal (Cheuk dan Chan, 2007; Barnes et al., 2005).

2.2.2 Makroskopik

Tumor berukuran beberapa milimeter sampai beberapa sentimeter,

berkapsul tipis dan soliter. Namun tumor intraoral yang muncul dari palatum

biasanya tidak berkapsul lengkap. Permukaan irisan tampak elastis, fleshy, mucoid

atau berkilat tergantung jumlah stroma pada tumor. Pada area yang kapsulnya



tidak sempurna, tepi tumor berbatas langsung dengan jaringan kelenjar di

sekitarnya (Cheuk dan Chan, 2007).

Gambar 2.1 Gambaran makroskopik pleomorphic adenoma pada kelenjar parotis, berkapsul dan permukaan pada irisan mengkilat (A); tumor berbatas tegas pada kelenjar submandibula (B) (Mills, 2010) 2.2.3 Histopatologi

Pleomorphic adenoma menunjukkan keanekaragaman morfologi yang luar

biasa. Komponen pentingnya adalah kapsul, sel epitel dan mioepitel, serta elemen

stroma atau mesenkimal. Kapsulnya memiliki ketebalan dan keberadaannya yang

bervariasi dengan rentang ketebalan kapsul 15-1750 mm. Bila dilakukan irisan

berseri akan tampak area yang kapsulnya tampak tidak utuh dan menunjukkan

gambaran seperti satelit yang merupakan pertumbuhan yang berlanjut dari tumor

utama dan tidak boleh dianggap sebagai suatu invasi (Cheuk dan Chan, 2007;

Barnes et al., 2005).

Komponen epitelial menunjukkan bermacam-macam variasi sel, seperti

cuboidal, basaloid, squamous, spindle cell, plasmacytoid dan clear cells. Sel

mucous, sebaceous dan serous acinar dapat muncul namun jarang dijumpai. Sel-

sel ini secara sitologik tampak bland dan memiliki inti bervakuol tanpa anak ini

yang prominent dan sedikit mitosis. Epitel biasanya tersusun dalam lembaran atau

A B



membentuk struktur duct-like. Duktus menunjukkan sel luminal kuboid dan

mungkin terdapat lapisan abluminal sel mioepitel yang secara morfologi kadang

tampak mirip dengan sel luminal atau memiliki sitoplasma jernih dan

hiperkromatik serta kadang tampak inti sel yang berlekuk. Pada tumor yang kecil,

gambaran ini akan menyulitkan karena mirip dengan adenoid cystic carcinoma

dan epithelial-myoepithelial carcinoma. Squamous metaplasia, kadang dengan

keratin pearl dapat ditemukan. Kadang juga didapatkan mucous metaplasia atau

perubahan clear cell yang menyulitkan karena dianggap sebagai mucoepidermoid

carcinoma.

Sel mioepitel dapat tersusun membentuk pola retikuler atau lembaran sel

berbentuk spindle yang mungkin berbentuk palisading seperti gambaran

schwannoma. Gambaran yang paling jelas terlihat pada sel mioepitel yang

berbentuk plasmacytoid atau hyalin.



Gambar 2.2 Gambaran mikroskopik pleomorphic adenoma. Diferensiasi squamous (A); Diferensiasi chondroid (B); Diferensiasi osseus (C) (Sumber: Barnes et al., 2005). Komponen mesenchymal-like adalah mucoid/myxoid, cartilaginous atau

hyalinised dan kadang jaringan ini merupakan bagian utama tumor. Sel dengan

material mucoid berasal dari mioepitel dan bagian sel-sel yang berada di tepi

bercampur di sekeliling stroma. Material cartilage-like nampak seperti cartilage

yang sesungguhnya dan positif terhadap type II collagen dan keratan sulphate.

Tulang mungkin terbentuk dengan cartilage ini atau terbentuk secara langsung

oleh osseus metaplasia stroma. Squamous metaplasia mungkin ditemukan dan

menimbulkan kesalahan karena dianggap sebagai keganasan. Beberapa tumor

tampak menunjukkan degenerasi kistik dengan elemen neoplastik yang

membentuk rim di sekitar central cavity (Barnes et al., 2005; Mills, 2010).



2.2.4 Diagnosis banding

Diagnosis banding dari pleomorphic adenoma antara lain: Monomorphic adenoma

(misalnya basal cell adenoma, myoepithelioma), Adenoid cystic carcinoma,

Polimorphic Low Grade Adenocarcinoma, Epithel-myoepithelial carcinoma,

Mucoepidermoid carcinoma, dan macam-macam mesenchymal tumor, seperti

nerve sheath tumor, smooth muscle tumor (Cheuk dan Chan, 2007).

2.3 Mucoepidermoid Carcinoma

Mucoepidermoid carcinoma adalah neoplasma ganas epitel kelenjar yang

terdiri dari sel mucous, intermediate dan epidermoid dengan gambaran kolumner,

clear cell dan oncocytoid (Barnes et al., 2005).

2.3.1 Epidemiologi

Mucoepidermoid carcinoma (MEC) merupakan keganasan kelenjar liur

yang paling sering terjadi baik pada orang dewasa maupun anak-anak. Wanita

yang sedikit lebih sering menderita keganasan ini dibanding laki-laki. Angka

kejadian tertinggi pada dekade kelima, namun harus diingat bahwa pada anak-

anak, keganasan ini adalah keganasan kelenjar liur yang paling sering terjadi.

Kurang lebih setengah kejadian MEC muncul pada kelenjar mayor yang

didominasi kelenjar parotis (45%), kelenjar submandibula sebanyak 7% dan 1%

pada kelenjar sublingual. Lokasi paling sering adalah palatum dan mukosa bukal

(Mills, 2010; Barnes et al., 2005).



2.3.2 Makroskopik

Massa bervariasi dengan permukaan halus sampai ireguler, rata-rata

berukuran 3-5 cm, batas kurang tegas, berkapsul sebagian dengan konsistensi

kenyal sampai keras, mungkin kistik berisi bahan mukus atau material perdarahan

(Mills, 2010).

2.3.3 Histopatologi

Sesuai dengan definisinya, gambaran MEC terdiri dari berbagai tipe sel,

yang paling sering adalah sel squamous, sel mucous, sel intermediate berbentuk

kuboid, dan sel basaloid. Sel squamous membentuk sarang yang solid, kadang

dengan keratinisasi dan intercellular bridging. Komponen ini mendominasi pada

tumor derajat tinggi (high grade). Sel mucous mungkin tersebar diffuse atau

melapisi ruangan kistik. Sel mucous sering mendominasi tumor derajat rendah.

Jika bahan mucous keluar sampai pada jaringan kelenjar liur yang berbatasan

dengan tumor, akan muncul reaksi foreign body giant cell dan mempersulit

tegaknya diagnosis. Kadang MEC terdiri dari clear cell yang menyolok atau

oncocytic cell yang menyolok.

Derajat/grading mukoepidermoid diukur menggunakan sistem dari lima

tanda histopatologi, yaitu nuclear atypia, komponen intrakistik, jumlah mitosis,

invasi perineural dan nekrosis, seperti tampak pada tabel 2.1.



Tabel 2.1 Scoring yang digunakan untuk menentukan derajat MEC (Sumber: Barnes et al., 2005) Gambaran Histopatologik Nilai Komponen kistik <20% 2 Invasi neural 2 Nekrosis 3 Mitosis ≥ 4 / 10hpf 3 Anaplasia 4 Tumor Grade Skor nilai Rendah 0 – 4 Intermediate 5 – 6 Tinggi ≥ 7 Pada MEC derajat rendah, tampak bentukan kelenjar yang jelas atau

struktur mikrokistik, dilapisi selapis sel kolumner yang mensekresi bahan mucous.

Pada beberapa area tampak ruang-ruang kistik dibatasi lekukan papiler yang

dibentuk oleh sel intermediate, basaloid atau squamous. Kista-kista kecil yang

bergabung menjadi besar sangat mudah ditemukan.

Lesi MEC derajat sedang biasanya ditandai dengan pertumbuhan solid dari

sel squamous, intermediate, basaloid atau clear cell atau lekukan kista papiler.

Variasi ukuran dan bentuk sel ganas, anak inti yang menyolok, dan banyaknya

mitosis dengan mudah dikenali. Invasi yang jelas, termasuk invasi perineural yang

luas, nekrosis yang fokal, peningkatan jumlah mitosis, dan gambaran pleomorfik

berat menunjukkan suatu tumor derajat tinggi (Barnes et al., 2005, Mills, 2010).



Gambar 2.3 Mucoepidermoid carcinoma derajat rendah (A), derajat sedang (B), derajat tinggi (C) (Sumber: Mills, 2010). 2.3.4 Diagnosis Banding

Diagnosis banding dari MEC antara lain sebaceous neoplasms, clear cell

tumors dan squamous cell carcinoma. Salah satu bentuk MEC yang jarang yaitu

bentuk sclerosing bisa jadi didiagnosis sebagai sialadenitis kronis. Sebelum

menegakkan diagnosis primer squamous cell carcinoma pada kelenjar liur,

sebaiknya harus yakin bahwa itu bukan suatu MEC atau metastatis squamous cell

carcinoma (Mills, 2010).

2.4 Adenoid Cystic Carcinoma

Adenoid cystic carcinoma adalah tumor basaloid yang terdiri dari sel epitel

dan myoepitel dalam susunan morfologi yang bervariasi, antara lain pola tubular,

cribiform dan solid. Tumor ini biasanya berakibat fatal (Barnes et al., 2005).

B

A

A

C



2.4.1 Epidemiologi

Adenoid cystic carcinoma (AdCC) diperkirakan sekitar 10% dari seluruh

tumor kelenjar liur dan paling banyak terjadi pada parotis, kelenjar liur

submandibula dan minor. Tumor terjadi pada semua kelompok usia, paling

banyak usia pertengahan dan lebih tua serta tidak ada predileksi jenis kelamin.

(Barnes et al., 2005).

2.4.2 Makroskopik

Tumor padat, berbatas tegas tapi tidak berkapsul. Tampak kecoklatan,

kenyal dengan ukuran bervariasi dan infiltratif (Barnes et al., 2005).

2.4.3 Histopatologi

Ada tiga pola karakteristik pertumbuhan tumor, yaitu cribiform, tubular

dan solid. Beberapa pola dapat muncul dalam satu tumor. Struktur cribiform atau

klasik adalah struktur yang paling sering pada AdCC, terdiri dari sel epitel

basaloid yang membentuk sarang-sarang berbatas tegas berisi banyak ruang

ekstraseluler yang memberi gambaran “Swiss-cheese”. Ruangan ini bukan suatu

lumen kelenjar, berisi jaringan ikat mucin atau material seperti hyalin berwarna

eosinofilik yang merupakan suatu glycosaminoglycans dan duplikat sel lamina

basal. Di antara pulau-pulau cribriform terdapat kelenjar yang sempit yang

dilapisi sel kuboid dengan sitoplasma eosinofilik. Sel neoplastik basaloid

merupakan sel yang utama, memiliki inti yang berlekuk, pleomorfik ringan,

sitoplasma tipis, sebagian mungkin tampak pucat sampai jernih, mitosis sulit

didapatkan (Cheuk dan Chan, 2007, Mills, 2010).



Pola tubular ditandai dengan tubulus yang memanjang dilapisi selapis sel

epitel ductal dikelilingi satu sampai beberapa lapis sel epitel basaloid. Stroma di

sekitarnya fibrous atau hyalin. Susunan seperti ini sangat mudah didapatkan.

Ruangan seperti lumen ini berisi bahan mucin atau bahan hyalin atau bahkan

kosong. Pola ini sebanyak 20-30% dari seluruh kasus AdCC (Cheuk dan Chan,

2007, Mills, 2010).

