isolation and identification fungus from nature

8/10/2019 Isolation and Identification Fungus from nature

1/4

LAPORAN PRAKTIKUM MIKOLOGI 2014 1

AbstrakBerdasarkan kenampakannya jamur dibedakan

menjadi 3 yaitu khamir (yeast), kapang (mold), dan cendawan

(mashroom). Jamur kecuali khamir pada keadaan biasa

mempunyai badan yang terdiri dari benang-benang hifa

(miselium) dan spora. Praktikum ini bertujuan untuk mengenal

berbagai macam alat yang biasa digunakan dalam bidang

mikologi, mempelajari cara-cara sterilisasi terhadap bahan dan

peralatan baik secara fisik maupun kimia, mempelajari medium

fungi, komposisi, serta cara membuatnya. Mempelajari cara-cara

pengisolasian fungi dari alam maupun dari substrat organik

tertentu hingga mendapatkan kultur murni, serta mengetahuicara mengidentifikasi fungi sehingga diketahui genus atau spesie

dari suatu biakan. Praktikum ini dilakukan dengan pertamadilakukan sterilisasi alat, pembuatan medium PDA, isolasi jamur

mikroskopis dan makroskopis, sli de culture, serta pengamatan

slide culture dan identifikasi fungi. Dari hasi identifikasi

ditemukan bahwa jamur mikroskopis yang dipakai adalah

Aspergi ll us niger sedangkan jamur makroskopis yang dipakai

berasal dari genus Collybia

Kata KunciAspergillus, Collybia, Fungi, Isolasi, Slide culture

I.

PENDAHULUAN

UNGI atau cendawan adalah organisme heterotrofik,

mereka memerlukan senyawa organik untuk nutrisinya. Bilamereka hidup dari benda organik mati yang terlarut, mereka

disebut saprofit. Saprofit menghancurkan sisa-sisa tumbuhan

dan hewan yang kompleks, menguraikannya menjadi zat-zat

kimia yang lebih sederhana, yang kemudian dikembalikan ke

dalam tanah , dan selanjutnya meningkatkan kesuburannya.

Jadi mereka dapat sangat menguntungkan bagi manusia.

Sebaliknya mereka juga dapat merugikan kita bilaman mereka

membusukkan kayu, makanan, dan bahan-bahan lain [1]

Cendawan saprofit juga penting dalam fermentasi

industry, misalnya pembuatan bir, minuman anggur, dan

produksi antibiotik seperti penisilin. Peragian adonan dan

pemasakkan beberapa keju juga bergantung pada kegiatan

cendawan [1]Berdasarkan kenampakannya jamur dibedakan menjadi 3

yaitu khamir (yeast), kapang (mold), dan cendawan

(mashroom). Jamur kecuali khamir pada keadaan biasa

mempunyai badan yang terdiri dari benang-benang hifa

(miselium) dan spora. Hifa tersebut ada yang bersekat-sekat

atau tidak, dan ada yang bercabang-cabang atau tidak. Hifa

yang bersekat ada yang berinti satu dan ada yang berinti dua

atau lebih [1]

Sampai sekarang fungi pada umumnya diklasifikasikan

menurut morfologi struktur reproduksi, serta siklus hidupnya.

Identifikasi dilakukan dengan cara mengamati sesuai dengan

kunci identifikasi. Prinsip yang digunakan dalam kunci

identifikasi adalah pemisahan fungi menurut perbedaan atau

persamaan dari yang paling kasar hingga taraf yang detail.

Praktikum ini bertujuan untuk mengenal berbagai macam

alat yang biasa digunakan dalam bidang mikologi,

mempelajari cara-cara sterilisasi terhadap bahan dan peralatan

baik secara fisik maupun kimia, mempelajari medium fungi,

komposisi, serta cara membuatnya. Mempelajari cara-cara

pengisolasian fungi dari alam maupun dari substrat organiktertentu hingga mendapatkan kultur murni, serta mengetahui

cara mengidentifikasi fungi sehingga diketahui genus atau

spesie dari suatu biakan.

II. METODOLOGI

A. Waktu dan Tempat Penelitian

Kegiatan praktikum mikologi ini dilakukan setiap hari Senin

tanggal 7 April 2014 hingga 19 Mei 2014 pada pukul 13.00

hingga 14.40 WIB di Laboratorium Mikologi Jurusan Biologi,

Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut

Teknologi Sepuluh Nopember Surabaya.

B.

