hasil pengamatan dan pembahasan (bakteri)

7/25/2019 Hasil Pengamatan Dan Pembahasan (Bakteri)

1/12

BAB III

METODE KERJA

A. Pada praktikum isolasi dan identifikasi bakteri Stap!lo"o""us Sp. Pada

baan makanan dan minuman dari a#al praktikum mulai dari pembuatan

medium$ isolasi$ pen%e"atan %ram$ dan u&i biokimia dilakukan selama

beberapa ari mulai dari tan%%al '( September sampai () Oktober '*(+ di

laboratorium mikrobiolo%i STIKes Me%a Re,k! Makassar.

B. A-AT DA BA/A

(. Alat 0

a. Spiritus m. Ob&ek %elasb. Pipet tetes n. Korek api

". Mikroskop o. Ose bulat dan pan&an%

d. Tabun% reaksi p. 1elas ukur

e. Erleme!er 2. Plate3petridisk

f. Auto"la4e r. Rak tabun%

%. era"a Analitik s. Sendok Tanduk

. 1e%ep t. Botol Semprot

i. Pipet skala u. Batan% pen%aduk

&. /ot plate

k. Inkubator

l. 5oron%

'. Baan 0

a. Sampel 6air keran7

b. Media A 6Nutrient Agar7

". Media KIA 6Kinger Iron Agar7

d. Media SIM 6Sulfur Indol Motilit!7

e. Media MR 6Methyln Red)

f. Media 8P 6Voges Proskauer7

%. Media 9rea

. Media 5itrate

i. Media 1ula:%ula 61lukosa$ Manitol$ Sukrosa$ -aktosa7&. Rea%en kofak

k. -arutan KO/

l. Air ;u"sin

m. A2uades

n. Oil emersi

o. -u%ol

p. -arutan !dro%en peroksida

2. K%4 6kristal %entilen 4iolet7

r. Rea%en Metil Red

s. Rea%en


2/12

u. -arutan oksidase

5. 5ARA KERJA(. Men!iapkan alat dan baan !an% akan di %unakan. 9ntuk alat

di%unakan alat:alat !an% tela disterilisasikan.

'. Disetiap praktikum$ keadaan praktikan arus steril dan dilen%kapi

den%an APD

@. Disiapkan tabun% !an% berisi a2uades steril = ml 6diberi label (*:(:

(*:7$ dan sampel air keran.

. Dipipet sampel air keran seban!ak *$+ ml kedalam tabun% (*:(

+. Diomo%enkan sampel den%an a2uadest steril

>. Memipet larutan pada tabun% (*:(

seban!ak ( ml kedalam tabun% (*:'

$lalu diomo%enkan.

). Perlakuan !an% sama dilakukan pada tabun% (*:@dan (*:

. 9ntuk tabun% terakir 6(*:7 dipipet larutann!a seban!ak ( ml

kemudian dimasukkan kedalam media A

=. Memi&arkan ose lalu men%%ores larutan pada media !an% tela dipipet

tadi.

(*. Media !an% tela di%ores$ kemudian dimasukkan kedalam in"ubator

selama (C' &am dalam suu run%an.

((. Setela ari ke:( di amati koloni !an% tumbu pada media A('. Di lakukan pe#arnaan %ram untuk men%etaui &enis dan bentuk

bakteri apa !an% terdapat dalam sampel.

(@. Setela men%etaui &enis bakteri apa !an% terdapat pada sampel

kemudian dilakukan u&i katalase dan u&i oksidasi den%an "ara0

: Oksidasi 0 diambil koloni kemudian di%ores diatas preparat lalu

ditetesi den%an rea%en oksidase.

: Katalase 0 diambil koloni kemudian ditempelkan pada kertas

sarin% lalu ditetesi den%an rea%en !dro%en peroksida.

(. Setela itu$ dilakukan penanaman koloni pada media KIA$ 5itrate$

SIM$ 9rea$ MR8P$ dan media %ula:%ula 6%lukosa$ manitol$ sukrosa$

dan laktosa7

(+. Media !an% tela ditanami koloni$ kemudian di masukkan kedalam

in"ubator selama ( ari.

