Isolasi Senyawa Flavonoid dari Launaea procumbens Roxb. dengan Metode HPTLC

Flavonoid merupakan salah satu kelas yang paling karakteristik dari senyawa pada

tumbuhan tingkat tinggi. Tugas terpenting dalam paradigma ini adalah skrining senyawa

pada tanaman. Studi kromatografi senyawa berfungsi untuk menjadi sumber yang

sangat berguna dan dapat diandalkan dalam proses skrining senyawa bioaktif dalam

tanaman. Menurut informasi etnobotani, telah dilaporkan bahwa tanaman Launaea

procumbens memiliki potensi antikanker. Launaea procumbens adalah ramuan abadi

polimorfik dengan akar bantalan tunas (sehingga tanaman sering tumbuh dalam

kelompok), berbunga hingga 20-40 cm tinggi, dengan daun roset basal dan dengan (satu

sampai) beberapa , bukan minggu , procumbent untuk menaik - tegak, berdaun ke

berdaun berbunga batang , tanaman penuaan dengan kayu (dan sering bercabang) mulia;

rosulate inovasi berdaun di node yang lebih rendah sering batang hadir .

Oleh karena itu dalam penelitian ini, upaya telah dilakukan untuk mengidentifikasi

senyawa flavonoid Launaea dengan menggunakan TLC dan metode derivatisasi kimia.

Selanjutnya, isolasi senyawa yang sama dilakukan dengan metode HPTLC

menggunakan pelarut standar yaitu etil asetat : Asam formiat : asam asetat glasial : air

(12.1 : 1.3 : 1.1 : 2.8) . Konfirmasi isolasi dilakukan dengan spektroskopi inframerah

diikuti oleh Ultraviolet - Spektroskopi Visible.

BAHAN DAN METODE :

1. Pembuatan Simplisia

Daun dari tanaman dipisahkan , dicuci di bawah air keran mengalir dan dikeringkan

pada 45 ° C dalam oven. Daun kering kemudian dihomogenisasi menjadi bubuk

halus dan disimpan dalam wadah kedap udara untuk penyimpanan.

2. Proses Ekstraksi

Ekstrak dilakukan dengan cara maserasi menggunakan pelarut metanol. Proses

dilakukan dengan cara 10 gram serbuk simplisia dilarutkan dalam 100 ml pelarut.

Kemudian larutan dipanaskan pada suhu 55°C selama 5 menit dan selanjutnya

disegel dengan stopper kaca dan disimpan di rotary shaker selama 24 jam. Setelah

24 jam larutan dibuat menjadi ekstrak kental menggunakan rotavapor pada suhu

45°C untuk digunakan lebih lanjut.

3. Skrining Flavonoid

Proses awal dilakukan dengan uji kualitatif dasar flavonoid dengan cara 0,5 ml

ekstrak dicampur dengan 2 ml H2SO4 dan beberapa magnesium. Selanjutnya,

ekstrak tersebut dilakukan pengujian dengan metode kromatografi lapis tipis.

Pelarut yang digunakan adalah etil asetat, asam asetat glasial, asam formiat dan

aqua destilata dengan perbandingan ( 12.1 : 1.3 : 1.1 : 2.8 ) . Dalam prosedur

Skrining TLC, strip tipis 3 x 10 cm TLC Silica Plate (TLC Silica gel 60 F254,

Merck), diambil dan diresapi dengan penurunan ekstrak. Lempeng tersebut

kemudian dikeringkan dan disimpan untuk pembangunan di ruang kromatografi

yang mengandung 10 ml dari sistem pelarut disiapkan. Setelah didapatkan hasil

lempeng diperiksa di bawah Chamber UV pada 366 nm. Senyawa flavonoid yang

didapatkan dikonfirmasi oleh derivatisasi kimia, di mana lempeng dikembangkan

disemprot dengan larutan etanol 1 % dari AlCl3.

4. Preparatif HPTLC dari Ekstrak

Hasil yang didapat dari TLC dilanjutkan dengan meode HPTLC. Sebelum sampel

digunakan, 20 x 10 cm HPTLC plate ( HPTLC Silica gel 60 F254, Merck )

diaktifkan pada 110 ° C selama 30 menit. 2000μl ekstrak ini kemudian ditetapkan

sebagai band tunggal mm Panjang 180 pada pelat HPTLC diaktifkan. Lempeng

kemudian berkembang dengan 10 ml pelarut sistem standar, pelarut yang

digunakan adalah etil asetat, asam asetat glasial, asam formiat dan aqua destilata

dengan perbandingan ( 12.1 : 1.3 : 1.1 : 2.8 ). Selanjutnya hasil tersebut diperiksa di

bawah Chamber UV pada 366 nm .