Gambar 2.4 Adenoid cystic carcinoma memberi gambaran pola yang sangat bervariasi. A dan B menunjukkan pola cribiform, C menunjukkan pola tubular dan D menunjukkan pola solid (Sumber: Cheuk and Chan, 2007).

Pola solid adalah pola yang paling sedikit dan sering merupakan campuran

dengan varian lain yang terdiri dari sarang-sarang sel basaloid yang solid, sering

dalam storma hyalin. Secara sitologi, sel mirip bahkan identik dengan sel pada

pola cribiform dan tubular. Inti sel relatif uniform, berukuran besar dengan

kromatin gelap dan kasar, pleomorfik, anak inti prominent, jumlah mitosis sedikit

B A

D C



meningkat dan biasanya didapatkan area nekrotik. Biasanya terdapat lumen true

glandular (Cheuk dan Chan, 2007, Mills, 2010).

2.4.4 Diagnosis Banding

Adenoid cysytic carcinoma sulit dibedakan dari tumor kelenjar liur lain

yang memiliki komponen myoepitel dan sel basal yang prominent, seperti basal

cell adenoma/adenocarcinoma dan pleomorphic adenoma yang memiliki

gambaran morfologi yang serupa. AdCC dibedakan dari basal cell adenoma dan

pleomorphic adenoma dengan melihat invasi tumor di sekitar parenkim atau

syaraf dan biasanya menunjukkan struktur cribiform yang jelas. Namun AdCC

tipe solid memberikan kesulitan yang cukup besar untuk membedakannya dari

basal cell adenoma dan pleomorphic adenoma (Cheuk dan Chan, 2007).

2.5 Acinic Cell Carcinoma

Acinic cell carcinoma adalah neoplasma epitelial yang ganas pada kelenjar

liur yang merupakan salah satu dari sedikit neoplasma dengan diferensiasi sel

serous acinar yang ditandai dengan sekresi granula cytoplasmic zymogen (Barnes

et al., 2005).

2.5.1 Epidemiologi

Penyakit ini sedikit lebih banyak diderita oleh wanita dibanding laki-laki

dan tidak berhubungan dengan etnis tertentu. Penderita berasal dari berbagai

distribusi usia, mulai dari anak-anak sampai tua, mulai dari dekade kedua sampai

ketujuh. Sebanyak 4% penderita berusia di bawah 20 tahun. Lokasi yang paling

sering terkena adalah kelenjar parotis (84%) lalu kelenjar submandibula (4%),



diikuti mukosa bukal, bibir atas dan palatum (Cheuk dan Chan, 2007; Barnes et

al., 2005).

2.5.2 Makroskopik

Kebanyakan ukuran terbesar tumor 1-3 cm, biasanya memiliki batas,

nodul soliter, namun beberapa dengan batas tidak jelas dengan tepi tidak teratur

dan atau multinoduler. Pada irisan tampak berlobus-lobus, berwarna coklat

sampai merah, konsistensi bervariasi dari lunak sampai kenyal dan solid sampai

kistik (Barnes et al., 2005).

2.5.3 Histopatologi

Sel tumor acinar yang klasik menyerupai elemen seluler serous pada

kelenjar parotis normal bergranula halus dan sitoplasma basofilik. Jaringan tumor

mungkin juga tersusun dari clear cells, sel onkositik, sel basaloid, dan sel ductal

non spesifik. Macam-macam sel ini tersusun dalam pola pertumbuhan yang

bervariasi, antara lain solid, acinar, mikrokistik, kistik papiler dan folikular. Hasil

akhirnya adalah suatu tumor dengan spektrum yang luas sehingga harus sangat

berhati-hati agar tidak terjadi diagnosis yang berlebihan.



n

Gambar 2.5 Acinic cell carcinoma dengan clear cell (A), Acinic cell carcinoma, follicular variant ditandai dengan folikel yg berisi bahan colloid-like eosinofilik, sangat menyerupai folikel thyroid (B), Acinic cell carcinoma, papillary-cystic variant, ditandai dengan papil dan pseudopapil yang masuk ke dalam cavitas kistik (C), Dedifferentiated acinic cell carcinoma, tampak carcinoma poorly differentiated yang diketahui bukan suatu acinic cell carcinoma namun di area lain tampak suatu acinic cell carcinoma yang khas (D) (Sumber: Cheuk and Chan, 2007)

Acinic cell carcinoma merupakan tumor yang berdiferensiasi baik dengan

gambaran keganasan yang tidak terlalu jelas. Bila ditemukan inti sel yang jelas

tampak pleomorfik, mitosis mudah ditemukan, atau didapatkan nekrosis maka

sebaiknya dipikirkan entitas tumor yang lain. Jika hal-hal tersebut ditemukan

secara fokal pada acinic cell carcinoma yang jelas, disebut area

“dedifferentiation”. Dedifferentiated acinic cell carcinoma adalah tumor yang

sangat agresif yang membutuhkan terapi adjuvant. Beberapa acinic cell

B A

D C



carcinoma mengandung stroma limfoid yang menyolok dan pada sediaan yang

ekstrim akan sulit dibedakan dengan suatu metastasis limfoid (Mills, 2010).

2.5.4 Diagnosis Banding

Acinic cell carcinoma memiliki diagnosis banding antara lain oncocytoma,

adenoid cystic carcinoma, adenocarcinoma NOS atau cystadenocarcinoma,

jaringan kelenjar liur normal terutama dari bahan biopsi, metastasis kanker

thyroid dan granula cell tumor (Cheuk dan Chan, 2007).

2.6 Peran Cdk6 dalam Neoplasma Kelenjar Liur

Proliferasi sel merupakan proses pengaturan yang sangat ketat yg

melibatkan sejumlah molekul dan pathway yang saling berhubungan. Untuk

memahami bagaimana sel berproliferasi selama proses regenerasi dan perbaikan,

penting untuk merangkum suatu tanda penting dari siklus sel yang normal dan

pengaturannya. Replikasi sel dirangsang oleh faktor pertumbuhan atau pemberi

isyarat dari komponen ECM melalui integrin. Untuk mencapai replikasi dan

pembelahan, sel harus melalui suatu rangkaian yang diawasi ketat yang disebut

siklus sel. Siklus sel terdiri fase G1 (prasintesis), S (sintesis DNA), G2 (pramitosis)

dan M (mitosis). Gerak maju pada siklus sel, terutama pada G1/S dikendalikan

dengan sangat ketat oleh suatu protein yang disebut Cyclin dan berhubungan

dengan enzim-enzim yang disebut Cyclin-dependent kinases (Cdks) (Grossel et

al., 1999; Kumar, 2010).



Gambar 2.6 Skema siklus sel yang menunjukkan fase-fasenya (G1, S, G2 dan M) dengan protein-protein yang mengatur progresi positif (cyclin dan cdk) dan negatifnya (p15, 16, 19, 21, 27, 53 dan 57) (Sumber: Dhulipala et al., 2006) Pada awal fase G1, Cdk4 dan atau Cdk6 diaktifkan oleh Cyclin D.

Kompleks Cdk4/6 dengan Cyclin D akan menginisiasi fosforilasi dari keluarga

protein retinoblastoma (pRb). Fosforilasi Rb menyebabkan pelepasan faktor

transkripsi E2F yang kemudian menghasilkan aktivasi dan transkripsi gen-gen,

antara lain Cyclin tipe E dan A, yang berperan dalam siklus sel. Pada akhir fase

G1, Cdk2 diaktivasi dengan cara berikatan dengan Cyclin E. Hal ini mengarahkan

untuk melewati restriction point pada batas fase G1/S dan menginisiasi fase S

(Satyanarayana dan Kaldis, 2009).

Aktivitas kinase kompleks Cyclin/Cdk dan kelanjutan siklus sel dapat

dihambat oleh dua kelas protein Cdk-inhibitor, yaitu kelompok INK4 dan

Cip/Kip. Pengatur negatif dari siklus sel ini memainkan peran penting dalam

mengkoordinasi perputaran siklus sel dengan membatasi proses replikasi.



Kelompok protein INK4 meliputi p15, p16, p18 dan p19 dan diketahui secara

aktif melawan kompleks Cyclin D/Cdk4 atau 6 dengan cara mengikat kompleks

tersebut. Kelompok cip/kip terdiri dari p21, p27 dan p57 menghambat kompleks

Cyclin E/Cdk2 dan Cyclin A/Cdk2 (Sherr dan Robert, 1999; Dhulipala et al.,

2006).

Penelitian yang dilakukan beberapa tahun yang lalu mengindikasikan

peran Cdk6 dalam diferensiasi. Sel astrosit pada tikus berhubungan dengan

dediferensiasi astrosit sampai glial progenitor-like cell. Ekspresi Cdk6 dalam sel

astrosit tikus menunjukkan perubahan morfologi yang drastis dan perubahan pola

ekspresi dari marker diferensiasi glia (Ericson, 2003). Penelitian lainnya

mengindikasikan BMP-2 yang menstimulasi diferensiasi osteoblas dihambat oleh

overekspresi Cdk6. Dalam diferensiasi osteoblas, penghambatan diferensiasi oleh

ekspresi Cdk6 telah dinyatakan tidak bergantung pada perannya dalam pengaturan

siklus sel karena perubahan siklus sel tidak diobservasi (Ogasawara et al., 2004).

Pada beberapa penelitian disebutkan Cdk6 terekspresi pada sitoplasma

namun signifikansinya dan fungsi dari marker ini pada distribusi sel belum cukup

dimengerti. Penelitian yang dilakukan Kohrt (2009) menunjukkan aktivitas Cdk6

berupa pemecahan Cdk6 dalam sitoplasma. Teori pertama yang menyebutkan

pemecahan Cdk6 pada sitoplasma penting untuk mengaktifkan Cdk6 pada nukleus

yang kemudian akan mengatur proliferasi sel dalam hubungannya dengan proses

diferensiasi. Teori tersebut didukung sebuah penelitian yang menyatakan Cdk6

terekspresi pada sitoplasma dan inti sel T namun hanya inti Cdk6 yang aktif dan

menunjukkan kemampuan fosforilasi sel T (Mahony et al., 1998).



Sedikit referensi yang bisa didapatkan mengenai peran Cdk6 dalam

neoplasma kelenjar liur. Penelitian yang dilakukan oleh Pardis dan kawan-kawan

tentang peran Cdk6 dalam neoplasma kelenjar liur hanya mengenai ekspresi Cdk6

bukan mekanisme kenaikan ekspresi Cdk6 pada neoplasma kelenjar liur. Studi ini

meneliti ekspresi marker Cdk6 baik pada inti maupun sitoplasma sel. Hasilnya,

marker ini hanya terekspresi pada sitoplasma dalam kelenjar liur normal,

sedangkan pada neoplasma kelenjar liur marker Cdk6 terekspresi baik pada inti

maupun sitoplasma sel. Neoplasma yang diteliti antara lain Pleomorphic

adenoma, mucoepidermoid carcinoma,acinic cell carcinoma dan adenoid cystic

carcinoma (Pardis et al., 2012).

Gambar 2.7 Perbandingan ekspresi Cdk6 pada inti dan sitoplasma sel (Sumber: Pardis et al., 2012).

Cdk6 staining



Gambar 2.8 Ekspresi Cdk6 pada tumor dan kelenjar liur A. Ekspresi Cdk6 pada sitoplasma dalam kelenjar liur normal (400x), B. Ekspresi Cdk6 pada sitoplasma sel PA (400x), C. Ekspresi Cdk6 pada inti sel dalam PA (400x), D. Ekspresi Cdk6 pada inti dan sitoplasma sel AdCC (400x) E. Ekspresi Cdk6 pada sitoplasma dalam MEC (200x), F. Ekspresi Cdk6 pada inti sel dalam MEC (200x) (Sumber: Pardis et al., 2012).