(>. Pada ari berikutn!a di amati perubaan !an% ter&adi pada semua

media tersebut.

(). Pada media KIA di lakukan pen%amatan perubaan #arna$ !aitu

kunin% pada slant kunin% pada butt berarti ,at !an% difermentasikan


3/12

adala -a"tosa3Su"rosa$ kemudian &ika slantn!a ber#arna mera dan

butt mera berarti ,at !an% difermentasikan adala %lukosa dan

terakir &ika slant dan buttn!a ber#arna mera berarti ,at !an%

difermentasikan !aitu %lukosa$ laktosa$ dan sukrosa

(. Pada media SIM dilakukan @ identifikasi !aitu Sulfur$ Indol$ Dan

motilit!. Jika terdapat %aris itam pada media berarti men%andun%

sulfur$ &ika ter&adi per%erakan koloni berarti positif 67 motilit!$

kemudian untuk identifikasi indol$ ditambakan larutan kofak dan &ika

terdapat "in"in mera berarti positif 67 indol.

(=. 9ntuk media "itrate dan urea$ &ika ber#arna mera muda berarti 67urea dan &ika media beruba #arna dari i&au men&adi biru berarti

positif 67 "itrate.

'*. Pada media MR8P$ dilakukan u&i men%%unakan rea%en. 9ntuk

identifikasi MR maka di tambakan rea%en met!l red$ &ika ber#arna

mera maka asil positif. Kemudian u&i 8P maka ditambakan larutan


4/12

BAB I8

/ASI- PE1AMATA DA PEMBA/ASA

A. 1AMBAR /ASI- PE1AMATA

Keteran%an 0

Setela didapatkan asil penanaman kami mendapatkan ' &enis koloni

!an% berbeda pada media A den%an sampel air keran !aitu ber#arna puti dan

kunin%. Dan setela dilakukan pen%amatan pada mikroskop didaptkan asil

ba#a kedua &enis koloni tersebut adala bakteri %ram ne%ati4e berbentuk basil.

B. TABE- PE1AMATA

1. Pertumbuhan bakteri di media NA

SAMPEL KOLONI I KOLONI II

Air Keran Mera Kunin%


5/12

2. Pewarnaan gram

SAMPEL BENTUK

KOLONI I KOLONI II

Air Keran Basillus Basillus

. U!i bi"kimia IM#I$

MEDIA HASIL WARNA KETERAN

GAN

KIA glukosa

Merah(slant)kuning(butt)

Alkali &acid

SIM

Sulfur -

Tdkberubah

Tidakmengandung sulfur

Indol -

Tdk

berubah

Tidak indol

Motility +Tidakberubah

Teradi!ergerakan

"#$A +

Merahmuda

Mengandung urea

M#%M# + Merah

% -Tdkberubah

'IT#AT$-

Tidakberubah

"A-"A

"K*SA +

Kuning Tidakterda!atgas

MAIT* -

Tdkberubah

S"K#*SA -

Tdkberubah

AKT*SA -

Tdkberubah


6/12

5. PEMBA/ASA

Media adala suatu baan atau susunan baan !an% terdiri dari

nutrisi atau ,at:,at makanan !an% di%unakan untuk menumbukan mikroba

6bakteri7. Media pertumbuan atau pembiakan diperlukan untuk

mempela&ari sifat bakteri untuk dapat men%adakan identifikasi$ determinasi$

atau diferensiasi &enis:&enis !an% ditemukan.

Prinsip isolasi bakteri adala memisakan suatu mikroba dari

mikroba lainn!a sein%%a diperole kultur murni.Proses isolasi ini men&adi

pentin% dalam mempela&ari identifikasi mikrobia$ u&i morfolo%i$ fisiolo%i$

dan serolo%i. Sedan%kan pen%u&ian sifat:sifat tersebut di alam terbuka

san%at mustaill untuk dilakukan.

Proses identifikasi bakteri dapat perupa pen%e"atan$ penanaman

pada media plate$ dan u&i bio kimia. Sala satu tu&uan pen%e"atan bakteri

untuk men%etaui bentuk morfolo%i bakteri namun pada pen%e"atan belum

bisa pastikan spesiesn!a karena spesies !an% berbeda bentuk morfolo%in!a

bisa sama. Penanaman pada media plate bertu&uan untuk melakukan isolasi

dan dari penanaman dapat diketaui bentuk koloni.