Alat dan Bahan

Pada praktikum mikologi ini alat yang digunakan adalah

tabung reaksi, erlenmayer, autoclave, cawan petri, tusuk gigi,

aluminium foil, bunsen, tissue, penjepit kayu, jarum ose, jarum

tanam tajam, kompor listrik, panci, pisau, gelas ukur, kaca

objek, penutup kaca objek, neraca analitik, plastic wrap,

mikroskop compound.

Bahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah kentang

200 gram, agar, 15 gram, dektrose 20 gram, chloramphenicol,

aquades, alkohol 70%, jamur mikroskopis dari roti, jamur

makroskopis.

C.

Langkah Kerja

Sterilisasi Alat

Dibungkus semua alat gelas yang dibutuhkan dalam

praktikum mikologi ini dengan kertasyellow pages, dilakukan

sterilisasi panas lembab dengan menggunakan autoclave. Diisi

autoclave, dikumpulkan medium dan alat-alat yang telah

dibungkus dengan yellow pages, diletakkan ke dalam

keranjang autoclave alat-alat tersebut. Dimasukkan keranjang

autoclave ke dalam autoclave yang telah diisi dengan air.

Diberi rongga diantara alat-alat yang akan disterilkan untuk

pergerakan uap air dan udara. Ditutup autoclave dengan

Isolasi, Identifikasi Jamur Makroskopis dan

MikroskopisWindasari Putri Septarina (1511100023)

Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Teknologi Sepuluh

Nopember (ITS)

Jl. Arief Rahman Hakim, Surabaya 60111 Indonesia

e-mail: [email protected]

F


2/4


mencocokkan baut-baut yang ada di bagian atas tubuh

sterilisator dengan tempatnya yang terletak pada tutup. Dibuka

pengatur katup pengaman untuk mengeluarkan udara yang ada

di dalam autoclave. Dipasang sumber pemanas, ditutup katup

pengaman apabila uap air sudah keluar cukup banyak

(terdengar bunyi desis) dari katup pengaman. Dibaca skala

suhu dan tekanan hingga mencapai suhu 121C dengan

tekanan 15 lb. Ketika suhu mencapai 121C maka distabilkan

suhu selama 15 menit dengan cara mengatur sumber panas.Dimatikan autoclave saat sterilisasi sudah selesai. Ditunggu

hingga tekanan menjadi nol. Dibuka autoclave dan

dikeluarkan alat-alat dan medium yang telah disterilisasi.

Pembuatan Medium PDA

Dikupas dan dipotong kecil-kecil 200 gram kentang

kemudian direbus selama 30 menit dan diambil filtratnya. Pada

filtrat ditambahkan aquades hingga volumenya 1000 ml. Ke

dalam campuran ditambahkan dekstrose sebanyak 20 gram dan

agar sebanyak 15 gram ditunggu hingga semua larut. Setelah

semua agar larut medium dipindahkan ke dalam erlenmayer

dan dilakukan sterilisasi menggunakan autoclave. Setelah

steril dituangkan ke cawan petri yang juga telah disterilkan

secara aseptik, dalam cawan petri juga dituangkanchloramphenicol sebagai antimikrobia untuk mencegah

tumbuhnya mikroba.

Isolasi Jamur Mikroskopis

Disiapkan alat-alat untuk sterilisasi dan disiapkan jamur

mikroskopis yang akan di isolasi. Jamur yang akan di isolasi

diambil dari jamur roti yang berwarna hitam. Dibersihkan

tempat kerja, tangan dengan alkohol 70% agar steril.

Disemprot dengan alkohol dan dilewatkan dalam api bunsen

hingga membara jarum tanam tajam yang akan digunakan

untuk mengambil isolat jamur dari roti. Dipindahkan isolat

tersebut ke dalam cawan petri yang telah berisi medium yang

telah disterilisasi. Ditutup cawan petri dan dilapisi dengan

plastic wrap, ditunggu kurang lebih 3 hari. Untukpemeliharaan biakan murni dapat dilakukan pemeliharaan

berkala melalui pemindahan berkala pada medium agar miring

yang dilakukan secara aseptis sama seperti langkah yang telah

dijelaskan sebelumnya.

