isolasi enzim

Download Isolasi Enzim

Post on 06-Feb-2018

222 views

Category:

Documents

0 download

Embed Size (px)

TRANSCRIPT

  • 7/21/2019 Isolasi Enzim

    1/24

    ISOLASI ENZIM

  • 7/21/2019 Isolasi Enzim

    2/24

    RUANG LINGKUP

    Preparasi Sampel

    Ekstraksi

    Fraksinasi

    Dialisis

    Kromatografi

    Elektroforesis

    Spektrofotometri

    1.

    2.

    3.

    4.

    5.

    6.

    7.

  • 7/21/2019 Isolasi Enzim

    3/24

    1. PREPARASI SAMPEL

    Preparasi Sampelisolat protein.

    tergantung pada sumber

    Sumber Enzim: Mikroorganisma

    Hewan

    Tumbuhan

  • 7/21/2019 Isolasi Enzim

    4/24

    2. EKSTRAKSI

    SentrifugasiDiferential

    Sel dihancurkan dengan

    homogenizer homogenatdi setrifugasi diferentialekstrak yg berat akan adadi dasar tabung

  • 7/21/2019 Isolasi Enzim

    5/24

    Enzim dapat dimurnikan berdasarkan sifat

    kelarutan, ukuran, muatan, dan afinitas enzim.

  • 7/21/2019 Isolasi Enzim

    6/24

    TEKNIK FILTRASI

  • 7/21/2019 Isolasi Enzim

    7/24

  • 7/21/2019 Isolasi Enzim

    8/24

    3. FRAKSINASI

    Kelarutan Enzim Fraksinasi Enzim

  • 7/21/2019 Isolasi Enzim

    9/24

    4. DIALISIS

    Saat awal dialisis Mencapai kesetimbangan

    Enzim dapat dipisahkan dari molekul yg kecil (garam amonium sulfat)dengan proses dialisis menggunakan membran semipermiabel ~selulosa membran

    Proses Dialisis:

    .................................

    .................................

    .................................

    ..................................

    ..................................

  • 7/21/2019 Isolasi Enzim

    10/24

    5. KROMATOGRAFI

    Gel Filtrasi berdasarkan ukuran molekul

    Kromatografi Penukar Anion/Kation

    berdasarkan muatan total enzimAfinitas Kromatografi berdasarkan

    afinitas (spesifikasi ikatan)

    HPLC berdasarkan ukuran molekul

  • 7/21/2019 Isolasi Enzim

    11/24

    GEL FILTRASI

    Polimer terhidrasi: dextran, agarosa, poliakrilamida Sephadex, Sepharose, Biogel ~ diamater 100 m (0,1 mm)

  • 7/21/2019 Isolasi Enzim

    12/24

    KROMATOGRAFI PENUKAR ANION/KATION

    Enzim bermuatan positif/negatif yang telah terikat pada resin -/+ dapatdielusi dengan meningkatkan konsentrasi NaCl yang akan berkompetisidengan Enzim untuk berikatan dengan muatan +/- dari resin.

  • 7/21/2019 Isolasi Enzim

    13/24

    AFINITAS

    KROMATOGRAFI

    Conconavalin A(Glikoprotein)mempunyai residuGlukosa yang akan

    berikatan dengan kolom.Penambahan larutanglukosa Conconavalin

    A akan terelusi.Pemurnian

  • 7/21/2019 Isolasi Enzim

    14/24

    H P L C

    1.Thyroglobulin (669 kd),

    2.Catalase (232 kd),

    3.Bovin serum albumin (674.Ovalbumin (43 kd),

    5.Ribonuklease (13,4 kd)

    kd)

  • 7/21/2019 Isolasi Enzim

    15/24

    Gel Elektroforesis

    SDS Gel Elektroforesis

    Isoelectric Focussing

    Two-Dimensional Electrophoresis

    1.

    2.

    3.

    4.

    6. ELEKTROFORESIS

  • 7/21/2019 Isolasi Enzim

    16/24

    GEL ELEKTROFORESIS

    Pemisahan enzim berdasarkan ukuran molekul semakinkecilukuran protein, semakin cepat laju enzim pada proses elektroforesis

  • 7/21/2019 Isolasi Enzim

    17/24

    Cross-linker

    PembentukanGel Akrilamida

  • 7/21/2019 Isolasi Enzim

    18/24

    SDS Gel Elektroforesis

    memutus interaksi non-kovalen pada enzim enzim

    bermigrasi berdasarkan massa

  • 7/21/2019 Isolasi Enzim

    19/24

    ISOELCTRIC FOCUSSING

    Pemisahan enzim berdasarkan muatan residuasam/basa dari asam amino

  • 7/21/2019 Isolasi Enzim

    20/24

    TWO DIMENSIONAL ELECTROFORESIS

    Enzim dipisahkan dengan SDS PAGE (terpisah berdasarkan ukuranmolekul), kemudian di lakukan IEF (pemisahan berdasarkan muatanasam/basa dari residu asam amino)

  • 7/21/2019 Isolasi Enzim

    21/24

    Elektroforesis Proses Pemurnian Enzim

    Efektifitas proses pemurnian terlihat dengan semakin murninyaEnzim yang diinginkan.

  • 7/21/2019 Isolasi Enzim

    22/24

    7. SPEKTROFOTOMETRI

    Spektrofotometri Massa MALDI-TOF

  • 7/21/2019 Isolasi Enzim

    23/24

    Spektrofotometri Massa MALDI-TOF: Insulin dan -Lactoglobulin

  • 7/21/2019 Isolasi Enzim

    24/24

    KUANTIFIKASI PROSES

    PEMURNIAN ENZIM

    ISOLASI/

    Total Protein

    Rendemen

    Aktivitas Enzim Aktivitas Spesifik

    Tingkat Kemurnian