Pada praktikum bakteriolo%i II atau identifikasi Salmonella Sp. Kali

ini di%unkan media a dan BA dan air keran seba%ai sampel !an% akan

diidentifikasi ada tidakn!a Salmonella Sp. Setela diinkubasi pada suu @)

5 diperole asil pada media a ditumbui koloni !an% memiliki

morfolo%i berukuran ke"il$ ber#arna kunin% benin%$ dan berbentuk bulat$

sedan%kan sifatn!a adala tidak berlendir dan berbau men!en%at.

Sedan%kan pada media BA tidak ditumbui koloni karena media ini bersifat

memila bakteri enteri" %ram ne%ati4e !an% memfermentasi la"tose$ "r!stal

4iolet$ dan eutral red Bile Salt. amun pada koloni S. Aureus$ P.

Aeru%inosa$ dan Salmonella bila tumbu pada media ini tidak akan

ber#arna karena tidak mampu memfermentasi la"tose. Dalam praktikum

kali ini sampel keran !an% diperiksa bisa dikatakan tidak i%ienis atau tidak

seat untuk dikonsumsi karena dari asil pemeriksaan didapatkan

tumbun!a koloni kuman Salmonella Sp. Pada media a. Salmonella Sp.


7/12

Adala bakteri berbentuk batan% pada pen%e"atan %ram ber#arna mera

6 bakteri %ram ne%ati4e $ berukuran 'F : G *$>$ memiliki fla%el 6 ke"uali S.

1allinarum dan S pullorum 7$ dan tidak berspora . /abitat Salmonella Sp.

Adala pada saluran pen"ernaan 6 usus alus 7 manusia dan e#an. Suu

pertumbuan salmonella Sp. Iala @) 5 dan pada p/ >:. 6 Julius$ (==*7

Salmonella Sp. Bersifat aerob dan anaerob fakultatif. Salmonellosis adala

istila !an% di%unakan untuk menun&ukkan adan!a infeksi Salmonella Sp.

Manifestasi klinik salmonellosis pada manusia ada empat sindrom !aitu 0

(. 1astroentritis atau kera"unan makanan merupakan infeksi usus dan tidak

ditemukan toksin sebelumn!a$ ini disebabkan karena menelan makan !an%

men%andun% Salmonella Sp.

'. Demam t!poid !an% disebabkan ole Salmonella T!pi. Kuman masuk

melalui mulut dan masuk kelambun% untuk men"apai usus alus$ lalu

kekelen&ar %eta benin%.

@. Bakterimia 6 septikimia 7 dapat ditemukan pada demam t!poid dan

infeksi Salmonella non:t!pi. Adan!a Salmonella dalam dara beresiko

ter&an!a infeksi$ %e&ala !an% menon&ol adala panas.

. 5arier !an% asomatik adala semua indi4idu !an% terinfeksi Salmonella

Sp akan men%ekskresikan kuman dalam tin&a untuk &an%ka #aktu !an%

ber4ariasi.

Prosedur ker&a !an% pertama kali di lakukan !aitu men!iapkan alat

!an% akan akan di %unakan kemudian di sterilisasi den%an sterilisasi basa

men%%unakan auto"la4e den%an suu ('(o5 selama (+ menit. Kemudian

setela disterilisasi$ sampel dipipet seban!ak *$+ ml kedalam tabun% !an%

berisi a2uadest steril seban!ak = ml dan tela diberi label (*:( lalu

diome%enkan$ perlakuan !an% sama dilakukan pada tabun% selan&utn!a

sampai (*:. Kemudian di pipet ( ml larutan pada tabun% terakir dan

dipindakan pada media A den%an "ara pen%%oresan. -alu medium

tersebut dimasukkan kedalam in"ubator selama ( ari pada suu @) 5.

Kemun%kinan besar kita akan mendapatkan beberapa &enis koloni tumbu


8/12

dalam medium tersebut$ tetapi mun%kin &u%a kita memperole satu koloni

sa&a.