2.7 Peran Ki-67 dalam Neoplasma Kelenjar Liur

Salah satu hal terpenting dalam mekanisme biologik onkogenesis adalah

proliferasi. Ki-67 merupakan protein inti yang dikode dengan gen MKI67. Protein

B

D

E

A

F C



ini berhubungan dengan proliferasi sel dan diperlukan untuk mensintesis ribosom

dalam siklus sel (Bullwinkel et al., 2006, Liu et al., 2012). Inaktivasi Ki-67

menyebabkan terhambatnya sintesis rRNA (Rahmanzadeh et al., 2007). Selama

inter-phase, Ki-67 berada dalam inti sel dimana mitosis protein dibawa ke

permukaan kromosom. Protein ini aktif pada semua fase dalam siklus sel (G1, S,

G2 dan mitosis) namun tidak ditemukan dalam fase istirahat (Scholzen et al.,

2000)

Proporsi kuantitatif sel dengan ekspresi Ki-67 pada inti sel merupakan

suatu ukuran fraksi pertumbuhan dan karena itu menunjukkan sifat biologi yang

agresif dari suatu keganasan. (Li et al., 2004) Ki-67 sangat penting untuk

menetapkan prognosis tumor dan tingkat kekambuhan setelah radioterapi pada

penderita adenocarcinoma (Scalzo et al., 1998).

Ki-67 telah digunakan dalam penelitian beberapa keganasan pada manusia

seperti sarkoma jaringan lunak, meningioma, kanker payudara dan non-Hodgkin’s

lymphoma (Ashkavandi et al., 2013). Ki-67 telah digunakan juga dalam penelitian

neoplasma kelenjar liur untuk membedakan adenoma dari carcinoma, di mana

indeks Ki-67 biasanya <5% pada adenoma, sedangkan pada carcinoma >10%

(Cheuk dan Chan, 2007).

Dalam suatu penelitian yang dilakukan oleh Tadbir, dkk, meneliti tiga

kelompok yang terdiri dari kelenjar liur normal, pleomorphic adenoma dan tumor

ganas (acinic cell carcinoma dan mucoepidermoid carcinoma). Frekuensi dan

presentasi ekspresi Ki-67 pada kelenjar liur normal dibandingkan dengan

pleomorphic adenoma dan pleomorphic adenoma dibandingkan dengan tumor



ganas secara signifikan adalah rendah. Hal ini menunjukkan proliferasi yang lebih

tinggi pada lesi tumor dibandingkan dengan jaringan normal, juga proliferasi yang

lebih tinggi pada keganasan dibanding dengan tumor jinak (Tadbir et al., 2012).

Gambar 2.9 Ekspresi Ki-67 pada kelenjar liur. Ekspresi pada inti sel pleomorphic adenoma (A), mucoepidermoid carcinoma (B), adenoid cystic carcinoma (C) (Sumber: Ashkavandi et al., 2013).

B A

C



INTI SEL

BAB 3

KERANGKA KONSEPTUAL DAN HIPOTESIS

3.1 Kerangka Konseptual Kerangka konsep dalam penelitian ini dapat dilihat dalam gambar di bawah ini: Faktor pertumbuhan

INTI SEL Proliferasi ↑ Proliferasi ↑↑↑

Keterangan : Yang diteliti Tidak diteliti Gambar 3.1 Kerangka konsep

Cyclin-D/

cdk6

Rb-p

E2F

Fase S

E2F

Cyclin E/

Cdk2 Cyclin E

INK4

Ki-67 ↑ Ki-67 ↑↑↑

↑

JINAK GANAS

Sinyal aktivasi

Sinyal inhibisi

Cip/Kip

p53 mutan p21 (-)



Penjelasan kerangka konseptual :

Siklus sel dimulai dari masuknya sel dari fase G0 ke fase G1 karena

adanya stimulus oleh growth faktor. Pada awal fase G1, Cdk6 diaktifkan oleh

Cyclin D. Kompleks Cdk6 dengan Cyclin D akan menginisiasi fosforilasi dari

keluarga protein retinoblastoma (pRb). Fosforilasi Rb menyebabkan pelepasan

faktor transkripsi E2F yang kemudian menghasilkan aktivasi dan transkripsi gen-

gen, antara lain Cyclin tipe E dan A, yang berperan dalam siklus sel. Pada akhir

fase G1, Cdk2 diaktivasi dengan cara berikatan dengan Cyclin E. Hal ini

mengarahkan untuk melewati restriction point pada batas fase G1/S dan

menginisiasi fase S (Satyanarayana dan Kaldis, 2009). Aktivitas kompleks Cyclin-

Cdk pada kondisi tertentu diatur oleh beberapa macam regulator negatif yang

berperan sebagai check points pada berbagai tahapan siklus sel, yaitu INK4 dan

Cip/Kip untuk menghindari peningkatan proliferasi sel yang tidak diperlukan

yang mungkin akan menimbulkan tumor (Dhulipala VC et al., 2006). Hal ini

berarti peningkatan aktivitas cdk, dalam hal ini adalah cdk6, menimbulkan

pengurangan tingkat Rb hipofosforilasi aktif yang meningkatkan proliferasi,

pemendekan fase G1 dan pengurangan serum yang dibutuhkan untuk aktivitas

fase S (Khleif et al., 1996).

Ki-67 berada dalam inti sel pada siklus sel fase G1, S dan G2, yaitu saat

pembelahan sel maupun pada mitosis. Marker ini segera menghilang setelah

mitosis (Ashkavandi et al., 2013). Ikatan Cyclin E - Cdk2 dengan tingkatan

tertinggi berada pada saat transisi fase G1 – S dan menurun pada saat memasuki

fase S. Cyclin A yang sintesisnya meningkat pada akhir fase G1 dan akan



berikatan dengan Cdk2 menggantikan Cyclin E (Dhulipala et al., 2006). Ki-67

mungkin berada di inti sel pada fase G1- S bersama dengan Cyclin E. Ekspresi Ki-

67 yang positif pada inti sel menunjukkan perkiraan potensi pertumbuhan

neoplasma (Gerdes, 1990). Ekspresi yang rendah menunjukkan neoplasma jinak

dan ekspresi yang tinggi menunjukkan neoplasma yang ganas (Hollstein et al.,

1991).

3.2 Hipotesis

3.2.1 Ekspresi Cdk6 rendah pada neoplasma kelenjar liur yang jinak dan tinggi

pada neoplasma kelenjar liur yang ganas.

3.2.2 Ekspresi Ki-67 rendah pada neoplasma kelenjar liur yang jinak dan tinggi

pada neoplasma kelenjar liur yang ganas.

3.2.3 Terdapat hubungan positif antara ekspresi cdk6 dan Ki-67 pada neoplasma

kelenjar liur.



BAB 4

METODE PENELITIAN

4.1 Rancangan Penelitian

Penelitian ini melakukan observasi dengan pengamatan sesaat pada

variabel-variabel yang sudah terjadi. Oleh karena itu, rancangan penelitian yang

digunakan merupakan observasional analitik dengan pendekatan cross sectional

dengan dua populasi.

4.2 Populasi dan Besar Sampel

1. Populasi penelitian adalah penderita neoplasma kelenjar liur yang telah

didiagnosis secara histopatologi sebagai kasus pleomorphic adenoma

(neoplasma jinak) dan mucoepidermoid carcinoma, adenoid cystic carcinoma

dan acinic cell carcinoma (neoplasma ganas) di Laboratorium Patologi

Anatomi RSUD Dr. Soetomo Surabaya periode 1 Januari 2011 sampai 30 Juni

2015.

2. Sampel penelitian ini diambil secara proporsional yang memenuhi kriteria

inklusi sebagai berikut:

a. Telah didiagnosis sebagai pleomorphic adenoma, mucoepidermoid

carcinoma, adenoid cystic carcinoma dan acinic cell carcinoma secara

histopatologi periode 1 Januari 2011 sampai 30 Juni 2015.

b. Blok parafin masih mempunyai jaringan tumor yang representatif untuk

dilakukan pemeriksaan immunohistokimia.



Penghitungan besar sampel menggunakan rumus sebagai berikut:

2σ2 (Z1-α + Z1-β)2

(µ1 – µ2)2

n1= besar sampel kelompok neoplasma jinak minimal

n2 = besar sampel kelompok neoplasma ganas minimal

σ = SD Ki-67 = 19,49 (Ashkavandi et al., 2013)

µ1 = mean Ki-67 pada neoplasma ganas = 21,82 (Ashkavandi et al., 2013)

µ2 = mean Ki-67 pada neoplasma jinak = 1,73 (Ashkavandi et al., 2013)

α = 0,05 Z1-α = 1,645

β = 0,2 Z1-β = 0,842 (Dahlan, 2009)

Besar sampel minimal = 11,6 dibulat menjadi 12.

Untuk mengantisipasi preparat yang tidak representatif, dilakukan koreksi sebesar

20%, sehingga diperlukan sampel sebesar 15 untuk masing-masing kelompok.

Pengambilan sampel dilakukan secara proposional. Kelompok neoplasma jinak

seluruhnya adalah pleomorphic adenoma (PA) sebanyak 15 kasus dan kelompok

neoplasma ganas sebanyak 15 yang terdiri dari:

1. Mucoepidermoid carcinoma (MEC) sebanyak 5 kasus

2. Adenoid cystic carcinoma (AdCC) sebanyak 7 kasus

3. Acinic cell carcinoma (ACC) sebanyak 3 kasus

4.3 Variabel Penelitian

a. Variable bebas : ekspresi Cdk6, ekspresi Ki-67

b. Variabel tergantung : neoplasma jinak, neoplasma ganas

n1 = n2=



4.4 Batasan Operasional

4.4.1 Jenis Neoplasma

a. Neoplasma jinak pada penelitian ini adalah jaringan pada blok parafin

yang memiliki kriteria morfologi suatu pleomorphic adenoma.

b. Neoplasma ganas pada penelitian ini adalah jaringan pada blok parafin

yang memiliki kriteria morfologi suatu Mucoepidermoid carcinoma,

Adenoid cyst carcinoma dan Acinic cell carcinoma

4.4.2 Ekspresi Cdk6

Ekspresi Cdk6 adalah jumlah sel neoplasma yang memberi reaksi positif

terhadap antibodi anti-Cdk6 (Santa Cruz Biotechnology, SD-7961,

pengenceran 1:100). Ekpresi dinilai positif bila terpulas warna coklat pada

sitoplasma dan inti sel neoplasma, dihitung persentase sel yang terpulas

positif dari 1000 sel neoplasma dilihat dengan mikroskop binokuler

dengan pembesaran 400x. Hasil pengukuran dinyatakan dalam persen (%)

dan diberikan skor dengan kategori sebagai berikut (Wang et al., 2012) :

0 : bila tidak ada sel neoplasma yang terpulas coklat

1 : bila Cdk6 terpulas pada sitoplasma dan inti sebanyak 1 – 25%

2 : bila Cdk6 terpulas pada sitoplasma dan inti sebanyak 26 – 50%

3 : bila Cdk6 terpulas pada sitoplasma dan inti sebanyak 51 - 75%

4 : bila Cdk6 terpulas coklat sitoplasma dan inti sebanyak 76 - 100%

4.4.3 Ekspresi Ki-67

Ekspresi Ki-67 adalah jumlah sel tumor yang diperiksa secara

imunohistokimia dengan antibodi monoklonal anti-Ki67 (concentrated



rabbit monoclonal antibody, clone SPG, Biocare, The Netherland,

pengenceran 1:50). Ekpresi dinilai positif bila terpulas warna coklat pada

inti sel tumor, dihitung persentase sel yang terpulas positif dari 1000 inti

sel tumor pada area yang paling banyak terpulas coklat, dilihat dengan

mikroskop yang menggunakan graticulae dengan pembesaran 400x.

