Elektroforesis

ElektroforesisDra .Harlia,MSiFMIPA UNTAN2013

ElektroforesisElektroforesis adalah teknik pemisahan komponen atau molekul bermuatan berdasarkan perbedaan tingkat migrasinya dalam sebuah medan listrik

Medan listrik dialirkan pada suatu medium yang mengandung sampel yang akan dipisahkan. Teknik ini dapat digunakan dengan memanfaatkan muatan listrik yang ada pada makromolekul, misalnya DNA yang bermuatan negatif.

Jika molekul yang bermuatan negatif dilewatkan melalui suatu medium, kemudian dialiri arus listrik dari suatu kutub ke kutub yang berlawanan muatannya maka molekul tersebut akan bergerak dari kutub negatif ke kutub positif.

3

Kecepatan gerak molekul tersebut tergantung pada nisbah muatan terhadap massanya serta tergantung pula pada bentuk molekulnya.[

Pergerakan ini dapat dijelaskan dengan gaya Lorentz, yang terkait dengan sifat-sifat dasar elektris bahan yang diamati dan kondisi elektris lingkungan:

F adalah gaya Lorentz, q adalah muatan yang dibawa oleh objekE adalah medan listrikSecara umum, elektroforesis digunakan untuk memisahkan, mengidentifikasi, dan memurnikan fragmen DNA

5Teknik Elektroforesis

Jenis elektroforesisElektroforesis kertas adalah jenis elektroforesis yang terdiri dari kertas sebagai fase diam dan partikel bermuatan yang terlarut sebagai fase gerak, terutama ialah ion-ion kompleks. [4]

Pemisahan ini terjadi akibat adanya gradasi konsentrasi sepanjang sistem pemisahan. [4] Pergerakan partikel dalam kertas tergantung pada muatan atau valensi zat terlarut, luas penampang, tegangan yang digunakan, konsentrasi elektrolit, kekuatan ion, pH, viskositas, dan adsorpsivitas zat terlarut.

Elektroforesis Kertas

Elektroforesis gel

elektroforesis yang menggunakan gel sebagai fase diam untuk memisahkan molekul-molekul. [6] Awalnya elektoforesis gel dilakukan dengan medium gel kanji (sebagai fase diam) untuk memisahkan biomolekul yang lebih besar seperti protein-protein. [6] Kemudian elektroforesis gel berkembang dengan menjadikan agarosa dan poliakrilamida sebagai gel media

Secara prinsip, teknik ini mirip dengan kromatografi:memisahkan campuran bahan-bahan berdasarkan perbedaan sifatnya.Dalam elektroforesis gel, pemisahan dilakukan terhadap campuran bahan dengan muatan listrik yang berbeda-beda (menggunakan prinsip dalam elektroforesis).

Perangkat elektroforesis gel

Hasil Gel Elektroforesis

Cara kerja Elektroforesis GelDalam elektroforesis gel terdapat dua material dasar yang disebut fase diam dan fase bergerak (eluen). Fase diam berfungsi "menyaring" objek yang akan dipisah, sementara fase bergerak berfungsi membawa objek yang akan dipisah. Sering kali ditambahkan larutan penyangga pada fase bergerak untuk menjaga kestabilan objek elektroforesis gel. Elektroda positif dan negatif diletakkan pada masing-masing ujung aparat elektroforesis gel.14Elektroforesis protein

Elektroforesis protein

lanjutanZat yang akan dielektroforesis dimuat pada kolom-kolom (disebut well atau "sumur") pada sisi elektrode negatif. Apabila aliran listrik diberikan, terjadi aliran elektron dan zat objek akan bergerak dari elektrode negatif ke arah sisi elektrode positif. Kecepatan pergerakan ini berbeda-beda, tergantung dari muatan dan berat molekul DNA. Kisi-kisi gel berfungsi sebagai pemisah. Objek yang berberat molekul lebih besar akan lebih lambat berpindah.

Polyacrilamida Gel Elektroforesis (PAGE) -SDS

Elektroforesis gelpoliakrilamid(PAGE),merupakan teknik yang banyak digunakan dalambiokimia,forensik,genetika,biologi molekulerdanbioteknologi untuk memisahkan biologimakromolekul, seperti proteinatauasam nukleat, berdasarkan mobilitas elektroforesis.Mobilitas merupakan fungsi dari panjang, konformasi dan muatan molekul.

Bahan bahan yang diperlukanPolyarilamida suatu polimer yang digunakan sebahai gelsumber radikal bebas dan stabilisator, sepertiammonium persulfatdanTEMEDditambahkan selama prosepolymerisasi akrilamidaSDS ( sodium dodesil sulfat ) atau urea , kedua senyawa is ni berperan sebagai denaturantSDS adalah detergent anionik yang dapat memfraksinasi proteinUrea bisa digunakan untuk mendenaturasi asam nukleat ( dalam analisis DNA)

Bahan bahan yang diperlukanZat zat pereduksi seperti dithiothreitol (DTT)atau2-mercaptoethanol (beta-mercaptoethanol / BME)Butanol untuk menghilangkan delembung udaraPewarnaan noda untuk protein, paling sering denganCoomassie Brilliant BlueR-250, atau bromophenol blue dan untuk asam nukleat,etidium bromida, atau baik,noda perak),Persiapan sampel

Mempersiapkan gel polyacrilamida

Elektroforesis

Dua SDS-PAGE-gel setelah berjalan selesai