Isolasi Jamur Makroskopis

Disiapkan alat-alat untuk sterilisasi dan disiapkan jamur

makroskopis yang akan di isolasi. Jamur yang akan di isolasi

diambil dari halaman jurusan biologi ITS. Dibersihkan tempat

kerja, tangan dengan alkohol 70% agar steril. Disemprot

dengan alkohol dan dilewatkan dalam api bunsen pisau bedah

serta pinset. Disemprot dan dibersihkan dengan kapas bagian

stalk jamur makroskopis kemudian dibelah secara vertical

bagian stalk jamur tersebut dengan pisau bedah dan diambilsedikit bagiannya dengan menggunakan pinset kemudian

diletakkan ke dalam cawan petri yang telah berisi medium

yang telah disterilisasi. Ditutup cawan petri dan dilapisi

dengan plastic wrap, ditunggu kurang lebih 3-4 hari. Untuk

pemeliharaan biakan murni dapat dilakukan pemeliharaan

berkala melalui pemindahan berkala pada medium agar miring

yang dilakukan secara aseptis sama seperti langkah yang telah

dijelaskan sebelumnya.

Slide Culture

Dalam slide culture ini hanya dilakukan pada biakan

fungi dari fungi mikroskopis karena pada fungi makroskopis

tidak diperoleh biakan murni sehingga tidak dimungkinkan

untuk dilakukan slide culture. Disiapkan alat dan bahan yang

telah disterilisasi sebelumnya. Disiapkan cawan petri dan

diletakkan di dalamnya tusuk gigi yang telah dibungkus

dengan aluminium foil dan dibentuk seperti huruf U.

Kemudian diletakkan kaca objek diatas tusuk gigi yang

dibungkus aluminium foil tersebut dan diletakkan sepotongagar (6x6x2 mm) pada tengah kaca objek steril dan tiap sisinya

di inokulasi dengan fungi biakan murni hasil pemeliharan

berkala dari medium agar miring. Diletakkan penutup kaca

objek pada bagian atas agar yang telah di inokulasi dengan

fungi biakan murni mikroskopis. Dituangkan sedikit aquades

steril pada cawan petri untuk menjaga kelembaban cawan

petri, dilapisi dengan plastic wrap bagian mulut cawan petri

dan ditunggu kurang lebih 3-4 hari untuk melihat tegakan dan

identifikasi terhadap fungi tersebut.

Pengamatan Slide Culture dan Identifikasi Fungi

Dilakukan pengamatan pada hasil slide culture dengan

cara diamati secara langsung tegakan yang terbentuk pada agar

di kaca objek, dan dilakukan pengamatan dengan pewarnaanyaitu dengan pengambilan penutup kaca objek yang diletakkan

pada kaca objek baru yang telah ditetesi methylene blue. Serta

dilakukan pengamatan tanpa pewarnaan. Diamati dibawah

mikroskop compound dengan perbesaran yang sesuai.

III.

HASILDANPEMBAHASAN

3.1 Identifikasi Jamur Mikroskopis

Berdasarkan hasil pengamatan dan identifikasi jamur

mikroskopis yang digunakan dalam praktikum ini yaitu

Aspergillus niger. Hal tersebut dapat disimpulkan dengan

melihat secara makroskopis dan mikroskopis. Dari

pengamatan secara langsung atau makroskopis penampakanAspergillus niger tampak membentuk koloni berwarna hitam,

dan tekstur koloni tersebut tampak seperti bulu. Dari

pengamatan di bawah mikroskop compound tampak bahwa

konidia berwarna hitam, vesikel bulat besar dan tampak

terdapat fialid yang memenuhi permukaan vesikel tersebut.

Hal tersebut sesuai dengan literatur yang menyatakan bahwa

Aspergillus niger, merupakan salah satu spesies yang paling

umum dan mudah di identifikasi dari genus Aspergillus.

Aspergillus niger dapat tumbuh pada suhu 35C-37C

(optimum), 6C-8C (minimum), 45C-47C (maksimum).

Aspergillus niger, mempunyai koloni berwarna kehitaman

mencapai diameter 9 cm dalam 6 hari yang ditumbuhkan pada

media PDA, konidianya seringkali bersepta, konidia berbentukbulat hingga semibulat, berukuran 4,50-5,0 m. Kepala

konidia berwarna hitam, bulat, cenderung memisah [2]

Aspergillus niger mempunyai ciri-ciri yang khas yaitu

berupa benang tunggal disebut hifa, atau berupa kumpulan

benang-benang padat menjadi satu yang disebut miselium,

tidak mempunyai klorofil dan hidup heterotrop. Bersifat

aerobik dan berkembang biak secara vegetatif dan generatif

melalui pembelahan sel dan spora-spora yang dibentuk di

dalam askus atau kotak spora [3]. Kapang ini tumbuh dengan


3/4


baik pada suhu 30-35C. Kisaran pH yang dibutuhkan 2,8

sampai 8,8 dengan kelembaban 80-90 persen [4].