Persentase sel tumor yang positif per 1000 sel tumor disebut sebagai

labeling index (LI) (Tadbir et al., 2012, Ashkavandi et al., 2013), dihitung

dengan rumus:

Ki-67 (LI) = Jumlah inti yang terpulas positif x 100%

1000

4.5 Cara Kerja

1. Menghubungi bagian yang terkait, yaitu Laboratorium Patologi divisi

histopatologi serta imunohistokimia RSUD Dr. Soetomo.

2. Mengumpulkan arsip formulir pemeriksaan Patologi Anatomi sesuai

nomor pemeriksaan histopatologi kasus neoplasma kelenjar liur di

Laboratorium Patologi RSUD Dr. Soetomo, dilakukan sampling pada

kasus yang memenuhi kriteria inklusi.

3. Mengumpulkan slide pulasan HE dari kasus neoplasma kelenjar liur lalu

dilakukan review preparat oleh 2 orang ahli patologi untuk memilih slide

yang memenuhi kriteria inklusi.

4. Mengumpulkan blok parafin dan memotong blok parafin dari kasus

neoplasma kelenjar liur yang memenuhi kriteria inklusi, setebal 4 mikron,

masing-masing dua slide untuk dilakukan pemeriksaan imunohistokimia.



5. Melakukan pulasan imunohistokimia dengan antibodi Cdk6 dan Ki-67.

6. Menilai ekspresi Cdk6 dan Ki-67 sesuai dengan kriteria yang tertera pada

batasan operasional.

7. Melakukan analisis data.

4.6 Alur Penelitian

4.7 Pengelolaan dan Analisis Data

Data yang dikumpulkan dianalisis dengan SPSS for window 21.0.

Perbedaan ekspresi Cdk6 dan Ki-67 antara neoplasma kelenjar liur jinak dan

ganas dianalisis dengan uji statistik MannWhitney. Ekspresi Ki-67 pada

neoplasma kelenjar liur dicari nilai cut-off dengan menggunakan analisis

Pengumpulan nomor sediaan pleomorphic adenoma, mucoepidermoid carcinoma, adenoid cystic carcinoma, acinic cell carcinoma periode

1 Januari 2011 – 30 Juni 2015

Pengumpulan sediaan pulasan HE, dilakukan review dan

pengumpulkan blok parafin

Pemotongan blok parafin < 4 mikron

Pulasan imunohistokimia dengan antibodi anti-Cdk6 dan antibodi anti Ki-67

Pelaporan

Analisis data



kurva ROC. Kekuatan hubungan Cdk6 dan Ki-67 dianalisis dengan

menghitung koefisien korelasi dari Spearman.



BAB 5

HASIL PENELITIAN

Penelitian ini menilai perbedaan ekspresi protein Ki-67 dan Cdk6 antara

neoplasma kelenjar liur jinak dan ganas. Hubungan antara ekspresi protein Ki-67

dan Cdk6 pada neoplasma kelenjar liur jinak dan ganas juga dinilai pada

penelitian ini. Data demografi yang tercatat pada penelitian ini adalah usia, jenis

kelamin penderita dan lokasi neoplasma. Variabel penelitian yang dinilai adalah

ekspresi protein Ki-67 dan Cdk6 pada neoplasma kelenjar liur jinak dan ganas.

Sampel diambil dari blok parafin yang tersimpan di Instalasi Patologi

Anatomi FK Unair/RSU Dr. Soetomo Surabaya selama rentang 1 Januari 2011

sampai Juni 2015 sebanyak 147. Berdasarkan kepentingan statistik dilakukan

penghitungan melalui rumus mencari besar sampel dan diperoleh 23,2 sampel,

lalu dibulatkan sehingga keseluruhan sampel berjumlah 30, terdiri dari 15 sampel

neoplasma jinak yaitu pleomorphic adenoma (PA) dan 15 sampel neoplasma

ganas yang terdiri dari 5 sampel mucoepidermoid carcinoma (MEC), 7 sampel

adenoid cystic carcinoma (AdCC) dan 3 sampel acinic carcinoma (ACC).

5.1 Karakteristik Sampel Penelitian

5.1.1 Distribusi jenis kelamin

Pada penelitian ini jenis kelamin dibagi berdasarkan pria dan wanita

dengan distribusi sampel tampak pada Tabel 5.1.



Tabel 5.1 Distribusi Penderita Tumor Kelenjar Liur Berdasarkan Jenis Kelamin

Jenis Kelamin Jenis Tumor Kelenjar Liur

Total Jinak Ganas

Laki-laki 5 (33,3%) 6 (40,0%) 11 (36,7%)

Perempuan 10 (66,7%) 9 (60,0%) 19 (63,3%)

Total 15 (100,0%) 15 (100,0%) 30 (100,0%)

Chi Square p = 1,000

Tidak ada perbedaan distribusi jenis kelamin antara penderita neoplasma kelenjar

liur jinak dan ganas (p>0,05).

Bila dibuat dalam bentuk grafik, gambaran distribusi jenis kelamin

penderita akan tampak sebagai berikut :

Gambar 5.1 Distribusi penderita tumor kelenjar liur berdasarkan jenis kelamin

0

2

4

6

8

10

12

Jinak Ganas

Jum

lah

Jenis Neoplasma

Laki-laki

Perempuan



5.1.2 Distribusi usia

Data usia yang diperoleh pada penelitian ini menunjukkan penderita

termuda berusia 15 tahun dan tertua 73 tahun. Rata-rata usia penderita neoplasma

kelenjar liur dalam penelitian ini adalah 47,23 tahun ± 14,41 tahun. Tidak

didapatkan perbedaan usia antara penderita neoplasma kelenjar liur jinak dengan

penderita neoplasma kelenjar liur ganas (p>0,05).

Tabel 5.2 Deskripsi Usia Penderita Berdasarkan Jenis Neoplasma Kelenjar Liur Jenis tumor

kelenjar liur n

Usia Penderita (tahun) t test (p)

Mean SD Minimum Maksimum

Jinak 15 47,93 15,69 22 73 0,795

Ganas 15 46,53 13,52 15 63 Total 30 47,23 14,41 15 73 Untuk memudahkan pengamatan, dilakukan pengelompokan umur

menjadi 7 kelompok dengan rentang 10 tahunan. Kelompok usia penderita

neoplasma kelenjar liur yang paling banyak didiagnosis sebagai jinak berada pada

rentang 41 – 50 tahun dan 51 – 60 tahun masing-masing sebesar 26,67%,

sementara yang didiagnosis ganas paling banyak berada pada rentang 41 – 50

tahun (40%). Distribusi kelompok usia penderita neoplasma kelenjar liur dapat

dilihat pada Tabel 5.3.

Tabel 5.3 Distribusi Kelompok Usisa Penderita Neoplasma Kelenjar Liur Kelompok Usia

(Tahun)

Jenis Tumor Kelenjar Liur Total

Jinak Ganas

≤ 20 0 (0%) 1 (6,67%) 1 21 – 30 2 (13,33%) 1 (6,67%) 3 31 – 40 2 (13,33%) 0 (0%) 2 41 – 50 4 (26,67%) 6 (40%) 10 51 – 60 4 (26,67%) 5 (33,33%) 9 61 – 70 1 (6,67%) 2 (13,33%) 3 ≥ 71 2 (13,33%) 0 (0%) 2 Total 15 (100%) 15 (100%) 30



Bila digambarkan dalam bentuk grafik, gambaran distribusi usia penderita akan

tampak sebagai berikut :

Gambar 5.2 Distribusi penderita neoplasma kelenjar liur berdasarkan usia.

5.1.3 Distribusi lokasi neoplasma

Sampel penelitian ini menunjukkan lokasi neoplasma yang paling sering

pada neoplasma jinak adalah kelenjar liur mayor parotis dan submandibula

sebanyak 86,67% sedangkan pada neoplasma ganas sebanyak 60%. Neoplasma

pada kelenjar liur minor terdapat pada palatum durum, pangkal lidah, cavum nasi

dan sinonasal dengan ditribusi seperti pada Tabel 5.4

Tabel 5.4 Distribusi Penderita Tumor Kelenjar Liur Berdasarkan Lokasi

Lokasi Tumor Jenis Tumor Kelenjar Liur

Total Jinak Ganas

Kelenjar liur mayor 13 (86,67%) 9 (60%) 22

Kelenjar liur minor 2 (13,33%) 6 (40%) 8

Total 15 (100%) 15 (100%) 30

0

1

2

3

4

5

6

7

≤ 20 th 21–30 th 31–40 th 41–50 th 51–60 th 61–70 th ≥ 71 th

Jum

lah

Kelompok usia

Jinak

Ganas



Bila digambarkan dalam bentuk grafik, seperti tampak pada gambar 5.3.

Gambar 5.3 Distribusi neoplasma kelenjar liur berdasarkan lokasi.

5.2 Ekspresi Cdk6 pada Neoplasma Kelenjar Liur Jinak dan Ganas

Pada penelitian ini dinilai ekspresi Cdk6 pada sitoplasma dan inti sel

neoplasma kelenjar liur baik yang jinak maupun ganas, namun setelah dilakukan

pulasan ternyata Cdk6 hanya terekspresi pada sitoplasma sel neoplasma. Penilaian

yang digunakan adalah penilaian semikualitatif dalam rentang skor 1 – 4. Tumor

jinak kelenjar liur memiliki skor terendah 1 dan skor tertinggi 4 sedangkan

neoplasma ganas memiliki skor terendah 2 dan skor tertinggi 4.

Tabel 5.5. Distribusi Skor Pulasan Cdk6 Berdasarkan Jenis Neoplasma Skor PA MEC AdCC ACC

1 5 0 0 0

2 7 1 2 2

3 1 2 2 4

4 2 2 1 1

0

2

4

6

8

10

12

14

Jinak Ganas

Jum

lah

Jenis Neoplasma

Kelenjar liur mayor

Kelenjar liur minor



Tabel 5.6. Analisis Ekspresi Cdk6 pada Neoplasma Kelenjar Liur Jinak dan Ganas

Jenis tumor

kelenjar liur n

Cdk6 (Skor) Mann

Whitney

(p) Median

Simpangan Interkuartil

Minimum Maksimum

Jinak 15 2,0 0,5 1 4 0,002*

Ganas 15 3,0 0,5 2 4 Jinak + Ganas 30 2,5 1,0 1 4 Keterangan *Signifikan pada α=0,05

Distribusi ekspresi Cdk6 berdasarkan skor pada neoplasma jinak dan ganas

kelenjar liur tampak gambar 5.4.

Gambar 5.4 Distribusi ekspresi Cdk6 pada neoplasma kelenjar liur berdasarkan

skor.

Setelah dilakukan analisis statistik menggunakan Mann Whitney,

didapatkan hasil p=0,002 (p<0,05) yang berarti terdapat perbedaan signifikan

antara ekspresi cdk6 pada neoplasma kelenjar liur yang jinak dan ganas (data pada

0

1

2

3

4

5

6

7

8

Jinak Ganas

Jum

lah

Jenis Neoplasma

Skor 1

Skor 2

Skor 3

Skor 4



lampiran). Neoplasma kelenjar liur ganas memiliki ekspresi Cdk6 yang lebih

tinggi dibandingkan neoplasma jinak. Ekspresi Cdk6 pada neoplasma kelenjar liur

dapat dilihat pada gambar berikut ini:

Gambar 5.5 Neoplasma kelenjar liur dengan ekpresi Cdk6 terpulas pada sitoplasma (tanda panah) skor 1 (1% - 25%); 400X

Gambar 5.6 Neoplasma kelenjar liur dengan ekpresi Cdk6 terpulas pada sitoplasma (tanda panah) skor 2 (26% - 50%), 400X



5.3 Ekspresi Ki-67 pada Neoplasma Kelenjar Liur Jinak dan Ganas

Pada penelitian ini dinilai ekspresi Ki-67 pada inti sel neoplasma kelenjar

liur baik yang jinak maupun ganas. Penilaian yang digunakan adalah penilaian

kuantitatif. Nilai Ki-67 pada neoplasma kelenjar liur jinak terendah adalah 0% dan

yang tertinggi adalah 20% dengan nilai rerata 3,13%±4,98%. Neoplasma kelenjar

liur yang ganas memiliki nilai Ki-67 terendah sebesar 8% dan tertinggi sebesar

50% dengan nilai rerata 33,73%±14,61%. Hasil tersebut dilakukan analisis ROC

dan memberikan nilai cut-off sebesar 6,50%. Grafik ekspresi Ki-67 pada tumor

kelenjar liur tampak pada gambar 5.9.