Satu ari kemudian diamati medium A tersebut dan didapatkan

asil koloni seban!ak ' &enis koloni !an% ber#arna mera dan kunin%

den%an bentuk koloni bulat besar.

-alu dilakukan pe#arnaan %ram pada masin%:masin% koloni$

Pen%e"atan 1ram adala suatu pe#arnaan diferensial !an%

men%elompokkan bakteri men&adi %ram positif dan %ram ne%atif ber%antun%

kepada kemampuan bakteri !an% bersan%kutan untuk menaan pe#arna

primer 6un%u kristal7 ketika men%alami perlakuan den%an baan pen%e"at.

-alu diamati pada mikroskop den%an pembesaran (**C$ dari asil

pen%amatan koloni tersebut diketaui ba#a bakteri !an% terdapat pada

sampel air keran merupakan bakteri ber%ram ne%ati4e dan berbentuk basil.

Halaupun bakteri !an%didapatkan tidak sesuai den%an bakteri !an% pada

a#aln!a in%in diidentifikasi !aitu salmonella sp$ namun kami tetap

melan&utkan ke u&i berikutn!a.

Pe#arnaan %ram dilakukan den%an "ara membuat preparat den%an

mensuspensikan koloni den%an A2uades steril !an% difiksasi diatas api

Bunsen setela itu dikerin%kan. Setela kerin%$ ditambakan Kristal %entian

4iolet sampai menutupi permukaaan selama ':@ menit dan "u"i air men%alir.

Ditambakan lu%ol diamkan selama ' menit "u"i la%i air men%alir.

Kemudian dekolorisasi den%an al"ool =>? selama ' menit dan "u"i air

men%alir. kemudian ditambakan la%i air fu"sin selama ( menit dan di"u"i

air men%alir. kerin%kan dan kemudian diamati diba#a mikroskop den%an

perbesaran *G dan (**G 6 tambakan oil emersi7. Proses identifikasi bakteri

dapat perupa pen%e"atan$ penanaman pada media plate$ dan u&i bio kimia.

Sala satu tu&uan pen%e"atan bakteri untuk men%etaui bentuk morfolo%i

bakteri namun pada pen%e"atan belum bisa pastikan spesiesn!a karena

spesies !an% berbeda bentuk morfolo%in!a bisa sama. Penanaman pada

media plate bertu&uan untuk melakukan isolasi dan dari penanaman dapat

diketaui bentuk koloni.


9/12

Setela diamati diba#a mikroskop$ didapatkan asil !an% ne%atif

!aitu berbentuk basil dan ber#arna mera. Setela itu dilan&utkan den%an u&i

biokimia !aitu u&i katalase$ oksidase$urea$ KIA$ "itrat$ SIM$ MR8P$ dan u&i

media %ula:%ula.

a. 9&i Katalase

9&i Katalase dilakukan didapatkan asil !aitu positif karena terdapat

%elembun%:%elembun% udara. karena adan!a peme"aan /'O'6idro%en

peroksida7 ole en,im katalase !an% diasilkan ole bakteri itu sendiri.

Komponen /'O'ini merupakan sala satu asil respirasi aerobik bakteri$

misaln!a S. aureus$ dimana asil respirasi tersebut &ustru dapat

men%ambat pertumbuan bakteri karena bersifat toksik ba%i bakteri itu

sendiri. Ole karena itu$ komponen ini arus dipe"a a%ar tidak bersifat

toksik la%i. Pada tes ini$ asil !an% didapatkan adala posiitif.

b. 9&i Oksidase

u&i oksidase !aitu den%an "ara diambil koloni !an% ber#arna

kunin% tua !an% kemudian dipindakan dikertas sarin% dan ditetesi larutan

oksidase seban!ak ( tetes. Setela ditetesi didapatkan asil !an% positif

karena memberikan asil !an% ber#arna itam.