5. Isolasi Senyawa Flavoind

Lempeng yang telah didapat kemudian dilihat hasilnya dan diisolasi. Lempeng itu

disimpan di Kamar UV pada 366 nm dan band flavonoid ditandai pada timbangan.

Area yang dipilih kemudian tergores keluar bersama dengan silika , dengan pisau

bedah yang tajam dan dikumpulkan dalam tabung eppendorf. Senyawa flavonoid

kemudian dielusi dari gel silika dengan metanol dan zat yang dikumpulkan. Zat

dipekatkan dengan penguapan metanol pada suhu kamar dan volume akhir

disimpan 1/3 yang asli dan ditandai sebagai FRC 1 [ 20-21 ] . FRC 1 kemudian co -

dikromatografi dengan ekstrak kasar untuk konfirmasi band pada Rf yang sama .

Isolasi Konstituante flavonoid dari Launaea proumbens Roxb . oleh preparatif

6. Konfirmasi Isolasi Flavonoid

Konfirmasi lebih lanjut dari isolasi flavonoid dilakukan dengan menganalisis FRC

1 dalam spektrofotometer UV -Visible untuk puncak tunggal dan Inframerah

HASIL DAN PEMBAHASAN

Proses Kromatografi Lapis Tipis ( TLC ) menegaskan kemungkinan adanya flavonoid

dengan mengungkapkan band neon yang pada derivatisasi lanjut memberikan

fluoresensi kuning pada gelombang panjang ( 360nm ) dan membentuk zona berwarna

kuning bila dipanaskan pada 100 ° C selama 5-10 menit.

Preparatif HPTLC Ekstrak : Ekstrak kasar mengungkapkan coklat , dua biru , band neon

biru terang cahaya dan pita cokelat muda di Rf = 0,15 , 0,20 , 0,45 , 0,33 dan 0,82 cm

masing-masing di bawah scanner TLC di 356nm. Yang jelas, band neon terang

dianggap kemungkinan flavonoid di Rf = 0,33 cm dan dipilih untuk isolasi . Isolasi

Senyawa flavonoid : Kromatografi penyaringan FRC 1 oleh HPTLC mengungkapkan

tajam , satu band yang neon , biru yang dinilai flavonoid hanya pada Rf = 0,33 cm di

bawah 366Nm.

Konfirmasi Isolasi Flavonoid : Spektrum perbandingan ekstrak kasar di TLC scanner

mengungkapkan penyerapan maksimum band pada panjang gelombang 365 - 370Nm,

maka analisis spektrum FRC 1 dilakukan dengan spektrofotometer UV - Vis dalam

kisaran 200 - 800nm . Fraksi , FRC 1 menunjukkan adanya puncak tunggal dalam

spektrum lengkap pada sekitar 370 - 380nm. Ini menyelesaikan perkiraan konfirmasi

sejati isolasi senyawa . Selanjutnya analisis spektrum FRC 1 di IR Spektrometri,

mengungkapkan band yang kuat dan diselesaikan dengan baik yang selanjutnya

menegaskan pemisahan. Juga kehadiran band di 3195.74cm - 1 menunjukkan

kemungkinan adanya alkena bebas (= CH) peregangan memiliki wilayah 3100-3010

wavenumbers (cm - 1) . Kehadiran band di 3423.47cm - 1 menunjukkan kemungkinan

adanya fenol atau alkohol ( - OH ) stretch memiliki wilayah 3650-3300 wavenumbers

(cm - 1). Kehadiran band di 1652.32cm - 1 menunjukkan kemungkinan adanya senyawa

aromatik ( C = C peregangan ) memiliki wilayah ~ 1600 wavenumbers (cm - 1) .

KESIMPULAN

Dari latihan prosedural di atas, dapat disimpulkan bahwa jelas tanaman Launaea

procumbens mengandung flavonoid.

TUGAS ISOLASI DAN STANDARISASI

BAHAN ALAM

Oleh :

ALFINA FAIZAH (1041311169)

RINDA AYU HERAWATI (1041311182)

SARI R. DJAHILAPE (1041311184)

PROGRAM STUDI S1 FARMASI

SEKOLAH TINGGI ILMU FARMASI SEMARANG

2013