Gambar 5.9 Mean / rerata ekspresi Ki-67 pada neoplasma kelenjar liur.

Setelah dilakukan analisis statistik menggunakan Mann Whitney,

didapatkan hasil p=0,000 (p<0,05) yang berarti terdapat perbedaan signifikan

antara ekspresi Ki-67 pada neoplasma kelenjar liur yang jinak dan ganas (data

0

5

10

15

20

25

30

35

40

Jinak Ganas

Nila

i

Jenis Neoplasma

Rerata ekspresi Ki-67

33,73±4,98

3,13±4,98



pada lampiran). Distribusi ekspresi Ki-67 berdasarkan nilai cut-off 6,50% tampak

pada Tabel 5.7.

Tabel 5.7 Distribusi Ekspresi Ki-67 Berdasarkan Nilai Cut-Off 6,50% Ekspresi Ki67

(%)

Jenis Tumor Kelenjar Liur Total

Jinak Ganas

<6,50 14 (93,3%) 0 (0,0%) 14 (46,7%)

≥6,50 1 (6,7%) 15 (100,0%) 16 (53,3%)

Total 15 (100,0%) 15 (100,0%) 30 (100,0%)

Sensitivitas = 100% Spesifisitas = 93,3% Akurasi = 96,7%

Ekspresi Ki-67 pada neoplasma kelenjar liur dapat dilihat pada gambar berikut ini

Gambar 5.10 Ekspresi Ki-67 pada neoplasma jinak (pleomorphic adenoma); dengan pengecatan HE, 40X (A); dengan pulasan Ki-67 menunjukkan ekpresi yang rendah (tanda panah), 400x (B).

A B



Gambar 5.11 Ekspresi Ki-67 pada neoplasma ganas (adenoid cystic carcinoma); dengan pengecatan HE, 100X (A); dengan pulasan Ki-67 menunjukkan ekpresi yang tinggi (tanda panah), 400x (B). 5.4 Hubungan Antara Ekspresi Ki-67 dan Cdk6 pada Neoplasma Kelenjar

Liur

Hubungan antara ekspresi Ki-67 dan Cdk6 pada neoplasma kelenjar liur

baik yang jinak maupun yang ganas menggunakan uji korelasi Spearman. Hasil

uji ini menunjukkan adanya hubungan positif antara ekspresi Cdk6 dengan

ekspresi Ki67 pada neoplasma kelenjar liur (rs=0,519, p=0,003). Semakin tinggi

ekspresi Cdk6, semakin tinggi pula ekspresi Ki67 dan sebaliknya. Hubungan

ekspresi Ki-67 dengan Cdk6 tampak pada gambar 5.12.

A B



Gambar 5.12 Hubungan ekspresi Ki-67 dengan Cdk6 menggunakan uji korelasi Spearman.

0

10

20

30

40

50

60

0 1 2 3 4 5

Ki-

67

(%)

Cdk6 (skor)

rs=0,519, p=0,003



BAB 6

PEMBAHASAN

6.1 Karakteristik Sampel Penelitian

Penelitian ini menggunakan sampel sebanyak 30 pasien yang terbagi

menjadi 15 sampel untuk kasus neoplasma kelenjar liur jinak dan 15 sampel untuk

kasus neoplasma kelenjar liur ganas. Usia sampel termuda penelitian ini adalah 15

tahun sedangkan usia tertua 73 tahun. Tidak ada perbedaan yang signifikan pada

usia penderita neoplasma kelenjar liur jinak dan ganas. Usia rata-rata penderita

neoplasma kelenjar liur adalah 47,23 tahun dengan standar deviasi 14,41 tahun.

Hal ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan sebelumnya bahwa usia rata-rata

sampel penelitian neoplasma kelenjar liur jinak dan ganas adalah sebesar 49,1

tahun (Askhavandi et al., 2013; Tadbir et al., 2012). Penelitian yang dilakukan

oleh Evenson juga menyebutkan usia rata-rata penderita neoplasma kelenjar liur

jinak maupun ganas adalah 46 dan 47 tahun (Evenson et al., 2005).

Jenis kelamin perempuan sedikit lebih banyak jumlahnya dibanding laki-

laki pada penelitian ini. Hal ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh

Askhavandi, dkk (2013) dan Tadbir, dkk (2012) yang menyebutkan penderita

perempuan lebih banyak dibanding penderita laki-laki. Penelitian ini juga sesuai

dengan yang disebutkan oleh Eveson bahwa perempuan sedikit lebih sering

menderita neoplasma kelenjar liur dibandingkan laki-laki. Neoplasma pada

penelitian ini lebih banyak terdapat pada kelenjar liur mayor daripada kelenjar

liur minor. Hal ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh Sangeetha dan



rekan-rekannya (2014) yang menyebutkan bahwa baik neoplasma jinak maupun

ganas lebih banyak terjadi pada kelenjar liur mayor daripada kelenjar liur minor.

Evenson dan rekan-rekannya (2005) juga menyebutkan hal yang sama dalam

literatur yang mereka susun.

6.2 Ekspresi Cdk6 pada Neoplasma Kelenjar Liur Jinak dan Ganas

Proliferasi sel eukariotik, terutama mamalia, dikontrol oleh Cyclin, Cyclin

dependent kinases (Cdk) dan Cdk inhibitor pada poin spesifik dalam siklus sel

terutama pada fase G1 ke S dan G2 ke transisi M (Wang et al., 2004). Fase G1 ke

S dikendalikan suatu mekanisme yang kompleks yang melibatkan setidaknya tiga

tipe Cdk, di antaranya Cdk2, Cdk4 dan Cdk6 yang memegang peranan penting

(Malumbres, 2005; Sherr, 1999).

Cyclin dependent kinase (Cdk) adalah bagian dari kelompok protein

kinase yang awalnya diketahui fungsinya sebagai pengatur siklus sel. Cdk

merupakan protein yang kecil dengan berat molekul 34 – 40 kDa (Morgan, 2007).

Protein ini berikatan dengan Cyclin yang merupakan pengatur protein dan

memiliki protein kinasik yang ringan. Kompleks Cyclin-Cdk yang memiliki peran

kinasik yang aktif (Satyanarayana, 2009).

Cdk4 dan Cdk6 berhubungan dengan Cyclin tipe D (Cyclins D1, D2 dan

D3) untuk memicu mulainya siklus sel dan melaju melalui G1 dengan

menonaktifkan protein retinoblastoma Rb yang berlawanan dengan kelompok

INK4 yang merupakan Cdk inhibitors (CKI). Meskipun mutasi germline Cdk4



atau Cdk6 pada kanker jarang terjadi, sering didapati disregulasi Cdk4 dan Cdk6

baik berupa peningkatan fungsi atau hilangnya inhibisi (Huang et al., 2014).

Baik Cyclin D1 maupun Cdk4 memiliki peran dalam tumorigenesis

sehingga banyak penelitian dilakukan dengan fokus pada regulasi dari kompleks

Cyclin tipe D/Cdk4. Sebaliknya, kompleks Cyclin tipe D/Cdk6 sedikit diketahui

regulasinya. Cdk6 pertama diidentifikasi sebagai Cdc2 kinase homolog dan

kemudian diketahui berhubungan dengan Cyclin tipe D. Sebagai tambahan,

penemuan terakhir menunjukkan deregulasi Cdk6 memiliki peran dalam

permulaan timbulnya suatu neoplasma (Mahony D, 1998). Penelitian mengenai

Cyclin tipe D menunjukan bahwa adanya kehilangan satu tipe D (D1 atau D2 atau

D3) dapat digantikan oleh Cyclin tipe D lainnya yang merupakan tipe mayoritas

dalam suatu sel untuk mencegah konsekuensi yang berat pada proliferasi dan

kelangsungan hidup sel tersebut. Selain itu, terdapat juga penelitian yang

menyebutkan peran Cyclin D dapat digantikan oleh Cyclin E bila Cyclin D tidak

ada dalam suatu siklus sel (Satyanarayana dan Kaldis, 2009). Penelitian mengenai

proliferasi dengan menggunakan protein Cyclin D dikhawatirkan dapat

memberikan hasil yang bias.

Penelitian ini memberikan hasil bahwa Cdk6 terekspresi pada sitoplasma

neoplasma kelenjar liur jinak maupun ganas. Neoplasma jinak memberikan

ekspresi dengan rentang yang cukup luas (skor 1 – 4), sedangkan neoplasma

ganas memiliki rentang ekspresi yang lebih sempit (skor 2 – 4). Uji statistik

menunjukkan perbedaan ekspresi Cdk6 yang signifikan pada neoplasma jinak dan



ganas kelenjar liur ( p < 0,05), artinya pada neoplasma kelenjar liur ganas, Cdk6

tereskpresi lebih tinggi dibanding pada neoplasma jinak.

Pardis yang meneliti ekspresi Cdk6 pada kelenjar liur menyebutkan tidak

ada perbedaan yang signifikan antara ekspresi Cdk6 pada sitoplasma dan inti sel

tumor kelenjar liur yang jinak dan ganas (Pardis et al.,2012). Namun hasil

penelitian ini sesuai dengan penelitian ekspresi Cdk6 pada karsinoma buli yang

dilakukan oleh Wang dan rekan-rekannya. Penelitian tersebut menyebutkan

terdapat perbedaan ekspresi Cdk6 yang signifikan pada sitoplasma dan inti sel

karsinoma buli invasif dibanding dengan ekspresi pada jaringan penyangganya

namun tidak terdapat perbedaan ekspresi Cdk6 pada sitoplasma dan inti sel yang

signifikan antara jaringan karsinoma buli superfisial dengan jaringan

penyangganya (Wang et al., 2012). Penelitian yang dilakukan Kohrt (2009)

menunjukkan aktivitas Cdk6 berupa pemecahan Cdk6 dalam sitoplasma. Teori

pertama yang menyebutkan pemecahan Cdk6 pada sitoplasma penting untuk

mengaktifkan Cdk6 pada inti sel yang kemudian akan mengatur proliferasi sel

dalam hubungannya dengan proses diferensiasi. Hal ini menjelaskan semakin

banyak sel-sel neoplasma yang mengekspresikan Cdk6, semakin tinggi proliferasi

sel neoplasma tersebut.

Pada penelitian ini, Cdk6 hanya terekspresi positif pada sitoplasma,

sedangkan penelitian yang dilakukan Pardis (2012) dan Wang (2004)

menyebutkan Cdk6 terekspresi pada sitoplasma dan inti sel. Penelitian

sebelumnya menyebutkan bahwa Cdk6 terletak pada sitoplasma, namun beberapa

dari penelitian ini memiliki konflik sehubungan dengan lokasi subseluler dari



kinase yang penting ini (Ericson et al., 2003; Grossel et al., 1999; Kwon et al.,

1995; Mahony et al., 1998; Nagasawa et al., 1997). Penelitian yang dilakukan

oleh Slomiany (2006) memiliki hipotesis bahwa Cdk6 terekspresi di sitoplasma

sel astrosit yang menunjukkan peranan Cdk6 dalam proses diferensiasi, namun

hasil dari penelitian mereka menyebutkan bahwa Cdk6 terekspresi pada

sitoplasma dan inti sel yang menunjukkan peran Cdk6 dalam proses kompleks

proliferasi dan diferensiasi sel. Demikian juga dengan penelitan yang dilakukan

oleh Kohrt dan rekan-rekannya (2009) yang menyebutkan bahwa Cdk6

terekspresi mayoritas pada sitoplasma dan beberapa tampak terekspresi pada inti

sel astrosit. Sementara penelitian Mahony mengenai Cdk6 pada sel T (1998)

menyebutkan bahwa meski kompleks Cyclin D/Cdk6 terdeteksi berada pada

sitoplasma dan inti, namun hanya Cdk6 pada inti yang memiliki aktivitas

biokimia. Tidak terekspresinya Cdk6 pada inti sel dalam penelitian ini dapat

disebabkan karena Cdk6 sudah menyelesaikan aktivitas biokimianya sehingga

tidak tersisa lagi Cdk6 pada inti sel namun masih tersisa Cdk6 yang terekspresi

pada sitoplasma.