Gambar 1. Pengamatan langsung pada media agar perbesaran 100 kali

(a: konidia, b: konidiofor)

Gambar 2. Pengamatan tanpa pewarnaan perbesaran 400 kali (a: konidia,

yang tampak berantai)

Gambar 3. Pengamatan dengan pewarnaan perbesaran 400 kali (a:

konidiofor, b: vesikel, c: spora)

Berdasarkan gambar hasil pengamatan tersebut dapat

dipastikan bahwa fungi yang diambil dari substrat roti tersebut

adalah Aspergillus niger. Dilihat dari warna konidia yang

memiliki warna hitam, serta tampak fialid yang menempel

pada vesikelnya. Selain menurut deskripsi literatur yang telahmenyatakan ciri-ciri dari Aspergillus niger baik secara

makroskopis dan dilihat secara mikroskopis di bawah

mikroskop dengan perbesaran tertentu yang memiliki

kesamaan dengan isolat yang dipakai di bawah ini juga

terdapat foto literaturAspergillus niger.

Gambar 4. Struktur mikroskopis Aspergillus niger (a: konidia, b: fialid,

c: vesikel, d: konidiofor) perbesaran 100 kali [5]

3.2 Identifikasi Jamur Makroskopis

Berdasarkan hasil pengamatan dan identifikasi jamur

makroskopis yang digunakan dalam praktikum ini yaitu

Collybia sp. Habitatnya merupakan jenis jamur liar yang

banyak menempel pada batang kayu yang telah lapuk atau

mati. Ciri-cirinya berbentuk seperti payung, berwarna

kekuning-kuningan atau kecoklat-coklatan. Genus ini dapat

dibedakan karena memiliki spora putih, terdapat inrolled

margin pada cap spesimen yang masih muda. Memiliki gills[6]. Dalam keseharian jamur ini lebih dikenal dengan nama

jamur payung.

Gambar 5. Pengamatan morfologi jamur makroskopis

Berdasarkan hasil praktikum identifikasi jamur

makroskopis yang digunakan hanya dengan melihat

penampakan morfologinya saja dan tidak dilakukan dengan

pengamatan secara mikroskopis hal tersebut karena tidak

diperolehnya biakan murni dari jamur tersebut sehingga tidak

memungkinkannya identifikasi secara mikroskopis. Dari hasil

identifikasi tampak bahwa jamur yang dipakai memiliki ciri-

ciri yang sama dengan yang telah disebutkan di dalam literatur.

a

b

a

a

b

c


4/4


IV. KESIMPULAN

Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan dapat

disimpulkan bahwa alat-alat yang digunakan dalam praktikum

ini yaitu tabung reaksi, erlenmayer, autoclave, cawan petri,

tusuk gigi, aluminium foil, bunsen, tissue, penjepit kayu, jarum

ose, jarum tanam tajam, kompor listrik, panci, pisau, gelas

ukur, kaca objek, penutup kaca objek, neraca analitik,plastic

wrap, mikroskop compound. Sterilisasi yang digunakan dalam

praktikum ini yaitu teknik sterilisasi panas lembab denganmenggunakan autoclave. Medium yang digunakan dalam

praktikum ini yaitu PDA dengan penambahan chloramphenicol

sebagai zat antimikrobia untuk mencegah tumbuhnya

mikroorganisme selain fungi. Isolasi fungi diambil dari

substrat roti untuk jamur mikroskopis dan diambil di halam

Jurusan Biologi ITS untuk jamur makroskopis, dilakukan

isolasi secara aseptis untuk mendapatkan biakan murni dan

kemudian dilakukan slide culture dan identifikasi terhadap

jamur tersebut baik secara morfologi maupun secara

mikroskopis dengan pengamatan di bawah mikroskop.

V.

DAFTARPUSTAKA

[1]

Pelczar, M.J dan E.C.S Chan. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta: UI

Press (2008).

[2]

Soernartiningsih. Efektivitas beberapa Cendawan Antagonis dalam

Menghambat Perkembangan Cendawan Rhizoctonia solani pada Jagung

Secara Invitro. Prosiding Pekan Serealia Nasional (2010).

[3]

Raper, K.B., and D.I. Fennel. The Genus Aspergillus. Baltimore: The

William and Wilking Co (1977)

[4]

Ratledge, C. Biochemistry of Microbial Degradation. London: Kluwer

Academic Publishers (1994)

[5]

Natalia. Isolasi, Identifikasi, Patogenitas, dan Proses Kolonisasi

Cendawan. Bogor: IPB (2000)

[6]

C.M Christensen. Edible Mushrooms. USA: University of Minnesota

(1981)

isolation and identification fungus from nature

Documents