". 9&i 9rea

9&i 9rea !aitu den%an "ara memasukan media kedalam 9rea

den%an "ara di%ores pada leren% media setela itu dimasukkan kedalam

in"ubator. Setela dikeluarkan dari inkubator didapatkkan asil positif$ al

ini dibuktikan den%an adan!a perubaan #arna men&adi mera muda.

amun pada media Kami$ belum sepenun!a ber#arna mera muda

karena #aktu inkubasi !an% masi kuran% atau searusn!a &am masa

inkubasi tapi kami an!a ' &am.

d. 9&i KIA

Kemudian setela dilakukan u&i urea dilan&utkan den%an 9&i KIA

!aitu den%an "ara dimasukan media kedalam KIA men%%unakan ose !an%


10/12

tela dipi&arkan diatas api Bunsen !an% kemudian di%ores dan

men%%unakan tenik penusukan didalam media. Pada media KIA$

didapatkan asil A"id Alkali. /al ini dibuktikan den%an terbentukn!a

#arna mera pada leren% tabun% 6slunt7 dan #arna kunin% pada dasar

tabun% 6butt7. Den%an adan!a asil seperti ini$ maka dikatakan ba#a

bakteri pada sampel dapat menfermentasikan %lukosa. Selain perubaan

tersebut$ identifikasi kemun%kinan !an% dapat ter&adi pada media KIA

!aitu adan!a %as$ "ara men%etauin!a !aitu&ika terliat ada %elembun%

pada media atau media seperti terpisa. Adapun identifikasi lain !aitu$ &ika

media KIA men%alami perubaan #arna men&adi itam berarti bakteri

tersebut men%andun% sulfur.

e. 9&i 5itrat

Setela itu dilan&utkan den%an u&i 5itrat$ den%an "ara dimasukan

media kedalam media 5itrat den%an "ara di%ores diatas permukaan media.

9&i Simmons Citrat A%ar di%unakan untuk meliat kemampuan

mikroor%anisme men%%unakan "itrat seba%ai satu:satun!a sumber karbon

dan ener%i. Media ini merupakan medium sintetik den%an A "itrat

seba%ai satu:satun!a sumber karbon$ /Aseba%ai sumber danBrom

hymol Blue seba%ai indikator p/. Pada u&i ini menun&ukkan reaksi

ne%ati4e. /al ini ditandai den%an tidak adan!a perubaan #arna media

dari i&au tetap i&au. Ini karena dasar dari medium tidak mampudiilan%kan sein%%a tidak ter&adi penin%katan p/ !an% nantin!a akan

menamba #arna media dari i&au men&adi biru bila keadaan men&adi

alkalin.

f. 9&i SIM 6sulfur Indol Motilit!7

9ntuk media SIM$ ada @ u&i !an% diidentifikasi$ !aitu Sulfur$ Indol

dan Motilit!. 9&i sulfur menun&ukkan asil ne%ati4e dikarenakan tidak

terbentuk %aris itam$ namun &ika asil positif maka akan terbentuk %aris


11/12

itam. 9&i indol dilakukan den%an menambakan beberapa tetes larutan

kofak$ &ika media men%alami pembentukan "in"in mera berarti asil

positif$ namun pada media kami tidak tebentuk "in"in mera !an% berarti

asil ne%ati4e. Dan terakir dilakukan identifikasi Motilit! !aitu den%an

men%amati media$ apa ada per%erakan atau tidak. Jika ada per%erakan dan

men!ebar maka asil positif$ dan &ika tidak ada per%erakan dan tidak

men!ebar berarti asil ne%ati4e. Kami mendapatkan asil positif.

%. 9&i MR8P

Selan&utn!a$ untuk media MR8P$ pertama:tama dilakukan pemisaan

antara MR dan 8P. 9ntuk u&i MR$ media ditambakan larutan met!l red

seban!ak ' tetes kemudian ditun%%u selama beberapa menit. Kemudian

dilakukan pemisaan pada MR dan 8P dimana MR ditambakan den%an

pereaksi met!l Red !an% memberikan asil !an% positif karena ter&adi

perubaan #arna pada media !aitu dari kunin% men&adi mera sedan%kan

pada media 8P !an% ditambakan pereaksi KO/ @*? dan


12/12

%ula dilakukan untuk men%identifikasi bakteri !an% mampu

mempermentasi karboidrat.

hasil pengamatan dan pembahasan (bakteri)

Documents