6.3 Ekspresi Ki-67 pada Neoplasma Kelenjar Liur Jinak dan Ganas

Salah satu mekanisme biologis yang penting dalam onkogenesis adalah

proliferasi sel (Liu et al., 2012). Ki-67 adalah penanda proliferasi yang paling

sering digunakan yang telah dimanfaatkan untuk penelitian mengenai keganasan

pada manusia seperti soft tissue sarcoma, meningioma, kanker payudara dan

limfoma non Hodgkin (Brown dan Gatter, 2002; Pich et al., 2004; Van Diest et



al., 2004). Ki-67 terekspresi pada inti sel dan terlibat dalam semua fase dalam

siklus sel, kecuali G0. Ki-67 tampak pada fase G1, meningkat perlahan di fase S,

G2, dan berlanjut terekspresi melalui fase M dan akhirnya menurun lalu

menghilang. Waktu paruh penanda ini dapat dideteksi hanya 1,5 jam (Nurhan et

al., 2001; Nguyen et al., 2003; Faur et al., 2015).

Penelitian ini mendapatkan hasil ekspresi Ki-67 pada neoplasma kelenjar

liur yang jinak dengan rerata 3,13%±4,98% dengan rentang indeks proliferasi 0%

- 20% dan yang ganas 33,73%±14,61% dengan rentang indeks proliferasi 8% -

50%. Rerata ekspresi Ki-67 pada neoplasma kelenjar liur yang ganas lebih tinggi

dibanding ekspresi Ki-67 pada neoplasma kelenjar liur yang jinak. Hasil uji

analisis menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna (p<0,05) untuk ekspresi

Ki-67 pada neoplasma kelenjar liur jinak dan ganas. Hasil ini sesuai dg penelitian

yang dilakukan Vargas yang menyebutkan ekspresi Ki-67 pada neoplasma

kelenjar liur jinak lebih rendah (rentang 0,54 - 7,24%, rerata 2,81±1,92%)

dibanding ekpresinya pada neoplasma ganas (AdCC: rentang 10,85 – 81,14%,

rerata 28,15±19,28%; MEC: rentang 1,62 – 13,94%, rerata 5,21±4,47%; ACC:

rentang 0,96 – 10,10%, rerata 5,15±3,33%), juga sesuai dengan penelitian

Shigeishi yang rerata neoplasma ganas lebih tinggi (12,8±3,86) dibanding pada

neoplasma jinak, sebesar 4,68±1,67 (Vargas et al., 2007; Shigeishi et al., 2006).

Ashkavandi menyebutkan ekspresi Ki-67 pada PA yang merupakan

neoplasma kelenjar liur jinak memiliki rentang 0 – 15%. MEC dan AdCC yang

merupakan neoplasma ganas berturut-turut memiliki rentang 1 – 50% dan 1 –

40% (Ashkavandi et al., 2013). Penelitian lain menyebutkan rentang indeks



proliferasi untuk neoplasma jinak sebesar 0,5 - 6% dan untuk neoplasma ganas

sebesar 3,6 – 50% (Faur et al., 2015). Tadbir dan rekan-rekannya yang juga

meneliti ekspresi Ki-67 pada neoplasma kelenjar liur menunjukkan ekspresi Ki-67

pada pleomorphic adenoma memiliki rerata sebesar 0,78±0,2 dan pada neoplasma

ganas yang diwakili oleh MEC dan ACC memiliki rerata sebesar 10,74±10,2

(Tadbir et al., 2012).

Ki-67, suatu protein inti, berhubungan dengan proliferasi sel dan

berhubungan dengan transkripsi ribosomal RNA (Bullwinkel et al., 2006).

Molekul rRNA adalah kunci pengatur produksi ribosome dan menentukan potensi

pertumbuhan sel dan proliferasi. Partisipasi Ki-67 dalam sintesis rRNA

menunjukkan peranan fungsi dalam pengaturan biosintesis dalam proliferasi sel.

Inaktivasi Ki-67 memicu inhibisi sintesis rRNA (Rahmanzadeh et al., 2007).

Pernyataan tersebut menunjukkan penelitian ini konsisten dengan penelitian-

penelitian sebelumnya bahwa semakin tinggi sel yang mengekspresikan Ki-67,

semakin tinggi proliferasi sel.

Nilai cut-off indeks proliferasi Ki-67 dapat digunakan untuk menentukan

apakah suatu neoplasma jinak atau ganas. Penelitian ini mendapatkan nilai cut-off

indeks proliferasi Ki-67 untuk menjadi neoplasma kelenjar liur yang ganas adalah

sebesar 6,50%. Ini berarti bila indeks proliferasi Ki-67 di bawah nilai tersebut

termasuk dalam kategori neoplasma kelenjar liur jinak, namun bila didapatkan

indeks proliferasi Ki-67 di atas atau sama dengan nilai tersebut maka termasuk

suatu neoplasma kelenjar liur yang ganas. Penelitian ini sesuai dengan yang

dilakukan Suzzi (2005) dan rekan-rekan menyebutkan nilai cut-off ekspresi Ki-67



pada neoplasma kelenjar liur adalah 5%, sesuai juga dengan nilai cut-off yang

digunakan pada penelitian Faur (2015). Ada juga penelitian dengan nilai cut-off

yang lebih tinggi, yaitu 10% (Norberg et al., 2000; Hellquist et al., 1997).

Satu sampel (6,7%) PA menunjukkan proliferasi yang tinggi, yaitu 15%,

melebihi nilai cut-off ekspresi Ki-67 untuk neoplasma jinak kelenjar liur. Hasil

tersebut sama dengan penelitian yang dilakukan oleh Horii dan rekan-rekannya.

Mereka menduga proliferasi yang tinggi pada PA menunjukkan adanya potensi

biologik pada neoplasma tersebut untuk menjadi ganas yang dapat berupa

kekambuhan neoplasma atau transformasi keganasan (Horri et al., 1998).

Penelitian lain menyimpulkan proliferasi sel yang meningkat pada PA yang

mengalami kekambuhan selain berhubungan dengan subtipe histologik juga

berhubungan dengan ukuran nodul jaringan neoplasma (Stennert et al., 2004).

Sampel PA dengan ekspresi Ki-67 yang tinggi pada penelitian ini dapat dimaknai

sebagai PA tersebut memiliki potensi kekambuhan atau transformasi menjadi

ganas.

Pada sebagian besar kasus, neoplasma jinak dapat dibedakan dengan pasti

dari neoplasma ganas berdasarkan morfologi. Suatu neoplasma terkadang sulit

didiagnosis. Secara morfologik tertentu menggambarkan suatu lesi jinak,

sementara secara genotip mengarah pada kemungkinan keganasan. Pada akhirnya

diagnosis morfologi tidak dapat dengan pasti memprediksi perilaku biologik atau

perjalanan penyakit neoplasma. Prediksi ini dipersulit oleh perbedaan yang nyata

antara gambaran morfologi tumor dan perilakunya. Secara morfologik terlihat

jinak namun dapat menutupi genotipnya yang sudah berubah ke arah keganasan



(Stricker dan Kumar, 2010). Penggunaan nilai cut-off Ki-67 dapat membantu

untuk mendukung suatu diagnosis disebut sebagai neoplasma jinak atau ganas.

6.4 Hubungan Ekspresi Cdk6 dengan Ekspresi Ki-67 pada Neoplasma

Kelenjar Liur

Salah satu tujuan penelitian ini adalah mencari korelasi ekspresi Cdk6

dengan ekspresi Ki-67 pada neoplasma kelenjar liur dan hasilnya adalah korelasi

yang signifikan yang berarti bahwa jika ekspresi Cdk6 meningkat maka ekspresi

Ki-67 juga akan meningkat, sebaliknya jika ekspresi Cdk6 menurun, maka

ekspresi Ki-67 juga akan menurun.

Siklus sel dan proliferasi sel dikontrol oleh Cyclin, Cdk dan Cdk-inhibitor

(Murray, 2004). Perubahan berbagai komponen mekanisme pengatur siklus sel

yang mengontrol perkembangan sel dari status diam lalu bergerak memberikan

kontribusi untuk pengembangan berbagai jenis kanker pada manusia (Santamaria

dan Ortega, 2006). Cdk6 bekerjasama dengan Cyclin D mendorong

perkembangan siklus sel dari G1 ke fase S melalui fosforilasi dan inaktivasi

berikutnya dari pRb 1. Peningkatan aktivitas Cdk6, menimbulkan pengurangan

tingkat Rb hipofosforilasi aktif yang meningkatkan proliferasi, pemendekan fase

G1 dan pengurangan serum yang dibutuhkan untuk aktivitas fase S. Ekspresi

Cdk6 yang menyimpang menunjukkan keterlibatan Cdk6 dalam kanker

(Meyerson dan Harlow, 1994; Khleif et al., 1996).

Ki-67 biasa digunakan sebagai penanda proliferasi. Selama interfase,

protein Ki-67 secara spesifik dalam inti sel, dimana dalam mitosis kebanyakan



protein diangkut pada permukaan kromosom. Protein Ki-67 ini berada dalam

seluruh fase siklus sel yang aktif (G1, S, G2 dan mitosis) namun tidak ditemukan

dalam sel yang sedang beristirahat (G0) (Scholzen et al., 2000).

Tingkat proliferasi terdiri dari dua parameter: fraksi pertumbuhan (dinilai

oleh Ki-67) dan waktu yang dibutuhkan untuk sel untuk menyelesaikan siklus sel

(tidak dapat diakses oleh Ki-67). Dengan demikian, suatu neoplasma yang

sebagian besar selnya berada dalam siklus sel, akan membutuhkan waktu yang

lama untuk menyelesaikan siklus tersebut dan akan menunjukkan ekspresi positif

yang luas untuk Ki-67, namun tidak memiliki tingkat proliferasi yang cukup

tinggi. Sebaliknya, suatu neoplasma yang hanya sebagian kecil selnya berada

dalam siklus sel, akan memiliki waktu siklus yang sangat pendek dan akan

memiliki tingkat proliferasi lebih tinggi, namun hanya sedikit sel menunjukkan

ekspresi Ki-67 yang positif (Brown dan Gatter, 1990).

Mengingat Cdk6 maupun Ki-67 berperan dalam proliferasi sel dan

keduanya berada dalam siklus sel, dapat diartikan keduanya memiliki hubungan

meski melalui jalur yang berbeda. Jika Cdk6 meningkat, Ki-67 juga meningkat

dan sebaliknya bila Cdk6 menurun maka Ki-67 juga akan menurun.



BAB 7

KESIMPULAN DAN SARAN

7.1 Kesimpulan

1. Ekspresi Cdk6 rendah pada neoplasma kelenjar liur jinak dan meningkat

pada neoplasma kelenjar liur ganas.

2. Ekspresi Ki-67 rendah pada neoplasma kelenjar liur jinak dan meningkat

pada neoplasma kelenjar liur ganas.

3. Terdapat korelasi positif antara ekspresi Cdk6 dan Ki-67 pada neoplasma

kelenjar liur jinak dan ganas.

7.2 Saran

1. Penggunakan nilai cut-off Ki-67 pada penelitian ini dapat dipertimbangkan

untuk membantu menegakkan diagnosis suatu neoplasma jinak atau ganas

bila dengan pemeriksaan histopatologi rutin sulit ditentukan.

2. Perlu dilakukan penelitian dengan sampel yang meliputi masing-masing

subtipe neoplasma kelenjar liur

3. Perlu dilakukan penelitian yang mengkaitkan Cdk6 dan Ki-67 dengan

faktor prognosis penderita.



DAFTAR PUSTAKA

Ashkavandi, Z.J., Najvani, A.D., Tadbir, A.A., Pardis, S., Ranjbar, M.A., Ashraf, M.J., 2013. MCM3 as a novel diagnostic marker in benign and malignant salivary gland tumors. Asian Pasific J Cancer Prev, 14(6), pp.3479-82.

Barnes, L., Eveson, J.W., Reichart, P., Sidransy, D., eds., 2005. World Health Organization Classification of Tumours. Pathology and Genetics of Head and Neck Tumours. Lyon: IARC Press.

Brown, D.C. and Gatter, K.C., 1990. Monoclonal antibody Ki-67: its use in histopathology. Histopathology,17, pp.489-503.

Brown, D.C. and Gatter, K.C., 2002. Ki-67 protein: the immaculate deception? Histopathol, 40, pp.2-11.

Bullwinkel, J., Baron-Luhr, B., Ludemann, A., Wohlenberg, C., Gerdes, J., Scholzen, T., 2006. Ki-67 protein is associated with ribosomal RNA transcription in quiscent and proliferating cells. J Cell Physiol,206, pp.624-35.

Cheuk, W. and Chan, J.K.C., 2007. Salivary gland tumor. In: C.D.M. Fletcher, ed. 2007. Diagnostic Histopathology of Tumors. Philadelphia: Elsevier. Ch.7.

Dhulipala, V.C., Welshons, W.V., Reddy, C.S., 2006. Cell cycle proteins in normal and chemically induced abnormal secondary palate development: a review. Human&Experimental Toxicology, 25, pp.675-82.

Ericson, K.K., Krull, D., Slomiany, P., Grossel, M.J., 2003. Expression of cyclin-dependent kinase 6, but no cyclin-dependent kinase 4, alters morphology of cultured mouse astrocytes. Mol Cancer Res, 1, pp.654-64.

Faur, A.C., Sas, I., Motoc, A.G.M., Cornianu, M., Zamfir, C.L., Lazar, D.C., et al., 2015. Ki-67 and p53 immunostaining assessment of proliferative activity in salivary tumors. Rom J Morphol Embryol, 56(4), pp.1429-39.

Gerdes, J., 1990. Ki-67 and other proliferation markers useful for immunohistological diagnostic and prognostic evaluations in human malignancies. Semin Cancer Biol, 1(3), pp.199-206.

Grossel, M.J. and Hinds, P.W., 2006. From cell cycle to differentiation: an expanding role for cdk6. Cell Cycle, 5(3), pp.266-70.

Grossel, M.J., Baker, G.L., Hinds, P.W., 1999. Cdk6 can shorten G(1) phase dependent upon the N terminal INK4 interaction domain. J Biol Chem, 274, pp.29960-67.



Horri, A., Yoshida, J., Sakai, M., Okamoto, S., Kubo, T., 1998. Flow cytometric analysis of DNA content and Ki-67-positive fractions in the diagnosis of salivary gland tumors. Eur Arch Otorhinolaryngol, 255, pp.265-68.

Hellquist, H.B., Sundelin, K., Di Bacco, A., Tytor, M., Manzotti, M., Viale, G.,1997. Tumor growth fraction and apoptosis in salivary gland acinic cell carcinomas. Prognostic implications of Ki-67 and bcl-2 expression and of in situ end labelling (TUNEL). J Pathol, 181(3), pp.323-29.

Hollstein, M., Sidransky, D., Volgestein, B., Harris, C., 1991. P53 mutations in human cancer. Science, 253, pp.49-53.

Howe To,V.S., Chan, J.Y.W., Tsang, R.K.Y., Wei, W.I, 2012. Review of salivary gland neoplasms. ISRN Otolaryngology, 6 pages.

Huang, X., Di Liberto, M., Jayabalan, D., Liang, J., Ely, S., Bretz, J., et al., 2012. Prolonged early G1 arrest by selective CDK4/CDK6 inhibition sensitizes myeloma cells to cytotoxic killing through cell cycle-coupled loss of IRF4. Blood, 120(5), pp.1095-106.

Khleif, S.N., DeGregori, J., Yee, C.L., Otterson, G.A., Kaye, F.J., Nevin, J.R., Howley, P.M., 1996. Inhibition of cyclin D-cdk4/cdk6 activity is associated with an E2F-mediated induction of cyclin kinase inhibitor activity. Proc.Natl.Acad.Sci.USA, Cell Biology, 93, pp.4350-54.

Kohrt, D.M., Crary, J., Gocheva, V., Hinds, P.W., Grossel, M.J., 2009. Distinct subcellular distribution of cyclin dependent kinase 6. Cell Cycle, 8, pp.2837-43.

Kwon, T.K., Buchholz, M.A., Gabrielson, E.W., Nordin, A.A., 1995. A novel cytoplasmic substrate for cdk4 and cdk6 in normal and malignant epithelial derived cells. Oncogene, 11, pp.2077-83.

Li, R., Heydon, K., Hammond, M.E., Grignon, D.J., Roach III, M., Wolkov, H.B., et al., 2004. Ki-67 staining index predict distant metastasis and survival in locally advanced prostate cancer treated with radiotherapy: An analysis of patient in radiation therapy oncology group protocol 86-10. Clin Cancer Res, 10, pp.4118-24.

Liu, P., Sun, Y.L., Du, J., Hou, X.S., Meng, H., 2012. CD105/Ki67 coexpression correlates with tumor progression and poor prognosis in epithelial ovarian cancer. Int J Gynecol Cancer, 22, pp.586-92.

Macluskey, M., Ogden, G.R., Green, M., Chisholm, D.M., Schor, L., Schor, A.M., 1999. The association between epithelial proliferation and disease progression in the oral mucosa. Oral Oncology, 35(4), pp.409-14.



Mahony, D., Parry, D.A., Lees, E., 1998. Active cdk6 complexes are predominantly nuclear and represent only a minority of the cdk6 in T cells. Oncogene, 16, pp.603-11.

Malumbres, M. and Barbacid, M., 2005. Mammalian cyclin-dependent kinases. Trends Biochem.Sci., 30, pp.630-41.

Meyerson, M., and Harlow, E., 1994. Identification of G1 kinase activity for cdk6, a novel cyclin D partner. Mol Cell Biol, 14, pp.2077-86.

Mills, S.E., 2010. Head and neck: Salivary gland. In: Stenberg’s Diagnostic Surgical Pathology. Philadelphia: Lippincott Williams & Wilkins. Ch.20.

Morgan, D.O., 2007. The cell cycle: principles of control. London: New Science Press.

Murray, A.W., 2004. Recycling the cell cycle: cyclins revisited. Cell, 116, pp.221-34.

Nagao, T., Sato, E., Inoue, R., Oshiro, H., Takahashi, R.H, et al., 2012. Immunohistochemical analysis of salivary gland tumors: Application for surgical pathology practice. Acta Histochem. Cytochem, 45(5): 269-282.

Nagasawa, M., Melamed, I., Kupfer, A., Gelfand, E., Lucas, J., 1997. Rapid nuclear translocation and increased activity of cyclin-dependent kinase 6 after T cell activation. J Immunol, 158, pp.5146-54.

Nagasawa, M., Gelfand, E.W., and Lucas, J.J., 2001. Accumulation of high levels of the p53 and p130 growth-suppressing proteins in cell lines stably over-expressing cyclin-dependent kinase 6 (cdk6). Oncogene, 20(23), pp.2889-99.

Norberg-Spaak, L., Dardick, I., Leidin, T., 2000. Adenoid cyctic carcinoma:use of cell proliferation, BCL-2 expression, histologic grade and clinical stage as predictors of clinical outcome. Head and Neck, 22(5), pp.489-97.

Nurhan, G., Nil, C., Fatih, C., 2012. Ki-67 and MCM-2 in dental follicle and odontogenic cysts: the effect of inflammation on proliferative markers. Sci World J, 8 pages.

Ogasawara, T., Kawaguchi, H., Jinno, S., Hoshi, K., Itaka, K., Takato, T., et al., 2004. Bone morphogenetic protein 2-induced osteoblast differentiation requires NF-kappaB-mediated downregulation of cyclin dependent kinase 6 (cdk6). J Bone Miner Res, 19, pp.1128-36.

Pardis, S., Tadbir, A.A., Ashkavandi, Z.J., Najvani, A.D., Ashraf, M.J., Ranjbaran, H., 2012. Expression of cdk6 in salivary gland tumors. J Med Sci, 12(6), pp.193-197.



Pich, A., Chiusa, L., Navone, R., 2004. Prognostic relevance of cell proliferation in head and neck tumors. Ann Oncol, 15, pp.1319-29.

Rahmanzadeh, R., Huttmann, G., Gerdes, J., Scholzen, T., 2007. Chromophore-assisted light invactiation of pKi-67 leads to inhibition of ribosomal RNA synthesis. Cell Prolif, 40, pp.422-30.

Rahniayu, A. dan Fauziah, D., 2008. Diagnostic accuracy of fine-needle aspiration cytology in major salivary gland lesions: telaah retrospektif. Universitas Airlangga.

Sangeetha, N., Palaniaapan, V., Hamavathy, N., Subathra, K., 2014. Histo-pathological analysis of salivary gland lesions with ki-67 immunoprofile. RJPBCS, 5(1), pp.993-1004.

Santamaria, D. and Ortega, S., 2006. Cyclins and cdks in development and cancer: lessons from genetically modified mice. Front Biosci, 11, pp.1164-88.

Satyanarayana, A. and Kaldis, P., 2009. Mammalian cell-cycle regulation: several CDKs, numerous cyclins and diverse compensatory mechanisms. Oncogene, 28, pp.2925-39.

Scalzo, D.A, Kallakury, B.V., Gaddipati, R.V., et al., 1998. Cell proliferation rate by MIB-1 immunohistochemistry predicts postradiation recurrence in prostatic adenocarcinomas. Am J ClinPathol, 109, pp.163-8.

Scholzen, T. and Gerdes, J., 2000. The Ki-67 protein: from the known and the unknown. J Cell Physiol, 182, pp.311-22.

Sherr, C.J. and Roberts, J.M., 1999. CDK inhibitor: positive and negative regulators of G1 phase progression. Gene Dev,13(12), pp.1501-12.

Shigeishi, H., Yonedo, S., Taki, M., Nobumori, T., Ohta, K., Higashikawa, K., et al., 2006. Correlation of human bub1 expression with tumor-proliferating activity in salivary gland tumors. Oncology Reports, 15, pp.933-38.

Slomiany, P., Baker, T., Elliot, E.R., Grossel, M.J., 2006. Changes in motility, gene expression and actin dynamic: Cdk6-induced cytoskeletal changes associated with differentiation in mouse astrocytes. Journal of Cellular Biochemistry, 99, pp.635-46.

Slootweg, P.J., 1995. P53 protein and Ki-67 reactivity in epithelial odontogenic lesions. An immunohistochemical study. Journal of Oral Pathology and Medicine, 24(9), pp.393-7.

Stennert, E., Wittekindt, C., Klussmann, J.P., Arnold, G., Guntinas-Lichius, O., 2004. Recurrent pleomorphic adenoma of the parotid gland: A prospective



histopathological and immunohistochemical study. Laryngoscope, 114, pp.158-163.

Stricker, T.P., Kumar, V., 2010. Neoplasia. In: V, Kumar, A.K. Abbas, N. Fausto, J.C. Aster, eds. 2010. Robbins and Cotran Pathologic Basis of Disease. Philadelphia: Saunders Elsevier. Ch.7.

Suzzi, M.V., Alessi, A., Bertarelli, C., Cancellieri, A., Procaccio, L., Dall’olio. D., 2005. Prognostic relevance of cell proliferation in major salivary gland carcinomas. Acta Otorhinolaryngol Ital, 25, pp.161-68.

Tadbir, A.A., Pardis, S., Ashkavandi, Z.J., Najvani, A.D., Ashraf, M.J., Taheri, A., et al., 2013. Expression of ki-67 and cd105 as proliferation and angiogenesis markers in salivary gland tumors. Asian Pasific J Cancer Prev,13(10), pp.5155-59.

Van Diest, P.J., vander Wall, E., Baak, J.P., 2004. Prognostic value of proliferation in invasive breast cancer: a review. J Clin Pathol, 57, pp.675-81.

Vargas, P.A., Cheng, Y., Barrett, A.W., Craig, G.T., Speight, P.M., 2008. Expression of mcm-2, ki-67 and geminin in benign and malignant salivary gland tumours. J Oral Pathol Med, 37, pp.309-18.

Wang, C., Li, Z., Fu, M., Bouras, T., Pestell, R.G., 2004. Signal transduction mediated by cyclin D1: from mitogens to cell proliferation: a molecular target with therapeutic potential. Cancer Treat Res, 119, pp.217-37.

Wang, G., Zheng, L., Yu, Z., Liao, G., Xu, R., Zhao, Z., et al., 2012. Increased cyclin-dependent kinase 6 expression in bladder cancer. Oncology Letter2, 4, pp.43-46.

Zarbo, R..J., 2002. Salivary gland neoplasia: A review for the practising pathologist. The United States and Canadian Academy of Pathology, Inc, 15(3), pp.298-323.



Lampiran 1

LAMPIRAN HASIL ANALISIS

Crosstabs

Jenis kelamin * Klp Crosstabulation

Klp Total jinak ganas

jenis kelamin laki-laki Count 5 6 11

% within Klp 33.3% 40.0% 36.7%

perempuan Count 10 9 19 % within Klp 66.7% 60.0% 63.3%

Total Count 15 15 30 % within Klp 100.0% 100.0% 100.0%

Chi-Square Tests Value df Asymp. Sig.

(2-sided) Exact Sig. (2-sided)

Exact Sig. (1-sided)

Pearson Chi-Square .144a 1 .705 Continuity Correctionb .000 1 1.000 Likelihood Ratio .144 1 .705 Fisher's Exact Test 1.000 .500 Linear-by-Linear Association

.139 1 .710

N of Valid Cases 30 a. 0 cells (0.0%) have expected count less than 5. The minimum expected count is 5.50. b. Computed only for a 2x2 table

Tests of Normality

Klp Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk Statistic df Sig. Statistic df Sig.

Age jinak .114 15 .200* .967 15 .809 ganas .208 15 .080 .896 15 .082

*. This is a lower bound of the true significance. a. Lilliefors Significance Correction



Test of Normality

Klp Kolmogorov-Smirnova Shapiro-Wilk Statistic df Sig. Statistic df Sig.

Ki67

jinak .287 15 .002 .569 15 .000 ganas .201 15 .107 .894 15 .076

a. Lilliefors Significance Correction T-Test

Group Statistics Klp N Mean Std. Deviation Std. Error Mean

Age jinak 15 47.93 15.691 4.051 ganas 15 46.53 13.522 3.491

Independent Samples Test Levene's Test

for Equality of Variances

t-test for Equality of Means

F Sig. t df Sig. (2-

tailed)

Mean Difference

Std. Error Difference

95% Confidence Interval of the

Difference Lower Upper

Age

Equal variances assumed

.833 .369 .262 28 .795 1.400 5.348 -9.555 12.355

Equal variances not assumed

.262 27.402 .795 1.400 5.348 -9.566 12.366

Mann-Whitney Test

Ranks Klp N Mean Rank Sum of Ranks

skor CDK6 jinak 15 10.60 159.00 ganas 15 20.40 306.00 Total 30

Ki67 jinak 15 8.20 123.00 ganas 15 22.80 342.00 Total 30



Test Statisticsa

skor CDK6 Ki67 Mann-Whitney U 39.000 3.000 Wilcoxon W 159.000 123.000 Z -3.171 -4.588 Asymp. Sig. (2-tailed) .002 .000 Exact Sig. [2*(1-tailed Sig.)] .002b .000b a. Grouping Variable: Klp b. Not corrected for ties.

Nonparametric Correlations

Correlations

skor CDK6 Ki67

Spearman's rho

skor CDK6 Correlation Coefficient 1.000 .519** Sig. (2-tailed) . .003 N 30 30

Ki67 Correlation Coefficient .519** 1.000 Sig. (2-tailed) .003 . N 30 30

**. Correlation is significant at the 0.01 level (2-tailed).

ROC Curve

Case Processing Summary

Klp Valid N (listwise) Positivea 15 Negative 15 Larger values of the test result variable(s) indicate stronger evidence for a positive actual state. a. The positive actual state is ganas.



Area Under the

Curve Test Result Variable(s): Ki67

Area .987

The test result variable(s): Ki67 has at least one tie between the positive actual state group and the negative actual state group. Statistics may be biased.



Coordinates of the Curve Test Result Variable(s): Ki67

Positive if Greater Than or

Equal Toa

Sensitivity 1 - Specificity

-1.00 1.000 1.000 .50 1.000 .867

1.50 1.000 .400 2.50 1.000 .333 4.00 1.000 .267 6.50 1.000 .067

10.50 .933 .067 16.50 .867 .067 22.50 .733 .000 27.50 .667 .000 35.00 .467 .000 45.00 .333 .000 51.00 .000 .000

The test result variable(s): Ki67 has at least one tie between the positive actual state group and the negative actual state group. a. The smallest cutoff value is the minimum observed test value minus 1, and the largest cutoff value is the maximum observed test value plus 1. All the other cutoff values are the averages of two consecutive ordered observed test values.

Kategori Ki67 * Klp Crosstabulation

Klp Total jinak ganas

Kategori Ki67 <6,50

Count 14 0 14 % within Klp 93.3% 0.0% 46.7%

6,50 ke atas Count 1 15 16 % within Klp 6.7% 100.0% 53.3%

Total Count 15 15 30 % within Klp 100.0% 100.0% 100.0%



Lampiran 2

TEKNIK PENGECATAN HEMATOKSILIN EOSIN CARA MEYER

- Sediaan dicelup dalam larutan xylol bak I selama 5 detik - Pindahkan dalam larutan xylol bak II selama 5 menit dan ke dalam larutan

xylol bak III selama 5 menit - Masukkan dalam alkohol 96% bak I dan II masing-masing 2 menit,

kemudian ke dalam alkohol 80% selama 2 menit - Cuci dalam air mengalir selama ± 10 menit - Masukkan dalam larutan meyer hematoksilin selama 15 menit - Cuci kembali dengan air mengalir selama 20 menit - Dimasukkan bak eosin 1% selama 1 menit - Dimasukkan dalam alkohol 80% selama 2 menit kemudian alkohol 96%

bak II dan III masing-masing 2 menit - Terakhir dimasukkan dalam xylol bak I, II, III masing-masing 5 menit - Ditutup dengan entelan dan cover glass

(Prosedur tetep pembuatan histopatologi Instalasi Patologi Anatomi RS dr. SOetomo, Surabaya, 1997)



Lampiran 3

TEKNIK PULASAN IMUNOHISTOKIMIA DENGAN ANTIBODI Cdk6

1. Jaringan blok parafin dipotong dengan ketebalan 3 mikron. Letakkan di atas object glass Poly L Lysin

2. Letakkan object glass di inkubator dengan suhu 600C, biarkan semalam 3. Lakukan deparafinisasi dengan xylol 1 selama 15 menit, masukkan dalam

xylol 2 selama 15 menit, selanjutnya masukkan dalam alkohol 96% selama 5 menit, pindahkan ke dalam alkohol 96% lain selama 5 menit lalu alkohol 80% selama 5 menit

4. Cuci dengan air kran mengalir, cuci dengan aquadest 5 menit 5. Inkubasi dengan H2O2 3% selama 30 menit 6. Cuci dengan air kran mengalir, cuci dengan aquadest selama 5 menit 7. Proses dalam decloaking chamber dengan larutan DIVA pada suhu 1100C

selama 30 menit 8. Dinginkan kurang lebih selama 30 menit di dalam chamber 9. Cuci PBS 2x selama 3-5 menit 10. Inkubasi degan blocking menggunakan backgorund sniper selama 30

menit 11. Tiriskan dan bersihkan tepi-tepinya 12. Inkubasi dengan primer antibodi cdk6, biarkan selama 1 jam 13. Cuci PBS 2x selama 3-5 menit 14. Inkubasi dengan antibodi sekunder atau trekkie universal link selama 30

menit 15. Cuci PBS 2x selama 3-5 menit 16. Inkubasi dengan trekkie tieravidin selama 30 menit 17. Cuci PBS 2x selama 3-5 menit 18. Teteskan cromogen DAB, biarkan selama 3-5 menit 19. Cuci air 20. Counterstain dengan Hematoxylin mayer 5 menit 21. Cuci air 5 menit 22. Celupkan ke alkohol bertingkat 70%, 96%, 100%, xylol 1 dan xylol 2

masing-masing selama 5 menit 23. Mounting



Lampiran 4

TEKNIK PULASAN IMUNOHISTOKIMIA DENGAN ANTIBODI Ki-67

1. Jaringan blok parafin dipotong dengan ketebalan 3 mikron. Letakkan di atas object glass Poly L Lysin

2. Letakkan object glass di inkubator dengan suhu 600C, biarkan semalam 3. Lakukan deparafinisasi dengan xylol 1 selama 15 menit, masukkan dalam

xylol 2 selama 15 menit, selanjutnya masukkan dalam alkohol 96% selama 5 menit, pindahkan ke dalam alkohol 96% lain selama 5 menit lalu alkohol 80% selama 5 menit

4. Cuci dengan air kran mengalir, cuci dengan aquadest 5 menit 5. Inkubasi dengan H2O2 3% selama 30 menit 6. Cuci dengan air kran mengalir, cuci dengan aquadest selama 5 menit 7. Proses dalam decloaking chamber dengan larutan DIVA pada suhu 1100C

selama 30 menit 8. Dinginkan kurang lebih selama 30 menit di dalam chamber 9. Cuci PBS 2x selama 3-5 menit 10. Inkubasi degan blocking menggunakan backgorund sniper selama 30

menit 11. Tiriskan dan bersihkan tepi-tepinya 12. Inkubasi dengan primer antibodi Ki-67, biarkan selama 1 jam 13. Cuci PBS 2x selama 3-5 menit 14. Inkubasi dengan antibodi sekunder atau trekkie universal link selama 30

menit 15. Cuci PBS 2x selama 3-5 menit 16. Inkubasi dengan trekkie tieravidin selama 30 menit 17. Cuci PBS 2x selama 3-5 menit 18. Teteskan cromogen DAB, biarkan selama 3-5 menit 19. Cuci air 20. Counterstain dengan Hematoxylin mayer 5 menit 21. Cuci air 5 menit 22. Celupkan ke alkohol bertingkat 70%, 96%, 100%, xylol 1 dan xylol 2

masing-masing selama 5 menit 23. Mounting



Lampiran 5



Lampiran 6



Lampiran 7

karya akhir analisis ekspresi cdk6 dan ki-67 pada …repository.unair.ac.id/55664/13/ppds. pa. 02-16...

Documents